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Renewable Energy 37 (2012) 259e265

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Renewable Energy
j o u r n a l h o m e p a g e : w w w . e l se v i e r . c o m / l o c a t e / r e n e n e

Fermentation medium and oxygen transfer conditions that maximize the xylose conversion to
ethanol by Pichia stipitis
a b, * a b
João Paulo A. Silva , Solange I. Mussatto , Inês C. Roberto , José A. Teixeira
a
Department of Biotechnology, Engineering College of Lorena, University of São Paulo, Estrada Municipal do Campinho s/n, Cep: 12602-810, Lorena/SP, Brazil
b
IBB - Institute for Biotechnology and Bioengineering, Centre of Biological Engineering, Universidade do Minho, Campus de Gualtar, 4710-057, Braga, Portugal

article info RESUMEN

Article history: Se estudió la conversión de xilosa en etanol por Pichia stipitis. En un primer paso, se evaluó la necesidad de suplementar el
Received 8 November 2010 medio de fermentación con urea, MgSO _ {4} 7H _ {2} O, y / o extracto de levadura mediante un diseño factorial completo.
Accepted 20 June 2011 Available La adición simultánea de estas tres fuentes alimenticias al medio de fermentación, en concentraciones de 2,3, 1,0 y 3,0 g / l,
online 23 July 2011 respectivamente, mostró ser importante para mejorar la producción de etanol en detrimento de la conversión del sustrato en
células. En una segunda etapa, los ensayos de fermentación realizados en un biorreactor bajo diferentes condiciones KLa
(coeficiente volumétrico de transferencia de oxígeno) hicieron posible la comprensión de la influencia de la transferencia de
Keywords:
oxígeno en el rendimiento de la levadura, así como definir el rango de valores más adecuado para Una producción eficiente de
Xylose
etanol. La región más prometedora para realizar este proceso de bioconversión se encontró entre 2.3 y 4.9 h 1, ya que
Ethanol
promovió los mayores resultados de producción de etanol con prácticamente agotamiento de la xilosa del medio. Estos
Pichia stipitis
hallazgos contribuyen al desarrollo de una tecnología económica y eficiente para la producción a gran escala de etanol de
Nutrient
segunda generación.
Volumetric oxygen transfer coefficient

.

1. Introducción La xilosa es el principal azúcar obtenido por hidrólisis de esta fracción y su
El comienzo de este siglo está marcado por el gran incentivo dado al uso de bioconversión es un paso importante en el uso de materiales lignocelulósicos
biocombustibles en sustitución de la gasolina, motivado por varias razones, para la producción de etanol. Pichia stipitis es una cepa de levadura
entre ellas la subida de los precios del petróleo y el reconocimiento de que las prometedora para aplicaciones industriales en la producción de etanol debido
reservas mundiales de petróleo agotan rápidamente; La preocupación por las a su capacidad para convertir rápidamente xilosa en etanol, con alto
emisiones de combustible; Los requisitos del Protocolo de Kioto y el Plan de rendimiento [3e5]. Además, esta levadura también es capaz de fermentar
Acción de Bali sobre las emisiones de carbono, así como la oferta de puntos varios otros azúcares además de la xilosa, incluyendo la glucosa, la manosa, la
de venta alternativos para los productores agrícolas [1]. Actualmente el etanol galactosa y la celobiosa, junto con los oligómeros de manano y xilano [6], lo
es el principal biocombustible utilizado en el mundo y las perspectivas cual es una característica importante considerando que los hidrolizados
mundiales son la expansión de la producción y consumo de etanol. hemicelulósicos contienen usualmente estos otros azúcares en mezcla con
Xilosa.

Los polisacáridos presentes en materiales lignocelulósicos, incluyendo Como es bien sabido, la eficacia de un proceso de fermentación se ve
celulosa y hemicelulosa, son de gran interés como materia prima para la afectada por la composición del medio de cultivo y las condiciones operativas
producción de etanol de segunda generación debido a su gran disponibilidad, utilizadas. Diferentes cepas de levadura requieren diferentes fuentes y
riqueza en azúcares y principalmente porque no afectan la provisión de cantidades de nutrientes para convertir eficientemente los azúcares en el
alimentos. Sin embargo, aunque las tecnologías para producir etanol a partir producto de interés. Es posible que se requieran nutrientes específicos como
de azúcar o almidón están bien establecidas, las tecnologías para producir nitrógeno, oligoelementos o vitaminas para obtener una fermentación rápida y
bioetanol a partir de biomasa lignocelulósica están todavía en desarrollo en altos niveles de etanol, lo que es conveniente para minimizar los costos de
todo el mundo. La hemicelulosa es uno de los tres componentes principales de capital y la energía de destilación [7]. Entre las condiciones operativas, la
la biomasa lignocelulósica junto con la celulosa y la lignina, y puede ser disponibilidad de oxígeno se considera el factor más importante que afecta a
fácilmente hidrolizada a azúcares monoméricos en condiciones suaves [2] la fermentación de los azúcares por las levaduras, ya que determina la
partición del flujo de carbono entre el crecimiento y la formación del producto
[8]. El establecimiento de un nivel de oxígeno adecuado es por lo tanto de
gran importancia para obtener un proceso eficiente con

el presente estudio evaluó la influencia de la composición del 6 2. El valor de KLa se calculó mediante la forma integrada de la que contenían 100 ml del medio compuesto por ecuación propuesta por Stanbury et al. los ensayos se realizaron en un Table 2 biorreactor de tanque agitado de 1.38 crecimiento celular.5 1. que contenía 1. 150 rpm.7 0. las propiedades reológicas del Assay Variables Responses medio (densidad y viscosidad) y las variables ambientales (temperatura y presión) [9].0 0.1 0.00 0.00 Aunque se han llevado a cabo varios estudios sobre la producción de etanol a 2 2.33 0. 20 min) y se resuspendieron en el El crecimiento celular se estimó midiendo la absorbancia del caldo de medio de fermentación para obtener una concentración inicial de 1 g / l.0 1. se monitorizó Los cultivos de esta levadura se mantuvieron en agar de agar de extracto de el curso del tiempo de saturación de oxígeno a medida que se reanudaban las malta a 4ºC. Stipitis NRRL Y-7124 fue el microorganismo utilizado en los experimentos.15 0. Materiales y métodos nitrógeno y burbujeo de aire. G / g) fermentación se controlaron mediante muestreo periódico para determinar el se determinó mediante la relación entre la concentración celular (g / l) y el crecimiento celular.0).15 0. las células 2. QP: ethanol volumetric productivity.70 generación.83 7 0.8 mm) etanol. Medio de fermentación y condiciones resolución (HPLC) en un cromatógrafo Jasco equipado con un detector de Para evaluar la influencia de la composición del medio en la producción de índice de refracción y una columna Bio-Rad Aminex HPX-87H (300 7.P. se realizaron ensayos en matraces Erlenmeyer de 125 ml que a 60ºC.7 0. El valor nutrients.3.0 8. Los ciclos de consumida (g / l). Wald. inicialmente se calibró la sonda de oxígeno polarográfico a presión atmosférica ajustando cero y 100% de saturación bajo 2. Urea (2.21 MgSO _ {4} 7H _ {2} O. usando 0.0). durante 24 h. separó del medio por burbujeo con nitrógeno. sustrato consumido (G / l). de KLa depende de varios factores.32 0. 200 rpm. MgSO4 7H2O (1. Yx/S: cell yield factor. En un segundo paso.0 3. los 11 1. 10 1.31 0.0 74. y / o extracto de levadura.00 tecnología eficiente para la producción a gran escala de etanol de segunda 5 0. on ethanol production and xylose consumption by Pichia stipitis.00 productividades de etanol.5 15.0 24.15 0.0).17 medio y el coeficiente volumétrico de transferencia de oxígeno sobre la 8 2.1. durante 48 h. y extracto de levadura (3.3 0. Bioengineering AG. Urea (2. fermentación a 600 nm. [11].33 en cada ensayo se muestran en la Tabla 2. que se correlacionó con una curva de calibración (densidad óptica en peso seco). Tipo R'ALF. Con el objetivo de contribuir al desarrollo de una 4 2.0 0. En la secuencia.24 (3.23 0.5 1. así como definir el intervalo más adecuado de valores para una 2. siguientes Medio de fermentación (g / l): xilosa (90. respectivamente. Determinación de KLa producción eficiente de etanol por esta cepa de levadura. los ensayos en frascos de 9 1. etanol y 18. g / g) se calculó mediante la inocularon con una concentración inicial de células de 1 g / l y se mantuvieron relación entre la concentración de etanol (g / l) y el sustrato (glucosa þxilosa) en un agitador rotatorio a 30ºC. y extracto de levadura 0. Después de inocular con 1 g / l de células. Para evaluar la influencia del coeficiente volumétrico de transferencia de oxígeno (KLa) sobre la producción de etanol. como la velocidad de agitación y el caudal de aireación.3 0. Las concentraciones de glucosa.0).0 3. stipitis.0 45.3). En este sentido.00 YP/S: ethanol yield factor. Inicialmente.0 4.6 l (Fermentador Benchtop Autoclavable Fermentation parameters obtained during the ethanol production from xylose by Pichia stipitis.3 1.17 65.8 0.0). arabinosa y etanol se determinaron mediante cromatografía líquida de alta 2.5 12. La productividad volumétrica de etanol (QP.0).0 1.0 4.3). Para la determinación de KLa. el coeficiente de Table 1 transferencia volumétrica de oxígeno (KLa) es un parámetro importante que Experimental conditions for evaluation of the fermentation medium supplemen-tation with se debe observar en las fermentaciones realizadas en biorreactores.00 partir de xilosa. 7H _ {2} O (1. y el oxígeno se P.0). Para la preparación de inóculo.54 0.260 J. Los matraces inoculados se incubaron a 30ºC.4.7 ml / min.5 1.7 0. Los valores de KLa usados 11.0). el biorreactor 2. / Renewable Energy 37 (2012) 259e265 Valores de conversión y productividad.21 0. glucosa (5. glucosa (15.9 0.2 L de los under different KLa values.0 0. contenían 50 ml de una solución de xilosa de 90 g / l suplementada o no con nutrientes (urea. donde el valor de KLa es igual a la pendiente de la recta resultante que representa el ln (C * CL) en función del (G / l): xilosa (30.32 fermentación se mantuvieron a 30ºC durante 96 h.20 ensayos en biorreactor bajo diferentes condiciones de KLa hicieron posible la comprensión de la influencia de la transferencia de oxígeno en el rendimiento de la levadura.5 41. MgSO4 7H2O o extracto de levadura) Los matraces se El factor de rendimiento de etanol (YP / S. g / lh) se definió por la relación entre la concentración máxima de etanol (g / l) y el tiempo de fermentación respectivo (h). las operaciones de 2.34 tomaron muestras cada 12 h para determinaciones de azúcares.51 0. (g/l) 1 0. A través del valor de KLa. 58.2 12. y las operaciones de ampliación g/l xylose (%) production para la geometría de los diferentes biorreactores se facilitan [10]. xilosa.0 0.26 0. Métodos analíticos y determinación de parámetros de fermentación se recuperaron por centrifugación (2000 g. A continuación.13 0.30 0.0 0. Durante los experimentos.0 0. queda mucho por hacer para lograr altos rendimientos y 3 0. Después de este tiempo.3 19.0 12.18 0.005 M como eluyente en un caudal de 0.17 producción de etanol de P.19 0.25 Erlenmeyer revelaron la necesidad de complementar el medio con urea.0 0.3 15.0). la transferencia de oxígeno para Urea MgSO4 7H2O Yeast Total Maximum g/l g/l extract consumed ethanol diferentes procesos pueden ser comparados.0 3. Silva et al. Suiza).8 0. el consumo de xilosa y la producción de etanol. Microorganismo e inóculo se llenó con el medio de cultivo no inoculado con células.3 1.0 3.0). MgSO _ {4} tiempo.0 5. la geometría del reactor.1. las células de la levadura en el condiciones de flujo de aire y agitación elegidas para uso durante la medio de mantenimiento se transfirieron a matraces Erlenmeyer de 500 ml fermentación.0 60.1 0. Arabinosa (5.0 0.0 47. .27 4.13 0.5 42.3 0.15 0. se 12.5 40.15 0. mientras que el factor de rendimiento celular (Yx / S.A. KLa (h ) 1 YP/S(g/g) Yx/S(g/g) QP(g/l h) arabinosa (15.8 0.

1 Muestra los valores de parámetros de fermentación obtenidos para desarrollo de una tecnología eficiente para la producción De etanol de cada ensayo experimental. MgSO 4 7H2O y también un aumento de aproximadamente 20% en la producción de etanol extracto de levadura añadido al medio de fermentación. 3. Fig. Según algunos autores. así como sus interacciones mostraron una influencia significativa en p <0. J. producción de etanol (ver ensayos 5 y 7. La producción de etanol no ocurrió cuando el medio no fue en su concentración más elevada. stipitis. que estimulan la tasa de fermentación y la producción de etanol [17. no se hará posible la producción de etanol por P. levadura tuvo 47. que fue significativamente cepas de levadura. Obsérvese que algunos experimentos (1e4) dieron segunda generación. se eligen para complementar el medio de xilosa para la los ensayos 5e8 (Figura 1a). Yx / S y QP. El MgSO4 7H2O. el medio de fermentación suplementado sólo con extracto de entre 0. ya que se utilizan comúnmente para estos ensayos indica que la adición de extracto de levadura fue posiblemente componer medios de fermentación para diferentes microorganismos y han el factor con mayor influencia en esta respuesta. y no a un alto crecimiento celular. Los Tres fuentes nutricionales diferentes. Por otra parte. Yx / S. lo que revela que P. Otros autores también han informado de mejoras en la producción de etanol por otras cepas de levadura. ya que la suplementación de económico complejo para consideración comercial [13]. incluyendo vitaminas y fuentes de nitrógeno. Los parámetros. asimilar nutrientes para producir etanol. como se puede observar fácilmente comparando los ensayos 5 y 6 y 7 y 8 (Tabla 1).P. la En contraposición a los resultados YP / S. Tabla producción de etanol en los ensayos no suplementados con este nutriente 1). Por otra parte. La Tabla 1 muestra las condiciones experimentales diferente de los obtenidos en los otros ensayos de fermentación. no tuvo el mismo efecto positivo en la Design-Expert 5. La urea también se ha informado como un nutriente de gran influencia en la producción de etanol de S. las concentraciones máximas evaluadas (ensayo 8. o para buscar un medio concentraciones utilizadas en el presente estudio. YP / debido a la adición de MgSO _ {4} 7H _ {2} O al medio de fermentación. La pequeña variación en los valores YP / S en producción de etanol por P. Tabla 1).A. 3. positivamente E influyó significativamente suplementado con nutrientes (ensayo 1). pero que punto central (9e11) que contenía también los tres Pero con valores de esta dependencia varía dramáticamente según el género y la especie de concentración iguales a la mitad de los del ensayo 8. Fig. etanol (5e11). stipitis necesita en una formación más rápida de etanol. Sin embargo. En este evaluadas en este estudio y los resultados obtenidos. se sabe que la conversión de xilosa en etanol está influenciada por producción de etanol. 21]. la elevada conversión del sustrato en células en estos el más importante para la producción de etanol por P. lo que sugiere que la consumo de sustrato según la fuente de nutrientes añadida al medio de adición de todos los nutrientes (urea.05. fermentación. Influencia de la composición del medio sobre la conversión de El magnesio parece proteger las células de levadura durante la fermentación xilosa a etanol por P. stipitis. a saber. MgSO4 7H2O y extracto valores más altos de YP / S de aproximadamente 0. el nutrientes en exceso se informa que causan inhibición osmótica en el conocimiento sobre la influencia de las fuentes de nutrientes en la producción metabolismo de la xilosa [13]. urea. por un mecanismo que resulta en la disminución de la permeabilidad de la membrana plasmática bajo etanol condiciones de estrés [20. La suplementación del medio sólo con urea o MgSO 4 7H2O. con valores Además. stipitis hará posible entender los requerimientos de esta cepa de levadura para un buen rendimiento de bioconversión y será útil para el Fig. MgSO4 7H2O y extracto de levadura) fermentación. En ausencia de estas fuentes.13 g / g. stipitis.40 g / g se obtuvieron para de levadura. Resultados y discusión al complementar el medio de fermentación con iones de magnesio [7. Análisis estadístico Los ensayos de fermentación para evaluar la influencia de la composición del Un análisis comparativo entre los ensayos 6 y 8 (no completados y medio sobre la producción de etanol se realizaron de acuerdo con un diseño suplementados con MgSO _ {4} 7H _ {2} O. y QP se tomaron como respuestas de este diseño experimental. / Renewable Energy 37 (2012) 259e265 261 2. Las gráficas de Pareto para la estimación de efectos revelaron que sólo la variable C (extracto de levadura) producción de etanol por otras cepas de levadura incluyendo Saccharomyces presentó un efecto positivo y significativo al 95% de confianza para la cerevisiae [15] y Kloeckera africana [16]. todas las variables independientes.50 g / lh. 1b) en los ensayos 1e3. Silva et al.5. Estos resultados microorganismos utilizados.10 y 0. La definición de la composición de un medio de fermentación se considera una forma importante de aumentar la productividad de los procesos de El medio de fermentación suplementado con las tres fuentes nutricionales en bioconversión y. Como se puede observar. stipitis. Dicha diversidad de requerimientos de nutrientes implica que la concentración en el medio de fermentación influyeron en la producción de optimización de cada cepa individual es necesaria para diseñar un medio etanol por P. 1c). donde no se produjo la producción de etanol y el medio no contenía fuentes de Entre los tres nutrientes evaluados. ya que no hubo ensayos puede atribuirse al bajo consumo de sustrato (menos del 5%. vitaminas y magnesio [14]. valores nulos de factor de rendimiento de etanol (YP / S) y productividad volumétrica (QP). sólo el ensayo demostrado ser de gran importancia Para un buen desarrollo de diferentes 8 dio el mayor valor de QP (0. la viabilidad y la QP (Figura 2c].7 g / l.Cerevisae. por tanto. con una producción de etanol de 15. que fue 2 veces superior a la obtenida en los ensayos de factores nutricionales.3% de consumo de sustrato después de 48 h de fermentación. stipitis. se realizó un análisis estadístico también ha sido considerada una fuente nutricional importante para la de las respuestas YP / S. se obtuvieron los valores más altos levadura sólo consumía alguna fuente de carbono para el crecimiento celular. stiptis. Esta conclusión es válida para el rango de apropiado definido para aplicaciones experimentales.0. los valores Yx / S presentaron pocas variaciones. ya que la adición de sulfato de magnesio en presencia de análisis estadístico de los datos se llevó a cabo utilizando los softwares extracto de levadura solamente. Yx / S (Figura 2b) y de levadura tiene efectos protectores sobre el crecimiento. Este resultado sugiere un posible efecto de interacción positivo entre la urea y S. el extracto de levadura fue probablemente nitrógeno. el medio de fermentación se suplementó con todas las fuentes de se encontraron variaciones significativas en la producción de etanol y nutrientes en sus valores máximos de concentración. respectivamente) reveló factorial completo (Tabla 1). Tabla 1) dio la mejor Además. Para los ensayos con producción de (ensayos 1 a 4) y el consumo de sustrato Era demasiado baja (<10%). de etanol por P. 18].0 y Statistica 6.1. ya que no hubo producción de etanol en estos medios. Para las otras respuestas. Sin embargo. que producción de etanol de xilosa por P. El extracto de Para una mejor comprensión de la influencia de cada nutriente en la levadura es una mezcla de aminoácidos. este fue el primer objetivo de nuestro estudio. el extracto respuesta YP / S (Figura 2a). . experimento. del factor de rendimiento celular (Yx / S. la adición de urea en presencia de extracto de levadura tuvo una influencia positiva en la producción de etanol y el consumo de sustrato. e incluso por la cepa dentro del mismo género y permiten concluir que no sólo la presencia de los nutrientes sino también su especie [ 12]. 19e21]. variando las cantidades de urea.

Estos ensayos alcanzaron valores máximos similares de concentración de etanol y xilosa. Después de definir la mejor composición del medio de fermentación para la En conjunto. MgSO4 7H2O (1. (B) MgSO4 7H2O y (C) extracto de levadura. El consumo fue similar para varias condiciones KLa (Fig. Sin embargo. que pueden considerarse repeticiones. Esto significa que la adición de urea (2. QP. De diferentes medios de cultivo según un diseño experimental. y la producción de etanol de etanol resultante fue mayor que la concentración de células a 96 h. Los ensayos con valores de KLa de 11.262 J. resultados de este proceso de bioconversión. / Renewable Energy 37 (2012) 259e265 Higo. 1. ya que estos azúcares están usualmente presentes en los hidrolizados células (aproximadamente 16 g / l) al final de la fermentación (96 h).2. (b) factor de rendimiento celular. Es evidente que en el rango de Mientras que para valores superiores a 12 h 1 (figura 3feh). corresponden a efectos estadísticamente significativos a un nivel de confianza del 95%. stipitis cinética de la formación del producto y el crecimiento celular presentaron perfiles muy diferentes. el consumo de azúcares a 12 h1 parecía ser Un punto de inflexión entre las concentraciones de células (glucosa y xilosa. Estos experimentos se realizaron respectivamente). ya que la arabinosa no fue consumida por la levadura y etanol. YP / S. Valores de los parámetros de fermentación: (a) factor de rendimiento de etanol. las variables A (urea). las variaciones de KLa (0.8 h 1) afectaron celular final fue más elevada que la concentración final de etanol. para estos ensayos se muestran en la Fig.1 h 1 (Fig. La longitud de cada barra es proporcional al mejorando el rendimiento y la productividad del etanol en detrimento de la efecto estandarizado. fuertemente al bioproceso. revelaron un en un medio de fermentación que contenía glucosa y arabinosa en mezcla con interesante comportamiento de conversión de xilosa por la levadura. QP. Las barras que se extienden más allá de la línea vertical conversión del sustrato en células . 3. sobre los parámetros de para QP. 2. 3d y e. Yx / S.0 g / l) favoreció la producción de etanol. (B) factor de rendimiento g / l) y extracto de levadura (3. cuando se compararon con los otros experimentos. def).3 g / l).P. B (MgSO4 7H2O) y C (extracto de levadura) y la interacción AB mostraron efectos negativos para Yx / S. los ensayos se realizaron en biorreactor utilizado. 3a. Yx / S. mientras que todas las variables e interacciones mostraron efectos positivos Higo. mientras que la producción de etanol tuvo el comportamiento para definir un nivel adecuado de transferencia de oxígeno para maximizar los opuesto. y (c) productividad volumétrica de etanol. obtenida durante la producción de etanol a partir de xilosa por Pichia stipitis . este valor de KLa cercano El comportamiento cinético del crecimiento celular. y hemicelulósicos usados para la segunda generación de producción de etanol.A. 3aec) la concentración durante el tiempo de fermentación considerado). el crecimiento celular fue favorecido a mayor el valor de KLa producción de etanol por P. YP / S. Los gráficos de Pareto para los efectos de las variables (A) urea. ya que para valores inferiores a 12 h 1 (Fig. y (c) productividad volumétrica de etanol.7e65. La concentración valores estudiado.7 y 12. así como sus interacciones. Influencia de KLa sobre la conversión de xilosa a etanol por P. celular. Silva et al. pero la 3.0 fermentación: (a) factor de rendimiento de etanol. obtenida durante la fermentación de xilosa por Pichia stipitis. Los azúcares . stipitis.

Higo. opuesto al observado para el crecimiento celular (Figura 4a). stipitis se vio fuertemente siendo la suma de estos dos parámetros mantenida cerca de 0.7 h 1.1 g / l.7 h 1 (figura 3f).9e18. de bajo estas condiciones.P. observándose pocos otro lado. 4 muestra las variaciones en las concentraciones de células y etanol.7 h 1). Considerando los valores de KLa evaluados en el presente estudio. los valores más altos de QP no se encontraron en los extremos de transferencia de oxígeno más baja y más alta. La producción máxima de etanol en este experimento (13. (F) 18. lo que influyó directamente en la partir de glucosa en condiciones aeróbicas.7 h 1. KLa ¼ 58 h 1) o ninguna formación de etanol (KLa ¼ 65. el porcentaje de azúcares consumidos y los valores de los parámetros de fermentación en función de la KLa utilizada. los cuales se ajustaron bien. (B) 2. se obtuvieron concentraciones hecho. permaneciendo menos del 4% de los azúcares totales después de 96 h de fermentación. Las levaduras que presentan este efecto presentan una reducción en la tasa de consumo de azúcares. stipitis. 3b yc.0 h ^ {1}. Este hecho podría ser un indicativo de la inhibición en el transporte de azúcares por oxígeno. el valor máximo de QP descrito por el modelo ajustado (alrededor (2.9 h 1 (Fig. Mientras que si se usan valores Además de la baja formación de etanol.3 h ^ {1}. La Tabla 2 muestra los valores de parámetros de fermentación obtenidos para cada condición KLa. stipitis CBS Higo. mientras que el mayor Yx / S fue encontrado para valores altos de KLa (0.7 h ^ {1}.5 g / l) se obtuvo utilizando valores de KLa de 2.9 h 1. Un hecho interesante se observó durante la fermentación formada con un valor KLa de 18. similar al efecto Pasteur. tanto de xilosa como de glucosa como productividad valor. se alcanza un menor rendimiento de etanol. restando alrededor del 40% de los azúcares en el medio después de 96 h. se obtienen valores de productividad más bajos. los ensayos bajo los valores más altos de KLa más altos.A.8 h 1) de 0.1 h 1). respectivamente). con estas dos curvas presentando comportamientos similares. De oxígeno. (G) 58. que es prácticamente la mitad del valor obtenido bajo condiciones de mayor transferencia de oxígeno . Fiaux et al.40 g / lh) debería ocurrir para un valor de KLa cercano a 25 h 1 y. se fuente de carbono. stipitis debe atribuirse al transporte mayores resultados de producción de etanol con prácticamente agotamiento del azúcar. Con respecto a los parámetros de fermentación (Figura 4b). De hecho. Obsérvese que los YP / S más altos fueron encontrados para valores bajos de KLa (entre 0.-). -) por Pichia stipitis en un biorreactor de tanque agitado bajo Diferentes valores de KLa: (a) 0.7 y 12. 3. / Renewable Energy 37 (2012) 259e265 263 Consumo en comparación con los otros experimentos. así como en el porcentaje de azúcares consumidos. el etanol producido se asimiló rápidamente reduciendo el tiempo en manera similar. Para una mejor visualización del comportamiento de estas respuestas.8 h 1). los datos se ajustaron a polinomios de segundo orden. para los resultados obtenidos experimentalmente. Estos resultados sugieren que la formación de etanol por P.58 y 65.1 h ^ {1}. incluso en presencia de xilosa en el medio de fermentación. De forma opuesta. presentando correlaciones entre el 88 y el 99%. de KLa (58 h 1 y 65. azúcares (xilosa þ glucosa) 6054 [23]. stipitis estaba entre 2. Silva et al. parte del etanol producido fue asimilado por las células. Estos ensayos presentaron también el mayor consumo de sustrato. J. La asimilación de etanol por la levadura sugiere que el oxígeno fue suministrado en exceso en este medio ya que las condiciones de alta disponibilidad de oxígeno han sido reportados para favorecer la asimilación de etanol por P. (C) 4. lo que indica que para estas máxima productividad de etanol para Una KLa próxima a 19 h1 (Tabla 2). ya que promovió los etanol a partir de glucosa o xilosa por P. y después de este tiempo. [22] informó que P. de la xilosa Desde el medio. donde las condiciones de oxígeno limitado Producción de etanol. Sin condiciones de transferencia de oxígeno. se alcanzó la celulares elevadas en estos experimentos.5 g / l) ocurrió a las 36 h. Diferentemente de YP / S y Yx / S. stipitis CBS 5774 [29] y P. Al final de la fermentación (96 h) la concentración de etanol se había reducido a la mitad del valor máximo alcanzado.8 h ^ {1}. prácticamente todos los azúcares embargo. Si se utilizan valores de KLa inferiores. El requisito previo de la oxigenación para la formación eficiente de en etanol por P. pero para los valores de KLa intermedios (4. el crecimiento o una función mitocondrial intacta [23].8 h 1) promovieron también azúcares más lentos . depende de un suministro de oxígeno adecuado a las encontró que la región más prometedora para realizar la conversión de xilosa células. Comportamiento cinético del crecimiento celular (. Esta cifra muestra claramente que el aumento de KLa provocó una reducción en la concentración máxima de etanol.7 h ^ {1}. y alcanzaron una concentración celular de aproximadamente 15 g / l.9 h 1. y (h) 65. (D) 11. Por afectada por los valores de KLa superiores a 18. sino al hecho de que. (E) 12. Similar comportamiento se observó también durante la conversión de xilosa a etanol por Candida shehatae [28] y durante la conversión de glucosa a etanol por P. el incremento de KLa provocó una reducción en YP / S con incremento simultáneo en Yx / S. siendo este efecto más pronunciado cuando la respiración es la vía predominante en el catabolismo de los carbohidratos [24e26].3 o 4. este valor de productividad no se puede atribuir a una alta consumidos fueron metabolizados por la vía oxidativa. stipitis [27]. reduciendo la concentración de etanol. consumo (-B-) y producción de etanol (-.3 y 4. stipitis no produce etanol a que se obtuvo la concentración máxima. la conversión de xilosa a etanol por P. La mayor producción de etanol (aproximadamente 26.50 g / g. debido a la disponibilidad de producción de etanol y proporcionando un alto crecimiento celular.

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[2] Mussatto SI. como fuente de high gravity ethanol fermentation by media supplementation using Saccharomyces aminoácidos.9:793e807. cerevisiae. Los resultados aquí encontrados contribuyen así a una mejor comprensión de la relación entre los nutrientes.28:817e30. favoreciendo el crecimiento celular en detrimento de la formación de fermentation with Pichia stipitis. Pilcher L.83:561e4. Guimarães PMR. Walker GM. Van Vleet JRH. el crecimiento y la producción de etanol por P. Xu P. [13] Slininger PJ. Bioconversion of water-hyacinth (Eichhornia crassipes) hemi-cellulose acid hydrolysate to motor fuel ethanol by xylose-fermenting yeast. Dömény Z. [12] Prior BA. Silva et al.101: 7856e63. Eukaryot Cell elevada de etanol por P. Ethanol production from wheat straw hemicellulose hydrolysate by Pichia stipitis. Roslander C. Fermentation of D-xylose by the yeasts Candida shehatae and Pichia stipitis: prospects and problems. Process Biochem 1989. Enzym Microb Tech 2000. J Biotechnol 2002. 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