Clase 4

Citogenética Médica y
Mutagénesis

Gisel Padula

¿Qué es la Citogenética?

Es la rama de la genética que tiene por objeto el
estudio de la estructura y comportamiento
cromosómico, a través de técnicas de microscopía

¿Qué son los cromosomas?

“Cuerpos coloreados” (cromo:
color; soma: cuerpo)
Cromosoma: unidad de
organización y funcional,
estructura microscópica
Es un estado permanente
dentro del ciclo celular, pero
su condensación es máxima
en metafase

¿Cuáles son las partes de un cromosoma? brazo corto brazo largo .

Diagnóstico prenatal: líquido amniótico y vellosidad corial . médula ósea. ¿Cómo se obtienen los cromosomas? Los cromosomas se pueden obtener a partir de diferentes tejidos u órganos . etc .Diagnóstico postnatal: sangre periférica. células tumorales.

0.5 a 5 ml de sangre periférica (heparina)  siembra de las células en medio de cultivo + suero + antibiótico y antimicótico + mitógeno Incubación a 37 ºC durante 48 a 72 hs  Agregado de un agente antimitótico  Agregado de solución hipotónica  Fijación de las células  Goteo del material en portaobjetos  Coloración  Análisis microscópico  .

morfología y estructura). de mayor a menor tamaño y de acuerdo a la posición del centrómero Según lo establecido por ISCN (Sistema Internacional de Nomenclatura en Citogenética Humana). la clasificación básica comprende 7 grupos . Cariotipo Ordenamiento sistemático de los cromosomas. Se establece a partir de las tres constantes cromosómicas (número. Los cromosomas se ordenan de a pares.

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a nivel fetal “Diagnóstico Prenatal” y en individuos ya nacidos y adultos “Diagnóstico Postnatal” .Citogenética Clínica Se trata de la investigación y diagnóstico de patologías cromosómicas.

Anomalías Cromosómicas Se presentan en 1 de cada 150 nacidos vivos Son la principal causa conocida de retraso mental y de pérdida de la gestación Se observan anomalías cromosómicas entre el 50 y el 20 % de los abortos espontáneos del 1er y 2do trimestre Se clasifican en: Anomalías del Número (ACN) Anomalías de la Estructura (ACE) .

Monoploidía (x) .autosómicas .gonosómicas . . . Anomalías Numéricas Euploidía: presencia de uno o más juegos haploides en las células.Poliploidía (3n. 4n) Aneuploidía: se pierden o se ganan algún/os cromosomas.

Anomalías del Número de Cromosomas Poliploidías Triploidías (3n = 69) Tetraploidía (4n = 92) .

Diginia . Diandria. Causas de Poliploidías Dispermia.

Aneuploidías Autosómicas Monosomías (2n-1= 45): una única copia de un cromosoma en una célula (incompatibles con la gestación a término) Trisomías (2n+1= 47): tres copias Ejemplos de trisomías .

Anafase lag . Aneuploidías Causas: No-disyunción.

XX.000 nv. Sindrome de Edwards: 1/ 6. El grado de retraso es mayor que en S.XX.+21).+18). Trisomía 13 (47. Trisomía 18 (47. XY. de Down. Trisomía 21 (47. .+13). Sindrome de Down: frecuencia 1/750 nv. Sindrome De Patau: 1/12.000 nv.

a los 40 años 1/100 2 factores: Por envejecimiento celular y cambios en el medio hormonal. Trisomías y Edad Materna La mayoría de las trisomías aumenta su prevalencia a medida que avanza la EM Ej. S. a los 35 años 1/400. Se pierde la capacidad de reconocer concepciones anormales y eliminarlas . Down: en < 30 años 1/800.

de Turner: 1/2700 mujeres nv . Aneuploidías Gonosómicas Las consecuencias son menos graves que las aneuploidías de los autosomas por la inactivación del X Ejemplos Monosomía del X (45. S. X0).

000 varones nv (trastornos menores de conducta y CI levemente disminuido) .XXXXX: aumento del retraso mental y físico 47.000 mujeres nv 48.000 varones nv (47.XXXX o 49.XXX): 1 /1.XXY): 1/ 1.Sindrome de Klinefelter (47.XYY: 1/1.

Anomalías de la estructura cromosómica Equilibradas: la redistribución no causa una pérdida o ganancia de material cromosómico Desequilibradas: hay pérdida o ganancia Las anomalías estructurales. pueden originar enfermedades en los individuos o en su descendencia . especialmente las desequilibradas.

Frecuencia 1/500 individuos Translocaciones Recíprocas: las roturas ocurren en dos cromosomas diferentes y el material se intercambia mutuamente. . Equilibradas Translocaciones: intercambio de material genético entre cromosomas no homólogos.

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Ej. El nro.21) segregación adyacente: S.: t(14. cromosómico disminuye en 1. Translocaciones Robertsonianas: se pierden los brazos cortos y se funden los brazos largos de los cromosomas acrocéntricos. Down .

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Translocación Robertsoniana y Origen Humano .

Paracéntrica (no lo incluye). . Pericéntrica (incluye el centrómero) o i. Puede ser: i. Frecuencia: 1/1.Inversión: dos roturas en un cromosoma seguidas de la reinserción del fragmento en orden invertido.000.

de Prader- Willi (15q paterno).: S. . de Angelman (15q materno). de cri-du-chat: del (5p). Desequilibradas Deleciones: causada por una rotura cromosómica y la consiguiente pérdida del material genético Ejs. De Wolf: del (4p) Microdeleciones: deleciones identificadas con las técnicas de bandeo de alta resolución y citomoleculares. S. S.: S. Ejs.

. Pueden originarse de cruzamientos desiguales o aparecer en la descendencia de portadores de una translocación recíproca. Duplicaciones: copias extras de un segmento cromosómico.

q22) Tumores sólidos Linfoma de Burkitt t(8. FISH y análisis molecular permite la clasificación de las neoplasias y la monitorización del efecto del tratamiento Leucemias LMC t(9.14) (q24.21) (q22. Citogenética del Cáncer La combinación de citogenética convencional.22) (q34.q32) Retiniblastoma del (13) (q14) Tumor de Wilms del (11) (p13) .q11) LMA t(8.

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Mutagénesis La citogenética se utiliza también para medir el efecto de agentes mutagénicos valorando la presencia de ACN y ACE .

en células somáticas y germinales. pueden producir alteraciones sobre el genoma.Genotoxicidad Agentes genotóxicos. Estos eventos pueden ser causa de cáncer y defectos del desarrollo . artificiales y naturales.

amniótico y vellosidad corial) Los estudios pueden ser: . Obtención de Cultivos Diferentes tejidos (sangre periférica. líq.In vivo (epidemiológicos o de intervención) . líneas celulares o animales de laboratorio) . médula ósea. células tumorales.In vitro (células.

Evaluación de Cito y Genotoxicidad De Nivel Primario: procariotas De Nivel Secundario: líneas celulares De Nivel Terciario: animales de laboratorio De Nivel Cuaternario: poblaciones expuestas Análisis de Aberraciones Cromosómicas Estructurales (ACE) Ensayo de micronúcleos por bloqueo de la citosinesis (CBMN) Ensayo de electroforesis en gel de células individuales (Cometa) .

chrg) SUBCROMÁTIDA .Brechas intersticiales o gaps (chtg.Adhesividad cromosómica (tas) TIPO .Fractura de cromátida (chtb.Intercambios Asimétricos o Cromosomas dicéntricos (dic) . chrb) CROMÁTIDA TIPO .Cromosomas en anillo (r) CROMOSOMA . Análisis de ACE TIPO .Fragmentos Cromosómicos (ace) .

5 a 5 ml de sangre periférica (heparina)  siembra de las células en medio de cultivo + suero + antibiótico y antimicótico + mitógeno Incubación a 37 ºC durante 48 a 72 hs  Agregado de un agente antimitótico  Agregado de solución hipotónica  Fijación de las células  Goteo del material en portaobjetos  Coloración  Análisis microscópico  . 0.

estableciéndose la frecuencia de cada tipo de alteración cromosómica Con esta técnica podemos evaluar la citotoxicidad a través del establecimiento del Índice Mitótico (IM) IM= metafases/1000 células . Análisis microscópico Se analizan 200 metafases por cada punto experimental.

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Ensayo CBMN Los micronúcleos (MN) son pequeñas masas de cromatina que se ubican próximos a los núcleos en interfase Se originan durante la división celular por la pérdida de fragmentos y/o cromosomas enteros Esta técnica permite también detectar : .Cromosomas dicéntricos (Puentes nucleoplásmicos o NPBs) .Amplificación del ADN (Brotes nucleares o NBUDs) .

0.5 a 5 ml de sangre periférica (heparina)  siembra de las células en medio de cultivo + suero + antibiótico y antimicótico + mitógeno Incubación a 37 ºC durante 72 hs  Agregado de un agente bloquedor de la citosinesis  Agregado de solución hipotónica  Fijación de las células  Goteo del material en portaobjetos  Coloración  Análisis microscópico  .

Análisis microscópico
Se contabilizan los MN, los NPBs y
los Nbuds en 1000 células
binucleadas (BN)
Se contabilizan células apoptóticas
y necróticas en 500 BN
Asimismo, se puede establecer el
Índice de división nuclear (IDN)

IDN= 1 x nro. de células
mononucleadas + 2 x nro. de células
binucleadas + 3 x nro. de células tri y
tetranucleadas/nro. total de células
contadas (500)

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durante la electroforesis. Ensayo Cometa Consiste en la electroforesis en gel de células únicas Es una técnica muy sensible que detecta roturas de cadena sencilla. de fragmentos rotos de ADN . Se basa en la migración.

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50 µl de sangre periférica (heparina)  las células se mezclan con agarosa  siembra de la preparación en portaobjetos con capa de agarosa  los preparados se sumergen en lisis (desnaturalización de proteínas)  corrida electroforética (desnaturalización del ADN)  Coloración (colorante fluorescente)  Análisis al microscopio (de fluorescencia)  .

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Olive Tail moment). Análisis cualitativo: se asignan niveles o grados de daño según la extensión que adquiere la cola del cometa. . Análisis microscópico Se analizan 100 imágenes por punto experimental utilizando un microscopio de fluorescencia. de 0 (cola no visible) a 4 (cabeza de cometa detectable pero más ADN en la cola). Tail moment. Análisis cuantitativo: a través de un programa se realizan mediciones (diámetro de la cabeza. largo y ancho de la cola) y se calculan diferentes índices (Tail Length. Las células se clasifican en 5 categorías.