CULTIVO DE SECRECION VAGINAL

Paute Mara de los ngeles; Pinzn Tania; Salinas Yelitza & Tuqueres Danilo
Bioqumica y Farmacia, Universidad Tcnica Particular de Loja San Cayetano Alto,
Calle Pars, Loja, Ecuador

La vaginosis bacteriana (VB) es una condicin caracterizada por el reemplazo de los

lactobacilos vaginales con otras bacterias, sobre todo microorganismos anaerbicos, tales
como Gardnerella vaginalis y Prevotella, Peptostreptococcus y Bacteroides spp. Se
identifica con una prevalencia que oscila entre el 10 - 40%%, de acuerdo a diferentes
estudios, y se considera la infeccin vaginal ms frecuente . Cabe mencionar que un
nmero importante de investigadores considera a la vaginosis bacteriana como un
complejo desequilibrio microbiano, no como una infeccin.La vaginosis bacteriana afecta
a millones de mujeres en edad reproductiva. Est asociada a diversos problemas, tales
como parto prematuro, enfermedad inflamatoria plvica y endometriris posparto y
postaborto, as como a un aumento en la susceptibilidad a diversos patgenos causantes
de infecciones de transmisin sexual (ITS): Neisseria gonorrhoeae, Trichomonas
vaginalis, Chlamydia trachomatis, virus del papiloma humano y virus de la
inmunodeficiencia humana, y otras infecciones como candidiasis (Peas, 2014) .

Varias conductas de riesgo asociadas a infecciones de transmisin sexual coinciden en la

vaginosis bacteriana. Sin embargo, las ITS tpicas involucran habitualmente a un solo
agente etiolgico, con rutas claras de infeccin, en tanto que la VB involucra a mltiples
microorganismos, la mayora de los cuales puede detectarse, en bajas cantidades, en
mujeres sin vaginosis. (Marrazzo. 2011).
El KOH es un compuesto qumico inorgnico de frmula KOH, es una base fuerte de uso
comn. En el laboratorio clnico su uso es importante puesto que es un procedimiento
auxiliar para diagnstico de infecciones micoticas Es el medio de montaje de las muestras
clnicas ms universalmente aceptado. El KOH disuelve rpidamente los elementos
celulares, para observar los hongos (protegidos por la pared celular). El efecto clarificador
del KOH puede demorar desde 10 min hasta horas, en el caso de las muestras de uas, y
puede reducirse calentando ligeramente la preparacin. Se suelen utilizar dos
concentraciones, una ms fuerte del 20-30% para uas, y del 10% al 15% para el resto de
muestras. Los inconvenientes de las soluciones de KOH son, entre otros, que su reaccin
con el material clnico puede crear unos artefactos que pueden parecerse a los hongos,
con lo que se hace necesaria cierta experiencia en el observador (Arenas, 2011).
El agar chocolate se obtiene calentando la sangre antes de adicionarla al medio base. Por
esta razn el agar chocolate contiene hemoglobina, que aporta al medio un importante
elemento para el crecimiento: el factor X o hemina termoestable. El agar chocolate es un
medio destinado principalmente al aislamiento de Neisserias y Haemophilus, pero en l
pueden crecer muchos otros microorganismos exigentes El Agar chocolate lleva
Hemoglobina que aporta al medio un importante elemento para el crecimiento: el factor
X o Hemina termoestable (Castro, 1967).
PROCEDIMIENTO
DA 1:
1. Obtencin de la muestra: La paciente no debe estar recibiendo tratamiento
antimicrobiano. No practicarse duchas vaginales, ni tener relaciones sexuales 24 horas
antes de la obtencin de la muestra. As mismo, no debe baarse el da de la recoleccin
de la misma. Para la obtencin de la muestra vaginal y/o cervical, se debe emplear un
espculo. Se coloca a la paciente en posicin ginecolgica; con guantes estriles, una
mano separa los labios mayores de la paciente y se le pide que puje, con el fin de lograr
la apertura del introito vaginal. Con la otra mano se introduce suavemente un hisopo
estril hasta el tercio superior de la vagina, cuidando de no contaminarlo con la piel de la
regin genital.

2. Realizamos un examen en fresco y Gram con la muestra clnica, y evaluamos de

acuerdo a los criterios que se presentan en la Tabla 2 de la prctica impartida por el
docente.

3. Procedimos a inocular y estriar sobre la superficie de los siguientes medios de cultivo:

a. Agar MacConkey (bacilos gram negativos).
b. Agar Sabouraud (levaduras).
c. Agar Chocolate (Haemophylus, Neisseria spp. y Gardnerella vaginalis).
d. Agar sangre de humano al 5%(Streptococcus agalactiae).

4. Incubamos a 35C 2C, de 18 a 24 h; el agar sangre y el agar chocolate son puestos

en una atmsfera parcial de CO2, donde la concentracin de oxgeno es del orden del
10%, para el aislamiento de microorganismos anaerobios.

DA 2:

5. Realizamos Tincin de Gram de lo sembrado en el agar chocolate para confirmar lo

observado en el da 1 (cocos bacilos).

6. Realizamos caracterizacin bioqumica segn corresponda al grupo bacteriano.

RESULTADOS
Los resultados que llegamos a obtener de dicho prctica guindonos en las indicaciones
correspondientes son las siguientes:
EXAMEN DIRECTO

Negativo

Figura 1 Vista directamente al microscopio con el lente de 40x.en lo que no se observ

nada que pueda ayudar a un diagnstico.
TINCION GRAM

Coco bacilos
Gram+

Figura 2 Tincin Gram se observan coco bacilos

PH DE MUESTRA

Ph 6.7

Figura 3 Determinacin del Ph de muestra.

 CULTIVO AGAR MACCONKEY

Crecimiento
negativo

Figura 4 Cultivo en agar macconkey. Sin crecimiento bacteriano.

CULTIVO AGAR SANGRE

Crecimiento
negativo

Figura 5 Cultivo en agar sangre en el que no se ve ningn crecimiento bacteriano.

CULTIVO EN AGAR CHOCOLATE

Colonias redondas
brillantes y lisas

Figura6 Crecimiento de escasas colonias bacterianas.

TINCION GRAM

Cocos Gram +

Figura7 Tincin de colonia de agar chocolate en la que se observa cocos.

DISCUSIN:
Los resultados obtenidos en nuestra practica fueron los siguientes; para el examen en
fresco cocobacilos que los podemos observar en la fig1, a su vez se sembr la muestra de
secrecin vaginal en los diferentes agares como lo son ( sangre, chocolate en el cual estos
dos agares iniciales se los someti a Incubar en un temperatura de 35C 2C, de 18 a
24 h; puestos en una atmsfera parcial de CO2, donde la concentracin de oxgeno es del
orden del 10%, para el aislamiento de microorganismos anaerobios, a su vez se sembr
en el agar glucosado de Sabouraud, MacConkey , en el cual se puede observar en la fig
2 en los cuales no hubo ningn crecimiento, el nico el cual si presento un crecimiento
disminuido fue el agar chocolate del cual se realiz un frotis para tincin Gram en donde
al llevar al microscopio nos dio cocobacilos pudiendo as confirmar que se trata de
cocobacilos.
De acuerdo a la prctica realiza sobre el cultivo de secrecin vaginal podemos concluir
que mediante el protocolo seguido a cabalidad la muestra obtenida es debido a un examen
rutinario que enva un doctor para analizar de porque la secrecin , descartar alguna
infeccin o enfermedad asociado al aparato reproductor femenino; a su vez existen tres
parmetros para determinar o confirmar un diagnostico como lo son el aspecto del flujo,
el Ph del flujo, clulas, tincin Gram, ya que tratndose de un examen rutinario no
podemos llegar a concluir con exactitud todas las pruebas en los diferentes agares
glucosado de Sabouraud, MacConkey; ya que no hubo un crecimiento en ninguno de los
agares mencionados, por lo tanto no podemos determinar con exactitud que se trate de
una muestra de una mujer embarazada, control de Papanicolaou, ni en qu condiciones
fueran tomadas, a su vez si la paciente sigui con las indicaciones para la toma de
muestras o si fueron muestras recojidas despus de iniciar un tratamiento antimicrobiano,
ya que las muestras fueras recojidas por gente especializada impartiendo as una muestra
para la el estudio y la realizacin de la prctica, podemos decir que tambin la falta de
informacin al paciente para la toma de muestras puede influenciar mucho en un
diagnostico rutinario, a su vez el uso de jabones ntimos puede alterar el pH vaginal ,
como tambin un volumen escaso de la muestra. Koneman E., et al (2008)
Segn Olivas E. (2004) nos menciona que los medios deben incubarse a 35- 37C hasta
por tres das cuando no ha habido crecimiento aparente en los primeros dos das,
preferentemente en una atmsfera con 5-10% C02, podemos llegar a decir que pudo haber
sido algn factor para que no haya habido un buen crecimiento en el agar chocolate.

CONCLUSIONES
Concluimos que el KOH es el mtodo de eleccin directo para la identificacin
de estructuras fngicas, pero que el mtodo gold estndar sigue siendo el
cultivo.
Determinamos que el examen directo de KOH este sirve para el estudio de micosis
de cualquier origen, segn su localizacin.
El moco secretado por la vagina est compuesto principalmente por
glucoprotenas, mucopolisacridos, electrolitos y agua. La mucosa de la vagina,
adems de proveer los nutrimentos necesarios para la microbiota vaginal, tambin
contiene receptores para la microbiota.
Se estableci que la muestra adquirida era de un control rutinario que no tenia
especificidad del para el diagnstico de Gardenerella vaginalis y solo fue posible
su uso para la diferenciacin de bacterias Gram negativas de las bacterias Gram
positivas
RECOMENDACIONES
Cuando se use el KOH sin ningn mtodo modificado, se deber contar con un
personal altamente calificado para la observacin en el microscopio y con mucha
experiencia.

BIBLIOGRAFIA

Peas Espinar C, Navarro Snchez-Ortiz MD, Olmo Montes FJ, Muniin Ezcurra
MA, Surez Barrenechea AI. Protocolo diagnstico y teraputico de las vaginitis
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Medicine - Programa de Formacin Mdica Continuada Acreditado, March
2014;11(51):30293032. Enfermedades infecciosas (III): Infecciones por
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Jeanne M. Marrazzo. Interpreting the epidemiology and natural history of
bacterial vaginosis: Are we still confused? Anaerobe, Aug 2011;17(4): 186-190.
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Roberto Arenas, Cuarta Edicin de Micologa Mdica Ilustrada, Editorial
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Castro G,A., 1967, "Medios de Cultivo y reactivos de diagnstico, tomo 1"
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ATLAS EN COLOR.-6 ed.- Buenos Aires: Mdica Panamericana.