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PREGUNTAS

1. EN QU CONSISTE LA PRUEBA DE ADDIS

Conteo de Addis o tambin conocido como recuento de Addis, es un anlisis de

orina que permite valorar la funcionalidad renal mediante el estudio
microscpico de los sedimentos urinarios.
La prueba consiste en el conteo celular y de cilindros en la orina centrifugada,
donde el paciente es sometido a una dieta restrictiva de lquidos, para luego
recolectar la orina, la cual debe hacerse de forma cronometrada en 2 h, 4 h o
24 h. La determinacin de proteinuria minutada debe hacerse por el mtodo
de Biuret.

Los objetivos principales son:

- Deteccin precoz de las lesiones renales.

- Localizacin anatmica del dao (pre renal, glomerular, tubular).

- Cuantificar el dao del rgano comprometido.

Las cifras o valores normales son:

Protenas: menor a 0.03 mg/min.
Hemates y leucocitos: menor 1000/min.
Cilindros: menor 250/min.

4. FUNDAMENTO DE LOS PARAMETROS BIOQUIMICOS DE LAS TIRAS

REACTIVAS.
Consisten en una cinta de material plstico o papel, de aproximadamente 5
milmetros de ancho, las cintas de material plstico constan de unas
almohadillas impregnadas de sustancias qumicas que reaccionan con los
compuestos presentes en la orina produciendo un color caracterstico. En las
cintas de papel, los reactivos se encuentran absorbidos directamente sobre la
misma. Las cintas de papel frecuentemente son especficas para una nica
reaccin (por ejemplo medicin de pH), mientras que las cintas con
almohadillas permiten realizar varias determinaciones simultneamente.
Existen tiras reactivas con diferentes objetivos, hay tiras cualitativas que solo
determinan si la muestra es positiva o negativa, y hay semi cuantitativas que
adems de brindar una reaccin positiva o negativa aproximan un resultado
cuantitativo; en estas ltimas las reacciones de color son aproximadamente
proporcionales a la concentracin de sustancia presente en la muestra. La
lectura de los resultados se realiza comparando los colores obtenidos con una
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escala de colores provista por el fabricante, no necesitando de aparatos

adicionales.

pH
Las marcas comerciales miden el pH en aumentos de 0,5 a 1 unidades entre
los pH 5 y 9. Para diferenciar el pH en este amplio rango se utiliza
frecuentemente un sistema de indicador doble de rojo de metilo y azul de
bromotimol. El rojo de metilo produce un cambio de color del rojo al amarillo
en el rango de pH de 4 a 6, y el azul de bromotimol vira del amarillo al azul
en el rango de 6 a 9. En el rango de 5 a 9 medido por las tiras se observan
colores que progresan del anaranjado a pH 5, pasando por el amarillo y verde,
hasta el azul oscuro a pH 9.

PROTENA
La prueba de protenas en orina de las tiras reactivas se basa en el principio
de error proteico de los indicadores para producir una reaccin colorimtrica
visible. Este principio se basa en el hecho de que algunos indicadores de pH
cambian de color ante la presencia de protenas an cuando el pH del medio
permanece constante. Esto se debe a que las protenas (y en especial la
albmina) adquieren iones hidrgeno a expensas del indicador, debido a que
los grupos amino de las protenas son aceptores especialmente eficientes de
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iones H+. De acuerdo con el fabricante, el rea de protenas de la tira

contiene azul de tetrabromofenol o 3',3,5',5-tetraclorofenol-3,4,5,5-
tetrabromosulfonftalena, ms una sustancia amortiguadora cida, para
mantener el pH a un nivel constante. A pH 3 y en ausencia de protenas
ambos indicadores aparecen de color amarillo, al aumentar la concentracin
de protena el color progresa por varias tonalidades de verde, hasta llegar
finalmente a azul oscuro.
Indicador-H+(Amarillo) + Protena Indicador(Verde-azul) + Protena-H+
Los principales problemas con las tiras de protenas son en primer lugar, las
orinas muy alcalinas que anulan el sistema amortiguador cido y producen un
color no relacionado con la presencia de protenas. Otro error similar es el
que se obtiene al dejar demasiado tiempo sumergida la tira en la muestra de
orina. Un inconveniente a tener en cuenta es que las tiras de orina detectan
principalmente albmina, por lo que de hecho puede haber un cierto grado de
proteinuria (p. ej. proteinuria de Bence Jones) sin que las tiras registren un
gran aumento.

GLUCOSA

Las tiras de orina basan la deteccin de glucosa en la reaccin enzimtica de

la glucosa oxidasa. Esta enzima cataliza la oxidacin de la glucosa por el
oxgeno ambiental para formar D-glucono--lactona y perxido de hidrgeno.
En una segunda reaccin acoplada, mediada por una
enzima peroxidasa cataliza la reaccin entre el perxido y un cromgeno (una
sustancia que adquiere color luego de una reaccin qumica), para formar un
compuesto coloreado que indica la concentracin de glucosa.

1)Catalizada por Glucosa Oxidasa

Glucosa + O2 D-glucono--lactona + H2O2

2)Catalizada por peroxidasa

H2O2 + Cromgeno Cromgeno oxidado (coloreado) + H2O

Como todos los mtodos enzimticos, la reaccin es especfica para
glucosa, pero pueden presentarse algunos falsos positivos debido a la
presencia de restos de agentes oxidantes fuertes o perxido de los
desinfectantes en el instrumental del laboratorio.

CETONAS
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Las pruebas de tira reactiva se basan en la reaccin del nitroprusiato

(nitroferricianuro). En esta reaccin el cido acetoactico en medio alcalino
reacciona con el nitroprusiato de sodio para producir un complejo de color
magenta:8 11

Na2[Fe(CN)5NO] + CH3COCH2COOH + 2Na(OH) Na4[Fe(CN)5-

N=CHCOCH2COOH](magenta) + H2O

Nitroprusiato + cido acetoactico + Medio bsico Complejo rosa-

magenta + Agua
La prueba no mide cido hidroxibutrico, y es solo dbilmente sensible a
acetona cuando se adiciona glicina a la reaccin, sin embargo como estos
compuestos provienen del cido acetoactico, puede presuponerse su
existencia y no es necesaria una demostracin selectiva. Las medicaciones
que contienen grupos sulfhidirlo, tales como el mercaptoetano sulfonato
sdico (MESNA) y captoprilo y la levodopa pueden dar coloraciones atpicas.
En muestras conservadas inadecuadamente puede ocurrir una disminucin
falsa de los valores debido a volatilizacin y degradacin bacteriana.

HEMOGLOBINA
La tira reactiva para sangre se basa en la actividad pseudoperoxidasa de la
hemoglobina para catalizar una reaccin entre perxido de hidrgeno y el
cromgeno tetrametilbencidina para producir un producto oxidado de color
azul oscuro. Dependiendo de la cantidad de hemoglobina, el color puede
variar de verde a azul oscuro.

Catalizada por hemoglobina como peroxidasa

H2O2 + Cromgeno Cromgeno oxidado (coloreado) + H2O

La reaccin no es exclusiva de la hemoglobina sangunea y otras globinas
con grupo hemo tales como la mioglobina pueden catalizar la misma reaccin.
La mioglobina, no solo reacciona de modo positivo en la prueba de tira
reactiva para sangre, sino que tambin puede producir orina lmpida de color
rojo a marrn. La presencia de mioglobina en lugar de hemoglobina debe
sospecharse en patologas asociadas con destruccin muscular (rabdomilisis),
tales como traumatismos, sndrome de aplastamiento, coma
prolongado, convulsiones, atrofia muscular progresiva, alcoholismo, abuso
de herona y actividad fsica extensa.
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La fraccin hemo de estas protenas es txica para los tbulos renales, y las
concentraciones elevadas pueden provocar insuficiencia renal aguda.

BILIRRUBINA

Las tiras reactivas utilizan una reaccin de diazotacin para la deteccin de

bilirrubina. La bilirrubina se combina con una sal de diazonio (2,4-
dicloroanilina o 2,6-diclorobenceno-diazonio-tetrafluoroborato) en medio
cido para producir un colorante azoico con colores que varan del rosado al
violeta:8

En medio cido

Glucurnido de bilirrubina + Sal diazo Colorante azoico

(violeta)
Las reacciones falsas positivas se deben a pigmentos no usuales en orina
(p. ej. los metabolitos de fenazopiridina de color amarillo-
naranja, indicn y metabolitos de la medicacin Lodine (etodolac) . Los
falsos negativos pueden deberse a muestras mal conservadas ya que la
bilirrubina es fotosensible y sufre un proceso
de fotooxidacin a biliverdina cuando es expuesta a la luz, o por hidrlisis
del glucurnido que produce bilirrubina libre ya que esta ltima es menos
reactiva.

UROBILINGENO

Las reacciones que se producen en la tira reactiva varan de acuerdo al

fabricante, pero en concreto dos son las ms utilizadas. Por un lado algunos
fabricantes utilizan la reaccin de Ehrlich en la que el urobilingeno reacciona
con con p-dimetilaminobenzaldehdo (reactivo de Ehrlich) para producir
colores que varan del rosa claro al rosa oscuro. Otros fabricantes utilizan una
reaccin de acoplamiento diazo que utiliza 4-mtoxibenceno-diazonio-
tetrafluoroborato para producir colores que varan del blanco al rosa. Esta
ltima reaccin es ms especfica.

(1) Reaccin en Multistix (en medio cido)

Urobilingeno + p-dimetilaminobenzaldehdo Colorante rojo

(2) Reaccin en Chemstrip (en medio cido)

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Urobilingeno + 4-mtoxibenceno-diazonio-tetrafluoroborato
Colorante azoico rojo
La reaccin de Ehrlich en Multistix est sujeta a varias interferencias:
porfobilingeno, indicn, cido p-aminosaliclico, sulfonamida,
metildopa, procana y clorpromacina. La sensibilidad de la reaccin
aumenta con la temperatura, debindose realizar a temperatura
ambiente. Resultados falsos negativos pueden aparecer con muestras
mal conservadas, pues el urobilingeno sufre fotooxidacin a urobilina
que no reacciona. El formol utilizado como conservante produce falsos
negativos con ambas reacciones.

NITRITOS

Las tiras reactivas detectan nitrito por medio de la reaccin de Greiss en la

que el nitrito reacciona en medio cido con una amina aromtica (cido para-
arsanlico o sulfanilamida) para formar una sal de diazonio que a continuacin
se hace reaccionar con una tetrahidrobenzoquinolina para producir un
colorante azoico de color rosa.

1) En medio cido

cido para-arsanlico o sulfanilamida + NO2 Sal de diazonio

2) En medio cido

Sal de diazonio + tetrahidrobenzoquinolina Colorante azoico

rosa
La prueba de nitritos no es especialmente fiable, y las pruebas
negativas en presencia de sntomas clnicos no son raras, por lo que no
debe tomarse como un resultado concluyente. Los microorganismos no
reductores de nitrato no dan reaccin positiva, las bacterias reductoras
deben permanecer en contacto con el nitrato el tiempo suficiente para
producir cantidades detectables (primera orina de la maana o al
menos 4 horas de retencin urinaria), grandes cantidades de bacterias
pueden producir la reduccin total del nitrito hasta formar nitrgeno,
lo que causa una reaccin negativa, la administracin de antibiticos
inhibe el metabolismo bacteriano causando reacciones negativas an
con bacteriuria, y algunas sustancias tales como el cido ascrbico
compiten con la reaccin de Greiss pudiendo producir resultados
falsamente disminuidos.
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LEUCOCITOS

La reaccin de la tira reactiva se sustenta en la accin de la esterasa

leucocitaria para catalizar la hidrlisis de un ster de cido indolcarboxlico.
El indoxilo liberado se combina con una sal de diazonio para producir un
colorante azoico de color violeta.

1) Catalizado por esterasa leucocitaria

ster de cido indolcarboxlico Indoxilo + cido

2) En medio cido

Indoxilo + Sal de diazonio Colorante azoico violeta

La reaccin de la esterasa es la que ms tiempo requiere (alrededor de
5 minutos). La presencia de agentes oxidantes fuertes o formol causa
falsos positivos. Resultados falsos negativos se asocian a concentracin
elevada de protenas (mayor a 500 mg/dL), glucosa (mayor a 3
g/dL), cido oxlico y cido ascrbico. Orinas con alta densidad
pueden provocar la crenacin de los leucocitos que pueden impedir la
liberacin de las esterasas.

PROTEINAS

El cido sulfosalicilico precipita la albmina presente en la orina, dando una

turbidez aproximadamente proporcional a la concentracin existente.

La prueba se basa en la capacidad de las protenas para alterar la reaccin al

color sin modificar el pH. La tira reactiva se encuentra impregnada con azul
de tetrabromofenol tamponado hasta un pH cido de 3 en forma de
tetraclorofenol-tetrabromosulftaleina.

GLUCOSA

La glucosa se reduce a cobre de la solucin alcalina del reactivo de Benedict a

oxido cuproso con la formacin de un precipitado de color rojo ladrillo.

Se basa en el mtodo especifico enzimtico de doble secuencia, con glucosa

oxidada, peroxidasa y un cromgeno, la intensidad del color verde a azul
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depende de la cantidad de glucosa existente, pudindose obtener resultados

semi cuantitativos de 100 gr/dl.

ACETONA

El nitroputasio sodico en presencia de acetona forma un color violeta. La zona

reactiva tamponada alcalinamente contiene nitroputasio sdico y glicina, que
al reaccionar con el cido aceto actico y acetona forman un compuesto de
color violeta.

HEMOGLOBINA

La hemoglobina y el peroxido de hidrgeno oxidan al piramidon produciendo

un color rosa violeta. La prueba se basa en la liberacin de oxigeno por el
peroxido de la tira reactiva. La zona de la relativa esta imnpregnada de una
mezcla tamponada de un peroxido
orgnico y el cromogeno tetrametilbencina que es oxidado por el hem de la
hemoglobina presente, produciendo un color verde a verde azulado.

BILIRRUBINA

Se basan en una diazoreaccion en que la bilirrubina presente en la orina se

acopla con el sulfonqato de p-nitrobencenodiazonio-p-tolueno para dar una
coloracin azulado prpura.

UROBILINOGENO

El urobilingeno se encuentra en la orina en condiciones normales. La zona de

la tira reactiva contiene una sal de diazonio y un tampn que mediante
reaccin de acoplamiento con el urobilingeno presente forma un color
azulico rojizo.
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NITRITOS

La prueba depende de la conversin de nitratos en nitritos por accin

bacteriana de la orina. La zona ms reactiva tamponada est impregnada de
una amina y un acoplador.

REFERENCIAS
1. Moreno Tellez, Ela. Sistematizacin de pruebas de laboratorio clnico en
las enfermedades renales. Archivo Mdico de Camagey. 2001.
2. STRASINGER, Susan King; Marjorie Schaub Di Lorenzo. Anlisis de orina y
de los lquidos corporales. 5ta edicin. Editorial Mdica Panamericana.
Espaa. 2010.
3. Graff Laurine S. Anlisis de orina. Editorial Mdica Panamericana.
Argentina. Cap. 2. 1987.
4. Medi-Test. Anlisis de Orina. Disponible en: ftp://ftp.mn-
net.com/espanol/Flyer_Catalogs/Medi-Test/Br_Medi-TestES.pdf.