EVALUACIN DE LA VELOCIDAD DE RESPIRACIN MICROBIANA COMO

MEDIO PARA CARACTERIZAR SU ESTADO FISIOLGICO

Edgar Cubedo., Iram Mondaca

imondaca@itson.mx

Modalidad y temtica para participar: Oral (x) Cartel ( ) con la temtica de Tecnologa y Biotecnologa
Ambiental.

Palabras clave: Estado fisiolgico, biosensor, respiracin microbiana

Introduccin. Un gran nmero de sensores celulosa. sta membrana se fij a un

microbianos han sido desarrollados desde
los aos 70. Como estos sensores poseen
un alto potencial para detectar un amplio
espectro de sustancias se han utilizado en
gran medida para llevar a cabo la
cuantificacin de compuestos orgnicos en
aguas residuales. Sin embargo, existen otras
posibilidades de uso para este tipo de
biosensores y una de ellas es que se puede
caracterizar el estado fisiolgico de un
microorganismo (1)(2).
En este trabajo se propone evaluar la
velocidad de respiracin de la bacteria
Pseudomonas putida 12633 en diferentes
etapas de crecimiento, con el objeto de
caracterizar su estado fisiolgico y as, por
medio de sto, determinar el periodo ptimo
de cosecha del microorganismo, con fines de
conservacin de la cepa o de construccin
de biosensores microbianos..
Metodologa. Primeramente se realiz una
curva de calibracin entre el peso seco del
microorganismo contra la absorbancia de
suspensiones microbianas, para eliminar el
efecto de esta variable al utilizar la misma
concentracin de biomasa en los diferentes
experimentos realizados.. .
El crecimiento se inici al descongelar la
cepa contenida en un vial sembrando en
agar TSA. Posteriormente se transfiri una
asada del microorganismo a un matraz de
100 ml de caldo TSB, incubndose a 27 C
con agitacin a 175 RPM hasta alcanzar una
absorbancia de 0.9 . Posteriormente se
transfiri con una proporcin del 3% V/V a un
matraz con 250 ml de TSB y se incub en las
mismas condiciones Despus de iniciado el
crecimiento se extrajo una pequea cantidad
de biomasa cada cuatro horas hasta la hora
28. En cada caso la biomasa se centrifug y
se le realizaron tres lavados con buffer de
fosfatos para eliminar cualquier residuo de
nutrientes. Se diluy la biomasa a una
absorbancia de 0.6, para filtrar 1 ml. a travs
de una membrana estril de nitrato de
electodo de oxgeno disuelto tipo Clark
utilizando una membrana de acetato de
celulosa, despus de lo cual el biosensor se
puso en contacto con una solucin de 0.5 g/l
de glucosa en buffer de fosfatos, sometida a
aireacin y agitacin, para determinar la
pendiente inicial de reduccin de oxgeno
disuelto para cada muestra.
Resultados y discusin. El consumo de
oxigeno fu evaluado cada cuatro horas y el
tiempo en el que la bacteria present una
mayor velocidad en el consumo de oxigeno
fue a las 20 horas despus de que se inici
la incubacin, reportndose una absorbancia
de 1.6.
Este experimento se realiz en tres
ocasiones diferentes, siguiendo el mismo
procedimiento, encontrndose que a las 20
horas se present en todos los casos la
mayor velocidad de consumo de oxgeno.,
concordando con la etapa de crecimiento
exponencial tardo..
Conclusin. Es posible estimar el tiempo de
cosecha de un microorganismo a base a la
determinacin de su actividad respiratoria, ya
que por medio de este procedimiento
podemos evaluar su actividad fisiolgica y
podemos asegurar que el microorganismo se
encontrar en el mejor estado fisiolgico
para ser almacenado o utilizado para la
construccin de biosensores microbianos.
Agradecimientos. Se agradece el apoyo del
M. C. Luciano Castro y del Dr. Fernando
Lares por proporcionarnos su ayuda con los
materiales y equipos utilizados en esta
investigacin.
Bibliografa.
1. Mulchandani , A., Rogers, K. Enzyme and
Microbial Biosensors. Techniques and
Protocols. Humana Press (1998): 203-207.
2. Riedel, K., Renneberg, R., Liebs, P.,
Biochemical Basis of a Kinetically Controlled
Microbial Sensor. Bioelectrochemistry and
Bioenergetics. 19 (1988) 137-144.