UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA LA

MOLINA

INTEGRANTES:
 GRANADOS CALDERON, BRYAN JESÚS
 PORTOCARRERO, PABLO

FLORICULTURA II - GRUPO A* - JAULIS

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con ventajas evidentes que hicieron crecer el cultivo de tejidos vegetales. el desconocimiento de técnicas alternativas de micropropagación. la cual se puede llevar a cabo de manera rápida. nutrición y todo lo pertinente con el crecimiento y desarrollo de las plantas in vitro. En la presente practica se llevara a cabo la siembra in vitro de semillas de orquídea en las instalaciones del IBT de la UNALM. La inmensa diversidad de plantas con potencial ornamental existente en nuestro país está siendo actualmente mal aprovechada. equipos. 2. Página | 2 . vivienda. con su biodiversidad ha sido sometida y solo un porcentaje muy pequeño. soluciones. Ya con nuevas herramientas y tecnologías el hombre descubrió que las plantas podían reproducirse o multiplicarse en un tiempo más rápido y en mayor número.  Propagar orquídeas por medio de cultivos de semillas. eficiente y segura mediante la propagación in vitro. ya que no toda la naturaleza. reactivos. es el que ha sido manipulado por el hombre para su sustento alimentario y necesidades varias tales como: fibras y materiales para la elaboración de todas sus manufacturas. medicinas y en fin todo lo que el hombre puede imaginar en su mente creadora. siendo una de las razones. con la finalidad de conocer acerca de la propagación in vitro de este material así como de los procedimientos y cuidados que se debe tener al momento de realizarlo. que luego van a formar piezas más elaboradas como textiles. Una alternativa para la solución de este problema lo constituye el recurrir a la reproducción artificial. Objetivos:  Profundizar en el manejo de instrumentos. La tala como actividad extractiva y la pérdida de dichos hábitats llega a tal punto que actualmente muchas de nuestras especies nativas se encuentran en inminente peligro de extinción. herramientas. como una rama de la biotecnología. Introducción Desde hace miles de años el hombre ha domesticado animales y plantas con relativo éxito. 1.

a esta porción se le denomina “explante”. meses o incluso años dependiendo de la especie hasta que alcance la edad apropiada para producir raíces y hojas. su tamaño generalmente es pequeño (ocasionalmente microscópico) y su manipulación debe ser bajo condiciones de laboratorio aséptico e inoculado en medios de cultivo apropiados. ya que en cada uno de los pasos de la propagación. 2008). heladas y muchas más condiciones adversas que en la naturaleza están presentes e inciden en el vegetal.  El tiempo de regeneración de una planta es significativamente menor. 3. así como plantas tolerantes a sequías. Usualmente estas semillas no germinan en el medio natural a menos que sean infectadas por un hongo micorriza. y eliminar el material contaminado. ya que el explante es de carácter somático y su información genética es homocigota 2n diploide.  Mejoramiento genético: con fines de obtener plantas más resistentes al ataque de plagas y enfermedades. se hace una selección del material. Manteniendo las condiciones normales. B. bajo condiciones ambientales controladas. C. con el fin de producir únicamente material sano. salinidad. (Pachón. Cuando la semilla germina produce una masa indiferenciada de células llamada protocormo.  Número grande de plantas homogéneas o iguales a la planta donante. Página | 3 . Definición: El cultivo de tejidos vegetales es un grupo de técnicas por medio de las cuales se pueden obtener plantas. a partir de una porción vegetal con crecimiento activo de una planta donante. La biología de la germinación de semillas de orquídeas Las semillas de orquídeas son conocidas usualmente como semillas de polvo porque son minúsculas y contienen pocas reservas de alimento. y no sexual n haploide. En el caso de orquídeas terrestres.  Sanidad de las plantas propagadas por este método: son de calidad certificada. el protocormo continuará su crecimiento por varias semanas. el mismo que abastece a las plantas jóvenes con azúcares y nutrientes que necesitan hasta que sean lo suficientemente grandes para fabricar su propio alimento. Ventajas de la Propagación In vitro:  Número ilimitado de nuevas plantas (miles). Revisión Literaria: A. es de vital importancia que la relación orquídea-hongo se conserve durante los estados tempranos del ciclo de vida de la planta ya que el protocormo enterrado no puede fabricar alimento por sí mismo.

Use un roceador y limpie todas las superficies de la cámara con un algodón empapado de alcohol (incluyendo las paredes y el techo). lo que les posibilita producir parte de su alimento.Por otro lado. Generalmente. o desinfectando semillas maduras con hipoclorito de sodio o calcio. Una vez en la cámara. secarse y esterilizar con alcohol. Esta temperatura y presión son suficientes para matar todas las esporas de bacterias y hongos presentes en el medio. sin embargo en caso de que existieran problemas con contaminación bacterial se debe volver a utilizar los guantes. Todo lo que ingresará en la cámara debe estar esterilizado. Además de asegurarse que todos los instrumentos utilizados en la transferencia estén desinfectados. Utilice guantes y desinféctelos completamente antes de usarlos. 2. los protocormos de las orquídeas epífitas son comúnmente verdes. o peróxido de hidrógeno. Use un mandil de laboratorio y lávelo constantemente. Con práctica. los aparatos y las semillas se mantengan desinfectadas desde el principio del proceso de germinación. los frascos. Siempre se la debe desinfectar por completo usando alcohol de 70-90% de concentración. Cualquier bacteria u hongo que se introduzca en los frascos crecerá más rápido que las semillas y pronto ocupará su espacio hasta matarlas. roceándo alcohol y guardándolos en la cámara hasta que el alcohol se haya secado. E. La mejor manera de conservar el etanol es en frascos grandes de vidrio para permitir la máxima exposición de los Página | 4 . este proceso se realiza sembrando desde la superficie desinfectada de cápsulas verdes. Las condiciones de esterilización en la preparación del medio se crean autoclavando el medio y los frascos a utilizarse por 15 minutos a 15 atm. Uso de la cámara de flujo laminar Se debe prestar atención a ciertas reglas básicas al usar la cámara de flujo laminar: 1. La relación orquídea-hongo no ha sido en su totalidad investigada para el caso de las orquídeas tropicales. la esterilización es asegurada sumergiéndola en etanol al 100% y encendiéndola tres veces antes de usarla. lavarse las manos y fregarse las uñas usando un jabón antibacterial. Con cierto cuidado y práctica se puede crear y mantener condiciones de esterilización desde la germinación hasta el transplante de las semillas. Se debe desinfectar tanto antes como después de utilizar la cámara. Fundamentos para mantener condiciones de esterilización Es de vital importancia que el medio. Las semillas deben ser esterilizadas y transferidas a los frascos sin introducir hongos o bacterias externos. D. es posible en lugar de usar guantes.

La nutrición mineral in vitro. naturaleza del tejido. jugo de tomate. está en función de las dimensiones del explante. método de cultivo y tipo de organogénesis a estudiar. Déjelos enfriar antes de su uso. Nunca ponga las manos. etc. extracto de malta. jugo de naranja. mangas u otro objeto sobre o en dirección de algo desinfectado (como el medio). como también del empleo de tejidos viables. la naturaleza del tejido. Mantenga las condiciones de esterilización mediante la limpieza regular de la cámara con alcohol. tal como: pulpa de plátano. emulsión de pescado. 3. incubación. 4. Elaboración del medio de cultivo El éxito que se obtenga en el cultivo de tejidos vegetales depende en gran parte del uso de un medio nutritivo adecuado. endospermo de coco. Recuerde que cualquier espora de bacteria u hongo dentro de la cámara flotará hacia el interior y en dirección a su persona. Compuestos orgánicos: Se clasifican en tres grupos: Carbohidratos. ácido abscisico) y vitaminas. Complejos naturales: Muchas preparaciones de composición indefinida han sido empleadas para enriquecer los medios de cultivo. estado fisiológico. la actividad metabólica.Efecto favorable sobre rizogénesis debido al oscurecimiento del medio. 4. desinfecte nuevamente los instrumentos luego de su uso y lávese de nuevo las manos después de haber tenido contacto con cualquier objeto fuera de la cámara. etc. varían con la especie. Sales inorgánicas: Mezcla de macronutrientes y micronutrientes. 3. giberelinas. sustancias hormonales (auxinas. calidad de reactivos. 2. F. Después de flamear los instrumentos éstos deben ser ubicados rápidamente sobre un frasco de vidrio esterilizado para continuar con el flameado. Los principales componentes del medio de cultivo se pueden clasificar en: 1. citoquininas. la frecuencia de trasplante y la composición del medio.instrumentos al etanol. Carbón activado Sus efectos se pueden resumir así: . Página | 5 . etileno. Las necesidades nutricionales. Trabaje en lo posible por la parte de atrás de la cámara y minimice el tiempo de exposición de los medios cuando sea posible.

y está lista para ser sembrada. La ventaja de este método es que no se requiere de la esterilización de las semillas. y se abre las cápsulas bajo condiciones de esterilización las semillas podrán mantenerse desinfectadas.Previene el crecimiento de callo.Adsorción de etileno que inhibe el crecimiento y la diferenciación de las plántulas y protocormos. Una cápsula verde que está madurando. ácido-para-hidrobenzóico).Efecto favorable por la absorción de metabolitos fitotóxicos que estarían siendo liberados al medio de cultivo por los tejidos (fenoles y sus oxidados. Siembra a partir de cápsulas verdes El interior de las cápsulas de orquídeas se mantiene estéril si las cápsulas están intactas. . hidroxiquinonas. No se debe almacenar las semillas en fundas plásticas ya que las cápsulas sudarán y se podrirán. . G. resultado de la deshidratación de las hexosas que afectan el desarrollo y crecimiento de las plántulas. lo que podría provocar su deterioro.Contribución de minerales en forma de impurezas la cual estaría enriqueciendo el medio de cultivo. "queda intacta". A continuación se describen las ventajas y desventajas de ambos métodos: a. 2. Las cápsulas pueden ser almacenadas por algunas semanas si se las envuelve en papel de cocina y si se las coloca en un lugar del refrigerador con bastante aireación (como el compartimiento para el queso). Entonces. se encuentra llena de semillas y no se deforma cuando se la aprieta con las pinzas.Promueve la embriogénesis. . si se esteriliza la parte exterior de las mismas. Siembra de las Semillas 2. Colección y Almacenamiento de las Semillas Las semillas pueden ser colectadas a partir de cápsulas verdes o cápsulas maduras.1 Cápsulas verdes vs. como el hidroximetil-furfural. donde hongos y bacterias pueden desarrollarse. Además. algunas semillas tomadas de cápsulas casi Página | 6 .. Siembra de semillas 1. . semillas secas Se puede sembrar semillas a partir de cápsulas verdes o a partir de semillas secas.Adsorción de sustancias producidas durante la esterilización en el medio de cultivo. .

Deje que el alcohol se queme completamente y que la cápsula y las pinzas se enfríen.  Transfiera la cápsula a una superficie desinfectada (como una caja petri esterilizada). almacenadas por varios meses en el refrigerador y utilizadas cuando sea necesario. Una vez que la cápsula es abierta. Luego sumérjala en alcohol al 100% y pásela rápidamente por el fuego (flamear). 3. Comúnmente. b. La desventaja de este método es que al abrir la cápsula todas las semillas en ella deben ser utilizadas o eliminadas (algunas semillas maduras podrían secarse y ser almacenadas). se utiliza una solución de hipoclorito (cloro) de sodio.  Introduzca la cápsula por 10 minutos aproximadamente en una solución de hipoclorito de sodio al 1% a la que se ha añadido una gota de detergente (tome en cuenta que el cloro común es hipoclorito de sodio al 5% por lo tanto hay que diluir lo necesario). Si no es posible sostenerlas del peciolo. cambie la posición de las pinzas antes de flamearlas nuevamente. hipoclorito de calcio o peróxido de hidrógeno.  Transfiera la cápsula sumergida en la solución de cloro a la cámara de flujo laminar. Las semillas se agitan dentro de la solución que además contiene una gota de detergente para “humedecerlas”. Siembra a partir de semillas secas. remueva cuidadosamente la flor muerta de la cápsula  Utilice un cepillo de dientes suave para fregar suavemente la cápsula con la solución jabonosa. las semillas dejan de ser estériles y requieren de un proceso de esterilización. Corte longitudinalmente la cápsula en la mitad con la ayuda Página | 7 . maduras podrían germinar más rápido que las provenientes de cápsulas maduras a causa de los mecanismos de dormancia. Repita el proceso dos veces para las cápsulas grandes.  Enjuague la cápsula en agua.  Saque la cápsula de la solución de cloro usando unas pinzas y tomándola preferiblemente de lo que queda del peciolo. secadas al aire. También se debe considerar que las semillas sembradas a partir de cápsulas que no han madurado lo suficiente podrían germinar lentamente o simplemente no germinar. Siembra a partir de cápsulas verdes El método general para sembrar semillas a partir de cápsulas verdes es el siguiente:  Con la ayuda de un bisturí. Para el caso de las cápsulas pequeñas y frágiles decida Usted con discreción el tiempo de pasarlas por la llama (tal vez sólo una vez). luego se las enjuaga con agua destilada y se las siembra en el medio preparado. La ventaja de este método es que las semillas pueden ser colectadas.

Si la contaminación es detectada lo más temprano posible. pero deben ser transplantadas antes que el hongo ocupe su espacio y las destruya. de un bisturí desinfectado. Normalmente se añaden unas gotas de agua en cada frasco de modo que ciertos grupos de semillas se separen y se distribuyan sobre el agar. Las pequeñas plantas son transplantadas cuando empiezan a aparecer hojas y empiezan a llenar el frasco. pero usualmente es mejor si se añade al nuevo medio sustancias complejas (como plátano aplastado. una vez que el hongo ha producido esporas. Las semillas menos maduras se pueden extraer de la cápsula con las pinzas. jugo de piña o vitamina B) para fomentar el desarrollo de la raíz. Los frascos recientes deben ser revisados regularmente luego de la siembra por el riesgo de contaminación. El siguiente medio puede ser el mismo que el primero. se puede dejar que las semillas crezcan.  Repetir este paso hasta que todas las semillas faltantes se utilicen. de las condiciones climáticas a momento de la colección y de los métodos de secado y almacenamiento. un rango de tiempos de esterilización es recomendado para las nuevas semillas. Sin embargo. Todos ellos se basan en la esterilización de las semillas y el lavado en agua destilada antes de sembrarlas.  Levante la una mitad de la cápsula con las pinzas y golpéela ligeramente sobre el medio para discernir las semillas. H. Siembra a partir de cápsulas dehiscentes (abiertas con semillas secas) Existen diferentes métodos para la siembra a partir de semillas secas. Las semillas en la USFQ crecen 40 cm bajo tubos fluorescentes de 20 watts en un cuarto de crecimiento que está regulado a 18°C con 16 horas de luz y 8 horas de oscuridad. El tiempo de esterilización también varía dependiendo de la especie. En este último caso. pero las técnicas varían. usando una jeringuilla desinfectada. En casos como éste. se debe eliminar el frasco. una contaminación de hongos podría motivar la germinación. A. 4. no es aconsejable combatir dicha contaminación. Página | 8 . se la puede combatir antes de que se disperse totalmente. Las semillas en los frascos. De manera ocasional. leche de coco. del tiempo de maduración luego que la semilla es colectada. CUIDADO DE LAS PLÁNTULAS. La excepción a esta regla se da cuando es más eficaz remover los protocormos de un frasco o caja petri contaminada. Agua destilada puede ser añadida si los frascos están secos. Por ello. o si existe poco líquido en el fondo del frasco. Las plántulas se transfieren a nuevos frascos que contienen el medio usando pinzas desinfectadas. Utilice una hoja de bisturí nueva para cada cápsula para prevenir la propagación de virus.

Además. La humedad en los frascos es alta y las plantas están protegidas de ataques de hongos. En el cuarto de crecimiento. Finalmente. ambas temperatura y luz varían constantemente. Bisturí y pinzas 5. B. 4. Envases de vidrio . Jabón desinfectante . tanto en la fase de aclimatación como en la de transplante. Cámara de flujo laminar . bacterias y herbívoros. Transplante En los frascos las plántulas se han desarrollado en un ambiente cerrado y limpio por lo que deben acostumbrarse gradualmente al ambiente externo antes de ser transplantadas a las masetas. Mandiles . Tapabocas . Mechero . En el medio natural. la luz es baja y tanto la luz como la temperatura son prácticamente constantes. Alcohol . las plántulas deben ser cuidadas diariamente para evitar problemas. Agua . Las nuevas plantas deben estar protegidas de manera especial de la fuerte luz solar: incluso una pequeña cantidad de luz solar podría quemar las hojas de estas plantas que usualmente crecen en la sombra. Materiales y Equipos: . Medios de cultivo . y más que una vez al día si el clima es seco y muy soleado. las plántulas que han crecido en condiciones de alta humedad tendrán cutículas débiles por lo que necesitan acostumbrarse gradualmente a medios más secos antes de ser transplantadas. Detergente . Legía pura . Capsulas de orquídea (Cattleya) . Procedimiento:  Remojar las capsulas en detergente por 10 min  Lavar y enjuagar las capsulas  Remojar las capsulas en legía pura por 15 minutos  Llevar las capsulas a la cámara de flujo laminar (previa desinfección de las manos e instrumentos por parte del manipulador) Página | 9 .

 Remojar las capsulas en agua esterilizada (3 veces)  Flamear la capsula para esterilizarla y proceder a cortarla y abrirla  Coger una porción de semillas con las pinzas y colocarlas dentro del medio de cultivo  Sellar correctamente el envase y llevarlo al ambiente de incubación Página | 10 .

lo que significa que se podrán admirar muchas plantas. Hay dos tipos básicos de germinación in vitro: simbiótica y no simbiótica. las mismas que tienden a crecer fácilmente en comparación con sus parientes en zonas templadas. Un grupo de estas semillas germinadas podrán ser exportadas fácilmente porque las orquídeas cultivadas y mantenidas en frascos esterilizados están exentas de las usuales regulaciones CITES referentes a sanidad vegetal y vida silvestre. El hongo crece en el medio. las semillas se siembran con una pequeña porción del hongo micorriza apropiada. La germinación asimbiótica es usualmente usada en la propagación de orquídeas tropicales. Sin embargo. Página | 11 . coloniza a las semillas en proceso de germinación y se origina una relación simbiótica que se espera alimente al protocormo hasta que éste produzca hojas y se vuelva autotrófico. y por lo tanto no se dispone del hongo micorriza apropiado. 6. y como resultado las plantas micorrizales suelen ser más fuertes y resistentes a infecciones que sus contrapartes cultivadas asimbióticamente. Cada cápsula de orquídeas contiene muchos miles de semillas. Discusiones: Mediante la germinación in vitro. la desventaja es que se necesita seleccionar el tipo de hongo micorriza adecuado para que se origine la simbiosis y prevenir parasitismo y la consecuente muerte de las semillas. 7. ya que todos los nutrientes orgánicos e inorgánicos y los azúcares deben estar disponibles para la orquídea en una forma apropiada puesto que ya no existe la intermediación del hongo. Se ha realizado poca investigación sobre la relación del hongo micorriza con las orquídeas tropicales. se reproducen semillas en frascos de vidrio o plástico sobre un medio de agar nutritivo que contiene los azúcares y minerales necesarios para que las semillas germinen y crezcan. Tiene la ventaja de usar un medio simple (uno de los más comúnmente usados consiste en avena en polvo con una pequeña cantidad de extracto de levadura). Conclusiones: Mediante la germinación in vitro un mayor número de plantas pueden ser cultivadas en un período de tiempo relativamente menor (algunos meses para las especies más rápidas). El medio usado para la germinación asimbiótica es más complejo que para la germinación simbiótica. En la germinación simbiótica. Esta técnica es ampliamente usada para la propagación de orquídeas terrestres en zonas templadas.

blogspot. Multiplicación vegetativa y cultivo “in vitro”. Madrid · Roca. y Mroginski. L. Ediciones Mundi Prensa. Manual de cultivo de tejidos vegetales y la micropropagación. I. 8. 1993. · Sánchez. · http://turrusta. 1988. J. Bogotá.html Página | 12 . Centro Internacional de Agricultura Tropical CIAT. 1990.com/2009/05/formulas-para-hacer-el-medio-para-la. Cultivo de tejidos en la agricultura. A. W. Cali. Fundamentos y Aplicaciones. Bibliografía: · Márgara. J. Los meristemos y la organogénesis.