Curso: BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR (Capitulo III

)
Fecha: 29/05/2017
Profesor: Mario Monteguirfo
Tema 3: “Receptores RAS/MAPK e intracelulares”

Son vías muy importantes, que tienen que ver con la proliferación celular y la diferenciación
celular, de ahí la importancia de conocer cuáles son las funciones de estas dos vías. Son vías
complejas, cada día se descubren más proteínas mediadoras de transmisión (proteínas
adaptadoras, acopladoras) y cascadas de quinasas que participan en los efectos de estas dos
vías. Una de ellas la vía RAS/MAPK (RAS=proteína G monomérica, MAPK=proteína quinasa
activada por mitosis) y la otra es la vía PI3K/Akt (PI3K=fosfatidilinositol 3-quinasa, Akt=tirosina
quinasa B).

Como se sabe, los mecanismos de los receptores proteína-quinasa de superficie, que lo que
hacen es que cuando se activan con unos ligandos, en todo caso se dimerizan, luego viene un
paso de activación del dominio citosólico de la tirosina-quinasa por transautofosforilación.

Los ligandos de los receptores tirosina-quinasa (RTK), son diversos, tienen que ver mucho con
los factores de crecimiento que son sensibles a este tipo de ligandos, entre ellos tenemos a:

 El factor de crecimiento del nervio (NGF)
 El factor de crecimiento de fibroblastos (FGF)
 La insulina.
 El factor de crecimiento epidérmico (EGF) provoca que la proteína-quinasa se dimerice,
se active.

Esta es la activación (Figura), recordando, los dominios intracelular, extracelular y
transmembrana, este último con una alfa hélice también, y también observamos donde se
realiza la actividad catalítica que está en la región citosólica, también observamos una
estructura llamada “labio de activación” (activation lip) que es donde ocurre la primera
fosforilación y produce un cambio conformacional, todo esto ocurre por transautofosforilación
que activada por un ligando, activa a la subunidad adyacente (activación cruzada), una primera
activación produce la dimerización y fosforilación de las tirosinas ubicadas en el labio de
activación y luego hay una sucesiva fosforilación, estas ocurren en los residuos de tirosina del
receptor ubicado en el dominio citosólico.

allí se van a activar. son completas. la vía PI-3K. que van a ser medios de transducción de señal (proteínas adaptadoras. controlan tres eventos importantes: división celular. Entonces hay un conjunto de proteínas que son muy diversas. mediante la unión al IRS-1. proteínas de acoplamiento) que van a interactuar con los RTK activados. . en general. En general la señalización por los receptores tirosina-quinasa. o también directamente al receptor. participa en las vías de señalización mediadas por lípidos. La unión de estas proteínas en la ruta de señalización. el receptor de insulina utiliza esta vía. que van a traducir la señal del ligando. Todas estas proteínas que se unen a los dominios de fosfotirosina van a ser activadas por fosforilación de los residuos de tirosina de esas proteínas. también la vía PI3K. es la PI-3K (fosfatidilinositol 3-quinasa) que también va a ser activada con estas proteínas de señalización ya activadas previamente por la tirosina-quinasa. Vía Ras/MAPK La mayoría de RTK utilizan esta vía (hay muchas vías). por ejemplo. en los dominios de fosfotirosina. por ejemplo.Una vez que está activado. es una proteína adaptadora que puede unir a otras proteínas para que se activen también mediante fosforilación. se puede producir mediante unión indirecta. para regular expresión génica de los GLUT (o transportadores de glucosa). Donde están las tirosinas. en estas vías de activación. las señales de los receptores activados (RTK activados). las activa la tirosina-quinasa. utiliza la vía RAS/MAPK y para esto necesita de los factores que son las proteínas de transducción de señal. Algunas proteínas ya activadas van a estar también implicadas en la activación de RAS GTPasa (proteína G) y esta va a formar parte de la vía RAS/MPAK y la otra vía que también es importante. porque sus segundos mensajeros van a derivarse casualmente de lípidos estructurales de la membrana citoplasmática. una de ellas llamada IRS-1 (sustrato receptor de insulina). que cada vez se encuentran más. es decir que puede anclar varias proteínas. Estas proteínas de transducción se unen a dominios fosfotirosina a través de dos dominios (segmentos de la proteína que tienen determinada estructura que reconocen a los dominios de fosfotirosina): dominio de unión a fosfotirosina PTB y dominio SH2 (dominio de homología Src-2). tiene una función multi-docking. Entonces. las vías Ras/MAPK. En general. por ejemplo. regula la síntesis de glucógeno sintasa en la liberación de glucógeno. Estas proteínas. y lo que hacen cuando está activa la tirosina-quinasa es fosforilar. su regulación es mediada por incrementación de los receptores vía endocitosis. fosforilados en su dominio citosólico.

a la generación de cáncer o al mantenimiento de la proliferación descontrolada de la célula. Y la otra proteína es la GAPs. están asociadas a diversos tipos de cánceres. En este caso no. es decir este factor que hidroliza GTP no puede actuar por la mutación en Ras. dos factores intercambiadores de nucleótidos. que hace todo lo contrario. es una proteína tipo G porque puede intercambiar nucleótidos de guanina difosfato por guanina trifosfato. las mutaciones dominantes de Ras. al final de la cascada de quinasas. y esto va a terminar. se encuentran o se descubren más proteínas que fosforilan el . impide que actúe GAP y por consiguiente Ras se va a mantener encendido todo el tiempo con la consecuencia que va a activar constantemente a MAPK y de esta manera favorecer la proliferación celular y el cáncer finalmente…. y la diferencia que tiene es con respecto a las proteínas G clásicas triméricas (3 subunidades α. Como pueden ver todas estas vías. Por ejemplo. y su intercambio de GDP por GTP para que se active y deje participar otras proteínas. conjunto proteínas que van a ser fosforiladas. posteriormente va a activar a la transcripción de determinados genes relacionados con la diferenciación celular o con la división celular. β y gamma). están asociados directamente con diferentes tipos de cáncer. Una vez que el Ras es activado. con la activación de la MAPK (proteína quinasa activada por mitosis). La Ras es una proteína pequeña. se propaga la señalización dentro de la célula a través de una cascada de quinasas.diferenciación y el metabolismo. de bajo peso molecular. por ejemplo. ha pasado a su conformación con GTP. En la división celular. Los mutantes de los RTKs o de las proteínas señalizadoras de Ras/MAPK están asociados casi todos con cáncer. se dan simultáneamente. el efecto es sumatorio que puede ser “positivo” es decir para aumentar el efecto. de allí es que muchos fármacos lo que hacen es tratar de inhibir la actividad de estas enzimas fosforilantes. todas estas vías entre ellas interactúan. uno de ellos es el GEFs (factor intercambiador de guanina) lo que hacen es intercambiar el GDP por GTP y de esa manera activa Ras la proteína G. sufriendo un cambio conformacional y allí había un intercambio de GDP por GTP. en el anterior caso las proteínas G triméricas se unían directamente a receptores. es decir si hay una mutación en el receptor o en las proteínas que participan en la cascada hasta la forsofrilación de la MAPK. se puede ver el número de proteínas mediadoras va a un aumento. en este caso es monomérica (una sola unidad). este es un banco que muchos de los fármacos que utilizan para el tratamiento por quimioterapia para cáncer. bloquean la unión de GAP. Acá pueden ver otro grafico para ver los efectos. cualquier mutación que ocurra o mutante que exista en esta secuencia de estas fosforilaciones. MAPK fosforilan los factores de transcripción (TFs) que regulan los genes que participan en el ciclo celular y en la diferenciación. otras enzimas. estimula hidrólisis del GTP para que pase Ras de la forma activa al a forma inactiva. aquí las estudiamos por separado cada una de ellas pero en la vida real todas estas vías están interactuando para producir un efecto final. esta proteína G monomérica no se une a receptor sino a la membrana. esta quinasa posteriormente va a migrar al núcleo y va a activar a elementos de respuesta. o puede ser para disminuir el efecto.. alteraciones en esta vía. Ras utiliza. evidentemente que es lo normal.

las que hemos visto son las más básicas. al bloquear la actividad de tirosina quinasa. se ubica la mutación y según la mutación que tenga se aplica o no determinado fármaco. y son los más efectivos pero también los más costosos para el tratamiento de cáncer pero su efecto es sorprendente porque estos fármacos pueden hacer retroceder un tumor en cuestión de semanas.ATP. bloquea su vía de señalización. Bien con esto hemos terminado el tema de receptores de tirosina quinasa. en este caso no están graficadas MAPK sino solo sus factores de transcripción. pero esto lo estudian más la industria farmacéutica que es la industria que estudia más estas vías para generar una serie de fármacos que puedan ser útiles por ejemplo para el tratamiento de cáncer. Acá este otro esquema nos muestra la vía de RAS/MAPK y la vía de P3K. y ustedes dirán porque se estudia tanto esta vía. Fíjense acá. por . aquí en este caso a P3K. evidentemente estos receptores son intracelulares y una vez que se unen a los receptores intracelulares forman un complejo y ese complejo viaja al núcleo donde se une a los elementos de respuestas ubicados en el ADN y de esa manera activan una respuesta que responde a estas señales lipofílicas . etc. Estos son los anticuerpos monoclonales que son de última generación para el tratamiento de cáncer. todos estos fármacos también tienen efectos secundarios pero se han desarrollado teniendo en consideración estas vías de señalización y el efecto que tienen estas vías de señalización sobre la división celular sobre la apoptosis. un fármaco que se utiliza en el tratamiento de leucemia mieloide crónica o leucemia mieloide aguda. al igual por acá donde ve otros cuadraditos vemos otro fármaco (anticuerpo monoclonal) que cada uno de ellos lo que hace es inactivar en este caso a RAS. a AkT. es una terapia dirigida. pero aquí dicen algo que está en rojo y quiero resaltar. Acá vemos las 2 vías cómo interactúan entre ellas: inclusive pueden darse simultáneamente y este es el punto medio que puede activar a RAS puede activar a la P3K y luego desactiva a KP en este caso sería a mas quinasas a través en este caso de él y lo que hace es la activación de una serie de genes mediante la vía de transcripción relacionados a la vía RAS/MAPK. se hace un estudio. entonces el ligando receptor actúa como un factor de transcripción (enhancer= intensificador) o inhibidor (silenciador) de la expresión génica. P3K . Estos son fármacos que se utilizan en quimioterapia. es decir bloquea la actividad de tirosina quinasa. Los elementos de respuesta hormonal vienen a ser los HRN y lo que van a hacer antes de funcionar como un intensificador que aumenta la actividad génica o un silenciador que disminuye la intensidad o expresión génica. todos los efectos que tendría sobre la proliferación celular. pero aun así todas ellas tienen que ver con apoptosis y síntesis de proteínas. tratar de secuenciarla y ubicar esta mutación y según eso se dirige la terapia. ya en un estudio más profundo. el otro gran grupo de receptores son los intracelulares que tiene que ver con las señales lipofilicas que son de naturaleza fisicoquímica y pueden atravesar las membranas. en este caso de genes de RaS/MAPK. y lo que hace imatinib es un anticuerpo monoclonal que se une específicamente cerca al sitio activo y tiene una conformación similar al sustrato natural de tirosina quinasa y se une por consiguiente al sitio activo y bloquea al sitio activo. por eso para algunas personas el estudio previo consiste en hacer un secuenciamiento de los genes implicados. imagínense un fármaco que inhibe a AKT. luego detectar la mutación. Ahora no todas las personas evidentemente responden igual a este tipo de fármacos: lo primero que se debe de hacer es un estudio previo. determinado anticuerpo monoclonal. por ejemplo imatinib es muy conocido porque es una medicina. podrían verse similares porque son las mismas que activan a RAS. que responde a cierto tipo de tratamiento al que algunas personas no responden. por ejemplo donde está la mutación. de ahí la importancia de estudiarlas.

posteriormente vamos a ver más cuando lleguemos a la parte de transcripción. La respuesta a estos receptores intracelulares con respecto a otras vías es más lenta. Luego en la región “bisagra” que es una región que conecta los dominios DBD y LBD (dominio al que se conecta el ligando) y luego tenemos el ultimo dominio que es el dominio carboxi terminal. Bien con esto hemos terminado la parte de receptores. de las que ya sabemos las funciones que tienen caracteres sexuales secundarios. Es más lenta porque puede demorar horas o hasta días sin embargo a pesar de ser lenta su efecto es más duradero. Acá hay un receptor en el citosol como pueden ver acá la hormona viene por la sangre. Que no tiene un rango muy importante Luego tienen el dominio de unión al ADN (DBD) en este caso este dominio mayor tiene ciertas características de formar una estructura que se conoce como la secuencia de la proteína factor de transcripción que forma unas estructuras que están mediadas . Los receptores se ubican en el citoplasma o en el núcleo . entonces se puede difundir a nivel del núcleo o a nivel del citoplasma. Podemos ver que los receptores nucleares son complejos en su estructura y tienen determinada característica por las cuales se les puede reconocer y estas características son esenciales para que puedan hacer su efecto a nivel de los genes que responden a estas hormonas. este dominio va a ser importante para que pueda interactuar con los elementos de respuesta hormonales. los receptores intracelulares están ubicados en el citoplasma esperando que ingrese el ligando (la hormona) o también directamente que viaje hasta el núcleo este ligando (la hormona interactúe directamente con el elemento de respuesta) . por eso se les llama dedos de zinc: es una característica de esta estructura en los factores de transcripción donde interactúan con el ADN. son como unos dedos pero que tienen un átomo de zinc. con respecto a otras vías que ya hemos visto anteriormente. ingresa y se reconoce la hormona a nivel del citoplasma e indirectamente activa la transcripción de forma directa de algunos genes.ejemplo los glucocorticoides que se generan en respuesta al estrés al actuar de esta manera. por eso la presencia de los dedos de zinc es muy importante en los factores de transcripción para que interactúe con los dominios de respuesta hormonales ubicados en el ADN. como la de la adrenalina que es inmediata. por receptores intracelulares que actúan en el control del núcleo. y puede formar el complejo receptor hormona. . Por otro lado estos receptores generalmente tienen varios dominios por ejemplo el dominio N- terminal donde se encuentra la actividad de unión AN1. De igual manera acá en el citoplasma y luego viaja al núcleo donde encuentra los elementos de respuesta hormonal. las hormonas sexuales que también.