You are on page 1of 3

TUGAS REVIEW JURNAL VIROLOGI NAMA : SEPTIANI NIMA ANGGRIANI

NIM: A201401013

KELAS : J1 ANALIS KESEHATAN

Judul : pemurnian partikel virus dengue oleh One-Step

Kromatografi Hidroksiapatit Keramik

Tujuan : pemurnian partikel virus dengue

Pendahuluan : Pemurnian virus sangat penting untuk vaksin de- Velopment dan terapi gen.
Proses hulu untuk Pengembangan vaksin, baru-baru ini mengalami dra- Perkembangan matik,
namun proses hilir belum Berubah secara signifikan, meski penting. Chroma- Tography telah
digunakan untuk pemurnian virus.

Metode: Kromatografi Hidroksiapatit Keramik

Bahan dan alat :

1. Keramik Hidroksiapatit dan Kolom Persiapan


CHT Keramik Hidroksiapatit, Tipe II, partikel 40 m Ukuran dibeli dari Bio-Rad
Laboratories, Inc. (Her- Cule, CA, USA). Bahan ini adalah keramik standar Jenis,
yang merupakan bahan sinter; Penggunaan in-house hy- Droxyapatite dapat
menyebabkan berbagai hasil. Keramik hy- Droxyapatite (0,358 g) dimasukkan ke
dalam noda kosong - Kolom baja kurang (4,6 mm x 35 mm;) dengan metode kering.
2. Budaya Virus Dengue
Didahului dengan poli-L-lisin (Sigma-Aldrich Co., St. Louis, MO, AS) pada 100 g /
mL dalam buffered buffered phosphine (PBS), disimpan pada suhu kamar dan dibilas
dengan PBS, sebelum digunakan. Sel C6 / 36 dikultur dalam Minimum Essential
Medium Eagle (dimodifikasi) (EMEM, MP Biomedicals, Irvine, CA, AS) yang
mengandung serum bovine 10% janin (FBS; Invitrogen Corporation, Carlsbad, CA,
AS) di poli-L Termos dengan labu dilapisi 28C selama 1 minggu. Setelah sel
mencapai pertemuan, virus demam berdarah tipe 2 diinokulasi ke monolayer sel
dalam 75 mL EMEM yang dimodifikasi (MP Biomedicals) yang mengandung 0,5%
FBS dan MEM Vitamin Solution (Invitrogen Corporation), dan dikultur pada 28 C.
Medium diubah pada hari ke 3 dan cairan kultur (sekitar 75 mL) dikumpulkan pada
hari ke 7 (Skema 1). Cairan kultur disaring melalui filter ukuran pori 0,22 m untuk
menghilangkan sel dan puing sel besar.
Prosedur kerja
C6/36 cells in
T225 (75 ml) Media kultur sel: MEM
mengandung FBS 10%
Selama 1 minggu dengan suhu 28C

Inokulasi virus Media kultur Media kultur virus:


MEM mengandung 0,5%
FBS
Selama 3 hari dengan suhu 28C

Perubahan Perubahan
Buang 75 SampeL 3
media media
Selama 4 hari dengan suhu 28C
panen 75 ml panen 75 ml
1. Prosedure kromatografi standar
SampeL 1 SampeL 2
Kromatografi dilakukan pada BioLogic Duo- Sistem aliran (Bio-Rad
Laboratories, Inc.). Kolom Dipasang pada sistem BioLogic DuoFlow dan dibilas 600
mM sodium phosphate buffer (NaPB) pH 7.2. Itu Kolom kemudian diseimbangkan
dengan NaPB 10 mM pH 7,2. Sepuluh mililiter cairan budaya dari virus dengue tipe 2
Dimasukkan ke kolom dengan NaPB 10 mM pH 7,2, Dan kemudian dielusi dengan
gradien linier sampai 600 mM NaPB pH 7,2 selama 15 menit pada laju alir 1,0 mL /
menit. Kromatografi dipantau dengan absorbansi UV pada 280 dan 260 nm, dan
konduktivitas. Eluate dikumpulkan Dengan fraksi 2 mL, untuk 20 menit pertama (10
fraksi), dan Maka dengan fraksi 1 mL (sisa 20 fraksi). Itu Fraksi dikumpulkan
digunakan untuk evaluasi. Sebagai Kontrol, media kultur dan kultur sel cairTanpa
virus juga dimuatkan ke kolom. Setelah Prosedurnya, kolom itu dicuci dengan air
suling. Ter, disterilkan dengan NaOH 0,5 M selama 5 kolom volume, Dan itu diganti
dengan NaPB 10 mM. Sistem Selanjutnya dicuci dengan air suling
2. Uji Hemaglutinasi (HA)
Darah angsa yang diawetkan dibeli dari Nippon Bio- Tes Laboratories Inc.,
Tokyo, Jepang. Angsa darah merah Sel (GRBC) dicuci 3 kali dengan garam.
GRBCDisuspensikan dalam larutan garam pada konsentrasi akhir 8% sebagai
Suspensi stok. Hal ini selanjutnya diencerkan 1:24 menjadi pra- Pare 0,33% suspensi
kerja GRBC dalam penyesuaian virus Pengencer (VAD) yang mengandung 150 mM
NaCl dan 200 mM Natrium fosfat pada pH 6,2. Setiap fraksi diencerkan 10 kali lipat,
dan 50 L sampel terdilusi diencerkan lebih lanjut Secara serial, 2 kali lipat dengan
BSA 0,4% di BS9 (120 mM NaCl, 50 mM asam borat dan 24 mM natrium hidrat) di
U- Papan sumur 96 (Becton, Dickinson and Company, Franklin Lakes, NJ, AS). Dan
kemudian, 50 L sebesar 0,33% Suspensi GRBC ditambahkan ke masing-masing
sumur, lempeng Dicampur dengan lembut, dan kemudian diinkubasi pada suhu 37 C
selama 30 Min. Titer HA adalah pengenceran virus tertinggi Menunjukkan pola
aglutinasi di bagian bawah baik

3. Memperkirakan DNA Double-Stranded (DsDNA)


Konsentrasi dsDNA dalam fraksi adalah deter- Ditambang menggunakan
Quant-iT PicoGreen dsDNA Assay Kit (In- Vitrogen Corporation), menurut
produsennya Instruksi. Kurva standar disiapkan dengan lambda DNA (komponen kit)
pada konsentrasi antara 1,56 dan 100 ng / mL. Jumlah total dsDNA dalam fraksi
adalah cor- Disusul oleh konsentrasi dan volume fraksi yang ditentukan
Hasil
Kromatogram cairan kultur sel C6 / 36 terinfeksi virus dengue tipe 2 (Contoh 1) dari kolom
hidroksiapatit keramik (Gambar 1 (a)) dibandingkan dengan

Gambar 1. Kromatogram kolom hidroksiapatit keramik diaplikasikan dengan cairan kultur


dan media. (A) Cairan kultur sel C6 / 36 terinfeksi virus dengue (Contoh 1); (B) Cairan kultur
sel C6 / 36 tanpa infeksi virus (Contoh 2); Dan (c) Media kultur yang mengandung FBS 0,5%
tanpa virus (Contoh 3). Garis hitam, absorbansi UV pada 260 nm; Garis abu-abu, absorbansi
UV pada 280 nm; Dan garis patah, konduktivitas penyangga elusi

Cairan kultur sel C6 / 36 tanpa infeksi virus (Contoh 2; Gambar 1 (b)) dan media kultur itu
sendiri (Contoh 3; Gambar 1 (c)). Setelah 30 menit waktu retensi, media kultur menunjukkan
nilai absorbansi UV yang sama pada 280 dan 260 nm (Gambar 1 (c)). Meskipun absorbansi
pada 260 nm sedikit lebih besar dari pada 280 nm dalam cairan kultur sel tanpa virus
(Gambar 1 (b)); Selanjutnya, kromatogram cairan kultur virus menunjukkan puncak
absorbansi UV kecil pada 260 nm (Gambar 1 (a)). Hal ini menunjukkan bahwa puncak pada
260 nm disebabkan oleh budaya virus

Kesimpulan

Keramik hidroksiapatit adalah media pengemasan ringan untuk bio- Bahan logis dan
bisa diaplikasikan di daerah netral. Kondisi netral menyebabkan pemisahan bio- Bahan logis,
sekaligus menjaga aktivitas biologis. Hasil penelitian ini mengkonfirmasi bahwa jenis virus
dengue 2 Dimurnikan dengan kromatografi hidroksiapatit keramik Namun infektivitas
virusnya. Penelitian ini menunjukkan bahwa pemurnian satu langkah metode untuk virus
dengue tipe 2 oleh hydroxyapa- keramik Kromatografi tite keduanya dapat direproduksi dan
kuat. Ini Metode dapat diterapkan pada spesies virus lainnya, dan Ini mungkin kemudian
ditemukan di berbagai tempat di masa depan