Cultivo Lote Alimentado Aireado

CULTIVO LOTE ALIMENTADO AIREADO 2011
CULTIVO POR LOTE ALIMENTADO AIREADO
I. OBJETIVOS:
1.1.Objetivos generales:
Disear y realizar una experiencia de cultivo celular por lote alimentado (CLA)
con alimentacin constante utilizando una cepa de Saccharomyces cerevisiae
ATCC-4126.
1.2. Objetivos Especficos:

Disear el medio de cultivo.
Realizar la activacin y desarrollo del inoculo.
Identificar y describir las partes, a accesorios y geometras, conocimiento de la
operacin del fermentador, esterilizacin, carga y descarga y toma de muestra.
Identificar en el fermentador los instrumentos de medicin y control automtico,
as como la calibracin de los sensores
Puesta en marcha del cultivo por lote alimentado y determinar max y Y x/s.
Obtener los perfiles de masa celular, fuente de carbono y oxgeno disuelto a travs
del tiempo de operacin.
Observar las zonas de crecimiento exponencial y limitada.
Determinar el Y x/s y Qx del CLA.
II. METODOLOGA EXPERIMENTAL :
A la hora de disear un medio de cultivo no slo hay que tener en cuenta los nutrientes
sino tambin las condiciones fsicas que permitan el crecimiento de los
microorganismos, asimismo nos interesa cuanto de biomasa se desea producir.
Tambin es importante conocer las caractersticas de los microorganismos con el que
se va a trabajar.
LABORATORIO DE BIOPROCESOS GRUPO B-4 Pgina 1

Microorganismo.
La levadura usada es Saccharomyces Cerevisiae ATCC 4126, siendo el sustrato
sacarosa
Condiciones del medio:

Sustrato limitante: SACAROSA ( C12H22O11)
Duracin: 6 horas de la etapa de CLA
Usar el fermentador automtico Biotron Modelo Liflus G X de 2 litros
Control de pH mediante electrodo
Medicin de oxigeno disuelto mediante electrodo : 1,0 vim ; 200 rpm
La existencia de las zonas de crecimiento exponencial y limitado.
Utiliza macro nutrientes como: C.N.Mg,K,P
Utiliza micro nutrientes como: Ca,Na,Fe,Cu,Mn,Mo,Co,Zn
2.1. DISEO DEL MEDIO DE CULTIVO
Para disear el medio de cultivo se realizara de acuerdo a los alcances que nos
proporciona la gua de prctica, en el cual podemos conocer los requerimientos del
microorganismo, para su mantencin, activacin y para la fermentacin del cultivo
por lote alimentado.
Otro modo de operar un biorreactor es empleando la tcnica de batch alimentado
(BA) o fed batch. Esta tcnica se define como un cultivo en batch donde se alimenta
continuamente medio nutritivo fresco o alguno de sus componentes. Si el nutriente
que se alimenta es el limitante del crecimiento, esta tcnica permite controlar la
velocidad de crecimiento () del microorganismo.
El BA es particularmente til en procesos en los que el crecimiento celular

y/o la formacin de producto son sensibles a la concentracin del sustrato limitante,
es decir cuando el rendimiento celular o la poductividad de la biomasa o del
metabolito buscado se ven afectados. As, este mtodo se emplea cuando se quieren
evitar fenmenos de inhibicin por sustrato y se requiere alcanzar una alta
concentracin de biomasa.

ESQUEMA
F(t)
SR(t)
Vf, Xf
VR = Vf - V0
V0, X0, S0
RESERVORIO BOMBA
BIORREACTOR
Donde F(t): caudal de alimentacin
Sr(t):concentracin de sustrato de la alimentacin
Vf: volumen final de trabajo
Vo: volumen al inicio de la alimentacin
Xo: concentracin de biomasa al inicio de la alimentacin
So: concentracin de sustrato limitante al inicio de la alimentacin
El cultivo BA se inicia a partir de un cultivo en batch, por lo que V o, Xo y So son las

condiciones finales de dicho batch.
Es posible elegir distintas condiciones de alimentacin, ya sea mediante el empleo

de caudales variables (F = F(t)), o bien mediante la variacin de la concentracin de
sustrato limitante (Sr=Sr(t)). En el caso del Trabajo Prctico se utilizar el sistema ms
simple, es decir F=cte y Sr=cte.
Puede representarse un cultivo en batch alimentado operando en las condiciones halladas.

S0'
X.V = X0.V0 + F.SR.YX/S.t
X0.V0 < max
X.V
= max
X0'.V0' S0 = 0
BATCH t = t0 BATCH ALIMENTADO t
Al obtener valores de Sr y F, se ha DISEADO una alimentacin para el cultivo en

batch alimentado. El caso descrito hasta aqu tiene en cuenta que tanto F como Sr
sean constantes. Es claro que en caso de ser F = F(t) y/o S r = Sr(t), dicha
funcionalidad habr de ser tenida en cuenta para resolver las ecuaciones planteadas
2.2. PREPARACION DEL MEDIO:

2.2.1. PREPARACIN DEL MEDIO DE MANTENCIN
La preparacin de este medio se realizara de acuerdo a los componentes que
se encuentran en la tabla N 01
Nutriente So (g/l) So (g/50ml)
Extracto de Levadura 3 0.15

Extracto de malta 3 0.15
Peptona 5 0.25
Agar 20 1
Glucosa 10 0.5
Tabla N1: Composicin de medio slido de mantencin (para 50 ml de

solucin)

Procedimiento
La preparacin del medio de mantencin se inicia de acuerdo a las
concentraciones de la tabla N 01.
Los nutrientes se pesan en cantidades requeridas para 50ml. De la tabla
N 01,por lo que el medio de mantencin se necesita en cantidades
menores a 50 ml.
Medir en una probeta graduada 50 ml de agua destilada.
Mezclar todos los compuestos en un matraz Erlenmeyer adicionando el
agua destilada.
Calentar con el mechero Bunsen la mezcla disuelta en el matraz;
agitando constantemente con la ayuda de una varilla de vidrio, hasta la
aparicin de la primera burbuja, a partir de lo cual se controla de 1 a 2
minutos.
Preparar 8 tubos de ensayo con tapa, y en caliente adicionar 6ml de la
mezcla a cada tubo, e inmediatamente taparlos.
Colocar los tubos en un vaso de precipitado, y llevarlos a la olla a
presin, previamente aflojar las tapas, para permitir el intercambio de
gases.
Calentar hasta que la temperatura alcance los 121C y a partir de ello
controlar de 15 a 20 minutos, finalizando la esterilizacin.
Ajustar las tapas de los tubos estando estos aun dentro de la olla, luego
colocarlos en posicin inclinada y dejarlos a temperatura ambiente.
Luego preparamos nuestra rea de trabajo, desinfectando con alcohol.
para tener una rea estril prendemos el mechero cinco minutos antes de
realizar la resiembra con el Saccharomyces cerevisiae ATCC 4126.
Abrimos los tubos de ensayo cerca al mechero bunsen, flameando para
evitar la contaminacin, teniendo la aza bacteriolgica calentada al rojo
vivo esperamos un momento que se enfre.
Sacamos 2 a 3 azadas y colocamos en el tubo con agar, flameamos y
cerramos el tubo y as en los 8 tubos con agar.

2.2.2. PREPARACIN DEL MEDIO DE ACTIVACIN
NUTRIENTE CONCENTRACIN (G/L) PESAR (G)
Sacarosa 15 1.125
Extracto de 3 0.225
Levadura
Extracto de Malta 5 0.375
Solucin de Sales 5 ml/L 0.375ml
Tabla N 2: Composicin de medio de Activacin (para 75 ml de solucin)
Procedimiento
Pesar los componentes descritos en la tabla N 2.

En un matraz Erlemenyer se coloc la cantidad pesada de sacarosa ms
8 ml de agua destilada.
El extracto de levadura se coloc en tubo de ensayo y se agreg 10 ml
de agua destilada
En cuanto a la solucin de sales tambin se coloc en tubo se ensay y
se agreg 7 ml de agua.
Se esterilizan: la mezcla de extracto de levadura y sales en un tubo de
ensayo cada uno, la sacarosa en un matraz de 125 ml todo esto en un
vaso precipitado colocado dentro de una olla a presin.
Despus de haber esterilizado se dej enfriar para luego mezclar y
realizar la activacin con el microorganismo.
Al mezclar estos componentes (las sales y la levadura con la sacarosa)
se procedi a activar el microorganismo bajo mechero para evitar la
contaminacin.
Sacamos dos azadas y colocamos en el medio de activacin, luego
tapamos con el tapn previamente elaborado.
Colocar en el shaker por un tiempo de 12h.

2.2.3. PREPARACIN DEL MEDIO DE FERMENTACIN
Tabla N 3: Composicin Del Medio De Fermentacin I

Composicin del Medio de Cultivo de Saccharomyces cerevisiae- ATCC
4126 para un crecimiento en biomasa de 1.8 g/l. para un volumen de 750
ml
Elemento Nutriente % en % en Y x/s (g/g) S`0 (g/l) S0 (g/l) pesar

Celula nutriente (gr)
C Sacarosa 45 42,105 0,5614 3,2063 3,2063 2.4047
(C12H22O11)
N Sulfato de 9 21,21 2,3567 0,7638 1,1457 0.8593

Amonio
(NH4)2SO4
K Fosfato Potasico 0,5 28,676 57,352 0,0314 0,0471 0.0353
(KH2PO4)
Mg Sulfato de 0,4 9,86 24,65 0,0730 0,1095 0.0821
Magnesio
Heptahidratado
(MgSO4.7H2O)
P Fosfato Potasico 2 22,79 11,395 0,1580 0,2369 0.1777
(KH2PO4)
- Extracto de - - - - 1,8 1.35
Levadura
- Solucion de sales - - - - 10 ml/L 7.5
Condiciones de Cultivo :
pH inicial : 4,2
SHAKER
Temperatura: 35C
Velocidad de agitacin : 200 rpm
La fermentacin se realizara en un matraz de 1000 ml.

2.3. DETERMINACIN DE LA CONCENTRACIN CELULAR POR D.O.

El mtodo se basa en el aumento de la turbidez del medio, al incrementarse la
concentracin de microorganismos a medida que avanza el tiempo, esto puede
ser detectado fcilmente por espectrofotometra a 640nm. Para sta
determinacin es necesario que previamente se elabore una curva de calibrado,
para lo cual las concentraciones de microorganismos en el medio son
determinadas por peso seco de acuerdo al siguiente procedimiento:
Se toma una muestra de volumen conocido, y se centrifuga a 1200rpm.

Durante 20 minutos.
Se elimina el sobrenadante y se resuspende el centrifugado con agua
destilada.
Se vuelve a centrifugar en las mismas condiciones a fin de eliminar restos de
sustrato que pudiera alterar la determinacin.
Se elimina el sobrenadante, se redisueIve el precipitado y se seca en la estufa
a 80C hasta peso constante.
2.4. MONTAJE DE EQUIPO
El biorreactor antes de ser puesto en marcha se llenara con alcohol de 96 para

ser esterilizado.
El biorreactor ser puesto en marcha con un volumen inicial igual a 0.75 Lt para
llegar a un volumen final de 1.65 Lt y utilizando la siguiente formula:
V=V0+Ft
Se determin q el tiempo de fermentacin ser de 6 h para un flujo constante de

alimentacin de (3/20) Lt/h.
Se trabajara con 1,5 vvm y 150 rpm como ser un cultivo por lote alimentado
aireado no habr flujo de salida.

F(t)
SR(t)
Vf, Xf
VR = Vf - V0
V0, X0, S0
RESERVORIO BOMBA
BIORREACTOR
Para esta experiencia se utilizara un El sistema Liflus GX fermentacin es un

fermentador a escala de laboratorio, que est diseado para la fermentacin de
usos mltiples. Varios esquemas de fermentacin, tales como fedbatch e incluso
el cultivo de clulas animales pueden ser pertalined con la serie BioGM. El
monoltico monitor LCD se instala en el cuerpo de la torre controlador de
tamao medio y se puede visualizar todos los valores medidos y los parmetros
de control.

El biorreactor del laboratorio es un biorreactor marca boitron- liflus GX.

El biorreactor del laboratorio de la universidad nacional del santa posee las
siguientes partes:
Determinacin de PH (4.2)
Sensor de PH
Sensor de T
Sensor Oxgeno Disuelto.
Antiespumante
Condensador
Motor de rotor
Posee cuatro bombas peristaticos: acido- base- alimentacin-
espumante
2 Sensores de aire (1%)
Un vaso con capacidad de 6 lt
1. Sensor de
espuma
2. Condensador
3. Motor
4. Sensor de O.D
5. Sensor de PH
6. Sensor de T

2.5. PREPARACION DE SOLUCIONES DE SALES CONCENTRADAS (1L)
Pesar las correspondientes sales que conforman nuestra solucin de sales

concentradas para sepa de Saccharomyces Cerevisiae ATCC 4126 lo cual se
muestra en la gua de Prctica de Bioprocesos:
Fuente de Ca : 2,9 g CaCl2. 2H2O
Fuente de Fe : 0.6009 g FeSO4.7H2O
Fuente de Cu : 0,25 g CuSO4.5H2O
Fuente de Co : 0,24 g CoCl2.6H2O
Fuente de Zn : 0,4015 g ZnSO4.7H 2O
Fuente de Mg : 2,20 g MgSO4.7H2O
Fuente de B : 0.06 g H3BO3
Fuente de Cl : HCl conc.
Cada compuesto se pesara con cuidado.

Luego de pesar, cada compuesto lo diluiremos con agua destilada en un vaso de
precipitado adicionndole 100 ml de agua destilada con la ayuda de un agitador
de vidrio, la solucin se colocara en una fiola de 1 litro y se enrazara con agua
destilada hasta completar 1litro.
Una vez realizado el preparado se llevara a refrigeracin para su posterior
utilizacin.

III. MATERIALES INTRUMENTOS Y REACTIVOS

3.1. Medio de mantencin y resiembra del microorganismo.
Materiales y equipos
Balanza analtica
Olla a presin
Mechero Bunsen
Pipetas de 10 ml.
Aza bacteriolgica
Tubos de ensayo con tapas (8 tubos)
Varilla de vidrio
Matraz Erlenmeyer (250ml)
Guantes.
Esptula
Probeta graduada
Capachos de papel metalico
Reactivos
Muestra: Saccharomyces cerevisiae ATCC 4126
Sustrato: sacarosa
Agua destilada.
Extracto de levadura.
Peptona.
Agar.
3.2. Medio de activacin

Matraz de 250ml.
Matraz de 125 ml
Tubos de ensayo con tapa

Algodn
Gasa
Varilla de vidrio
Balanza analtica
Esptula
Agua destilada
Pinzas
Guantes
Shaker
Mechero Bunsen, trpode y rejilla.
Olla a presin
Pipetas
Capachos de papel metlico.
Reactivos
Componentes segn Tabla N 2
Alcohol
HCl cc.
3.3. Medio de fermentacin y proliferacin
Matraz de 1 L
Matraces de 125 ml
Varilla de vidrio
Capachos de papel metlico.
Balanza analtica
Reactivos
Segn la tabla N 3 y 5 de anexos
Agua destilada
Alcohol

IV. CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES:
Tabla N: Programacin y actividades a realizar
ACTIVIDADES FECHA
Recepcin de gua de practicas 02/11/10
Explicacin del procedimiento de 02/11/10
prctica.
Presentacin del preinforme de 07/11/10
practicas
Esterilizacin de materiales preparacin 09/11/10
de medios e inoculo para la curva de
calibrado
Toma de muestras para determinacin 16/11/10
de la curva de calibrado rpido
Preparacin de instrumentos y 22/11/10
esterilizacin de los mismos
Preparacin del medio de activacin
Inoculacin al medio de activacin 22/11/10
Preparacin del medio de fermentacin
Inicio de la cintica y toma de muestras 23/11/10

Discusin y conclusin de la experiencia 23 24/11/10
Imprevistos de la experiencia 25/11/10
Presentacin del informe final 30/11/10

V. BIBLIOGRAFIA
Jay, J. 1994. Microbiologa Moderna de los Alimentos. Zaragoza, Espaa: Acribia.
Doran M, P. Principios de Ingeniera de los Bioprocesos. Zaragoza, Espaa:
Instituto Politcnico Nacional. 2007. Laboratorio de Biorreactores: Manual de
Prcticas. Mxico. p. 48
http://www.microbiologia.com.ar/bacteriologia/fisiologia.php?Mostrar=quimic
os
http://www.laboratoriosmicrokit.com/docs/..%5Cmanual%5CKits-C.pdf.
http://www.monografias.com/trabajos15/lactobacilos/lactobacilos.shtml
QUINTEROS RAMIREZ Rodolfo, Ingeniera Bioqumica
www.sciencedirect.com


En la Gua de prcticas de curso Laboratorio de Bioprocesos se parte de las

siguientes condiciones:
Referencias de composicin de medios de mantencin, activacin y cultivo para

Saccharomyces Cerevisiae ATCC 4126
MEDIO NUTRIENTE CONCENTRACIN (GR/L)

Solido de mantencin Extracto de levadura 3
(YM solido) Peptona 5
Extracto de malta 3
Agar 20
Glucosa 10
Activacin Sacarosa 15
Extracto de levadura 3
Extracto de malta 5
Solucin de sales 5 ml/L
Fermentacin Sacarosa
Extracto de levadura 1.8
(NH4)2SO4
KH2PO4
MgSO4.7H2O
Solucin de sales 10 ml/L
pH 4,2
Condiciones de cultivo: temperatura 35C y velocidad de agitacin 200 rpm en el

agitador orbital (shaker)
COMPOSICIN DEL M.O:
COMPONENTES % DE COMPOSICION
C 45 %
N 9%
Mg 0.4 %
K 0.5 %
P 2.0 %
max = 0.37 h-1 en glucosa a 35 C ( Lane, M. y Morrissey, J. 2010

COMPOSICION DE NUTRIENTE (g) PARA UN MEDIO DE

MANTENCION PARA 50ml
Nutriente So (g/l) So (g/50ml)
Extracto de Levadura 3 0.15

Extracto de malta 3 0.15
Peptona 5 0.25
Agar 20 1
Glucosa 10 0.5
PREPARACIN DEL MEDIO DE ACTIVACIN
NUTRIENTE CONCENTRACIN (G/L) PESAR (G)
Sacarosa 15 1.125
Extracto de 3 0.225
Levadura
Extracto de Malta 5 0.375
Solucin de Sales 5 ml/L 0.375ml
Tabla N 2: Composicin de medio de Activacin (para 75 ml de solucin)
PREPARACIN DEL MEDIO DE FERMENTACION

Tabla N 3: Composicin Del Medio De Fermentacin I
Composicin del Medio de Cultivo de Saccharomyces cerevisiae- ATCC
4126 para un crecimiento en biomasa de 1.8 g/l. para un volumen de 750
ml

Elemento Nutriente % en % en Y x/s (g/g) S`0 (g/l) S0 (g/l) pesar

Celula nutriente (gr)
C Sacarosa 45 42,105 0,5614 3,2063 3,2063 2.4047
(C12H22O11)
N Sulfato de 9 21,21 2,3567 0,7638 1,1457 0.8593

Amonio
(NH4)2SO4
K Fosfato Potasico 0,5 28,676 57,352 0,0314 0,0471 0.0353
(KH2PO4)
Mg Sulfato de 0,4 9,86 24,65 0,0730 0,1095 0.0821
Magnesio
Heptahidratado
(MgSO4.7H2O)
P Fosfato Potasico 2 22,79 11,395 0,1580 0,2369 0.1777
(KH2PO4)
- Extracto de - - - - 1,8 1.35
Levadura
- Solucion de sales - - - - 10 ml/L 7.5
Condiciones de Cultivo :
pH inicial : 4,2
SHAKER
Temperatura: 35C
Velocidad de agitacin : 200 rpm
La fermentacin se realizara en un matraz de 1000 ml.
Fuente de carbono y energa: Sacarosa (C12 H22 O11), M = 342 g
YX/S = % de C en el nutriente / % de C en la clula.
% de C en el nutriente = 12(12) x 100 / 342 = 42.105 %
% de C en la clula = 45 %
YX/S = (42.105/45) x 0.6 (este factor por ser aireado)
YX/S = 0.936x 0.6 = 0.5614 g/g

1. CALCULO DE % NUTRIENTE:
Sacarosa: C12 H22 O11 136.1 100%

PM = 342
39.1 x
342 100%
12x12 x
x = 28.73
(NH4)2SO4:
x = 42.105 PM = 132
KH2PO4 132 100%

P:
28 x
PM = 136.1
x = 21.21
136.1 100%
31 x
MgSO47H2O
x = 22.777 PM = 246.3
KH2PO4 246.3 100%

K:
24.3 x
PM = 136.1
x = 9.866
Sacarosa:
2. CALCULO DE YX/S :
Yx/s=(42.105/45)x0.6
%nutriente Yx/s= 0.5614 g/g

Yx / s 0.6
%celula KH2PO4:

P:
Yx/s=(22.777/2) Yx/s= 57.46 g/g
Yx/s= 11.3885 g/g (NH4)2SO4:

Yx/s=(21.21/9)
Yx/s= 2.3567 g/g
MgSO47H2O
KH2PO4:
Yx/s=(9.866/0.4)
K:
Yx/s=(28.73/0.5)
Yx/s= 24.665 g/g
3. CALCULO DE S0
x x0
Yx / s
s0 s
Sacarosa: S0= (1.8/11.3885)x1.5
S0 = 0.2371 g/l
0.5614 = 1.8/S0
K2HPO4
S0= 1.8/0.5614 K:
S0 = 3.20627 g/l S0= (1.8/57.46)x1.5
S0 = 0.046989 g/l
KH2PO4
P:
(NH4)2SO4:

S0= (1.8/2.3567)x1.5 Extracto de levadura :

S0= 1.8
S0 = 1.14567 g/l
MgSO47H2O
Solucin de sales
S0= 10ml/L
S0= (1.8/24.665)x1.5
S0 = 0.10946 g/l
COMPOSICION DE SOLUCIONES DE SALES:
COMPONENTES CONCENTRACION
(gr/L)
CaCL2,2H2O 1.12
ZnSO4.7H2O 0.11
FeSO4.7H2O 0.06
CuSO4.5H2O 0.05
CoCL2,6H2O 0.01
MoO3 0.0005
MnCL2,6H2O 0.027
NaCl 0.28
DESARROLLO DE LA FERMENTACION (CAPACIDAD 2L)
MEDIO DE ALIMENTACIN: (para 900ml de solucin)
Elemento Nutriente SO(g/l) gr
C Sacarosa 6.59 5.931

Dato del biorreactor: F = 2.5ml/ min = (3/20)L/ h
X0 = 1.8 gr/L
S0 = 0
Sf = 3.77 gr/L
Condiciones iniciales dadas:
COMPOSICION ELEMENTAL DEL MICROORGANISMO
C 45% N 9% Mg 0.4% K 0.5% P 2.0%
Calculemos el Yx/s, teniendo a la fuente de Carborno (Sacarosa) como factor limitante, asi
tenemos:
%nutriente
Yx / s 0.6
%celula
Yx/s=(42.105/45)x0.6
Yx/s= 0.5614 g/g
As mismo, de acuerdo con las condiciones de cultivo:
umax=0.37h-1
T=35C
Volumen Total del fermentador= 2L
Tiempo total del CLA= 6h
Como sabemos, el CLA con aireacin necesita antes el microorganismo tener un

CULTIVO POR LOTE, en el cual haya comenzado su crecimiento exponencial, hasta
obtener hemos credo conveniente una concentracin de clulas de 2g/L.
Condiciones para el CULTIVO POR LOTE
Vo=750ml So=?
Xo=0.2g/L
Xf=2g/L

Supongamos que tras el inicio de la fermentacin, tenemos que encontrar el tiempo ptimo
donde se inicia la fase de crecimiento exponencial, para ello hemos querido conveniente
fijar una X=1.8g/L, suponiendo que se ha consumido todo el sustrato, entonces tendremos
que:
Sf=0 (inicio del CLA)
Entonces, So=?
Calculando el tiempo aproximado de fermentacin del Cultivo por Lote:
Condiciones para el CULTIVO POR LOTE ALIMENTADO
En la zona de crecimiento exponencial de masa celular
So=0 gr/L umax=0.37h-1
Xo=2gr/L Yx/s= 0.5614 g/g
Vo=750ml
BIOMASA INICIAL (XoVo)= (2g/l)(0.75L)=1.5gr
De acuerdo a la bibliografa revisada, hemos credo conveniente trabajar con un

volumen final de 1.65L (85% del volumen total), entonces se tendr:
Como el tiempo total del CLA = 6horas

Asimismo se debe cumplir, para un buen desarrollo del microorganismo:
OFERTA = DEMANDA
Entonces:
En la zona de crecimiento limitado de masa celular
Tendremos que:
XV= FSfYX/S t + SoVo + XoVo. ()
Como segn la bibliografa revisada, se tiene que Xf= 5g/L
Entonces en Vf= 1.65L, se tendr:
Asimismo, Sf=? y So=0gr/l
De la ecuacin (), reemplazamos los datos obtenidos:
XV= (3/20)*(6.59)*(0.5614)*(6) + 1.5
XV=4.82gr de biomasa
BIOMASA FINAL (XfVf)= (5g/l)(1.65L)=8.25gr
Condiciones de transicin
Como se tiene dos zonas de crecimiento, por teora sabemos que se debe cumplir:
Biomasa producida en la zona de crecimiento exponencial
= Biomasa producida en la zona de crecimiento limitado

Entonces debemos calcular el tiempo de transicin, a partir de:
(XV) crecimiento exponencial= (XV) crecimiento limitado
XoVoeut = 4.82
Siendo:
XoVo= 1.5gr
u=umax=0.37h-1
Entonces, despejamos:
Tiempo de transicin=3.156horas


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CULTIVO POR LOTE ALIMENTADO AIREADO

1.2. Objetivos Especficos:

II. METODOLOGA EXPERIMENTAL :

LABORATORIO DE BIOPROCESOS GRUPO B-4 Pgina 1

Condiciones del medio:

2.1. DISEO DEL MEDIO DE CULTIVO

El BA es particularmente til en procesos en los que el crecimiento celular

LABORATORIO DE BIOPROCESOS GRUPO B-4 Pgina 2

Donde F(t): caudal de alimentacin

Sr(t):concentracin de sustrato de la alimentacin

Vf: volumen final de trabajo

Vo: volumen al inicio de la alimentacin

Xo: concentracin de biomasa al inicio de la alimentacin

So: concentracin de sustrato limitante al inicio de la alimentacin

El cultivo BA se inicia a partir de un cultivo en batch, por lo que V o, Xo y So son las

Es posible elegir distintas condiciones de alimentacin, ya sea mediante el empleo

Puede representarse un cultivo en batch alimentado operando en las condiciones halladas.

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BATCH t = t0 BATCH ALIMENTADO t

Al obtener valores de Sr y F, se ha DISEADO una alimentacin para el cultivo en

2.2. PREPARACION DEL MEDIO:

Nutriente So (g/l) So (g/50ml)

Extracto de Levadura 3 0.15

Tabla N1: Composicin de medio slido de mantencin (para 50 ml de

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2.2.2. PREPARACIN DEL MEDIO DE ACTIVACIN

NUTRIENTE CONCENTRACIN (G/L) PESAR (G)

Solucin de Sales 5 ml/L 0.375ml

Tabla N 2: Composicin de medio de Activacin (para 75 ml de solucin)

Pesar los componentes descritos en la tabla N 2.

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2.2.3. PREPARACIN DEL MEDIO DE FERMENTACIN

Tabla N 3: Composicin Del Medio De Fermentacin I

Elemento Nutriente % en % en Y x/s (g/g) S`0 (g/l) S0 (g/l) pesar

N Sulfato de 9 21,21 2,3567 0,7638 1,1457 0.8593

La fermentacin se realizara en un matraz de 1000 ml.

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2.3. DETERMINACIN DE LA CONCENTRACIN CELULAR POR D.O.

Se toma una muestra de volumen conocido, y se centrifuga a 1200rpm.

2.4. MONTAJE DE EQUIPO

El biorreactor antes de ser puesto en marcha se llenara con alcohol de 96 para

Se determin q el tiempo de fermentacin ser de 6 h para un flujo constante de

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Para esta experiencia se utilizara un El sistema Liflus GX fermentacin es un

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El biorreactor del laboratorio es un biorreactor marca boitron- liflus GX.

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2.5. PREPARACION DE SOLUCIONES DE SALES CONCENTRADAS (1L)

Pesar las correspondientes sales que conforman nuestra solucin de sales

Fuente de Fe : 0.6009 g FeSO4.7H2O

Fuente de Cu : 0,25 g CuSO4.5H2O

Fuente de Co : 0,24 g CoCl2.6H2O

Fuente de Zn : 0,4015 g ZnSO4.7H 2O

Fuente de Mg : 2,20 g MgSO4.7H2O

Fuente de B : 0.06 g H3BO3

Fuente de Cl : HCl conc.

Cada compuesto se pesara con cuidado.

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III. MATERIALES INTRUMENTOS Y REACTIVOS

3.2. Medio de activacin

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