FACULTAD DE MEDICINA HUMANA Y CIENCIAS DE LA SALUD

ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE FARMACIA Y
BIOQUÍMICA

ANTEPROYECTO:
ANALISIS FISICOQUIMICO Y FITOQUIMICO DE LOS EXTRACTOS
ETANOLICOS DE HOJAS Y SEMILLAS DE CACAO
(THEOBROMA CACAO) AREQUIPA - 2015

ALUMNO:
JHONATHAN CHAVEZ BERVEÑO

AREQUIPA – PERÚ

2014

I. INTRODUCCIÓN

En el mundo de la salud natural no es novedad que el cacao puro es uno de los
alimentos que más propiedades beneficiosas para la salud del corazón posee. El
cacao aporta muchos beneficios también al equilibrio de la presión arterial y del
colesterol.

Las principales fuentes de estos compuestos son el té, el cacao, las aceitunas,
las manzanas

Norman Hollenberg, Profesor de Medicina de Harvard Medical School presenta
los resultados epidemiológicos que sugieren que los alimentos ricos en
Flavonoides, específicamente el cacao, podrían proporcionar grandes beneficios
en los manejos de 2 enfermedades más comunes con causa de muerte en el
mundo: enfermedades cardiovasculares y el cáncer.

Gran cantidad de estudios han demostrado los diversos y positivos roles que el
cacao puede jugar potencialmente para mejorar la salud pública ya que tiene
antioxidantes naturales que ejercen efectos beneficiosos tanto a nivel físico
como su acción de vasodilatación como a nivel psicológico, proporcionando una
sensación de vitalidad y energía todo ello es por la presencia de diferentes
metabolitos secundarios.

Los metabolitos secundarios son compuestos químicos sintetizados por las
plantas para realizar determinadas funciones, dispersión de semillas, defensa
frente a determinadas agresiones o la captación de los insectos polinizadores,
son un elemento importante y necesario ya que en el reino vegetal representan
una ventaja competitiva.

Cada familia de plantas utiliza precursores químicos comunes originando
diferentes resultados. También son importantes para los humanos, pues

es por ello el objetivo de este trabajo. Es importante resaltar que los estudios que se realizarán sobre las hojas y semillas de Cacao puedan servir de base para la posterior semisíntesis de fármacos o como modelo de nuevos fármacos sintéticos.presentan incontables aplicaciones en los campos de la farmacología. la industria agrícola o la industria cosmética. . Este estudio se realizará con el de identificar los principales metabolitos secundarios del cacao (Theobroma cacao) con posible acción farmacológica Sin embargo no se precisa un análisis fitoquímico y fisicoquímico lo cual es importante.

triterpenos y/o esteroides. aminoácidos. saponinas. También se cuantificaron algunos de estos metabolitos. así como 2 compuestos cromatográficamente puros. Se determinó la composición química general de la droga mediante ensayos de tamizaje fitoquímico. . antocianidinas. glicósidos y quinonas. se detecta rutina y quercetina. donde se determinaron inicialmente las características macromorfológicas y micromorfológicas de las hojas y tallos de la especie. taninos pirocatecólicos. además. alcaloides. Universidad de La Habana 2010 RESUMEN Se realizó un estudio farmacognóstico y fitoquímico preliminar dePhyllanthus orbicularis HBK. principios amargos y astringentes. y se detectó la presencia de flavonoides. Se estandarizó la droga cruda. Se procedió finalmente. Gloria del Barrio. que según los análisis efectuados se sospecha que sean flavonoides. Migdalia Miranda Martínez. Noel Varona Torres y José Luis Mayoral Jiménez TEMA: Evaluación farmacognóstica y fitoquímica preliminar de hyllanthus rbicularis HBK Instituto de Farmacia y Alimentos. mucílagos. sustancias reductoras. obteniéndose fracciones muy simples con la presencia de dichos compuestos. cuyos valores promedio obtenidos se encontraban dentro del rango permisible. cuando los comparamos con los de drogas oficiales. coumarinas. LOCAL AUTOR: Yamilet Irene Gutiérrez Gaitén. a la extracción y fraccionamiento de flavonoides.

. HIPÓTESIS Dado que a las hojas y semillas de cacao se le atribuye efectos terapéuticos en la medicina popular es probable que en los extractos etanólicos se pueda identificar metabolitos secundarios en mayor cantidad en semillas que hojas ya que en las semillas se encuentra los códigos genéticos de la planta . II.

1. densidad y viscosidad. OBJETIVOS 3. . OBJETIVO GENERAL  Realizar un análisis fisicoquimico y fitoquimico de la hojas y semillas de cacao (Theobroma cacao) 3. III. OBJETIVOS ESPECÍFICOS  Preparar los extractos etanolicos de hojas y semillas de cacao  Identificar los metabolitos secundarios de semillas de cacao.2.  Identificar los metabolitos secundarios de las hojas de cacao.  Determinar el PH.

IMPORTANCIA O CONTRIBUCIÓN DEL ESTUDIO: El trabajo que se realizará nos favorecerá porque nos brindará información además de ofrecer un aporte científico sobre el estudio del cacao con el fin de evitar posibles enfermedades. TRASCENDENCIA. Al culminar con el trabajo se proporcionará datos importantes en la investigación tal como establecer hasta qué grado puede ser eficaz el cacao. ALCANCE. . IV. en que presentaciones farmacéuticas puede ser llevada al mercado según sus características químicas.

PROCEDIMIENTO: El cacao colectado (tallos y hojas). METODOLOGÍA DEL TRABAJO 6. FUNDAMENTO: Se expone un método de lavado del material vegetal del cacao con el fin de disminuir su contaminación microbiana y asegurar su calidad. . V. LAVADO A. MÉTODO: Manual B. se lavará dos veces con agua de llave y una con agua destilada a temperatura ambiente con la finalidad de eliminar restos de tierra y otros materiales.2. C. RECOLECCIÓN DEL VEGETAL Dicho vegetal se comprará en el mercado Andrés Avelino del Distrito de José Luis Bustamante Y Rivero. POBLACIÓN Y MUESTRA La población lo conformaran una determinada cantidad de semillas y hojas de cacao durante la realización del trabajo de investigación se seleccionaran la unidad de muestra.1. 6.

MÉTODO EXTRACCIÓN POR EQUIPO SOXHLET DE SEMILLAS Y HOJAS DE CACAO . su humedad relativa debe ser baja. 5. sea tanto que se utilice secado al aire libre como secado mecánico. y deberá renovarse a medida que sea necesario en tanto el producto no haya cedido el agua que contiene en exceso. FUNDAMENTO El aire es el que absorbe el vapor de agua que se retira de las plantas por lo que no debe estar saturado. C. MÉTODO SECADO AL AIRE LIBRE B. SECADO A. EXTRACCIÓN DEL EXTRACTO ETANOLICO DE LAS HOJAS Y SEMILLAS DE CACAO A.3. transcurrido el tiempo se guardará en bolsas de papel etiquetadas para su posterior uso. PROCEDIMIENTO Se extenderá sobre papel craff y se colocará a la sombra para su secado. es decir.

FUNDAMENTO El método se basa en la extracción de grasa de la muestra mediante el tratamiento con solvente en el aparato de Soxhlet. el adaptador y el refrigerante.  Al final. . No tocar con las manos libres.  Registrar los pesos obtenidos. el equipo se ensambla en éste orden). Evaporar la solución.  Calentar el matraz con la cocina eléctrica. PROCEDIMIENTO  Triturar o dejar en partículas más pequeñas las hojas y semillas de cacao  Secado al aire libre. la duración del tiempo de extracción depende del tipo de muestra que se analice.  Agregar al matraz balón la solución de etanol para la extracción etanólica de las hojas y a otro matraz balón agua para la extracción de las semillas. pero la mayoría requieren hasta de 4 horas. C.  El proceso es cíclico.  La muestra se pone dentro del cartucho de papel filtro en la cámara interior del extractor. el extractor Soxhlet. por lo que se dejara calentado de 3 a 4 horas para extraer todos los lípidos de la muestra.  Pesar el matraz balón.B. se observará la solución con ciertas cantidades de lípidos.  Ensamblar las partes del equipo Soxhlet (el matraz balón. envolver en papel filtro la muestra total y volver a pesar.  Pesar la muestra seca.

FUNDAMENTO El reconocimiento de metabolitos secundarios se realiza por medio de pruebas fitoquímicas. las cuales son una prueba química de caracterización consistente en una reacción química que produce alteración rápida en la estructura molecular de un compuesto. PROCEDIMIENTO  RECONOCIMIENTO DE ALCALOIDES: Colocar en dos tubos de ensayo aproximadamente 0. la formación de un complejo. la modificación de un grupo funcional. Mayer. dándonos indicios de la presencia o ausencia de un metabolito secundario en particular. 2 gotas de los reactivos de: Dragendorff. MÉTODO PRUEBAS QUÍMICAS DE COLORACION Y PRECIPITACIÓN B.4.5 ml del extracto. la apertura de un sistema anular. lo cual da por resultado una manifestación sensible como el cambio de un color. Si se observa turbidez o precipitado en los dos tubos se considera que la muestra contiene alcaloides (Prueba presuntiva). ANÁLISIS FITOQUÍMICO A. la formación de un precipitado o el desprendimiento de un gas. por ejemplo.5. . agregar a cada uno de los tubos previamente rotulados con el respectivo nombre del reactivo. C.

 RECONOCIMIENTO DE ESTEROIDES Y/O TRITERPENOIDES: En un tubo de ensayo limpio y seco tomar 1 ml del extracto y agregar por la pared del tubo 1 ml de anhídrido acético y con precaución 1-2 gotas de ácido sulfúrico concentrado. en un segundo tubo de ensayo tomar otro mililitro del filtrado y agregar unas gotas de gelatinasal. Las dos pruebas son necesarias para comprobar la presencia de taninos. agregar varias limaduras de magnesio y por la pared del tubo dejar caer lentamente HCl concentrado (37%) la aparición de colores: naranja. rojo.  RECONOCIMIENTO DE SAPONINAS: Tomar 4 ml del extracto a en tubo de ensayo y agitar vigorosamente durante un minuto. La aparición de coloraciones: verdes. si hay turbidez o formación de precipitado es prueba positiva para taninos en la muestra. rojas o violeta es prueba positiva (+) para esteroides y/o triterpenoides en la muestra. si se forma abundante espuma. La aparición de un color verde.  RECONOCIMIENTO DE FLAVONOIDES: Tomar un 1 ml del extracto en un tubo de ensayo.  RECONOCIMIENTO DE TANINOS: Tomar 1 ml del extracto en un tubo de ensayo y adicionar dos (2) gotas de solución de tricloruro férrico (FeCL3 al 1%). estable aproximadamente 5 minutos es prueba presuntiva de la presencia de saponinas en la muestra. azul o negro es prueba positiva (+) para compuestos fenólicos. azules. violeta o rosado. . indican que la prueba es positiva (+) para flavonoides.

adicionar aproximadamente 1 ml de hidróxido de sodio al 5% en amoníaco al 2%. Del extracto. Añadir 1 gota del reactivo de sudán. evaporar el solvente a baño maria y el residuo disolver en 1ml de agua. durante 15 minutos hasta ebullición para producir la hidrólisis. Se debe observar un precipitado. calentar a baño maría. calentar en baño maría. Añadir 3 gotas de reactivo fehling A y 3 gotas de fehling B. Debe observarse un precipitado de color rojo.  RECONOCIMIENTO DE GRASAS / ACEITES Tomar 1ml del extracto en un tubo de ensayo. RECONOCIMIENTO DE QUINONAS: Tomar 5ml del extracto y adicionar aproximadamente 3 ml de H2SO4 al 10%. . lo que indica presencia de quinonas en la muestra.  RECONOCIMIENTO DE AZUCARES REDUCTORES Tomar en un tubo de ensayo 1ml. tomar 2ml de la fase orgánica en un segundo tubo de ensayo. enfriar la muestra y realizar la extracción de las quinonas con 5 ml de tolueno (usar el tolueno bajo campana extractora) agitar suavemente sin emulsionar. Luego añadir 1gota de agua destilada. Luego de agitar se obtiene un color rojo cereza en la capa acuosa. calentar.

DETERMINACION DE LA VISCOSIDAD A. FUNDAMENTO La viscosidad es la oposición de un fluido a las deformaciones tangenciales. MÉTODO Viscosímetro B. B. El pH indica la concentración de iones hidronio [H3O+] presentes en determinadas sustancia. C. a través del tubo de mayor diámetro.5. PROCEDIMIENTO  Llenar el viscosímetro limpio y seco con 10 ml del extracto de las hojas y semillas de cacao .  Comparar con la escala de pH. FUNDAMENTO El pH es una medida de acidez o alcalinidad de una disolución. A. . PROCEDIMIENTO  Colocar el papel indicador en el extracto.  Mantenerlo por unos segundos.  Retirar el papel indicador de la muestra. 5.

FUNDAMENTO La densidad de un cuerpo es la masa del cuerpo por unidad de volumen.  Cuando se termine la serie de medidas con un líquido.  Introducir el viscosímetro en el baño termostático y esperar unos 5 minutos para que el líquido alcance la temperatura de medida. DETERMINACIÓN DE LA DENSIDAD A. asegurándose que este bien limpio y seco. limpiar el viscosímetro primero con agua y luego con alcohol y por último secar con aire.  Se pesa el picnómetro lleno del extracto de las hojas y semillas de cacao. Obteniéndose m3.  Se obtiene la densidad relativa del líquido buscado: . Obteniéndose m2.  Succionar líquido por encima de la marca superior del viscosímetro (tubo de menor diámetro)  medir a continuación el tiempo de paso del mismo entre las marcas A y B. C. PROCEDIMIENTO HALLAR LA DENSIDAD EN HOJAS Y SEMILLAS  Se pesa el picnómetro vacío.  Se obtiene la masa del líquido mediante la ecuación: ml = m3 – m1.  Se pesa el picnómetro lleno de agua destilada. Obteniéndose m1. 5. MÉTODO Picnómetro B.6.  Se obtiene la masa del agua destilada: ma = m2 – m1.

ml/ma  Anotar la temperatura del agua se considera la densidad del agua para esta temperatura: densidad del agua (Da). CALENDARIO DE ACTIVIDADES AÑO 2015 ACTIVIDAD ABRIL MAYO JUNIO JULIO ES S S S S S S S S S S S S S S S S 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 Elección del X tema Presentación del título X anteproyecto Redacción y presentación X del primer avance. se multiplica la densidad relativa del extracto por la densidad del agua: Dl= Dr* VI. Para obtener la densidad del líquido. Modificacione s del X X anteproyecto Aprobación X X del . densidad relativa = .  .

2. MATERIALES.1.  01 Una balanza 8. LISTADO DE EQUIPOS. MATERIALES DE LABORATORIO  02 vaso precipitado de 500ml. EQUIPOS  02 Equipo soxhlet.  03 pipetas de 10ml  03 pipetas de 1ml  01 mechero  01 tripode  01 rejilla  01 matraz Erlenmeyer de 125 ml .anteproyect o Formulació X n del proyecto VII. INSUMOS Y REACTIVOS A UTILIZAR EN LA INVESTIGACIÓN 8.

Gorro desechable  50 Un. Papel Graf  01 Un.  04 Mangueras  02 embudos de vidrio  Papel filtro  01 probeta de 100ml OTROS MATERIALES  05 Kg Cacao(1.25de semillas)  10 Un.3. Mascarilla  02 Un. Lavatorio  50 Un. REACTIVOS  Ácido clorhídrico (HCl)  Etanol  Reactivo mayer  Reactivo fehling A  Reactivo fehling B  Reactivo sudan  Reactivo Lieberman  FeCl3  Reactivo shinoda . Guantes estéril  30 Un. Mandil  Agua destilada 8.

00 Cacao(1. PRESUPUESTO RUBROS (gastos) COSTOS S/.00 Pasajes 50.00 Libros 90.00 . VIII. Materiales vegetal 05 Kg 20.00 Impresión 50.00 Otros 100.25de semillas) Reactivos 80.00 Total 490.00 Internet 50.00 Copias 20.00 Hojas bond 30.

2009. 2. BIBLIOGRAFÍA 1. 2007. Barcelona: Mundi prensa. 1º Ed. COVEÑAS L. Madrid: Edibook. Medicina Alternativa. LOPEZ GONZALES G.IX. Colombia: Saxa. 2009. 2º Ed. 2º Ed. 3. Fitoterapia. Atlas de botánica. . CRESPO M.