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Mtodos de estudo de estrutura

e funo celular em Biologia Celular


O estudo da clula: 1) Ultracentrifugao: separa os componentes (clulas ou organelas) de acordo com as suas
densidades

Microscopia, tcnicas 2) Radioautografia:


. Metabolismo do DNA: Timidina 3H

histolgicas e histoqumicas
. Metabolismo do RNA: Uridina 3H
. Protenas: Metionina 35S
. Carboidratos: manose 32P

3) Microscopia:
- ptica:
. Colorao Histolgica
Universidade Federal de Minas Gerais . Colorao Histoqumica
Instituto de Cincias Biolgicas . Imunohistoqumica Unidades de medida
Departamento de Morfologia
- Eletrnica:
Prof. Luciana de Oliveira Andrade (Sala O3-245) . Transmisso
. Varredura

Mtodos de estudo: unidades de medida Poder de resoluo X Aumento


Limite de resoluo diferente da capacidade de aumento
Unidade Representao e valor Poder de Resoluo: menor distncia entre duas partculas que permite que elas
sejam vistas como dois objetos separados.
micrmetro 1m = 0,001 milmetro
Nanmetro 1nm = 0,001 micrmetro ou 0,000001 milmetro Abaixo do poder de resoluo

Boa imagem = Resoluo

Limites de Resoluo
Microscpio Resoluo Aumento
Microscpio Olho
eletrnico ptico humano

10-7 10-6 10-5 10-4 10-3 10-2 10-1 1 (mm)

0,0001 0,001 0,01 0,1 1 10 100 1000 (m)


Dentro do poder de resoluo
Microscopia ptica Microscopia ptica

Tipos de microscpia ptica:

partes mecnicas: partes pticas


(sistemas de lentes): - Microscopia de campo claro ou de luz
base
condensador
platina - Microscopia de contraste de fase
charriot objetiva
revlver
- Microscopia de fluorescncia
ocular
tubo
- Microscopia confocal
do charriot

Microscopia de Campo claro Preparao do material para estudo aos microscpios de


luz

preservar a morfologia e a
- Permite o exame de clulas e composio dos tecidos
a. Em PFA ou MEtOH (MO)
tecidos Fixados e corados. b. Em glutaraldeido (ME)
- Deteco da luz transmitida. A Tcnicas histolgicas e histoqumicas
colorao importante para a - Colorao Histolgica
distino de estruturas. . Preparo de tecidos
Manivela
. Corantes acidfilos e Suporte do bloco
Bloco de parafina
basfilos Fragmento de tecido
remover a gua
dos tecidos e
Navalha
embeber a pea
- Colorao Histoqumica em substncia
miscvel com mat.
. PAS de incluso
a. EtOH e xilol
. Alcian-Blue (MO)
. Feulgen b. acetona (ME)

/ ultramicrotomia

MO: Luz convencional


Colorao para microscopia de luz Colorao e montagem para microscopia de luz
A colocao da fita de parafina em banho-maria a 40oC distende
os cortes, que so recolhidos em lminas de vidro. Consiste em mergulhar a lmina contendo o corte no(s) corante(s), de
acordo com o que se deseja corar;

Corantes Montagem

PLANOS DE CORTE Tcnicas histolgicas e histoqumicas


Tcnica histolgica versus Tcnica Histoqumica
1) Tcnica histolgica
Evidenciar morfologia: uso de corantes basfilos ou acidfilos
. Estrutura de carter bsico ! afinidade por corante cido
. Estrutura de carter cido ! afinidade por corante bsico

Hematoxilina
(corante bsico)
HE

Eosina
(corante cido)
Tcnicas Histolgicas e Histoqumicas Tcnicas Histolgicas e Histoqumicas
Tcnica histolgica versus Tcnica Histoqumica
2) Tcnica histoqumica
Caracterizao qumica: localizao

P.A.S.
Periodic Acid-Schiff (cido Peridico-Schiff)
Demonstrao de radicais 1,2-glicol presentes em amido, glicognio e celulose

C C - Glicognio
- Glicoprotenas neutras
- Glicoprotenas cidas ricas em cido
OH OH silico: Sialomucinas

A tcnica P.A.S. no especfica para o glicognio, mas serve para evidenciar o Vilosidade intestinal corada pela tcnica de cido-peridico Schiff;
glicognio (...e outros polissacardeos). Contra-colorao: Hematoxilina
Reao intensa indicada pelas setas: alto contedo de polissacardeos

Microscopia de Fluorescncia
Algumas substncias quando excitadas por certos comprimentos de onda emitem
luz de maior comprimento de onda (Fluorescncia)
Microscopia Eletrnica de Transmisso
Microscopia Eletrnica
- A imagem formada pela passagem diferencial do feixe de eltrons pela amostra
- Utiliza feixes de eltrons acelerados como fonte de luz.
(A ME se baseia na interao entre eltrons e componentes dos tecidos)

Limite de Resoluo do MO: (550 nm) 0,55 m a 0,2 m

Limite de Resoluo do ME: 0.005 nm a 0,001 m

Microscopia eletrnica

Transmisso Varredura

Preparao do material para estudo aos microscpios


Microscopia Eletrnica de Transmisso eletrnicos
diferena de
potencial: 60 a
100 KV preservar a morfologia e a
composio dos tecidos
a. Em PFA ou MEtOH (MO)
b. Em glutaraldeido (ME)

Manivela
Suporte do bloco
Bloco de parafina
remover a gua
Fragmento de tecido dos tecidos e
Navalha
embeber a pea
em substncia
miscvel com mat.
de incluso
a. EtOH e xilol
(MO)
b. acetona (ME)

/ ultramicrotomia
Microscpia Eletrnica de Varredura
Microscopia Eletrnica de Transmisso - Os eltrons no atravessam a amostra, mas varrem (escaneiam) a sua superfcie;
os eltrons refletidos so coletados por um detector e processados para serem
exibidos em uma imagem.

Estrutura tridimensional

Setas indicam gros de prata (estruturas enoveladas) localizadas sobre


grnulos citoplasmticos (G) e no lmen (L) dos tbulos.

Microscpia Eletrnica de Varredura

Clios de clulas epiteliais Macrfago fagocitando hemcias


O estudo da clula: Funes gerais
Membrana plasmtica
! Separa o meio intracelular do extracelular.
! Responsvel pela constncia do meio intracelular:
controle da entrada e sada de substncias da clula.
! Sinalizao celular (receptores).
Funes gerais
Composio
Lipdeos
! Barreira seletiva.
Protenas
Carboidratos ! Canais de comunicao: estabelece conexes com
(glicoclice) outras clulas
Estrutura
Mtodos de estudo ! Fixao ou movimentao da clula (ligaes estveis
e instveis, respectivamente).
! Sistemas enzimticos.

LIPDEOS
Composio
SO MOLCULAS ANFIPTICAS

Cabea polar
! LIPDEOS ! PROTENAS ! CARBOIDRATOS hidroflica
Fosfolipdeos
e
Calda apolar
glicolipdeos
hidrofbica

colesterol
LIPDEOS Lipdeos possuem distribuio
Estrutura trilaminar (ME): ASSIMTRICA
unidades de membrana
Comparao de monocamadas externa e interna

Membrana celular
Meio extracelular

Membrana celular

Meio intracelular

Fluidez da membrana Fluidez da membrana

31 32
Fluidez da membrana Fluidez da membrana

Permite movimentao de seus comonentes Permite movimentao de seus comonentes


-Tipos de movimentos dos lipdeos:

Rotacional
Lateral (107 vezes/seg)
Flip-flop (raro; flipases)

Fluidez da membrana Fluidez da membrana


-Temperatura
-Presena de insaturaes nas caudas hidrofbicas
-Tamanho das caudas hidrofbicas
-Presena de colesterol

+ duplas, +
fluida

Presena de colesterol
Diminui a permeablidade
menor, Fluidez alterada de acordo com a temperatura
+ fluida -37oC: diminui a fluidez
-baixas temp: aumenta a fluidez
PROTENAS PROTENAS

importante componente funcional Interaes das protenas com a bicamada lipdica

Funes gerais
>Interaes com matriz extracelular
Transmembrana passagem nica / passagem mltipla
>Interaes com meio intracelular(citoesqueleto)
Ancoradas por lipdeos GPI
>Transduo de informaes para o interior da clula Perifricas

PROTENAS CARBOIDRATOS

TAMBM ACOMPANHAM A FLUIDEZ DA MEMBRANA LIGADOS LIPDEOS E PROTENAS


localizados na face externa da membrana plasmtica
Demonstrao dos movimentos das protenas na bicamada lipdica
Glicoclice Funes do glicoclice

Adeso celular
Reconhecimento celular
Inibio por contato
...

MET glicoclice

TRANSPORTE ATRAVS DA MEMBRANA Transporte sem auxlio de protenas


Sem gasto de energia

Difuso
passiva

Difuso Passiva

Transporte
mediado por
protenas
Transporte atravs de protenas
Tipos de transportadores
Com ou sem gasto de energia
Gardiente de concentrao

Energia

Passivo Ativo Canais Carreadores

Transporte atravs de protenas Energia para o transporte ativo


dierecionamento do transporte

nico co-transporte
Energia para o transporte ativo Energia para o transporte ativo
1- transporte acoplado 2- ATP

simporte

antiporte

49

Energia para o transporte ativo


3- Luz
TRANSPORTE EM
QUANTIDADE
FAGOCITOSE
Ingesto de partculas
slidas

PINOCITOSE
Ingesto de fuidos
FAGOCITOSE

Processo seletivo
DEFESA

ALIMENTAO

REMOO DE CORPOS
APOPTTICOS

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PINOCITOSE PINOCITOSE
NO-SELETIVA SELETIVA ou MICROPINOSITOSE
CLATRINA

58

MICROPINOCITOSE

ENDOSSOMO
PRIMRIO

ENDOSSOMO
SECUNDRIO

59
OBTENO DE TRANSFERRINA TRS VIAS PARA CHEGAR
AOS LISOSSOMOS

LISOSSOMOS
DIGESTO INTRACELULAR

AULA PRTICA

64
Aula prtica: pranchas Aula prtica: pranchas

Mitocndria ao ME de transmisso Mitocndria ao ME de varredura (aps criofratura)

67
69 70

Aula prtica: Lminas


Lmina 73 corte de traqueia
Colorao histolgica: HE

71
Aula prtica: Lminas
Lmina 3 corte de Fgado
Tcnica Histoqumica: PAS
Contra-colorao histoqumica: hematoxilina

74

Estrutura trilaminar:
Porqu?

75 76
Transporte X Gradiente eletroqumico
*velocidade de transporte*

Canais inicos transporte passivo


seletividade ROTA DOS RECEPTORES
CLATRINA Mtodos de estudo:
ME
Criofratura
Fracionamento
Anlise de expresso de protenas
...

PROTENAS

Restrio dos movimentos das protenas na


bicamada lipdica
Citoesqueleto
FUNO:

- Responsvel pelo estabelecimento e modificaes no


formato celular: suporta o grande volume do citoplasma.

Citoesqueleto - Responsvel pela organizao das organelas e das


clulas.

- Responsvel pelos movimentos celulares e deslocamentos


intracelulares de organelas e cromossomos (segregao
durante a mitose), vesculas e grnulos.

Citoesqueleto Filamentos Intermedirios


Localizao:
CONSTITUINTES: - Clulas que sofrem atrito constante
- Geralmente ligados protenas de membrana e/ou outras protenas
- Microtbulos do citoesqueleto
ALTAMENTE DINMICOS

~25nm Constituio:
-Protena filamentosa
-Vrios tipos
- Microfilamentos de actina (tecido especfico)
~7nm
MENOS DINMICOS

- Filamentos Intermedirios
~10nm
Filamentos Intermedirios Filamentos Intermedirios
Constituio:
Funes: Arquitetura celular

Suporte mecnico

Sinalizao celular

Flexibilidade e
ALTA RESISTNCIA

Microtbulos Microtbulos: DINMICOS


Localizao: Ligao Ligao instvel
- Espalhados pelo citoplasma e formando de estruturas estvel GTP alfa-Tubulina beta-Tubulina GTP
GTP GTP
especficas como os clios e flagelos.

Constituio:
GTP GDP
GTP GTP GDP
GTP GTP GTP
GDP GTP GTP GTP GTP

Subunidade

alfa-Tubulina beta-Tubulina

MICROTBULO
[
Protofilamento EXTREMIDADE
-

Despolimerizao
GTP GDP GTP GDP GTP GDP GTP GTP GTP GTP
EXTREMIDADE
+

Polimerizao
Microtbulos: como e onde so encontrados ? Microtbulos: como e onde so encontrados ?
DISPERSOS NO CITOPLASMA DISPERSOS NO CITOPLASMA
Consistem em filamentos nicos, longos e livres

Funo:
- participam do transporte intracelular de
partculas;
-Polimerizao regulada por:
. [ ] de Ca++ (atua nas polimerizaes de - participam no deslocamento dos
curta durao) cromossomos na mitose;
. Subunidades disponveis
- Contribuem para manter a forma das
-Regio onde se inicia a sua clulas.
formao:
.

CENTROLOS- Centro Organizador do

Microtbulos: como e onde so encontrados ?


DISPERSOS NO CITOPLASMA

Protenas Motoras (dinena e cinesina), e


movem por mudanas conformacionais,
utilizando energia de ATP.

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Microtbulos: como e onde so encontrados?
CLIOS
Consistem em nove diades de microtbulos ligadas umas s outras e
um par central, por MAPs.

-Polimerizao regulada por:


. pelas Protenas Associadas aos Microtbulos
(MAPs): atuam nas polimerizaes de longa
durao.

.
-Regio onde se inicia a sua formao:
CORPSCULOS BASAIS- Centro Organizador
do MicroTbulo (MicroTubule Organizing Center

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Microtbulos: como e onde so encontrados? Microtbulos: como e onde so encontrados?


CLIOS e FLAGELOS CLIOS e FLAGELOS
Funo:
- CLIOS: movimentao e transporte de partculas no meio
extracelular (mltiplos)
- FLAGELOS: movimentao celular (nico)

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Microtbulos: como e onde so encontrados ? Microtbulos: como e onde so encontrados ?
CENTROLOS E CORPSCULO BASAL
Consistem em nove trincas de microtbulos ligadas umas s outras
por MAPs. Funo:

Centrolos: do origem aos


microtbulos dispersos no citoplasma
-Polimerizao regulada por:
. pelas Protenas Associadas aos Microtbulos Corpsculo basal: do origem aos
(MAPs): atuam nas polimerizaes de longa durao. microtbiulos de clios flagelos
-Regio onde se inicia a formao:
CORPSCULOS BASAIS- (MTOC)

Filamentos de actina Filamentos de actina: DINMICOS


(ou microfilamentos) -Polimerizao regulada por:
. [ ] de Ca++ (atua nas polimerizaes de curta durao)
Localizao: . Subunidades disponveis
- Crtex celular: logo abaixo da membrana plasmtica

Constituio:

Monomeros de
Actina G Polmero de
actina-G em
constante
remodelamento
Filamento de
actina F

[Ca2+] [Ca2+]
Microfilamentos
de actina
Filamentos de actina Filamentos de actina
(ou microfilamentos) (ou microfilamentos)
Funo
fora mecnica (sustentao da membrana plasmtica)
Contrao muscular

Movimento celular
forma da clula

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Filamentos de actina: movimento celular Microfilamentos


envolvidos no movimento celular
Protenas motoras ligadas Actina
- Interagem principalmente com molculas de miosina tipo I (uma cabea e uma cauda ) e
tipo II (duas cabeas e uma cauda encontrada em dmeros associados opostamente).
Miosinas

microfilamentos
Cauda
Papel da miosina
-Citocinese
-Movimentos
amebides
Cabea Pescoo -Contrao
Atividade ATPase
Ligao actina
Regula
ativ. cabea
muscular
25 26

Ultra-estrutura da Mitocndria
-Mitos: filamento
-Condria: partcula

Lisa e altamente
permevel
(porinas e colesterol)

Biologia Mitocondrial

Rica em protenas
pouco permevel
(cardiolipina)
Origem da mitocndria

- A existncia de duas membranas levanta a hiptese de que as


mitocndrias so descendentes de alguma bactria que foi endocitada,
mas no digerida, por uma clula eucariota h milhes de anos atrs.
Esta hiptese da teoria simbionte suportada por outras evidncias:

- As mitocndrias tm o seu prprio DNA e os seus prprios ribossomos.


- E mais...os ribossomos mitocondriais assemelham-se mais aos
bacterianos do que os eucariticos. P.ex., o antibitico cloranfenicol inibe
a sntese de protenas tanto nas mitocndrias como nas bactrias, mas
no nos ribossomos do citossol.
29

Biologia Mitocondrial Replicao da


mitocndria
Distribuio dentro da clula: - Semelhantemente aos seus precursores bacterianos, as
mitocndrias replicam o seu DNA e se dividem para formar
duas mitocndrias filhas.
- Varivel e geralmente esto localizadas em locais onde o gasto
de energia mais intenso. - A replicao do DNA mitocondrial e diviso das mitocndrias
- O varivel de 20 a 1000 por clula. Quanto mais ativa a clula ocorre durante a intrfase, antes da replicao do DNA
nuclear.
maior o no. de mitocndrias.
- Pode contribuir at para 20% do volume total da clula.

Contudo intra-mitocondrial:

- Contm o seu prprio DNA (16.569 pares de nucleotdeos:


codificam aprox. 37 genes)
- Contm os seus prrios ribossomos e capacidade de sintetizar
protenas enzimticas para a respirao celular.
Herana mitocondrial Biologia Mitocondrial
- 99.99% do DNA mitocondrial de origem maternal; Nutrientes
- 100 mitocndrias no espermatozide / 100,000 no vulo; (energia contida nas ligaes qumicas)
- Eventualmente as mitocndrias dos espermatozides so destrudas.
- Entretanto, qualquer mutao no DNA mitocondrial so de origem
maternal.
Transferncia de Energia

Doenas relacionadas a defeitos no DNA mitocondrial:

Doena de Luft: h o aumento do metabolismo basal do paciente.


Mecanismo: h um aumento do nmero de mitocndrias no tecido muscular esqueltico do
ATP
paciente.

Miopatia mitocondrial infantil: leso dos msculos esquelticos e disfuno renal.


Mecanismo: diminuio acentuada (ou mesmo ausncia) das enzimas da cadeia Citossol
transportadora de eltrons. (transferncia para ATP pouco eficiente)
Mitocndrias
(transferncia para ATP eficiente)

Energia celular Energia celular


- Respirao celular: degradao lenta da glicose e outros compostos para
Energia acumulada no citoplasma gerao de energia, com consumo de O2 e liberao de CO2

Armazenamento 2 passos: Gliclise e fosforilao oxidativa


1 mol de Glicose
estvel e - Triacilglicerdeos (gorduras neutras)
concentrado - Glicognio
(Dinheiro no
Enzimas da Glicolise
banco)

Ncleo 2 mols de Piruvato


Armazenamento H2O +2ATPs O2
instvel no - Molculas intermedirias (principal ATP)
concentrado Mitocondria
(Dinheiro no bolso)
36 ATPs
Fosforilao
oxidativa ADP

CO2
Fosforilao oxidativa Organizao funcional e
estrutural das mitocndrias
- Degradao do piruvato em CO2 e H2O,
com produo de ATP (36 mols)
corpsculos matriz
elementares mitocondrial
1- Produo de Acetil CoA
espao
Ligao de piruvato + CoA intermembranoso cristas mitocondriais
ou
Quebra de cidos graxos em duas unidades carbnicas + CoA membrana interna
membrana externa
2- Ciclo de Krebs ou Ciclo do cido Ctrico
Liberao de eltrons (captados pelos NADs e FADs)
e
Liberao de prtons (H+) na matriz mitocondrial

3- Transporte de eltrons
Por citocromos e produo de ATP

Biologia Mitocondrial Diferenas na Composio


Lipdica entre as Membranas
Mitocndrias:
- Organelas esfricas ou alongadas com membrana dupla. Interna e Externa
- Medem de 0,5-1,0 um de largura; e alcanam at 10 um de comprimento.

Constituio:
- Membrana externa: contm porinas p/ o transporte de molculas de at
10 KDa.
- Rica em colesterol.
- Membrana interna: permeabilidade seletiva = impermevel.
- Rica em cardiolipina (fosfolipdeo): dificulta a passagem de
partculas com carga eltrica.
- Espao intermembranoso (perimitocondrial): rea onde se acumula
ons H+.
- Cristas mitocondriais: local da membrana interna onde abriga os
componentes da cadeia transportadora de eltrons.
- Matriz mitocondrial (mitoplasma): compartimento aquoso contendo
ribossomos, DNA.
* Microssomo - consiste no subfracionamento de reticulo endoplasmtico liso e rugoso
A arquitetura da mitocndria Ultra-estrutura da Mitocndria
determina a sua funo celular

- A arquitetura da membrana interna permite o fluxo eficiente de eltrons e o


funcionamento de enzimas (ATP sintase).
- A arquitetura da membrana interna organizada de modo a permitir o fluxo de
solutos at os complexos enzimticos.

A arquitetura da membrana Matriz mitocondrial Complexo da ATP-sintetase


interna da mitocndria (F0F1)

Espaco intermembranar
Teoria quimiosmtica: Mecanismo pelo qual
h a formao de ATP na mitocndria.

2
Biologia Celular
O ncleo da clula
- geralmente nico e localiza-se no centro da clula.

- geralmente acompanha a forma da clula.

Ncleo
- clulas com metabolismo intenso apresentam ncleos volumosos;

- quantidade de DNA varivel (46 cromossomos na clula humana);

Ciclo celular - produo protica elevada - mRNA (cpias do DNA);

- DNA com bases nitrogenadas disponveis para serem lidas (= transcritas)


e assim codificar (= traduzir) protenas.

Ciclo de vida da clula

Ncleo interfsico
Varivel

a) envoltrio nuclear
b) nucleoplasma
c) cromatina
d) nuclolo
Constituintes do Ncleo interfsico A) Envoltrio Nuclear (EN)
- Carctersticas:
Cromatina - 2 unidades de membrana
- Descontnua (presena de complexo do poro)
Membrana
-associao com Lmina nuclear externa

Lmina
nuclear
Nuclolo
Envoltrio
nuclear Membrana
interna

Nucleoplasma

Cisterna perinuclear Poros e complexo do poro


ao MET Anel
citoplasmtico

Transportador
central

Complexos do poro
Complexo protico constitudo
por Anel nuclear
Membrana externa:
protenas presentes no RE
* Aspectos morfolgicos:
NUCLEOPORINAS: denominao locais de fuso da ME com MI
Membrana interna:
dada ao conjunto de protenas que
Protenas que se ligam * Aspectos funcionais
constituem o complexo do poro.
lmina e cromatina Transporte seletivo
- At 9 nm: Livre
- >9nm: Transporte ativo seletivo
Poros/Complexos de poro ao MET Criofratura mostrando poros nucleares

-clulas com alta atividade de sntese


proteca possuem mais poros

(As setas indicam os poros)

Ncleo

Transporte de macromolculas Transporte de RNA


entre o citoplasma e ncleo
do ncleo para o citoplasma
Importao
- protenas como DNA e RNA polimerases possuem um Sinal de Localizao
Nuclear (SLN).

- Stio de Localizao Nuclear reconhecido pela protena Importina no


citoplasma Importina liga-se ao complexo do poro (trilho) translocao para o
ncleo.

Exportao
-protenas e RNAs (mRNA, tRNA e rRNA).

-Transporte de RNA feito atravs da associao com protenas (formando RNPs)

-Os complexos proticos associados a mRNA: hnRNPs (RiboNucleoProtenas


nucleares heterogneas)

-Feito pela exportina. Aps a liberao do material para o citoplasma as exportinas


retornam ao ncleo
B) Nucleoplasma C) Retculo Nucleoplasmtico
Soluo aquosa de molculas contidas dentro do ncleo: protenas (DNA e RNA
Armazena e libera calcio no ncleo,
polimerases, topoisomerases, helicases), RNAs, nucleosdeos, nucleotdeos e
controlando funes como: proliferao e
ons onde esto mergulhados os nuclolos e a cromatina.
diferenciao celulares, ativao e
transcrio de genes, apoptose (morte
programada das clulas)

Retculo Nucleoplasmtico

D) Cromatina Heterocromatina
Cromatina: DNA + protenas especficas presente no ncleo CONSTITUTIVA
- Dois tipos: - formada por sequncias nucleotdicas altamente repetitivas que nunca so
- Heterocromatina
- Eucromatina
transcritas;

HeteroCromatina (HC): - localizadas em regies especficas do cromossomo (telmero,


centrmero, constries secundrias).
- eletrondensa;
- grnulos grosseiros (DNA
FACULTATIVA
condensado): transcricionalmente
- parte da HC que, em um mesmo organismo, aparece condensada em
INATIVA.
- visvel ao Microscpio ptico. algumas clulas e no-condensada em outras.

EuCromatina (EC): - EXEMPLO: cromossomo X nas femas de mamferos: apenas um


cromossomo ativo.
- aparece granulosa e clara entre os
grumos de HC;
- DNA no condensado:
transcricionalmente ATIVA.
- abundante em clulas que esto
A presena ou no da cromatina sexual
produzindo muita protena. Obs.: Proporo HC:EC responsvel pelo permite o diagnstico citolgico do sexo
aspecto mais claro ou mais escuro dos ncleos
quando so observados ao MO ou ME.
Histonas: Protenas especficas da cromatina Protenas no-histnicas da cromatina
ESTRUTURA MOLECULAR DA CROMATINA
- nucleossomo: Protenas no-histnicas:
200 pares de bases (pb) de DNA - constituem um grupo heterogneo de protenas que
+
octmero de histonas (duas H2a, duas H2b associado a dois dmeros de H3 e 4) podem encontrar-se ligadas ao DNA ou dispersas no
A histona H1 prende os 200 pares - clip nucleoplasma (muitas so acdicas).

- Do ponto de vista funcional podem ser divididas em:


a) protenas que participam da estrutura dos cromossomos.

b) protenas do processo de replicao e reparo do DNA


(DNA polimerases, topoisomerases, Helicases).

c) protenas que participam do processo de ativao ou


represso de genes: fatores de transcrio.

Nveis de organizao da cromatina

1o
Protenas
Nucleofilamento (10nm)
histonas
eucromatina

2o

Associao
Lmina Solenide (30nm)
e matriz
heterocromatina

Protenas
no
histnicas
20
E) Nuclolo Ultra-estrutura do nuclolo ao MET
1 . Centro Fibrilar (pars fibrosa): DNA (rDNA, contendo os genes para rRNA),
Constituio RNA e protenas (RNA-polimerase, topoisomerases, fatores de transcrio).
2 . Componente fibrilar denso: envolve o centro fibrilar. rRNAs e enzimas
-60% protenas e rRNAs envolvidas em seu processamento.
3 . Componente granular (pars granulosa): grnulos de rRNA. o local onde ocorre
-Poro do DNA contendo os genes codificadores dos o processamento final dos rRNAs, de onde sero exportados para o citoplasma.
rRNAs

- esfrico, sem membrana,


normalmente nico.

- tamanho relacionado com


intensidade de sntese protica 2
pela clula.

- Local de processamento/sntese do 3
RNA ribossmico. 1

Mitose: ncleo em diviso


A diviso celular o perodo em que a clula reparte igualmente o seu
contedo, j duplicado na intrfase, para as duas clulas-filhas.

Mitose ou cariocinese: diviso do material nuclear.


Citocinese: diviso do citoplasma.

Ncleo em diviso Ciclo Celular:

a) Intrfase ncleo interfsico


b) Prfase
c) Metfase
d) Anfase
Mitose: ncleo em diviso
e) Telfase
Ciclo celular Ciclo celular
MPF (Fator Promotor de fase M)
Complexo protico : ciclina B1 e protena cinase cdc1.
- acumula-se durante a fase G2.
- fosforila a lmina nuclear desmontagem.
- fosforila condensinas e histona H1 empacotamento do DNA.
- fosforila outras protenas formao do fuso.
- Importante para a transio G2 - M.

Check point: coordenado por complexo Ciclina-cdc

Mitose: prfase Compactao do DNA para divisao


Prfase -Cromossomos: condensao mxima da cromatina
- Incio da condensao dos cromossomos (durante diviso celular - mitose e meiose)
induzida pelo Fator Promotor de fase M
(MPF) -fosforila H1 e outras protenas no- - Cromossomo metafsico: composto por duas
histnicas. molculas-filhas de DNA: cromtides

- Incio da formao do fuso mittico.

- Fragmentao do envoltrio nuclear.


Presena de protenas acidicas / no Associao
com um
B histnicas complexo
protico:
- Microtbulos comeam a se ligar aos Cinetocoro
Exs.: complexo condensina !condensao
cromossomos. complexo coesina!centrmero

- Formao do ster: Centrossomos (par


de centrolos e material pericentriolar)
mais fibras radiais de microtbulos. METFASE
Mitose: metfase Mitose: anfase
Metfase Anfase
- cromatina em condensao mxima
- separao dos centrmeros;
(1000X a da intrfase) - cromossomos
se tornam realmente visveis ao MO.
- migrao das cromtides para os
plos opostos.
- Microtbulos esto completamente
ligados aos cromossomos. - os microtbulos presos aos
cromossomos encurtam-se.
- Formao da placa metafsica
(alinhamento dos cromossomos na - O deslocamento dos
regio equatorial da clula). cromossomos depende dos
microtbulos.
*Constituio do fuso mittico: Evidncia experimental: tratamento
- Fibras polares de clulas com colchicina ou
- Fibras cinetocricas vinblastina leva parada do ciclo
- Fibras livres celular na metfase.

Mitose: telfase Mitose: citocinese

Telfase Citocinese
- descondensao da cromatina (ao de Diviso do citoplasma, deve-se
fosfatases). interao dos filamentos de
actina e miosina II (formam um
- reorganizao dos nuclolos.
anel contrtil na zona equatorial
da clula-me).
- reconstituio do envoltrio nuclear.

- fuso mittico se desmonta.


Contrle do ciclo celular Biologia Celular

Coordenado por cinases dependentes


de ciclina (ativadas por fatores externos)
Fase G0:
- As clulas entram em repouso.
- A partir de G0:
> as clulas podem re-entrar no ciclo ativo;
!permanecerem por um tempo longo; ou
Morte Celular Programada
mesmo permanentemente. (Apoptose)
Ponto de restrio (R):
- impede que clulas defeituosas ou
despreparadas entrem na fase S e
continuem o ciclo.

MPF (Fator Promotor de fase M)


um complexo protico dimrico composto por:
ciclina B1 e protena quinase cdc2.

Cincias Biolgicas

Morte Celular Programada: Significado Biolgico Apoptose (MCP) X Necrose


-Processo ubquo, encontrado em todos os organismos estudados, desde Morte Celular Necrose
nematides at o ser humano, plantas, fungos entre outros. Programada
-Manuteno da homeostase dos organismos vivos - juntamente com a Processo fisiolgico Injrias qumicas e fsicas
Proliferao Celular controla as populaes celulares.
Diminuio do volume celular Inchao celular
-Clula nica organismo altamente complexo
(milhares de eventos de Morte Celular no desenvolvimento. Porqu Fragmentao celular (CORPOS Ruptura de membrana c/
esse desperdcio?) APOPTTICOS) s/ perda de extravasamento de citoplasma
citoplasma
-Fundamental na evoluo dos organismos multicelulares
Fragmentao nuclear Destruio nuclear
-Evoluo X Alta presso seletiva: promoveu a conservao de vrios
componentes (genes) do processo, que so homlogos mesmo em
No induz resposta inflamatria Induo de resposta inflamatria
organismos to distintos quanto nematides e mamferos.
Alteraes morfolgicas tpicas da necrose ou apoptose
Necrose

Apoptose

Apoptose- onde e quando


-Na formao de Estruturas:
Apoptose- onde e quando
-Formao dos dedos dos ps e mos, (morte celular programada das -Na eliminao de clulas anormais
membranas interdigitais de mamferos -clulas contendo mutaes (tumores)
-Formao do tubo neural (invaginao) -Danos irreparveis ao DNA
-Formao do Palato (evaginao) -clulas diferenciadas erroneamente (clones de Linfcitos auto-reativos
-Corao desenvolvidos no timo).
-Retina
-Na Eliminao de estruturas (tecidos inteiros) -Atrofias e Regresso de Hiperplasias
-Eliminao da cauda de girinos (anfbios)
-intestino de anfbios. -Isquemias (hipxia)
-Tecidos larvais em Insetos (metamorfose)
-Tecido mamrio -Radiao, Mutagnese qumica
-No controle das populaes celulares
-Neurnios -Infeco viral
-msculo de camundongos,
-formao do olho (clulas pigmentares)
-
-resposta estmulos trficos (atresia folicular)
Maquinaria da morte celular e sua regulao

A cascata das caspases

A maquinaria
molecular central da
apoptose
Sntese e MACROMOLCULAS E
ORGANELAS ENVOLVIDAS NA
SNTESE
Secreo de Macromolculas Organelas

Macromolculas Protenas Polirribossomos livres,


Retculo endoplasmtico
Rugoso (RER), Complexo de
Golgi (CG)
Carboidratos complexos Retculo endoplasmtico
Rugoso (RER), Complexo de
Professora Luciana O. Andrade Golgi (CG)
Lipdeos Retculo Endoplasmtico
Liso (REL)

BIOSSNTESE E TRANSPORTE DE
MACROMOLCULAS NA CLULA
POLIRRIBOSSOMOS LIVRES

-Protenas citosslicas, nucleares,


mitocondriais, peroxissomos;
POLIRRIBOSSOMOS LIVRES Transcrio do mRNA durante a sntese protica. Observe mRNA,
sub-unidades 40S, 60S, ribossomo 80S e cadeia polipeptdica

-Funo: sntese protica


- Protenas dispersas no citossol (tubulina, actina, etc).
- Protenas nucleares;
- Protenas mitocondriais.

Sequncia sinal nas protenas -


endereamento
Sequncias Sinal determinam o destino da protena na clula.

8
BIOSSNTESE E TRANSPORTE DE RETCULO ENDOPLASMTICO (RE)
MACROMOLCULAS NA CLULA RER Retculo Endoplasmtico
Cisterna, lmen ou luz
Rugoso

ribossomos
cidos graxos
mRNA

-Lipdeos -Protenas:
membrana, secretadas, RER/L,
Golgi

REL Retculo Endoplasmtico


Liso

RE composio qumica RER E REL - FUNES COMUNS


Membranas do Retculo Endoplasmtico:
- 30% lipdeos: fosfolipdeos fosfatidilcolina, esfingomielina.
- Segregao, no interior de suas cavidades, dos
produtos sintetizados em suas membranas.
- 70% protenas: hidrolases, glicosiltransferases, cadeia transportadora de
eltrons, enzimas da sntese de fosfolipdeos e esterides. - Juntamente com os microtbulos e
microfilamentos, do suporte mecnico ao citossol
Contedo das cisternas: devido ao sistema de endomembranas espalhado no
-Soluo aquosa contendo protenas, glicoprotenas e lipoprotenas. Varia citoplasma.
de acordo com: - tipo de RE; tipo celular; estado fisiolgico das clulas.

- Por exemplo:
- PLASMCITOS: contm Imunoglobulinas;
- FIBROBLASTOS: cadeias de protocolgeno;
- CLULAS EXCRINAS DO PNCREAS: hidrolases cidas.
- CLULAS DA ADRENAL: hormnios esterides.
BIOSSNTESE E TRANSPORTE DE Retculo Endoplasmtico Liso - FUNES
MACROMOLCULAS NA CLULA
-Sntese:
-Lipdeos de membrana (todos)

-Hormnios esterides (progesterona, testosterona ou


cidos graxos
ribossomos desoxicorticosterona) a partir do colesterol (adrenal e
mRNA
clulas de Leydig)

REL -Triglicerdeos (clulas absortivas intestinais)

-Lipdeos -Protenas:
membrana, secretadas, RER/L,
- Desintoxicao do organismo: enzimas localizadas nas
Golgi membranas do REL. (fgado, pele, rins e pulmes).

- Controle da atividade de contrao muscular: REL


reservatrio de clcio.

Produo de lipdeos e colesterol Redistribuio de lipdeos na membrana


BIOSSNTESE E TRANSPORTE DE Retculo Endoplasmtico Liso
MACROMOLCULAS NA CLULA
- Exportao de lipdeos para as diferentes membranas.

Transportede lipdeos livre no


citoplasma

Transporte de lipdeos atravs de


vesculas

17

BIOSSNTESE E TRANSPORTE DE Retculo Endoplasmtico Rugoso


MACROMOLCULAS NA CLULA
-Contm os poliribossomos associados, que produzem e
segregam os polipeptdeos no lmen do RE
- Envolvidos na sntese de
ribossomos
protenas destinadas:
cidos graxos
mRNA 1 - prprio RE;
2 Complexo de Golgi;
3 - Lisossomos;
4 - Membrana plasmtica;
RER
-Lipdeos -Protenas:
5 - Exportao.
membrana, secretadas, RER/L,
Golgi
Retculo Endoplasmtico Rugoso - FUNES Reconhecimento do sinal e interiorizao da
cadeia polipeptdica
1. Sntese, reconhecimento e interiorizao de cadeias
polipeptdicas:

Peptdeo Sinal (20-25 aa)

PARTCULA RECONHECEDORA DO SINAL


(Signal-Recognition Particle)

-Ao: interrompe a sntese protica at sua ligao com


receptor prprio localizado na membrana do RE 22

24
Reconhecimento do sinal e interiorizao da
cadeia polipeptdica

TRAM

Sec 61

TRAP

Receptor
PRS

Peptidase
sinal Complexo OST

Translocon

Glicosilao da cadeia polipeptdica no Retculo Endoplasmtico Rugoso - FUNES


interior da cisterna do RER
3. Processamento de cadeias polipeptdicas: estrutura
terciria, quaternria.
Atravs de:
Chaperones Moleculares
(BiP, Hsp70, Dissulfeto
Isomerase -> sequncia
sinal KDEL).

27
Todos os passos de sntese, reconhecimento, interiorizao Sequncia sinal nas protenas endereadas
e processamento de polipeptdeos no RER ao RER
Sequncias Sinal determinam o destino da protena na clula.

TRANSPORTE DE MACROMOLCULAS

-Lipdeos -Protenas

32
Complexo de Golgi Complexo de Golgi - FUNES
-Carboidratos complexos;
- Modificaes (terminais) ps-traducionais nas
-Modificaes de protenas e lipdeos macromolculas alteraes na forma tridimensional e na
funo.
Glicosilao inicial RER.
Glicosilao terminal CG.

A glicosilao terminal determina a especificidade e o destino


final das glicoprotenas.
Por exemplo: as protenas dos lisossomos so modificadas no CG
fosforilao no C6 de uma manose (MANOSE-6-FOSFATO)
constitudo por sacos direcionamento para a face trans e ento para os lisossomos.
membranosos, achatados e
empilhados.
Na maioria das clulas - sntese da poro glicdica das proteoglicanas
eucariontes, cada pilha (componentes da matriz extracelular): polimerizao das
apresenta 4-6 sculos. glicosaminoglicanas.

Complexo de Golgi - FUNES Funes das cisternas do Golgi


O CG o principal centro de trfego de membranas no interior da clula
1. Participa do metabolismo de lipdeos:
sntese de glicolipdeos e esfingomielina.
(face trans ou de maturao)

2. Sulfatao e fosforilao de protenas,


lipdeos e glicdeos.

3. Formao dos lisossomos.


(face cis ou de formao)

Livre ou associado

Retculo Endoplasmtico
Complexo de Golgi - Funes Complexo de Golgi - Funes
Para assegurar que o transporte ocorra eficientemente, a
- VIA SECRETORA: Destinao e exportao de superfcie citoplasmtica de certas vesculas de transporte so
macromolculas realizados por vesculas de transporte. recobertas com protenas:
Via de fluxo contnuo no-regulada
1- Vesculas cobertas por clatrina e adaptinas: participam da endocitose
Leva secreo contnua de macromolculas que a clula e do transporte de molculas da rede trans do CG para os lisossomos.
libera (exocitose) medida que as elabora. Ex: colgeno pelos
Fibroblastos, protenas do soro pelos hepatcitos. 2- Vesculas do tipo COP-I (Coat Proteins): vesculas que brotam do CG
-> sugere-se que estejam envolvidads no transporte de molculas entre os
sculos de Golgi e recilcagem de molculas.
Via secretora regulada - Compostas por complexos de protenas diferentes de clatrina e adaptina.
Macromolculas especficas so secretadas em resposta a
sinais extra celulares. Ex: hormnios, NTs, enzimas digestivas 3- Vesculas do tipo COP-II (Coat Proteins): vesculas que brotam do RE
pelas clulas do pncreas. -> transporte de molculas do RE para o CG.
- Compostas por complexos de protenas diferentes de clatrina e adaptina.

Vesculas cobertas por Clatrina e adaptinas

Sistema de degradao
de macromolculas na
clula
Lisosomas: 0,5 3,0 m Lisosomas funes
Compartimento delimitado por Digerem molculas introduzidas na clula por
membrana que contm pinocitose, fagocitose
enzimas hidrolticas cidas.
Digerem organelas prprias da clulaem um processo
Estas enzimas so sintetizadas
no RER modificadas no CG e denominado autofagia
somente ativadas em pH cido.
Podem se fundir com a membrana plasmtica para
Sua membrana contem reparo da membrana
protenas especficas
caractersticas desta organela
(transportadores e protenas Podem se fundir com a membrana plasmtica para
estruturais)
degradao de protenas extracelulares
(reabsoro matriz ssea no crescimento)
Possuem forma e tamanho
variveis

Lisosomas funes Proteasomas


. .. .
EXOCITOSE .. ..
ENDOCITOSE/ Grande complexo protico situado no ncleo e citoplasma em
Pinocitose eucariotos e responsvel pela degradao de protenas
FAGOCITOSE velhas ou desnecessrias (importante no contrle da qtde de
certas protenas no citoplasma)
... . LS
EP

ET Degradao feita por proteases: levam a formao de septa e


LP
octapeptdeos
AUTOFAGIA CG

MT Ubiquitinao para marcao de protenas a serem


Nu
CR degradadas (ubiquitina ligases)
RE

CR
Proteasoma: funes Proteasoma: funes
Degradao

4 anis proticos
internos: Subunidades
2 anis de 7
subunidades (portes) regulatrias
e dois anis internos de
7 subunidades cada,
contendo os 6 stios
ativos com atividade
protesica

Exemplos da importncia dos proteasomos


-contrle da formao de agregados proticos

-contrle do ciclo celular

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