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UNIVERSIDAD ALAS PERUANAS

Facultad de Medicina Humana y Ciencias de la Salud


Escuela Acadmico Profesional de Tecnologa Mdica

ANTICUERPOS
ANTIPLAQUETARIOS

Presentado por:
Maribel Checca Escobedo

Arequipa 2017
Hematologa especial
Profesor: Christian Rodriguez Zamora
Abstract
La trombocitopenia inmunitaria primaria se caracteriza por trombocitopenia aislada con
cuentas plaquetarias menores de 100 x 10 9/L en ausencia de otras causas o enfermedades
que puedan estar asociadas con la trombocitopenia. Los anticuerpos antiplaquetarios
constituyen el principal mecanismo en la eliminacin acelerada de las plaquetas, debido a
que estn dirigidos contra protenas diversas que se encuentran en la superficie de las
plaquetas. La demostracin de anticuerpos antiplaquetarios es un auxiliar en el diagnstico
de trombocitopenia inmunitaria primaria y puede ser de utilidad en la evaluacin de la
respuesta al tratamiento con medicamentos inmunosupresores.
ndice
INTRODUCCIN........................................................................................................................................................ 4
HISTORIA.................................................................................................................................................................... 5
1. MTODOS PARA LA DETECCIN DE INMUNOGLOBULINAS UNIDAS A LAS PLAQUETAS...................6
1.1GRUPO I: MTODOS DIRECTOS........................................................................................................................7
1.2GRUPO II: MTODOS INDIRESTOS O COMPETITIVOS...............................................................................7
1.3GRUPO III: MEDICIN DE LAS INMUNOGLOBULINAS UNIDAS A PLAQUETAS EN
SOLUBILIZADO DE PLAQUETAS............................................................................................................................8
2. DETECCION DE ANTICUERPOS ANTIPLAQUETARIOS...................................................................................9
3. DETECCION DE ALOANTICUERPOS PLAQUETARIOS..................................................................................10
4.VALOR DIAGNOSTICO DE LA DETERMINACION DE ANTICUERPOS ANTIPLAQUETARIOS EN
PACIENTES CON TROMBOCITOPENIA..................................................................................................................12
5. ESTUDIO OBSERVACIONAL.................................................................................................................................14
OBJETIVO:...................................................................................................................................................................14
MATERIAL Y MTODO:.............................................................................................................................................14
METODOLOGA DE LA DETERMINACIN DE ANTICUERPOS ANTIPLAQUETARIOS............................14
MUESTREO Y MUESTRA.........................................................................................................................................14
SISTEMA ANALTICO................................................................................................................................................14
USO DEL SISTEMA ANALTICO.............................................................................................................................15
PROCESAMIENTO DE DATOS................................................................................................................................15
ANLISIS ESTADSTICO..........................................................................................................................................15
RESULTADOS..............................................................................................................................................................17
DISCUSIN..................................................................................................................................................................17
CONCLUSIONES........................................................................................................................................................17
BIBLIOGRAFA......................................................................................................................................................... 18

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Introduccin
La trombocitopenia inmunitaria primaria es un trastorno autoinmunitario adquirido, que se
caracteriza por trombocitopenia aislada, definida como cuenta plaquetaria en la sangre
perifrica menor a 100x109/L, sin tener causa aparente.

Se estima que la incidencia anual de la trombocitopenia inmunitaria primaria en adultos es


de 2 a 4 casos por cada 100,000 personas. Datos epidemiolgicos recientes sugieren que la
incidencia en adultos es prcticamente igual en uno y otro sexo, excepto entre los 30 y 60
aos de edad, cuando es ms prevalente en mujeres. En Mxico existen pocos datos
epidemiolgicos acerca de esta enfermedad, lo que afecta a la prctica del hematlogo en
los diversos mbitos de la especialidad. Con frecuencia, las recomendaciones de las guas
extranjeras no pueden aplicarse en Mxico debido a que se carece de recursos y por las
diferencias culturales, tanto de mdicos como de pacientes, costumbres arraigadas,
diferencias en el acceso a la informacin y en las condiciones de alimentacin y vivienda,
entre otros.
En ocasiones pueden hacerse modificaciones a los esquemas recomendados, que reducen
los gastos, pero sin perder la eficacia teraputica.

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Historia
Hasta 1950 el trmino prpura trombocitopenica idioptica era un indicativo de un
desorden clnico asociado a trombocitopenia y purpura de ideologa desconocida. Este
desorden se describa, como ahora, como agudo o transitorio en el nio, recurrente en
episodios de remisin o crnico en el caso del adulto y transitorio en nios recin nacidos.
Por estos acontecimientos observados se sugera la presencia de un factor humoral.
Adems se observ a pacientes con anemia hemoltica autoinmune con test de Coombs
positivo (presencia de anticuerpos antiglobulos rojos), periodos transitorios o recurrentes de
purpura trombocitopenica que sugeran que la purpura trombocitopenica inmunitaria (PTI)
era de etiologa autoinmune, esto es, que exista la posibilidad de que se produjeran
anticuerpos contra las plaquetas y que se unieran a ellas causando su destruccin.
En 1951 Harrigton establece que esta enfermedad es mediada por un factor humoral, por
anticuerpos. Se difundi as mismo por va intravenosa plasma de un paciente con purpura
trombocitopenica idioptica y rpidamente desarrollo una purpura trombocitopenica.
Posteriormente Shulman et al demostraron que el factor antiplaquetario tena las
caractersticas de una inmunoglobulina estable a 56C, con una actividad que poda ser
absorbida a plaquetas normales y eludida desde estas plaquetas. El material eludido dio un
peso molecular de 150000 dalton, S=7-7,5, similar o idntico a la IgG. Adems este factor
antiplaquetario poda ser transferido a travs de la placenta.
Actualmente se sabe que todas las subclases de IgG pueden unirse a plaquetas, como
tambin IgM, IgA y fracciones de complemento, C3c y C3d, cuando se miden por mtodo
sensibles. PAIgG, PAIgM, PAIgA, PAC3c, PAC3d es la terminologa usada para designar
anticuerpos o fracciones de complemento unidos o asociados a plaquetas. Dado que se ha
demostrado la naturaleza inmunolgica de la purpura trombocitopenica, se recomienda que
el trmino idioptico se cambie por autoinmune y que se designe como purpura
trombocitopenica autoinmune (PTAI).

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1. MTODOS PARA LA DETECCIN DE
INMUNOGLOBULINAS UNIDAS A LAS PLAQUETAS
Para la medicin de inmunoglobulinas o fracciones de complemento unidas a las plaquetas
es necesario separar las plaquetas desde la muestra de sangre por medio de una
centrifugacin diferencial, para lo cual se mezclan 1ml de EDTA al 5% en un suero fisiolgico
y 9ml de sangre venosa, que se dejan en reposo a temperatura ambiente durante 2h, y
luego se procede a centrifugar a 200g durante 30min, obtenindose as un plasma rico en
plaquetas (PRP) separado de eritrocitos y leucocitos. Despus las plaquetas se centrifugan
a 1.600g durante 10min y se lavan 4-6 veces con suero fisiolgico/EDTA al 0.5% con el fin
de evitar la agregacin plaquetaria y eliminar inmunoglobulinas inespecficas unidas a las
plaquetas, que pueden interferir en las siguientes etapas de las tcnicas de deteccin. Las
plaquetas as obtenidas pueden ser almacenadas a 4C (refrigeradas) en suero
fisiolgico/EDTA al 0.5% y acida sdica al 0.1%. Antes de su utilizacin, las plaquetas deben
ser elevadas en suero fisiolgico/EDTA al 0.5%.estos mtodos se pueden clasificar en tres
grupos.

1.1GRUPO I: MTODOS DIRECTOS


Se basa en la medicin directa de inmunoglobulina G unida a plaquetas (PAIgG) utilizando
una antiinmunoglobulina humana de origen animal o monoclonal (obtenida por la tecnologa
de hibridomas) marcada con indicadores como el isotiocianato de fluorescena (ITCF),I 125
radioactivo o enzima.
Para eliminar los anticuerpos marcados no unidos, las plaquetas se lavan varias veces y la
actividad residual se lee en un equipo apropiado al marcador utilizado: microscopio de
inmunofluorescencia, contador gamma o fotmetro de ELISA.

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1.2GRUPO II: MTODOS INDIRESTOS O COMPETITIVOS
Estos mtodos utilizan sistemas indicadores que permiten en forma indirecta cuantificar la
cantidad de PAIgG presentes en la membrana de las plaquetas.

La tabla II presenta un resumen de los mtodos indirectos ms representativos.


As; el mtodo 1 es un sistema de suero anti-F (ab ,)2 humano y un rango dioinmunoanalisis
(RIA) competitivo en el que, como sistema indicador, se usan anticuerpos contra fragmentos
F(ab,)2 de Ig humanas y fragmentos F(ab ,)2 marcados con I125. SI LAS plaquetas poseen Ig
unidas a su membrana, competirn con los fragmentos F(ab ,)2 - I125 para unirse a los
anticuerpos anti- F(ab,)2, con lo que aquellos quedaran libres en la parte fluida. Despus de
precipitar con sulfato amnico al 50% de saturacin, La radiactividad del sobrenadante
reflejara la cantidad de F(ab ,)2- I125 que ha quedado libre, la cual es directamente proporcional
a la cantidad de Ig unidas a las plaquetas.
Previamente se separa el sistema eritrocito de cordero-IgG humana; este sistema se pone
en contacto despus con las plaquetas en estudio y antisuero anti-IgG humana. El antisuero
compite por la unin entre eritrocitos-IgG Y PLAQUETAS-IgG Y, AL Aadir complemento, la
hemolisis producida se debe a la destruccin del complejo eritrocitico de cordero-IgG. Anti-
IgG, que ser tanto menor cuanto mayor sea la cantidad de PAIgG.
En el mtodo 4 se usa un nuevo sistema ampliamente conocido, l enzimoinmunoanalisis
(ELISA).
Aqu el suero humano normal o la inmunoglobulina humana marcada son absorbidos a
microplacas de ELISA o bolitas de poliestireno, y la cantidad de suero anti-IgG O suero
antifracciones de complemento que se une a la plaqueta es detectada utilizando un segundo
anticuerpo marcado con enzima.
El mtodo 5 es un radioinmunoanlisis en el que los anticuerpos anti IgG estn marcados
con I125radioactivo, lo que permite medir un contador gamma la cantidad de I 125 libre no unido
a plaquetas.
El mtodo 6 es el que utilizamos normalmente en nuestro laboratorio para medir
inmunoglobulinas o fracciones de complemento unidas a plaquetas.

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Con los mtodos indirectos aplicando el sistema de inhibicin competitiva se pueden usar
plaquetas intactas o solubilizadas de plaquetas.

1.3GRUPO III: MEDICIN DE LAS INMUNOGLOBULINAS


UNIDAS A PLAQUETAS EN SOLUBILIZADO DE
PLAQUETAS
En este grupo, antes de la determinacin de inmunoglobulinas o fracciones de complemento
unidas a plaquetas, las plaquetas son solubilizadas con detergentes no inicos, como tritn
X-100 o NP-40, son sonicadas y se procede por los mtodos anteriormente nombrados a la
determinacin de inmunoglobulinas o fracciones de complemento unidas a plaquetas,
expresando los resultados en fentogramos (fg) o molculas de anticuerpo o fracciones de
complemento por plaqueta.
En la tabla iii se presentan los mtodos utilizados para la medicin de inmunoglobulinas y
fracciones de complemento en solubilizado de plaquetas.
De estos mtodos nombrados, es posible utilizar el solubilizado de plaquetas en mtodos
competitivos, principalmente usando ELISA.
El mtodo 1 la cantidad de inmunoglobulinas o fracciones de complemento unidas a
plaquetas y presentes en el solubilizado se puede medir en forma directa por inmunodifucion
radial (IDR) con suero antihumano para inmunoglobulinas o fracciones de complemento
incorporadas a placas de agarosa al 1%, o placas de ELISA pre incubadas con suero
antihumana como en los mtodos 2y4 o por electroinmunodifusion en cohete (rochet) en el
mtodo 3.

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2. DETECCION DE ANTICUERPOS ANTIPLAQUETARIOS
Para detectar la presencia de anticuerpos plaquetarios sricos circulantes se incuba el suero
del paciente con plaquetas de dadores normales, y luego se mide la cantidad de anticuerpos
unidos a las plaquetas por alguno de los mtodos anteriormente descritos.
Actualmente se utiliza un mtodo de inmunofluorescencia indirecta descrito por Von dem
Borne et al (PFIST), quien utiliza plaquetas fijadas en p-formaldehido. Este mtodo fue
simplificado por Schneider y Schnaidt (PAIFT) y lo utilizamos en nuestro laboratorio
Para detectar anticuerpos antiplaquetarios fijadores de complemento se utiliza la reaccin de
fijacin de complemento con plaquetas. Esta reaccin mide la cantidad de complemento
consumido entre anticuerpos antiplaquetarios presentes en el suero del paciente y plaquetas
normales con ayuda de un sistema hemoltico (eritrocitos de cordero sensibilizado).con este
mtodo es posible tipificar plaquetas para aloantigenos cuando existen en el suero
aloanticuerpos que fijan complemento.
En ambos mtodos, inmunofluorescencia indirecta y reaccin de fijacin de complemento
con plaquetas, interfiere la presencia de anticuerpos anti-HLA.

3. DETECCION DE ALOANTICUERPOS PLAQUETARIOS


Existen adems un grupo muy importante de anticuerpos llamados aloanticuerpos, dirigidos
a aloantigenos ubicados en la membrana de las plaquetas y especficos de la especie
humana. Ellos desempean un papel importante en la purpura neonatal autoinmune (PNAI)
y purpura postransfucional (PPT).
La PNAI se caracteriza por el paso por va placentaria de plaquetas del nio a la circulacin
materna que induce la formacin de anticuerpos antiplaquetarios. Estos anticuerpos
atraviesan la placenta y producen en el nio un prpura trombocitopenica autoinmune
transitoria que aparece 6-10 das despus del nacimiento. Estos casos de PNAI la madre no
es portadora del aloantigeno, el nio lo adquiere por la herencia gentica del padre. El
aloantigeno involucrado corresponde en la mayora de casos a P1 A1(Zwa).
La PPT es un desorden agudo caracterizado por la presencia de trombocitopenia
aproximadamente una semana despus de la trasfusin de las plaquetas o sangre total a un
receptor carente de algn aloantigeno presente en las plaquetas transfundidas. Por lo tanto
se llega a la formacin de aloanticuerpos que pueden actuar como autoanticuerpos,
destruyendo las plaquetas del receptor o formando un complejo inmunitario entre su

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aloantigeno y su aloanticuerpo, que en presencia de complemento puede destruir las
plaquetas del receptor, este mecanismo no ha sido an aclarado del todo. Estos
aloantigenos se presentan en la tabla IV.

Se sabe que Back y Leck son serolgicamente idnticos, y estudios preliminares realizados
por Aster y Shibata indican que Yukb es idntico a Penay Penb a Yuka.
Utilizando anticuerpos monoclonales obtenidos por la tcnica de hibridoma para estructuras
de la membrana de la plaqueta, especficamente glucoprotenas de membrana, ha sido
posible no solamente caracterizar y detectar nuevos aloantigenos plaquetarios, sino tambin
conocer su distribucin en estudios de poblacin y estudiar la presencia de aloanticuerpos y
autoanticuerpos plaquetarios circulantes en pacientes con trombocitopenia de origen
inmunitario. Un ejemplo de estos mtodos es el Monoclonal Antibody Specific Immobilization
of Platelet Antigen (MAIPA) desarrollado por Kiefel et al. Brevemente, se dejan reaccionar las
plaquetas al estudio, un anticuerpo monoclonal dirigido a una glucoprotena especifica de la
membrana de la plaqueta, como GpIIb/IIIa y suero antiplaquetario de conocida
aloespecificidad durante 30 min a 37C. Las plaquetas son solubilizadas con NP-40 y luego
sonicadas. El sobrenadante obtenido, despus de la centrifugacin del solubilizado, es
incorporado a microplaca ELISA sensibilizada con suero de conejo antirraton.el anticuerpo
monoclonal unido a las plaquetas se fija a la fase solida de la placa ELISA, quedando libre el
receptor del aloantigeno. Si este reacciona con el aloantisuero es posible detectarlo con un
suero anti-IgG humano marcado con enzima. La ventaja d este mtodo es su simplicidad,
especificidad y que elimina la interferencia de anticuerpos anti-HLA.

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4.VALOR DIAGNOSTICO DE LA DETERMINACION DE
ANTICUERPOS ANTIPLAQUETARIOS EN PACIENTES
CON TROMBOCITOPENIA
la importancia de la deteccion de anticuerpos antiplaquetarios sericos circulantes o unidos a
plaquetas sirve para confirmar el carcter inmunitario de la trombocitopenia y para diferenciarla de
una purpura trombocitopenica no inmunitaria.el metodo debe ser especifico y sensible.su
especificidad viene dada por el hecho de no detectar anticuerpos antiplaquetarios en purpura
trombocitopenica no inmunologica,y la sensibilidad por el porcentaje de positividad de anticuerpos
antiplaquetarios en individuos con purpura trombocitopenica de origen inmunologico.

En la tabla v se muestran los resultados de especificidad y sensibilidad obtenidos por


diferentes autores para anticuerpos antiplaquetarios.
Para ser considerado autoinmune, el requisito fundamental de la purpura trombocitopenica
es tener inmunoglobulinas unidas a plaquetas o anticuerpos antiplaquetarios circulantes y
los otros criterios ya sealados anteriormente.
Es posible observar que la sensibilidad para detectar inmunoglobulinas unidas a plaquetas
varia en un rango de 59-100 % y la especificidad de los mtodos de deteccin varia en un
28-100 %.un aumento de las inmunoglobulinas unidas a plaquetas no est solo presente en
PTAI o trombocitopenia autoinmune secundaria, sino que puede tambin estar presente en
PTI de naturaleza no inmunitaria e incluso en pacientes con enfermedades no relacionadas y
con recuento de plaquetas normales en sangre. Mueller-Eckhardt et al, al estudiar un gran
nmero de pacientes encontr que el PAIgG era generalmente ms elevado en pacientes
trombocitopenicos. Los niveles de PSIgG mediados en plaquetas intactas en individuos
normales flucta entre 1y6 fg/plaqueta (4000-24000mol/plaqueta); utilizando solubilizado de
plaquetas flucta entre 1-16 fg/plaqueta (4000-64000 mol/plaqueta) y el PAIgG esta

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generalmente aumentado en cerca del 85% de los pacientes con PTAI 870-100%) con un
rango de 1-600fg/plaqueta. La cantidad de PAIgM flucta entre 0y4 fg/plaqueta en dadores
normales y esta elevada en un 70-90% de los pacientes con PTAI con valores que varan
entre <0.5 y 550fg/plaqueta. Para PAIgA el rango normal esta entre 0.0 y 0.7 fg/plaqueta
presente en un 80% de los pacientes con PTAI, variando entre <0.5 y 160 fg/plaqueta. La
cantidad de PAC3 varia, de acuerdo con los diferentes investigadores que la han medido,
entre 0y 12 fg plaqueta; esta diferencia se debera a la calidad de suero anti-C3 utilizando y
est presente en un amplio rango, entre 35 y 90% de los PTAI y con una fluctuacin entre
<0.05y 250fg/plaqueta. Finalmente PAC4 vara entre 0 y 0.22 fg/plaqueta y se ha encontrado
elevado en el 57% de los casos de PTAI con valores que fluctan entre <0.05 y6.0
fg/plaqueta. Un aumento de PAC3 y PAC4 casi siempre est asociado con una elevacin de
inmunoglobulinas unidas a plaquetas, y valores normales de estos cinco parmetros casi no
se encuentran en pacientes con PTAI (uno de 44 pacientes).

En la tabla VI se muestra una serie de enfermedades estudiadas por diferentes autores en


las que se ha demostrado la presencia de anticuerpos antiplaquetarios.
Sobre la trombocitopenia inmunitaria inducida por frmacos diremos que algunos das
despus de la ingesta del medicamento (quinina, quinidina, sulfonamidas, etc.) se produce
una fuerte trombocitopenia que es reversible cuando se suspende la ingesta del
medicamento. El suero de los pacientes con PTI dependiente de frmacos contiene
anticuerpos que reaccionan contra la plaqueta cuando se ingiere nuevamente el agente
causal. Se cree que el mecanismo de accin seria la formacin de un complejo anticuerpo-
frmaco que se unira al receptor en la plaqueta para el anticuerpo causando la destruccin
de la plaqueta. Para detectar la presencia de anticuerpos dependientes de frmacos se

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pueden utilizar mtodos anteriormente descritos, cualitativos (PFIST) o cuantitativos
(ELISA), y se debe conocer la anamnesis clnica de los frmacos ingeridos.

5. ESTUDIO OBSERVACIONAL
OBJETIVO:
Evaluar la utilidad de la determinacin de anticuerpos antiplaquetarios en el diagnstico de
trombocitopenia inmunitaria primaria.

MATERIAL Y MTODO:
Estudio observacional, transversal, retrospec-tivo,5-7 realizado en 10 aos y en una sola
institucin, en el que se analizaron los resultados de investigar los anticuerpos
antiplaquetarios mediante el mtodo de citometra de flujo, empleando anticuerpos
monoclonales contra glucoprotenas IIb y IIIa de las plaquetas y globulina antihumana
polivalente, marcada con isotiocianato de fluorescena, en un grupo de pacientes con
trombocitopenia.

METODOLOGA DE LA DETERMINACIN DE ANTICUERPOS ANTIPLAQUETARIOS


Los pacientes con trombocitopenia inmunitaria primaria, sea primaria o secundaria a
enfermedades autoinmunitarias multiorgnicas, cursan con destruccin perifrica de las
plaquetas como resultado de su sensibilizacin con anticuerpos.
En un porcentaje de estos pacientes es posible demostrar la existencia de inmunoglobulinas
(principalmente del isotipo IgG) unidas a la membrana plaquetaria; y en otros, adems, es
posible demostrar la existencia de anticuerpos libres en el suero, que son capaces de unirse
a las plaquetas provenientes de donadores sanos.
La demostracin de unos y otros es un auxiliar en el diagnstico de prpura de origen
inmunolgico y puede ser de utilidad en la evaluacin de la respuesta al tratamiento con
medicamentos inmunosupresores.
Los aparatos usados en este estudio fueron Gallios de Beckman-Coulter y un instrumento de
lisis y fijacin Coulter TQ-Prep.

MUESTREO Y MUESTRA
Sangre anticoagulada (heparina) del paciente y de un sujeto sano y suero del paciente.
Las mues-tras deben analizarse en las 72 horas siguientes a su obtencin. Una vez
teidas y fijadas, las muestras pueden analizarse en las siguientes 24 horas. Las
muestras no podrn ser procesadas en caso de que su fecha de obtencin supere las 72
horas y las clulas viables son escasas y si tienen signos importantes de deterioro, como
hemlisis, existencia de cogulos o viscosidad.

SISTEMA ANALTICO
Anticuerpos contra las glucoprotenas IIb y IIIa de las plaquetas y globulina antihumana
polivalente marcada con isotiocianato de fluorescena.

USO DEL SISTEMA ANALTICO


Disponer de cuatro tubos de polipropileno, de 12x75 mm, marcados como: a) control
positivo, b) control negativo, c) plaquetas autlogas y d) plaquetas alognicas. Despus,

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colocar 50 L de sangre control 1en los tubos a, b y d; colocar 50 L de sangre del
paciente en el tubo c; agregar 20 L de suero del paciente a los tubos c y d; agregar el
anticuerpo monoclonal CD41 acoplado a ficoeritrina a todos los tubos; aadir el
anticuerpo monoclonal CD61 acoplado a isotiocianato de fluorescena al tubo a; agregar
5 L de globulina antihumana polivalente marcada con isotiocianato de fluorescena a los
tubos b, c y d. Incubar como mnimo 30 minutos a temperatura ambiente; lisar y fijar de
manera automtica mediante el reactivo TQ-prep; pasar las muestras en el citmetro de
flujo, programado para la deteccin de dispersin frontal y dispersin lateral, log de
fluorescencia a 525 nm y log de fluorescencia a 575 nm.

PROCESAMIENTO DE DATOS
Mediante la construccin de un histograma biparamtrico de log FL2 y dispersin lateral hay
que definir una ventana electrnica que circunscriba el anlisis de fluorescencia a las
plaquetas.
Mediante la construccin de un histograma uni-paramtrico de log fluorescencia 525 nm,
debe cuantificarse el porcentaje de clulas que tienen en su membrana isotiocianato de
fluorescena.
En el tubo a, ms de 90% de las clulas deben ser positivas, pues estn teidas con el
anticuerpo monoclonal CD61, que se expresa en todas las plaquetas. Si el porcentaje de
clulas positivas es menor a 90%, debe corregirse la posicin de la ventana electrnica de
manera ptima, analizar el tubo b, que deber contener menos de 2% de eventos positivos,
y se utilizar como control isotpico para colocar la posicin del cursor lineal.
En los tubos c y d se cuantificar el porcentaje de plaquetas positivas que reflejan la
existencia de anticuerpos autlogos y heterlogos, respectiva-mente. Se considera que el
resultado es positivo cuando exista ms de 25% de eventos positivos (por arriba del tubo b).
Mediante la revisin del expediente clnico se obtuvieron 64 pacientes con trombocitopenia
inmunitaria primaria, de los que 17 eran hombres, estudiados y tratados por uno de nosotros
(GJRA).El criterio de inclusin fue: pacientes con determinacin de anticuerpos
antiplaquetarios con diagnstico establecido de trombocitopenia inmunitaria primaria; los
criterios de exclusin fueron: pacientes con determinacin de anticuerpos anti-plaquetarios
sin trombocitopenia, pacientes con determinacin de anticuerpos antiplaquetarios con
diagnstico de trombocitopenia no inmunitaria y pacientes con determinacin de anticuerpos
anti-plaquetarios con diagnstico de trombocitopenia inmunitaria primaria junto con otra
enfermedad.

ANLISIS ESTADSTICO
En el anlisis estadstico se utiliz el programa Minitab 17, usando los siguientes datos:
determinacin de anticuerpos antiplaquetarios: 2,549 en total; de stos, 75 fueron positivos
(slo dos con trombocitopenia inmunitaria primaria y 62 con otro diagnstico).
En los 2,474 casos en que las pruebas fueron negativas, hubo 62 casos de trombocitopenia
inmunitaria primaria y el resto (2,412) sin esta afeccin.

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Las dos variables que se consideraron son categricas para probar la hiptesis de si existe
asociacin entre los anticuerpos antiplaquetarios y la trombocitopenia inmunitaria primaria;
se us en primera instancia la prueba de c2para independencia de variables. Se escogi un
nivel de significacin (a=0.05).

En este caso, como una de las frecuencias esperadas en la prueba de c 2era menor de
cinco se us la prueba exacta de Fisher.

Se contrastan dos hiptesis: la nula (Ho: no hay asociacin entre los anticuerpos
antiplaquetarios y la trombocitopenia inmunitaria primaria) contra la alternativa (H1: s

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hay asociacin entre los anticuerpos antiplaquetarios y la trombocitopenia inmunitaria
primaria).
Como el valor de p obtenido en la prueba exacta de Fisher (0.712682) es mayor que el
valor de a, entonces se acepta la hiptesis nula, que plantea la no asociacin entre los
anticuerpos antiplaquetarios y la trombocitopenia inmunitaria primaria.

RESULTADOS
Se obtuvieron 2,549 determinaciones para investigar anticuerpos antiplaquetarios en 1,650
mujeres y 899 hombres. De ellos, slo 75 pruebas fueron positivas (dos en pacientes con
trombocitopenia inmunitaria primaria y 73 en pacientes con trombocitopenia por otras
causas).
En un grupo de 64 pacientes con trombocitopenia inmunitaria primaria, los anticuerpos
antiplaquetarios se reportaron slo en 2 (3%).

DISCUSIN
La aplicacin de la citometra de flujo en el estudio de las plaquetas ofrece grandes ventajas
sobre otros mtodos de anlisis, porque es el nico hasta el momento que puede medir la
extensin de la activacin de plaquetas individuales y detectar subpoblaciones de plaquetas.
Las plaquetas pueden analizarse en su medio fisiolgico, incluyendo eritrocitos y leucocitos,
mismos que afectan la activacin plaquetaria.
La manipulacin mnima de las muestras evita interferencias por activacin in vitro y reduce
las posibles prdidas de subpoblaciones de plaquetas.
Adems, es posible determinar el estado de activacin de las plaquetas circulantes y las
modificaciones especficas que ocurren en la superficie celular como consecuencia de este
proceso y puede detectarse incluso 1% del total de plaquetas en la muestra de sangre; se
necesitan pequeas alcuotas de sangre (aproximadamente 2 L) para evaluarlas. No
obstante, la citometra de flujo tiene limitaciones: se necesita un operador especializado,
porque la preparacin de las muestras es complicada, aunque los nuevos sistemas
automatizados y el uso de programas de computacin ms sencillos simplifican el ensayo.
Pero estos equipos son costosos, por lo que no estn disponibles en la mayor parte de los
centros hospitalarios; adems, las muestras de sangre deben procesarse en un intervalo de
45 minutos despus de la extraccin para evitar una posible activacin ex vivo.

CONCLUSIONES
Los hallazgos de este estudio indicaron poca utilidad de la prueba de investigacin de
anti-cuerpos antiplaquetarios, mediante el mtodo descrito, en el diagnstico de
trombocitopenia inmunitaria primaria; por ello, parece intil seguir realizndola otras
conclusiones el avance de los mtodos de diagnstico inmunolgico para la
deteccin, cuantificacin e identificacin de anticuerpos plaquetarios sricos o
asociados a plaquetas ha permitido definir con gran seguridad y precisin la
trombocitopenia autoinmune.
El uso de nuevos mtodos aplicativos a la serologa de plaquetas ha llevado no solo
a cuantificar las inmunoglobulinas y/o fracciones de complemento asociadas a
plaquetas en el PTAI, sino tambin a conocer los diferentes sistemas antignicos
plaquetarios presentes en las plaquetas y a la posibilidad de detectar nuevos
sistemas en el futuro.

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Bibliografa

1. Artculo original Rev Hematol Mex. 2016 jul;17(3):169-174.


2. http://www.inmunologia.org/Upload/Articles/2/0/200.pdf
3. http://www.binasss.sa.cr/revistas/amc/v39n1/art1.pdf
4. http://www.scielo.org.co/pdf/bio/v31n1/v31n1a06.pdf
5. https://worldwidescience.org/topicpages/l/los+anticuerpos+antiplaquetarios.html
6. http://scielo.isciii.es/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0212-71992005001200002

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