Fardy Díaz Microbiología Ambiental

Laura Vélez FUAC

INFORME 1: PRACTICA 1. ESTERILIZACIÓN + PRACTICA 2. MORFOLOGIA MICROBIANA Y
MUESTREO DE AMBIENTES Y SUPERFICIES + PRACTICA 7. MICROMYCETOS

RESUMEN

En el laboratorio de microbiología se realizaron los pasos y se conocieron los requisitos mínimos para
poder esterilizar y operar adecuadamente los implementos de trabajo, en la práctica 1 se conocieron los
métodos de eliminación total de las bacterias que contaminan las herramientas de laboratorio durante su
uso como lo son cajas de petri; asas; probetas etc. También se realizo la preparación de dos tipos de agar
en nuestro caso correspondió el agar Plate Count, utilizado para cultivar bacterias y el agar saboreaud
para cultivar hongos. Una semana después en el laboratorio de microbiología se tomaron muestras de
yogur, de la boca de un compañero, también se hizo muestreo de superficies en la sede de ingeniería
ambiental, en manos de un compañero y otra al ambiente, por último se sembraron en los agares
saboreau y plate count para cultivar las muestras anteriormente mencionadas. Ahora bien una semana
después se revisaron las muestras y se hizo el reconocimiento morfológico de las bacterias cultivadas de
yogur, boca, ambiente, superficie y manos a través de la tinción de gram y observando en el microscopio.
Finalmente para la práctica siete se analizaron los hongos cultivados en la practica 2 y se hizo su
respectiva identificación.

Palabras Clave: Esterilización, hongos, bacterias agar

ABSTRACT

In the microbiology laboratory were performed the steps and met the minimum requirements to operate
properly sterilized and work tools, in practice the methods met a total elimination of bacteria that
contaminate the laboratory tools for use as are petri dishes, handles, cylinders etc. Also we made the
preparation of two types of agar in our case accounted Plate Count agar, used to grow bacteria and fungi
to grow Saboreaud agar. A week later at the microbiology laboratory yogurt samples were taken from the
mouth of a partner, was also sampled surfaces at the headquarters environmental engineering in the
hands of a partner and the other to atmosphere, and finally planted in the and plate count agars saboreau
to grow the samples above. But a week after the samples were revised and became the morphological
recognition of bacteria cultured yogurt, mouth, atmosphere, surface and hands through Gram staining and
observing under the microscope. Finally, to practice seven cultivated mushrooms were analyzed in
practice 2 and their respective identification was made.

Keywords: Sterilization, fungi, bacteria agar

OBJETIVO GENERAL 6. Aprender a realizar un montaje
microscópico para la observación de
Realizar prácticas de laboratorio a través de las hongos unicelulares y pluricelulares.
guías y especificaciones dadas por la profesora 7. Aprender a realizar un microcultivo
de microbiología. para la observación de estructuras
fúngicas intactas.
OBJETIVOS ESPECÍFICOS 8. Reconocer las diferentes estructuras
fúngicas vegetativas y de reproducción.
1. Esterilizar los materiales de laboratorio.
2. Cultivar hongos y bacterias a través de
los agares dados en la práctica.
3. Realizar muestreos para aislar 1.1: Materiales Práctica 1.1: Esterilización
microorganismos. 1. Papel Kraft
4. Preparar eficientemente agares para el 2. Horno Eléctrico
cultivo de hongos y bacterias. 3. Cajas de petri
5. Identificar las especies de hongos y 4. Pipetas
bacterias encontrados en el laboratorio

alcohol. Se transfirió el polvo a un recipiente de vidrio resistente al calor se agrego el agua Se realizo la limpieza del mesón de trabajo con destilada medida en una probeta. Balanza.Fardy Díaz Microbiología Ambiental Laura Vélez FUAC 1: Metodología Práctica 1: Esterilización 2. eléctrico que elimina todo tipo de vida incluidas 5.3 Metodología Practica1. Se colocó cinta indicadora sobre la tapa del laboratorio y se cronometro un tiempo de dos recipiente. En el caso del PDA o SDA adicionar el observamos de que estuvieran bien envueltas. determinado que el tiempo requerido para matar 7. Se coloco un pequeño trozo de cinta indicadora a cada uno de los elementos a esterilizar. la medios de cultivo requerida para lograr 1210C de temperatura. bacterianas. pesando la cantidad de cultivos recomendada por el fabricante. .2 Esterilización presión de 15 libras por pulgada cuadrada. horas para la eliminación total de microorganismos que se encontrasen en ese momento en las cajas de petri y pipetas ya para finalizar con mucho cuidado se retiro el material PROCESO DE ESTERILIZACION con guantes y se dejo enfriar para su posterior uso.2 Metodología Practica 1. Se pesó la cantidad requerida del cultivo ciclo de esterilización. esterilización húmeda por medio de un equipo 2. o papel las endoesporas a través de calor seco para aluminio. Medio de cultivo Sabouraud Dextrosa El autoclave es un equipo hermético que Agar / Potato Dextrose Agar permite la entrada de vapor de agua a presión. finalmente el material se marco con los nombres inmediatamente antes de ingresar el medio de los integrantes y se llevo el hasta el horno al autoclave. de modo que su 1. que la temperatura deshidratado de acuerdo a las instrucciones de 1210C fue alcanzada en cada uno de los de la etiqueta. cual los autoclaves se han diseñado para alcanzar esta temperatura. microorganismos incluidas las endoesporas 5. razón por la 9. con el fin de confirmar al final del 1. Se calentó el medio de cultivo hasta su de que quedaran bien empacadas. Estufa. Los medios de cultivo para microorganismos se venden en forma deshidratada. las endoesporas bacterianas es de 10-20 8. Agar 3. siendo la 1. Con el fin de eliminar todos los microorganismos contaminantes y obtener el crecimiento 1. grados centígrados que es la utilizada en la técnica de esterilización de material de 6.3 Esterilización preparación implica únicamente mezclarlo con agua destilada. cloranfenicol después de la ebullición. minutos y la temperatura de 1210C. El autoclave utiliza la presión para lograr esta temperatura. luego se ebullición. los medios de cultivo son sometidos a un tratamiento térmico conocido como 1. envolvieron en grupos de 3 cajas de petri en fila una encima de otra y se envolvieron.2 Materiales Practica 1. Autoclave. 1. Se Colocó tapa rosca sin apretar. para esterilizar el medio en esto se calibro la temperatura del horno a 160 autoclave. después se tomaron tiras de papel Kraf y se envolvieron las pipetas con mucho cuidado 3.2 Esterilización únicamente de los organismos que nos medios de cultivo interesan. Cajas de Petri. Medio de cultivo Standard Plate Count conocido como autoclave. Experimentalmente se ha 6. Frascos tapa rosca. materiales esterilizados. Cinta indicadora. 4. Agua Destilada. (SDA/PDA) El uso de calor húmedo permite la muerte de los 4.

las bacterias gram negativas se prueba de esterilidad del medio de cultivo. Agar Plate Count. Una vez el medio se encuentre a una Alcohol Acetona 15 – 30 Segundos temperatura por debajo de 450C. Microscopio. Crystal Violeta. Se observó las cajas a las 24 horas. Exposición Crystal Violeta 1 Minuto 7. pueden mirar en el microscopio de color rosada. Gotero. Se introdujeron los elementos en el 7. se le aplican en el siguiente orden y tiempo de exposición: 6. En esta práctica se tomaron muestras del sarro 4. Cajas de petri.1 Morfología bacteriana Después de que se realizó la tinción de gram las tres muestras se marcaron y se dejaron secar 1. se Se lava la muestra Se lava la muestra solidifica y puede ser utilizado. 10. ya secas la se retiro el medio de cultivo nos permitió muestras se le realizó el proceso de la tinción que se enfríe ligeramente. mientras que cajas incubadas. Utilizando alguna protección para el calor. en las bacterias procedimiento ha sido adecuado no debe gram positivas se determinan que absorben aparecer ningún tipo de crecimiento en las hasta un 90% de peptidoglucano. luego se le aplica una gota de agua y se seca 5. en la tapa. Se marcaron las cajas con las iníciales del Se lava la muestra Se lava la muestra medio de cultivo utilizado. Lugol 1 Minuto Se lava la muestra Se lava la muestra 8. lo vertió en las cajas de Petri. en donde se 3. . Si el componen de peptidoglucano. determino el tipo de bacteria por su coloración y 4. de esterilización y únicamente cuando el yogur natural y contaminación ambiental indicador de presión marque cero. para permitir un adecuado contacto 9. ahora bien esto es porque las bacterias se 11. Ahora esas abrir el autoclave. para su correspondiente análisis en el 2. Yogur 3. al ambiente (No de gram que consiste en identificar el tipo colocarlo en agua o en una superficie muy bacterias a través de una serie de químicos que fría). su forma esto con ayuda de bibliografía para 5. Alcohol Acetona. Tabla 1: Tinción de Gram esterilizadas previamente en el horno. en una superficie previamente desinfectada y Compuesto Tiempo de siempre cerca de la llama.Fardy Díaz Microbiología Ambiental Laura Vélez FUAC 2. podemos brindada por el laboratorio. Fuscina. El tiempo de esterilización de los medios de 2. autoclave dejando suficiente espacio entre 8. las muestras con el mechero. Las bacterias gram positivas se 10. generalmente Morfología Bacteriana es de 10-15 minutos. gram positivas y invertida en la nevera. Fuscina 1 Minuto 9. de las bacterias. Si el medio no se ha de utilizar inmediatamente se guardo en forma Hay dos tipos de bacterias. Mechero. dejando la puerta o tapa muestras tomadas a través de un asa metálica y entreabierta por 15 minutos. las bacterias gram negativas absorben un 10% de peptidoglucano 2. Cuando tenga una temperatura cercana a los 500C. determinar con precisión e identificar el nombre 6. laboratorio de microscopia. ellos. Una vez cumplido el tiempo de dental de un compañero de laboratorio. con el vapor. un algodón se esparcen en una lamina de vidrio. Lugol.1 Metodología cultivo vienen definidos por el fabricante en la etiqueta correspondiente.1 Materiales Practica 2. gram negativas. Se tomó una caja de cada tipo de medio y pueden apreciar en el microscopio de coloración se colocó en la incubadora a 30ºC como morada.

derivados de leche y 11. calentar y hervir 1 minuto y esterilizar en el autoclave a 121 °C y dejar enfriar durante 15 Montaje minutos a una temperatura de 40 – 45 °C y Se desinfectó el mesón de trabajo con alcohol servir en las cajas de petri estériles.Fardy Díaz Microbiología Ambiental Laura Vélez FUAC 2. para finalizar la muestra se petri. para inhibir el crecimiento bacteriano. 6. también se hizo lo del tubo en el fondo de la cámara húmeda . 5. primero se limpio el ambiente para su posterior análisis en el mesón con alcohol. le dan energía para el crecimiento de las 3. Acido láctico. la de ambiente se hongos. Materiales Práctica Micromycetos.1 con ácido 13. el cuadrado de agar cortado se colocó hizo al aire libre en un pequeño patio y la de sobre una lámina de la cámara húmeda y se manos se pasó el isopo entre los nudillos y las paso por el mechero un cubreobjetos y se puso uñas de las manos de un compañero. Saboreaud(2) se utiliza para cultivar hongos y 9. su preparación normal es 25g del 4. cosméticos. Luego se paso el muestras son tomadas en manos de un bisturí por el mechero para eliminar compañero.2 Metodología petri y volver a limpiar el mesón con alcohol. bacterias. se escogió la muestra de ambiente. Las en concentración al 70%. se hizo contaminación y se hizo un corte cuadrado de 1 muestreo de superficie el en borde de la cm2 en el agar ya preparado de P.5 ± 0.D. muestra de los hongos cultivados desde la Después de hacer esto se realizó el respectivo practica 2. esterilizar en el autoclave durante 15 minutos a 7. El agar Plate count(1) esta hecho de nutrientes de suplemento de 1. Tinción de Azul de Lactofenol agar deshidratado en 1 litro de agua destilada. Portaobjetos tryptone. Su preparación recomendada es 39g del medio en un litro de agua destilada. se escogió agar plate count para aislar las bacterias y agar saboreaud 7.A para baranda de una escalera. hervir lentamente y agitar hasta que se disuelva. se tomó la de ensayo con la muestra de superficies. Luego incuba en un tiempo de 5 – 8 días. Microscopio. vitaminas de extractos y glucosa que 2. se tomo por encima de la superficie del agar. Se determino la contaminara y se realizó la toma de muestra a temperatura de crecimiento de las bacterias a través de un asa previamente flameada en el 37 °C. una temperatura de 121 °C y finalmente servir 8. levaduras. finalmente Observación de microcultivo se encendió la cámara y se espero un lapso de Pasada una semana después de someter una tiempo de 10 minutos para retirar las cajas de muestra ambiente de hongo a la cámara . Cuabreobjetos. se somete a temperatura con bombillos halógenos. ya con la pequeña porción de muestra de 8 dias de incubación a una temperatura de se sembraron 4 puntos en el agar y se le puso 25 – 28 °C. para cultivar los hongos. Algunos procedimientos señalan 12.1 Metodología Práctica Micromycetos. 6 cajas de petri una encima de otra. Asas Micológicas. bajar el pH del medio a 3. Ahora el agar montaje de microcultivo. Bisturís. cultivo en el agar para bacterias dentro de las se abrió la caja de petri del cultivo de hongos de cajas de petri y en el agar de los hongos en la ambiente cerca del mechero para que no se respectiva caja de petri . manos y Se preparó agar para cultivar bacterias y agar superficie. 7. la caja se se realizo el proceso de esterilización en una invierte y se marca con los nombres de los cámara a través de un horno que funcionaba integrantes del grupo. tartárico al 10 %. ya para terminar se dejaron las cajas de petri Muestreo de Ambientes y Superficies marcadas con la fecha. Pipetas estériles. ambiente y superficies. después se un tubo de ensayo con agua destilada y se aplicó 2 ml de solución estéril de glicerina al 5%. muestras de alimentos. Cultivos fúngicos. para cultivar hongos. Mechero. sumergió la muestra. agar y tipo de muestreo. es decir ambiente. Alcohol al 70%. durante 24 – 48 horas y para los hongos mechero. Solución estéril de glicerina al 5%. después se acomodaron las microscopio. 3 para hongos y 3 para bacterias. Caja de petri con cámara húmeda para en las cajas de petri. este agar esta hecho a partir de 10. En total se hizo esto en 6 cajas de el cubreobjetos.

Presencia de pigmentos difusibles: no en caso de no encontrar el agar preparado Presencia de plegamientos o surcos: no conseguir la ficha técnica para su preparación y Presencia de zonación: muy remoto y seguir las recomendaciones anteriores. ahora bien Color del anverso de la colonia: gris oscuro previamente en el laboratorio de microscopia se Color del reverso de la colonia: negro aplica una gota de azul de lactofenol a la lamina Presencia de pigmentos difusibles: no de vidrio y graduar el aumento del microscopio a Presencia de plegamientos o surcos: si 10x y 40x y se registro las estructuras del Presencia de zonación: ocupa un gran hongo. al no poder hacer esto entran en un fase de muerte por falta de nutrientes para su supervivencia.Fardy Díaz Microbiología Ambiental Laura Vélez FUAC húmeda se retira el cubreobjetos.5 Tiempo de incubación: 9 febrero 2012 – 8 Color del anverso de la colonia: gris claro marzo 2012 Color del reverso de la colonia: negro Diámetro de la colonia: 4 Presencia de pigmentos difusibles: no . cantidad disuelta. estos permanecieron estériles y listos para usarse en el laboratorio. Practica: 1 Esterilización Imagen 2: Hongo muestra de superficie A la semana de la práctica de esterilización gracias a la acción del papel kraf que protegió el material de vidrio utilizado. volumen a preparar. Resultados Práctica 7: Micromycetos Resultados Práctica 7: Micromycetos Imagen 3: Hongo muestra de ambiente Imagen 1: Hongo muestra de manos Medio de cultivo: saboreaud Temperatura de incubación: ambiente Morfología Macroscópica. Medio de cultivo: saboreaud Temperatura de incubación: ambiente Para preparar los agares en el laboratorio de Tiempo de incubación: 9 febrero 2012 – 8 microbiología es muy necesario seguir las marzo 2012 indicaciones en la etiqueta de los frascos. es decir las cajas de petri y las pipetas del ambiente para que no se contaminaran. espacio Textura: aterciopelada Resultados. Color del reverso de la colonia: anaranjado presión. Esto es pequeño el espacio importante para el optimo desarrollo de las Textura: cremosa bacterias y hongos a cultivar.7 muy cuidadosos en aspectos tan fundamentales Color del anverso de la colonia: rosado en su preparación como lo son temperatura. ser Diámetro de la colonia: 0. También porque las grandes temperaturas del horno eliminaron toda forma de vida porque cambia bruscamente el ambiente de las bacterias e inhibe que estas puedan generar endoesporas. Tiempo de incubación: 9 febrero 2012 – 8 Medio de cultivo: saboreaud manos marzo 2012 Temperatura de incubación: ambiente Diámetro de la colonia: 5.

Un objeto esterilizado esta contienen conidias: si totalmente libre de microorganismos viables.Fardy Díaz Microbiología Ambiental Laura Vélez FUAC Presencia de plegamientos o surcos: si Presenta cuerpos fructíferos: cuerpos Presencia de zonación: ¼ de la caja de petri globosos o piriformes que en el interior Textura: algodonoso contienen conidias: si Presenta cuerpos fructíferos que en el interior contienen ascos y ascosporas: si Morfología Microscópica Imagen 6: de la muestra de ambiente Hongo levaduriforme: no Hongo micelial o filamentoso: si Hifas cenocíticas o aseptadas: cenociticas Hifas septadas: no Presenta estructuras de reproducción: escolespora Presenta cuerpos fructíferos: cuerpos globosos o piriformes que en el interior contienen conidias: no Presenta cuerpos fructíferos que en el Imagen 4: Hongo de muestra de manos interior contienen ascos y ascosporas: si Hongo levaduriforme: no Hongo micelial o filamentoso: si Discusión de Resultados Práctica de Hifas cenocíticas o aseptadas: cenociticas esterilización.(3) En el presente trabajo se eliminaron los microorganismos que pudieran estar presentes en los implementos de trabajo los cuales son las cajas de petri y las pipetas a través del autoclave permitiendo la inhibición de endoesporas de las baterías Imagen 5: Hongo muestra de superficie Hongo levaduriforme: si Hongo micelial o filamentoso: no Hifas cenocíticas o aseptadas: Hifas septadas: no Presenta estructuras de reproducción: amerosporas Tabla 2: Experimento teórico de destrucción térmica microbiana minuto Numer MO Mo Log De s o inicial Destruido sobreviviente superviviente MO s en 1 s s min. Presenta cuerpos fructíferos que en el esporas y otros agentes infecciosos (Prescott M. esporas viables virus y Presenta cuerpos fructíferos: cuerpos viroides son destruidos o eliminados de un globosos o piriformes que en el interior objeto o hábitat. Hifas septadas: si Presenta estructuras de reproducción: La esterilización es el proceso por el que todas fragmospora las células vivas. interior contienen ascos y ascosporas: si 2004). (90% .

la tabla anterior no cabe duda que se eliminó totalmente microorganismos que se encuentre en el material de vidrio de laboratorio. tal es el caso de algunos levaduras como la Candida guillermondii Otros Ascomycetes han adoptado 5 102 9 * 101 10 1 un proceso de protección mas elaborado para sus esporas :los ascos se envuelven dentro de un ovillo de hifas que forman el ascocarpo.). CONCLUSIONES En la mayoría de los hongos se presenta 1. este según su forma y la manera como libera las esporas. El equipo Usado para esto fue el autoclave. La temperatura es de 121 de la muestra anterior. dando el nombre a los tres grandes grupos de hongos Zigomycetes. Discusión de Resultados Práctica de Micromycetos. y el 90% observo que el hongo microscópicamente posee de los microorganismos se destruyen cada hifas no septadas con las miasmas propiedades minuto de exposición.Fardy Díaz Microbiología Ambiental Laura Vélez FUAC del total) estructutras se denominan. 2 10 5 9 * 10 4 10 4 4 se observó en el microscopio por su morfología microscópica que presentan ascosporas con lo cual se deduce que los hongos que se estudiaron pertenecen al grupo de hongos 3 104 9 * 103 103 3 conocido con el nombre de Ascomycetes. 2004)(3) corresponde a una levadura ya que se observo que no posee hifas y que su morfología El tiempo que se utilizó para la esterilización del microscópica evidencia que tiene crecimiento material de laboratorio fue de 15 – 20 minutos a radial y textura cremosa características típicas la temperatura de 120 C y con la explicación de de las levaduras. Los Ascomycetes mas sencillos hacen la 4 103 9 * 102 102 2 reproducción dentro de un asco desnudo. Zigote. Muñoz J. apotecio y clesitotesio. Este tipo de en el laboratorio. (4) 7 1 0. Por ultimo la (figura 5) C (Prescott M. recibe diferentes nombres nombres como lo son: peritecio. La esterilización elimina con eficacia formación de de una estructura externa que los microorganismos y sus esporas envuelve las esporas sexuales protegiendolas garantizando buen manejo del material de las condiciones adversas. .1 -1 En la morfología microscópica de las muestras de manos (figura 4) se puede establecer que posee un proceso de protección mas elaborado en sus esporas porque posee hifas septadas. 1 106 9 * 105 105 5 Ascomycetes y Basidiomycetes (Suarez M. según el caso. Se asume que la muestra inicial contiene 106 También la muestra de ambiente(figura 6) se microorganismos vegetativos por ml. 101 9 1 0 6 (Suarez M.). Los Ascomycetes protegen las esporas sexuales dentro de un asco o asca. Muñoz J. Ascocarpo.9 0.(4) De los tres hongos analizados en el laboratorio.

Muñoz J. Madrid. . 8. Los agares son el hogar de bacterias y hongos para su óptimo desarrollo en el laboratorio. Teniendo bibliografía disponible se puede identificar macroscópicamente y microscópicamente diversas especies de hongos. Mcdlab. 4. 5ed. BIBLIOGRAFÍA 1. Con la ayuda de químicos como el lactofenol se puede observar hongos a la perfección. 147 -149p. Medicatec. consultado el 11 de abril de2012http://www.. 4. Biokar Diagnostics – Rue des Quarante Mines.mx/pdfs/agar_ dextrosa_papa. México.pdf. 15 19p. 7. Prescott M.a. Tener cuidado a la hora de realizar procesos como extracción de muestras.c.%28bk144ha%29-plate-count-agar- %28p. 3.%29-500-grs. Los muestreos dan una información fundamental a la hora de hacer estudios con microorganismos. 6.medicatec. Universidad Javeriana. 3.com/arg/? 291. 1999. McGraw Hill. Preparar el agar garantiza un óptimo desarrollo de cultivos de bacterias y hongos. 5.mcd.Fardy Díaz Microbiología Ambiental Laura Vélez FUAC 2. Manual de fundamentos de Micología. Suárez M. 2. Con libros y el microscopio podemos identificar especies de hongos.com. Especificaciones agar dextrosa y papa. . Microbiología. consultado el 11 abril de 2012http://www. Falcultad de ciencias.

Fardy Díaz Microbiología Ambiental Laura Vélez FUAC .

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