Doenças Humanas Associadas à Forma e Função do Complexo de

Golgi

Resumo
O complexo de Golgi situa-se no coração da via secretora e é responsável pela
modificação de proteínas e lipídios, bem como pela triagem de moléculas recém-
sintetizadas para o seu destino correto. Como consequência destes importantes papéis,
quaisquer alterações no seu proteoma podem afetar negativamente a sua função e, por
sua vez, levar à doença. Recentemente, foram identificadas algumas proteínas que,
quando esgotadas ou mutadas, resultam em doenças que afetam vários sistemas de
órgãos. Aqui descrevemos como estas proteínas foram ligadas ao complexo de Golgi, e
especificamente como elas afetam a morfologia, o tráfego de membrana ou a
capacidade de glicosilação dessa organela.
Introdução
Células eucarióticas superiores desenvolveram um sistema endomembranar altamente
compartimentado, a fim de aumentar a eficiência e a diversidade dos processos
bioquímicos que eles podem realizar. Para assegurar que o complemento correto de
proteínas e lípidos necessários para manter a homeostase celular esteja presente em cada
organela, existem vias de tráfego de membrana altamente discretas que ligam as várias
organelas limitadas à membrana. A interrupção de etapas específicas do transporte entre
o retículo endoplasmático (RE), o complexo de Golgi, o sistema endossomal-
lisossômico e a membrana plasmática pode ter conseqüências dramáticas sobre a célula
e cada vez mais defeitos na maquinaria molecular que regula o tráfego de membrana
estão sendo ligados a doenças hereditárias.
Em células de mamíferos, o complexo de Golgi tem uma arquitetura distinta, que ao
nível ultraestrutural é caracterizada por uma série de membranas longas em forma de
fita fortemente opostas uma à outra. No nível macro, esta organela é usualmente
posicionada centralmente na célula, próxima ao núcleo, e como tal é considerada como
tendo uma localização juxta-nuclear. Além da sua localização física no centro da célula,
esta organela também está no coração das vias de tráfico que atravessam o sistema
endomembranar. No caso da via secretora, ambas recebem proteínas recentemente
sintetizadas da ER e, subsequentemente, exportam estas mesmas proteínas para o
sistema endossomal-lisossómico e para a superfície celular. Durante o trânsito através
do complexo de Golgi modificações chave são feitas para a maioria das proteínas,
incluindo alterações ao seu perfil de glicosilação, sulfatação, fosforilação e também
clivagem proteolítica. Como tal, se a homeostase de Golgi é perturbada, então isto é
susceptível de afectar a sua função, que por sua vez pode resultar em doença. Várias
doenças relacionadas com Golgi foram identificadas, mas nos últimos anos tem havido
um aumento na identificação de novos genes relacionados com a doença. Aqui, focamos
nossa atenção em vários desses genes e discutimos os principais fenótipos com respeito
ao complexo de Golgi: tráfico, alterações morfológicas, defeitos de glicosilação e,
finalmente, perda de função dos residentes de Golgi.
Quando o tráfego pára
Devido ao seu papel central na via secretora, espera-se que qualquer alteração no
proteoma do complexo de Golgi afecte a sua homeostase e, consequentemente, o fluxo
de proteínas através dele. Nos últimos anos, várias doenças têm sido associadas de
várias maneiras com o tráfico no Golgi, tanto em termos de recepção de material da ER,
como também na direção retrógrada de reciclagem componentes de volta para o ER. No
entanto, desentrapar se o defeito de transporte é anterógrado ou retrógrado é muitas
vezes difícil, uma vez que ambos os caminhos são altamente dependentes uns dos

observa-se um bloqueio global da exportação de grânulos a partir da rede trans-Golgi e ocorre acumulação de grânulos. De ER para Golgi é restaurado [10]. No entanto. Outra doença neurodegenerativa que também tem em suas alterações centrais no tráfico de membrana é a atrofia muscular espinhal proximal. As mutações em PLP1 foram ligadas a um largo espectro de patologias hipomielinadoras tais como a doença de Pelizaeus-Merzbacher [5]. tais como o comprometimento da glicosilação. a doença de Parkinson está associada à acumulação da proteína pré-sináptica a-sinucleína e a um bloqueio no transporte de ER-Golgi [13]. Outros tipos de células e tecidos também são sensíveis ao bloqueio do tráfico do complexo de Golgi. na atrofia muscular espinal proximal. verificou-se que a fragmentação de Golgi observada é dependente dos níveis de expressão de certos membros da família Rab de proteínas de ligação a GTP pequenas [12]. existem exemplos em que as alterações morfológicas deste órgão podem ter consequências funcionais e a ligação à doença pode ser encontrada. que por sua vez inibe Golgi-a-ER tráfico retrógrado. que também fragmenta o complexo de Golgi. Recentemente foram identificadas três mutações missense no gene da subfamília de ligação de ATP 8 membro 6 (ABCB6). Nesta doença. Todas estas proteínas são bem estabelecidas moléculas de maquinaria de via secretória precoce. de facto. PLP1 mutante é misfolded e acumula no ER. No entanto. as experiências com imagens de células vivas demonstraram que. mas que o fenótipo poderia ser resgatado quando RAB1 e RAB8 foram overexpressed e RAB2 e STX5 foram esgotados [ 12]. que juntas resultam em problemas funcionais. RAB2. o agente nociceptivo dos microtúbulos. o complexo de Golgi para o transporte de superfície celular ainda ocorre com cinética normal [11]. que resulta da perda de expressão de SMN1. o tráfego secretório entre ER e o complexo de Golgi é inicialmente retardado [9]. envolvida na montagem de snRNP e que se mostrou se mover ao longo do axónio neuronal em grânulos.outros. Num modelo celular de doença de Parkinson em células PC12. Todas as mutações levaram à retenção da proteína no complexo de Golgi [8]. Em contraste. RAB8 e da proteína de fusão SNARE sintaxina-5 (STX5). a fragmentação foi correlacionada com alterações nos níveis de RAB1. conduzindo assim à formação . na presença do nocodazole. No entanto. dischromatosis universalis hereditaria é uma desordem caracterizada pelo aparecimento de máculas assintomáticas hiper e hipo- pigmentadas na pele. mas não está claro atualmente se isso é devido a um bloqueio geral no tráfico de membrana ou se as mutações afetam o direcionamento desta proteína apenas. Como conseqüência. levando assim à fragmentação do complexo de Golgi [6]. Um exemplo recente de uma molécula que afecta o transporte a este nível é a proteína proteolipídica 1 (PLP1). no entanto este estudo indicou que a fragmentação de Golgi ocorreu antes da agregação de α-sinucleína e pode. os chaperones que abrigam um motivo KDEL e a reciclagem entre o ER e o complexo de Golgi ficam esgotados do ER e acumulam-se no cis-Golgi. que codifica uma proteína expressa na epiderme e que é normalmente localizada a compartimentos tipo endossoma e às pontas de dendrite. Ao nível celular. que é um dos principais componentes da mielina. promovê-lo. Neste novo estudo. Por exemplo. ainda não está claro quanto à importância da integridade física deste organelo no que diz respeito às suas várias funções. Por exemplo. o gene SMN1 codifica a sobrevivência da proteína do neurônio motor 1. Isto finalmente resulta em níveis diminuídos de SMN1 em neurites e correspondentes defeitos de cone de crescimento. em células tratadas com nocodazol. Em células normais. Quando a forma muda Uma conseqüência possível de mutações em proteínas do complexo de Golgi é que elas causam mudanças grosseiras na morfologia de toda a organela e da deslocalização da proteína. embora com tratamento prolongado com nocodazole.

demonstrando que as conseqüências das mutações afetam o organelo em mais de uma maneira. os estudos de imunofluorescência mostram claramente que a depleção de RIN2 afecta efectivamente a morfologia global do complexo de Golgi. foi encontrado no coração de dois distúrbios conexos do tecido conjuntivo. O fato de que o complexo de Golgi parece estar inchado e que a rede trans-Golgi está fragmentada tem sido sugerido para indicar que esta proteína está envolvida na manutenção da morfologia da organela. Técnicas como a interferência de RNA (RNAi) em células de mamíferos em cultura devem ajudar-nos ainda a compreender as consequências celulares de alterações em proteínas como RIN2. um fator de troca de nucleotídeo de guanina para o regulador de via endocítica precoce RAB5 [16]. abordagens de imagem centradas no comportamento Rab em células vivas [15] são altamente susceptíveis de aprofundar a nossa compreensão destas moléculas de tráfego de membrana chave na doença. uma das quais resulta em splicing alternativo do mRNA sem expressão da proteína mutante. Quando a glicosilação é prejudicada A literatura referente a doenças de glicosilação tem sido extensivamente revista em outro lugar. Embora outras experiências ainda sejam necessárias. Em contraste. quando comparada com as células de controlo (Figura 1). Neste último. ao passo que cada um dos quatro mutantes analisados foi encontrado em diferentes localizações na célula. Os defeitos na glicosilação da prote�a levam a doen�s de v�ias etiologias que variam de dist�bios musculares a multi-sistema. os autores relatam um acúmulo de vacúolos no Golgi. No entanto. Um último exemplo recente que relata uma ligação potencial entre uma proteína do complexo de Golgi e a doença é centrado na proteína transmembranar TMEM165 anteriormente não caracterizada. A depleção celular de TMEM165 utilizando RNAi parece apenas ter um efeito suave no complexo de Golgi a nível macro. também foi detectado o comprometimento do tráfico do ER para o complexo de Golgi e do Golgi para a membrana plasmática. foram descritas duas mutações independentes de mudança de quadro que conduzem a uma diminuição dos níveis de expressão de mRNA e ausência da proteína em fibroblastos de pacientes. A proteína Ras e Rab interactor 2 (RIN2). nomeadamente macrocefalia.dos corpos de inclusão. na síndrome RIN2. mas nenhuma outra alteração na organela [17]. Quatro diferentes mutações causadoras de doenças que levam à diminuição da expressão proteica foram identificadas em TMEM165. Outras proteínas Rab do complexo de Golgi estão também implicadas na doença. Verificou-se que a proteína de tipo selvagem se localiza no complexo de Golgi e também no sistema endossomal-lisossómico. Uma análise mais profunda dos dados dos estudos de RNAi em grande escala que observam a função da via secretiva [19] ea morfologia de Golgi [20] fornecerão inevitavelmente mais candidatos associados à morfologia e à função de Golgi. Nestas doenças. Esta proteína pode estar envolvida no transporte de protões / cálcio e verificou-se estar ligada a desordens congénitas da glicosilação do tipo II. Mutações no RAB33B recentemente demonstraram levar a Golgi inchaço e fragmentação em Smith-McCort displasia [14]. é altamente provável que ainda haja mais doenças associadas a este processo a ser descoberto. que podem estar ligados à doença. uma vez que quase todas as proteínas que passam através da via secretora sofrem alguma forma de glicosilação. cutis laxa e Escoliose (MACS) ea síndrome RIN2 [17. Ao nível macro. No caso da síndrome MACS. alopecia. observou- se dilatação da ER e cisternas de Golgi dilatadas e rarificadas [18]. Proteínas que modulam a função de membros da família Rab de proteínas também têm estado envolvidas na patogênese de doenças relacionadas com Golgi. tais como os trastornos de glicosila�o humana dependentes do complexo de Golgi (COG) oligom�icos .18].

De notar é o facto de a detecção destas doenças é muitas vezes serendipitous e aqueles identificados até agora são principalmente graves síndromes algumas das quais são ainda fatais. um processo altamente dependente do pH. além disso. Outra observação é . abordamos a questão dos efeitos que podem ser causados quando a expressão de uma proteína residente em Golgi é perdida devido a mutação. como essa condição em particular foi recentemente revisada em outra parte [36]. pode-se especular que as perturbações ao pH intra-luminal de Golgi conduzirão inevitavelmente à glicosilação anormal da proteína e possível tráfico aberrante de Golgi. focalizaremos nossa atenção em outras proteínas complexas de Golgi. enquanto que na Smith-McCort a redução dos níveis de expressão da proteína RAB33B foi correlacionada com um complexo de Golgi inchado e fragmentado. Conforme descrito acima. 38] e também mais recentemente tem sido Conectado à autofagia [39.conservados. uma ATPase vacuolar que está localizada no complexo de Golgi e está envolvida na sua acidificação.40]. Embora os mecanismos exatos pelos quais essas mutações causam a doença ainda permaneçam a ser estabelecidos. que está localizado no complexo de Golgi e foi proposto para estar envolvido em tráfego retrógrado de volta para o ER [37. mutações também foram descritas em proteínas associadas ao complexo COG. Foi descrito um pequeno número de doenças que resultam de uma alteração na acidificação do complexo de Golgi. no entanto. os autores destes estudos também descrevem uma redução na glicosilação da proteína [21. Interessantemente. são causadas por mutações de ATP6V0A2. para que os eventos de glicosilação sejam rigorosamente regulados. cuja perda induz a doença. onde a proteína da distrofina (DMD) não é expressa. o comprometimento deste processo fornece uma explicação para as manifestações esqueléticas observadas na doença [34]. levando à organização aberrante de Golgi [35] (Figura 1). que por sua vez provoca o inchaço osmótico das cisternas de Golgi com uma redução simultânea Na sialilação de proteínas. mutações em TMEM165 induzem alterações morfológicas no complexo de Golgi. O primeiro exemplo é o RAB33B. Curiosamente. Duas mutações missense no domínio GTPase de RAB33B foram identificadas em pacientes com duas displasias esqueléticas diferentes. uma montagem multiproteína envolvida nos processos de tráfico de vesículas no complexo de Golgi. e em particular a pele. Quando a função está perdida Finalmente. Uma vez que a função de inúmeras proteínas envolvidas no metabolismo ósseo ou pertencentes à matriz extracelular pode ser afetada pela glicosilação anormal. afeta o processamento de proteínas e lipídios e glicosilação. tem sido relatado que a falta de expressão da ubiquitina proteína ligase E3A (UBE3A) leva a um aumento no pH de Golgi. Cutis Laxa tipo II e síndrome da pele enrugada. quaisquer rearranjos morfológicos das cisternas individuais podem comprometer esta situação. Talvez o caso mais conhecido seja na distrofia muscular de Duchenne. também é provável que sejam encontradas mais ligações entre defeitos na glicosilação e morfologia do complexo de Golgi aberrante. e altera a classificação de carga. doenças que afetam o tecido conjuntivo. Aumentos no pH intra-luminal Golgi perturba a morfologia da organela. classes distintas de enzima de glicosilação precisam ser fisicamente particionadas umas das outras e. Embora muitos distúrbios de glicosilação sejam causados por mutações de perda de função em glicosiltransferases ou transportadores de açúcar. um membro da família Rab de proteínas de ligação a GTP pequenas. na doença de Dyggve-Melchior-Clausen não foram detectadas alterações ao nível do complexo de Golgi [41]. No entanto. Na síndrome de Angelman.22]. uma doença grave e rara do neurodesenvolvimento. Isto porque. por conseguinte.

a dymeclin [42].48]. os estudos realizados com uma estirpe de levedura sem o ortólogo GOSR2 demonstram que a sobreexpressão da proteína mutante é incapaz de resgatar o fenótipo e as células morrem. está ficando claro que o número de proteínas relacionadas à doença associadas à homeostase de Golgi pode eventualmente rivalizar com as conhecidas como importantes para doenças associadas a outras organelas chave como a ER E lisossomas. . Em X-linked Retardo mental associado com autismo. por sua vez. Vale ressaltar o fato de que ambas as doenças também podem ser causadas por mutações em outra proteína residente em Golgi. embora este estudo mais recente destaque o seu papel no complexo de Golgi de células neuronais [44]. 46]. Ambas as mutações relatadas resultam na perda da expressão protéica nos neurônios.que a mutação encontrada na doença de Dyggve-Melchior-Clausen ocorre em um resíduo de lisina que é conservado em orthologs RAB33B em todas as espécies [41]. Muitas das proteínas que destacamos nesta revisão são. sugerindo que a mutação associada à doença é equivalente a uma mutação de perda de função. As mutações neste gene foram encontradas para causar Gerodermia osteodysplastica [45. o que. epilepsia e macrocefalia um estudo encontrou duas diferentes perda de função mutações em RAB39B. entretanto em uma família afetada a mutação conduziu ainda à expressão da proteína mas a função foi perdida [46]. Não só estas descobertas são importantes do ponto de vista da saúde. Este trabalho é importante não só no que diz respeito à elucidação dos mecanismos da doença. Além disso. Embora a lista de proteínas aqui reunidas esteja longe de ser completa. Conclusão Nos últimos cinco anos. A maioria das mutações identificadas neste gene conduzem a uma perda da expressão da proteína. mas também fornecem um caminho adicional de compreensão para que possamos compreender a função desta organela a nível molecular e celular até ao nível organizacional. Em todos os casos não foram detectadas alterações detectáveis na morfologia do complexo de Golgi. os resultados sugerem que esta proteína está de alguma forma envolvida no desenvolvimento de neurônios e capacidade intelectual humana. não consegue localizar o complexo de Golgi. Os autores deste estudo descrevem uma mutação missense num resíduo de glicina conservado entre espécies e presente em todas as três isoformas GOSR2. De fato. a família de proteínas Rab). associadas ao tráfico através do complexo de Golgi (por exemplo. um número significativo de doenças humanas está sendo associado a proteínas complexas de Golgi. Um exemplo final é o GOSR2. este resíduo de lisina é encontrado na pasta de ligação de GTP de todos os membros da família Rab.nio "Mar do Norte". demonstrando assim a importância deste resíduo para a função da proteína. um golgin que interage com RAB6. leva a um número alterado e morfologia dos cones de crescimento neurite e redução de botões pré-sinápticos. Embora esta mutação ainda leve à expressão da proteína. mas também é útil para começar a compreender a função de RAB39B no nível celular. Um segundo exemplo de perda de expressão de uma proteína de Golgi também é observado com outro membro da família Rab GTPase. Outro exemplo também com ligações funcionais potenciais à família Rab é SCYL1BP1 / GORAB. uma doença neurodegenerativa progressiva associada a deformidades esqueléticas [47. Esta proteína Rab particular foi originalmente descrita como sendo expressa em uma ampla variedade de tecidos [43]. que tem sido associado à epilepsia progressiva do mioclo. um Qb-SNARE residente no Golgi envolvido no tráfico intra-Golgi. De facto. sem surpresa. pelo que serão necessários mais estudos para estabelecer para essas doenças a relação entre esta proteína e RAB33B.

é só agora que estamos começando a perceber a importância do complexo de Golgi em células em todo o corpo humano eo papel crítico que desempenha no coração do sistema endomembrana.enquanto outras desempenham um papel na manutenção da homeostase da organela (por exemplo. em última instância. . a disponibilidade limitada de tecidos de pacientes (uma vez que muitos destes distúrbios são raros) também é problemática. ATP6V0A2). como na maioria dos relatórios que destacamos aqui. a mutação de um transportador do complexo de Golgi pode afectar o pH luminal. Por exemplo. espera-se que mais mutações causadoras de doenças sejam identificadas em proteínas que estão fisicamente e funcionalmente associadas ao complexo de Golgi. alterar o fluxo de todas as proteínas que passam através do organelo. apenas uma quantidade limitada de informações moleculares e celular foi recolhida. Nos próximos anos. o que por sua vez afecta as eficiências de glicosilação de enzimas particulares. Um desafio no entanto. De fato. uma vez que lhes permite realizar diagnósticos mais precisos e. em última instância. Por outro lado.por exemplo. finalmente. o que pode. ainda há muito a ser feito. como o sistema nervoso central. No entanto. Além disso. Outro obstáculo à elucidação dos mecanismos moleculares de muitas dessas doenças é que elas afetam sistemas de órgãos que são desafiadores para trabalhar. apenas em alguns casos foi possível ligar com precisão a proteína a um fenótipo particular. Mais de 100 anos após a descoberta desta organela. para muitas dessas proteínas agora ligadas à doença ainda não sabemos suas características bioquímicas fundamentais no nível celular . fornecer melhores conselhos às famílias afetadas. elas são degradadas mais rapidamente do que a proteína de tipo selvagem. é desvendar a causa eo efeito de cada fenótipo celular. enquanto que em muitos outros casos a forma como a etiologia da doença é derivada dos eventos celulares continua a ser estabelecida. No entanto. Até à data. desenvolver terapias apropriadas. defeitos em proteínas associadas ao tráfico podem causar alterações morfológicas na organela. agregam ou as interações proteína-proteína são prejudicadas? Somente um conhecimento mais completo das bases moleculares da doença permitirá. o que por sua vez pode afetar reações bioquímicas ou enzimáticas específicas que requerem um micro-ambiente discreto. a identificação de mutações causadoras de doenças em proteínas específicas é muito útil para os médicos.