Simposio de Metrologa 25 al 27 de Octubre de 2006

PRIMER PRUEBA INTERLABORATORIO NACIONAL PARA LA

EVALUACIN DE TAMAO DE PARTICULA EN EL ORDEN DE
NANOMETROS UTILIZANDO EL MICROSCOPIO ELECTRONICO DE
BARRIDO (MEB)

J. Jurez, F. Martnez, F. Rosas

Centro Nacional de Metrologa - Divisin Cermicos
km 4,5 Carretera a Los Cus Municipio El Marqus, A.P. 1-100 Quertaro, Mxico
Tel. Fax: 211-05-00, jjuarez@cenam.mx

RESUMEN

En este trabajo, se presentan los resultados obtenidos en la prueba interlaboratorio organizada por la
Divisin de Materiales Cermicos para evaluar el dimetro promedio de partcula en el orden de nanmetros
de esferas de poliestireno. Se mencionan los puntos que deben ser cubiertos para la organizacin de tal tipo
de pruebas y lo ms importante, la utilizacin de un material de referencia caracterizado por medio de una
microsonda analtica (MA), un microscopio electrnico de barrido (MEB) y un equipo de dispersin lser.
Dicha prueba se dirigi a todos los laboratorios del pas. El criterio de evaluacin utilizado se basa en el error
cuadrtico medio (ECM), el cual es una estimacin de la incertidumbre del laboratorio para cada medida
reportada; ste involucra la variabilidad de los resultados y el sesgo del promedio con respecto al valor de
referencia. El ECM proporciona una indicacin del estado real de las mediciones, suponiendo que una
medicin perfecta tiene sesgo = 0 y desviacin estndar = 0.
Con estal prueba de interlaboratorio se cumple con uno de los objetivos principales del CENAM, el cual es el
desarrollo de MRC y diseminacin de sus exactitudes; por otra parte, se intenta conocer la capacidad de
medicin de los laboratorios participantes en su desempeo en mediciones de alta complejidad, demandada
cada vez y con mayor intensidad, debido al avance ininterrumpido de la tecnologa en este ramo, se alcance
y se demuestre en las pruebas a las que voluntariamente se someten, demostrando que se pueden
desarrollar y efectuar mediciones cuantitativas micro dimensionales de la ms alta exactitud en el pas.

1. INTRODUCCIN (emulsin de poliestireno) de acuerdo a condiciones

La microcopia electrnica de barrido en Mxico ha
crecido considerablemente en los ltimos aos. La
informacin recopilada con el MEB es de gran
ayuda, ya que la tcnica tiene una resolucin
prctica de 4 nm a 100 nm (dependiendo del tipo de
muestra a analizar). Por otra parte y no limitativa, el
MEB nos ayuda a caracterizar la morfologa
(tamao, forma y distribucin) de las fases
presentes en casi cualquier tipo de material (acero,
nuevos materiales cermicos, compuestos
inorgnicos, muestras biolgicas, etc.). Los
laboratorios que realizan estas observaciones
necesitan evaluar de manera objetiva la calidad de
sus mediciones. La participacin en pruebas
interlaboratorio es una herramienta de gran utilidad
para este fin.
El presente ejercicio consisti en evaluar a cada
laboratorio mediante la determinacin del dimetro
promedio de partcula de un mismo material
establecidas (protocolo o mtodo de prueba). Dicha
prueba se dirigi a todos los laboratorios del pas. El
nmero de laboratorios inscritos fue de diez. Los
resultados permitirn a cada laboratorio evaluar su
desempeo y llevar a cabo mejoras en sus
procedimientos de medicin. El criterio de
evaluacin utilizado se basa en el error cuadrtico
medio ECM, mediante la siguiente ecuacin [1]:
2 2
s b
ECMrel = + (1)
s = desviacin estndar
b = sesgo
= incertidumbre estndar material de referencia
Y el sesgo (b) se determina de la siguiente forma:
sesgo = valor de referencia valor obtenido

1
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La caracterizacin de partculas nanomtricas va
tomando mayor relevancia en los procesos
industriales. A manera de ejemplo, en la industria
minera-metalrgica conforme los procesos son
mejorados (refinados) y las partculas disminuyen
en tamao, se requieren tcnicas que nos permitan
caracterizar estos finos con el propsito de entender
los efectos y la eficiencia de un proceso en
particular. Para este caso, la informacin recopilada
con el MEB es de gran ayuda por la alta resolucin
que se alcanza [2, 6].
De igual manera en el campo del anlisis ambiental,
la caracterizacin de partculas suspendidas en aire
inferior a 2,5 m se vuelve cada vez ms crucial, de
hecho recientes estudios demuestran que conforme
el tamao de la partcula es menor, el dao al
sistema respiratorio es mayor. As tambin, estas
partculas tienen un gran potencial para acelerar
reacciones de ozonlosis [3, 4, 5].
En fin, recientemente y ante la necesidad de evaluar
una caracterstica fsica esencial del cemento como
lo es la distribucin de tamao de partcula (DTP) se
han realizado pruebas round robin con el fin de
identificar y proponer mtodos normalizados, se
conoce que la DTP del cemento esta muy
relacionada con sus propiedades por lo tanto,
dichos estudios han incluido los mtodos de
difraccin lser, sensor elctrico (Coulter), mallas y
MEB [6].
Frecuentemente, mediciones realizadas en
materiales presuntamente idnticos, bajo
condiciones similares, no proporcionan resultados
idnticos. Esto se atribuye a los errores aleatorios
que son inherentes en cualquier proceso de
medicin y que solo pueden ser controlados
parcialmente; sin embargo, otros factores que
tambin contribuyen a la variabilidad son los
llamados errores sistemticos, los cuales pueden
tener diversas causas, por ejemplo:
a) El operador.
b) Estabilidad del equipo utilizado.
c) Calibracin de la escala de amplificacin.
d) Condiciones ambientales (temperatura,
humedad, etc.).
e) Malas prcticas de laboratorio.
En cada laboratorio, estos factores influyen en
forma diferente.
Las pruebas interlaboratorio permiten, entre otras
ventajas:
2
25 al 27 de Octubre de 2006
1. Evaluar el desempeo de los laboratorios
participantes para realizar pruebas especficas
de medicin y en caso de programas constantes
de pruebas, para monitorear su desempeo.
2. Identificar problemas tcnicos en los
laboratorios e iniciar acciones correctivas.
3. Comparar la variabilidad de los resultados del
laboratorio contra la obtenida por otros
participantes, motivando de esta manera,
programas de mejora continua.
4. Establecer la efectividad y comparabilidad entre
nuevos mtodos de medicin.
5. Proporcionar una confianza adicional a los
clientes de los laboratorios.
La participacin en este tipo de pruebas es una
alternativa eficaz que provee la evidencia necesaria
de la calidad de los resultados emitidos por el
laboratorio.
Actualmente, esta evidencia es un requisito
indispensable para la acreditacin de acuerdo con la
norma NMX-EC-17025-IMNC-2000, en su seccin
5.9 Aseguramiento de la calidad de los resultados
de calibracin y prueba.
Este ejercicio se ha llevado a cabo de acuerdo a las
recomendaciones de la siguiente norma
internacional:
ISO/IEC Guide 43-1-1997 Proficiency testing by
interlaboratory comparisons.
Part 1: Development and operation of
proficiency testing schemes.
Asimismo, se cont con las recomendaciones dadas
en las siguientes normas ASTM:
ASTM E 691-99. Standard Practice for
Conducting an Interlaboratory Study to
Determine the Precision of a Test Method.
ASTM E 1301-95. Proficiency Testing
Programs by Interlaboratory Comparisons.
2. DESARROLLO
El programa general se dividi en cuatro etapas:
1) Preparacin del material.
2) Distribucin de las muestras.
3) Anlisis del tamao de partcula en cada
laboratorio.
4) Informe de resultados.
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Preparacin y caracterizacin de la muestra

La emulsin original empleada para el estudio es de

un material polimrico, preparada por una empresa
mexicana. Se utiliz la tcnica de espectroscopia de
infrarrojo con transformada de Fourier (FT-IR) para
efectuar la caracterizacin qumica cualitativa del
material.

La morfologa del material de la muestra se observ

por MEB las imgenes se obtuvieron con electrones
secundarios, como la que se muestra en la figura 1,
la cual consiste de esferas de poliestireno.

El lote de material se prepar al 1% en volumen de

la emulsin original. El lote consisti en el llenado
de 100 botellas, y mediante un muestreo aleatorio
estratificado; para llevar a cabo el estudio de
homogeneidad se tomaron solo diez botellas
identificadas con los nmeros 1, 18, 23, 37, 48, 51,
64, 76, 84 y 100.
Se utiliz el equipo Mastersizer X para llevar a cabo
el estudio de homogeneidad, dicho equipo se
encuentra dentro de un programa de mantenimiento
anual que tiene incluida la verificacin de operacin
del mismo, utilizando microesferas de polmero
(proveedor Duke Scientific Corporation) con
dimetro medio de 1 m, 8,9 m y 39,6 m. As
mismo, la secuencia de medicin incluy la
medicin de la distribucin de tamao de partcula
de la retcula de verificacin LV-40.0-1.2-0.025 y del
dimetro medio del material de referencia SRM
1690 (esferas de poliestireno con dimetro nominal
de 1 m). Se realizaron mediciones de las muestras
por triplicado durante tres das. El resultado del
estudio de homogeneidad realizado con el mtodo
basado en la difraccin lser, indica que el material
es homogneo (la prueba estadstica aplicada a los
resultados de medicin indic que no hay una
diferencia significativa dentro y entre las botellas).
Se realizaron mediciones del dimetro promedio de
las esferas de poliestireno por el mtodo basado en
microscopa. Una pequea gota de la emulsin se
coloc sobre la cinta de grafito, se sec a las
condiciones ambientales de laboratorio y
posteriormente se recubri con una fina capa de
oro-paladio (se montaron diferentes gotas en 10
muestras aleatoriamente estratificadas).
Figura 1. Imagen obtenida con electrones
secundarios de la muestra utilizada en la prueba,
10000X.
Las imgenes de la muestra se adquirieron en la
supersonda JXA-8200 bajo las condiciones de
10000X de amplificacin, voltaje de aceleracin 25
kV, distancia de trabajo de 11 mm y corriente del
haz de 1 x 10-10 A. Posteriormente y con ayuda del
analizador de imgenes Scion Image se midi el
dimetro de 400 partculas en pixeles. La calibracin
del analizador de imgenes y la obtencin del factor
de conversin m/pxeles/m se clculo utilizando el
material de referencia certificado SRM 1690 (valor
de referencia 0,895 m 0,008 m). Finalmente se
obtuvo el valor de las mediciones (valor de
referencia 0,376 m) y se procedi a el clculo de
incertidumbre combinada con K = 2, (0,030 m).
Participantes
El nmero de instituciones que declararon su
disposicin a participar en la prueba interlaboratorio
fue de diez, todos ellos utilizando microscopa
electrnica de barrido, utilizando equipos de
diferentes marcas (JEOL; TOPCON, PHILIPS,
CAMECA). En la tabla 1 se muestra la informacin
solicitada y recopilada de los laboratorios
participantes con el fin de conocer el estado de sus
mediciones y de la calidad de ellas.

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Tabla 1. Informacin recopilada en el cuestionario.

Tabla 2. Resultados de los participantes en la
MRC del
Valor Sistema prueba interlaboratorio.
Lab. certificado Incertidumbre de Calidad
Lab.
del MR Acreditado
4422 --- --- --- No No. de Desviacin
Promedio
0193 --- 1 m --- No Lab. partculas estndar CV
[m]
MRS-3XY. medidas (s) [m]
9648 Lote 2 m 0,083 m S
#1080730 4422 No reporta 0,334 0,02 6,0
4875 --- --- --- No
3827 365 0,351 0,003 0,9
Aldrich Cat.
3827 0,554 m --- No
46, 172-5 9648 411 0,375 0,04 10,7
Portaobjetos
1215 --- --- No
para MET 0088 300 0,391 0,02 5,1
Rejilla de
0088 1 m --- No
calibracin 4875 395 0,360 0,03 8,3
0004 --- --- --- No
2451 --- --- --- No 1215 300 0,414 0,01 2,4
0193 314 0,382 0,02 5,2
3. RESULTADOS
En la grfica de la figura 3, cada participante puede
En la tabla 2 se observan los resultados de las determinar la calidad de sus resultados localizando
mediciones realizadas a las partculas por cada su posicin por medio de su nmero de cdigo. Los
participante y la figura 2 muestra los resultados mejores resultados son los ms cercanos al origen.
graficados. El coeficiente de variacin (CV) es igual
a la desviacin estndar entre el valor promedio de
la medicin por 100, este nos indica la variabilidad 0.44

de las mediciones por el laboratorio sin tomar el 0.42

Tamao de partcula (m)

cuenta el nmero de mediciones, en esta prueba 0.40

nos indica la variacin en porcentaje probable del
0.38
dimetro de las esferas, repetibilidad y
0.36
reproducibilidad de las mediciones, entre otros
aspectos. 0.34

0.32

Para la evaluacin del desempeo de los 0.30

laboratorios se utiliz el criterio del error cuadrtico 4422 3827 4875 9648 0193 0088 1215

medio relativo (ECMrel) calculado con la ecuacin 1,

sta es solamente una propuesta de evaluacin ya
Figura 2. Grfica del promedio de los resultados
que cada laboratorio tiene requisitos particulares de
obtenido por los laboratorios, valor de referencia:
calidad y en este ejercicio no se realiz ningn
0,376 m, incertidumbre estndar: 0,015 m.
consenso para establecer criterios de aceptacin o
rechazo de resultados.
Tabla 3. Valores del ECMrelativo

Para la construccin de tabla y grfica de ECMrel Sesgo (b)

se utilizaron los valores de desviacin estndar y Lab. s/ b/ ECMrelativo
[m]
sesgo, divididos por la incertidumbre del valor de 0193 -0,006 1,4 0,4 1,4
referencia, esto facilita la comparacin entre 0088 -0,015 1,1 1,0 1,5
laboratorios y permite realizar la comparacin de su
desempeo para cada analito, contra los valores de 3827 0,025 0,2 1,6 1,6
referencia (CENAM). 4875 0,016 1,9 1,0 2,2
9648 0,001 2,6 0,1 2,6
En la tabla 3, se han ordenado los laboratorios con 1215 -0,038 0,7 2,5 2,6
respecto a sus valores de ECM relativo de menor a 4422 0,042 1,1 2,7 2,9
mayor, considerando que el desempeo es mejor
para valores menores de ECMrel.

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Figura 3. Grfica del ECMrel obtenido por cada
laboratorio.
4. DISCUSIN
Debemos mencionar que algunas de las fuentes de
error ms comunes en las tcnicas de
caracterizacin de partculas por microscopa MEB
son las siguientes:
Errores asociados con la preparacin de la muestra
- Muestreo no representativo de la emulsin
- Una dispersin inapropiada o inadecuada de la
emulsin durante la preparacin de la muestra
- Aglomeracin o fractura de partculas durante la
preparacin de la muestra
- Contaminacin de la muestra/ introduccin de
artefactos durante la preparacin de la muestra /
almacenamiento
- Degradacin de la muestra durante el
almacenamiento
Errores asociados con la instrumentacin/ equipo y
el anlisis de imgenes
- Calibracin inapropiada de la magnificacin del
microscopio
- Operacin del microscopio bajo parmetros
menores a los ideales (p. e., voltaje de aceleracin o
corriente, de las lentes condensadoras,
seleccionados muy alto o muy bajo, errores debido
al astigmatismo)
- La superficie de la muestra se carga bajo el haz de
electrones
- Calibracin inapropiada del software/ hardware
para anlisis de imgenes
- Errores en el establecimiento del threshold de la
escala de grises en las tcnicas de anlisis de
imgenes
- Conteo inadecuado del nmero de partculas.
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25 al 27 de Octubre de 2006
Errores debidos a factores humanos y otros factores
- Fatiga del operador
- Habilidad y experiencia del operador (en el uso de
equipo y tcnicas asociadas con el anlisis)
- Falta de entendimiento de las capacidades y
limitaciones del equipo y del software/hardware
- Errores debidos a un inadecuado o incorrecto
anlisis estadstico.
El entendimiento a fondo de estas fuentes de error,
es esencial para poder identificar la ocurrencia de
ellos y desarrollar procedimientos de trabajo que
minimicen su impacto en los resultados finales.
3 de los 10 laboratorios registrados no entregaron
sus resultados, algunos de ellos argumentaron
problemas con sus equipos.
Se observa en la tabla 1 que la mayora de los
laboratorios no tienen un sistema de calidad
acreditado. Solo uno de los laboratorios ha
establecido el clculo de incertidumbre para este
tipo de medicin.
El uso de patrones o materiales de referencia ha
sido declarado y establecido por 4 de los
laboratorios. Sin embargo, no se observa un uso
adecuado de ellos para realizar correcciones a las
mediciones o para estimar la incertidumbre.
Todos los laboratorios realizaron las mediciones del
dimetro de partcula con los programas de anlisis
de imgenes integrados a sus equipos.
Si consideramos la variabilidad dentro de los
laboratorios como el coeficiente de variacin, se
puede decir que se encuentra entre 1 y 11 %.
5. CONCLUSIONES
Los resultados de la presente prueba
interlaboratorio permitirn a cada laboratorio llevar a
cabo mejoras en sus procesos de medicin.
Por ejemplo el laboratorio 9648 obtiene un resultado
similar al obtenido por el CENAM, sin embargo su
clculo de incertidumbre es muy alto.
Los laboratorios 1215 y 4422, deberan considerar
el uso de materiales de referencia.
Es necesario continuar con este tipo de pruebas
para la bsqueda de razones precisas de
variabilidad en los resultados e involucrar a mayor
nmero de laboratorios.
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REFERENCIAS

[1] Alvarez Rojas L, et al. Quality Assurance and

TQM for Analytical Laboratories, Melbourne,
Australia (1995).

[2] Hagni Ann M., Fine Particle Characterization by

Rietveld QXRD, CLM, and SEM-EDS Phase
Mapping, JOM, December 2002, pp.24-26.

[3] Bang J. J y Murr L. E., Collecting and

Characterizing Atmospheric Nanoparticles, JOM,
December 2002, pp.28-30.

[4] VAM NEWS,

http://www.npl.co.uk/environment/fm_cs_three.ht
ml.

[5] NOM-024-SSA1-1993, Salud Ambiental. Criterio

para Evaluar la Calidad del Aire Ambiente con
respecto a las Partculas Suspendidas Totales
(PST). Valor Permisible para la Concentracin de
Partculas Suspendidas Totales en el Aire
Ambiente como Medida de Proteccin a la Salud
de la Poblacin.

[6] Ferraris Ch. F., Analysis of the ASTM Round

Robin Test on Particle Size Distribution of
Portland Cement: Phase II, December 2002.
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