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INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
LABORATORIO DE FISIOLOGÍA Y BIOQUÍMICA MICROBIANA

Práctica 5:
“OXIDACIÓN DE
AZUFRE POR
BACTERIAS
QUIMIOLITOTRÓFICAS”

siendo indicador dicha disminución del pH de crecimiento positivo. entonces la cantidad de azufre residual en los matraces deberá ser menor en comparación a la cantidad de azufre inicial debido al crecimiento del microorganismo.8 63.8 (mg) 2.azufre utilizado (mg) 86..5 Cultivo de T.8 2.4 6.. ♦Cuantificar el H2SO4 formado después del periodo de incubación en condiciones de cultivo en agitación y estacionario cuando los microorganismos T. ♦Observar los cambios de pH al final del periodo de incubación en las distintas condiciones.1 3.H2SO4 formado (mg) 146. Objetivos específicos ♦Cuantificar el azufre oxidado después del periodo de incubación en condiciones de cultivo en agitación y estacionario cuando el microorganismo T. ♦Cuantificar el S2O3 oxidado después del periodo de incubación en condiciones de cultivo en agitación y estacionario cuando el microorganismo T.5 6.2 16.HIPÓTESIS •Si Thiobacillus thiooxidans es un microorganismo quimiolitotrofo capaz de oxidar el azufre en condiciones aerobias1.S de SO4 formado 46... thiooxidans en azufre elemental (Medio A) 1.5 .pH 1.5 0. thiooxidans y T.5 1.7 118. •Si la oxidación biótica del azufre y tiosulfatos acidifican el medio1. el crecimiento de los microorganismos quimiolitótrofos bajo 2 condiciones de incubación: estacionario y en agitación constante.8 3.H2SO4 formado (mg) 124. •Si Thiobacillus thioparus es un microorganismo capaz de obtener energía a partir de fuentes con iones tiosulfato en condiciones aerobias2. Resultados de las diferentes determinaciones realizadas en los medios A y B Cultivos Resultados obtenidos Agitados Estacionarios Cultivo de T.7 29..03 (mg) 4. OBJETIVOS Objetivo general: Determinar mediante la estimación de sustratos residuales o de los productos oxidados.. thioparus es inoculado en el medio “B” y cuando está ausente. entonces la cantidad de iones tiosulfato inicial en el medio “B” debe ser menor a la inicial debido al crecimiento del microorganismo. thioparus son inoculado en el medio “A” y “B” (respectivamente) y cuando están ausentes.9 4.. entonces el pH de los medios de cultivo al final del periodo de incubación se verá reducido.4 4. thiooxidans es inoculado en el medio “A” y cuando está ausente. thioparus en tiosulfato (Medio B) 1.3 81.Tiosulfato oxidado 153.pH 0. ANÁLISIS DE RESULTADOS Tabla 1.

thiooxidans. oxidándolo hasta sulfatos y éstos al ionizarse se transforman en ácido sulfúrico. ya que en las partículas de azufre se pueden formar esferas de solvatación y por lo tanto pueden dar un poco de peso extra y además la estructura de la “flor de azufre” se puede formar en medios acuosos. thiooxidans es mayor cuando éste se incuba en condiciones de agitación constante (5. el cual reduce el pH inicial del medio de 4.4 en el caso del medio en condiciones de agitación y pH de 0. .En el medio A la cantidad de azufre utilizado. DISCUSIÓN MEDIO A Azufre residual: Como es posible observar en la Tabla 1.9 estacionario. se debe considerar que al menos una pequeña cantidad de azufre residual determinada no es totalmente debida a la oxidación biótica del sustrato. 2. a 0. siendo ésta la razón por la cual hay una diferencia significativa entre el medio que estuvo en agitación contra el estacionario. El azufre se hidrata a azufre soluble hidratado que puede posteriormente entrar a la célula. El organismo reduce el azufre elemental a ácido sulfhídrico. Esta disminución demuestra que efectivamente hubo crecimiento del microorganismo. El pH del medio disminuyó de 3 a 4 unidades cuando fue inoculado con el consorcio microbiano que contenía a T. el cual entra en la célula y la re-oxida a ácido sulfúrico. es importante tenerlo en consideración. los mg de ácido sulfúrico formado y azufre de sulfato formado fueron mayores también cuando el medio estaba en agitación. H2SO4: De acuerdo con los resultados obtenidos. Existen ciertas dudas de acerca de los mecanismos que este microorganismo utiliza para poder incorporar el azufre elemental dentro de la célula debido a que este es un elemento insoluble por lo que se han propuesto 2 mecanismos de entrada9: 1. dando también una mínima cantidad de peso extra. ya que en el primero se promueve una mayor oxigenación al medio y por consiguiente más oxidación del azufre elemental.5. pues es mayor la oxigenación. ácido sulfúrico y azufre de sulfatos formado fue mayor en los cultivos agitados. se especula que al ser una cadena para oxidación aerobia su aceptor final de electrones es el oxígeno. Esto ocurre porque la oxidación del azufre se favorece en condiciones aerobias. thioparus.13 veces mayor). La enzima que cataliza la conversión de Azufre elemental a sulfito es la enzima sulfito citocromo reductasa (SCR por sus siglas en inglés) 10. Éste utiliza al azufre elemental presente en el medio como un donador de electrones. se observó que como productos formados tenemos la presencia de ácido sulfúrico. Si bien es cierto que los resultados obtenidos nos demuestran lo teóricamente esperado. la cantidad de azufre utilizado por T. De la misma manera en el medio B la cantidad de tiosulfato oxidado. Si bien la cantidad de peso extra que se puede generar debido a lo anteriormente explicado es muy mínima. En las determinaciones de azufre utilizado y tiosulfato oxidado se restaron los valores obtenidos en las determinaciones de los matraces no inoculados para descartar la oxidación abiótica del azufre y tiosulfato. ácido sulfúrico formado fue mayor en los cultivos agitados y el pH del medio disminuyó 5 unidades cuando fue inoculado con el consorcio microbiano que contenía a T. Además. A pesar de que la cadena de transporte de electrones no se conoce a detalle.

Es importante mencionar que el pH inicial de medio fue de 4. Esto puede deberse a que durante la oxidación del tiosulfato. S0+ O2+ H2O  H2SO3 H2SO3 + ½ O2  H2SO4 Reacciones de oxidación del azufre elemental a ácido súlfurico por T. pH: La acidificación del medio debido a la producción de H2SO4 5 fue mayor en los cultivos agitados. Esto puedo deberse a que la agitación favorece una mayor interacción del Thiobacillus thiooxidans con el azufre elemental con el que se inoculó el medio A además de que permite incorporar más oxígeno.3 kJ/reacción Reacción de oxidación del tiosulfato por T.5 lo cual favoreció tanto la oxidación del azufre como el crecimiento ya que aunque T. en el cultivo la oxidación se ve favorecida. ya que como se mencionó anteriormente la agitación favorece una mayor oxidación del azufre. de la oxidación del azufre y utiliza el CO2 como única fuente de carbono3. el tiosulfato residual reacciona con el triyoduro para formar tetrationato y yodo elemental. Esto debido ya que se necesita tener al oxígeno como aceptor final de electrones y a agitación favorece la oxigenación del cultivo aumentando así la probabilidad de oxidación. H2SO4 formado: Al igual que con el tiosulfato oxidado. se lleva a cabo la siguiente reacción 6: S2O32. utilizado el tiosulfato como fuente de energía como fuente de energía. MEDIO B T. Observando los resultados de la tabla 1 se obtuvo que al comparar entre los dos cultivos. necesaria para su crecimiento. la cantidad de H2SO4 formado fue mayor en el cultivo en agitación sin embargo se esperaba que la cantidad de tiosulfato oxidado obtenido fuera similar a la cantidad de H2SO4 producido. thiooxidans ya que obtiene energía.S de SO4 formado:Como puede observarse en la tabla 1 la cantidad de productos oxidados y que pueden ser precipitados como el S de SO4= fue mayor en condiciones de agitación. la fijación de CO2 y la síntesis de ATP disminuyen cuando el pH aumenta y cuando se encuentra por arriba de 4. thioparus es capaz de oxidar tiosulfato a sulfato.+ H2O + 2O2 → 2SO42.thiooxidans1. 3 4 . H2SO4 y azufre utilizado demuestran el metabolismo quimiolitotrófo de T. cantidad de tiosulfato oxidado es mayor. thioparus Tiosulfato oxidado: Al validar el tiosulfato oxidado.+ 2H2O ΔG0’ = -818. es necesario para la oxidación del azufre elemental 1.es decir. mediante yodometría. el cual. ya que es un producto de esta oxidación sin embargo esto no ocurrey se observa una cantidad menor obtenida. la cuantificación de S de SO4. Por otra parte. se producen de intermediarios como el tetrationato y el tritionato 7 que podrían interferir con la cantidad de H2 SO4 producida. thiooxidans puede oxidar el azufre en un rango de pH de 0. Así mismo las determinaciones anteriormente mencionadas permiten comprobar que la oxidación del azufre está ocurriendo de manera total y no parcial.La formación de dichos intermediarios se muestra en las siguientes reacciones: .9 a 7.

4 en condiciones de agitación y a 0. indicando también crecimiento del microorganismo. los cuales pasan hasta ácido sulfúrico. se explica la disminución del pH en cada cultivo indicando que T. siempre y cuando en el medio esté presente alguna fuente de azufre así como en condiciones de agitación constante para un mayor crecimiento del microorganismo.  La cantidad de tiosulfato que es oxidado es mayor cuando a éste se le pone en contacto con un consorcio microbiano que contiene a T.9 en condiciones de cultivo estacionario. indicando dicha disminución crecimiento del microorganismo.5 en condiciones de cultivo estacionario.  La oxidación del tiosulfato por T.  La cantidad de productos oxidados y metabolitos solubles en el medio.  La oxidación del azufre por Thiobacillus thiooxidans disminuyó el pH del medio inicial hasta 0. siendo dicha disminución del pH un indicador de crecimiento del microorganismo. . CONCLUSIONES  Thiobacillus thiooxidans es capaz de oxidar el azufre a sulfatos. thioparus en condiciones de agitación en comparación de condiciones de cultivo estacionario. generados a partir del metabolismo de los organismos quimiolitótrofos son directamente proporcionales al crecimiento de dichos microorganismos (biomasa).thioparus creció. thioparus disminuyó el pH inicial del medio hasta 1.4 en condiciones de agitación y a 1. Reacciones de la oxidación de tiosulfato por Thiobacillus thioparus Otro factor importante sería que la oxidación de tiosulfato a ácido sulfúrico es parcial 8 pH: Debido a la producción de H2SO4.

APPLIED AND ENVIRONMENTAL MICROBIOLOGY. Studies on the metabolism of autotrophic bacteria: I.E.R. (1966) Acid production by Thiobacillus thiooxidans . (1952) THE METABOLISM OF THIOBACILLUS THIOPARUS I.K. Marquez.. 6. (1971) The requirement of low pH for growth of Thiobacillus thiooxidans.  Thiobacillus thioparus es capaz de oxidar completamente el tiosulfato a sulfato y parcialmente a ácido sulfúrico  Es probable que a formación de intermediarios como el tetraionato y tritionato disminuya la cantidad de H2SO4 producido BIBLIOGRAFÍA CONSULTADA 1. Cambridge University Press. (1992) Oxidation of Elemental Sulfur to Sulfite by Thiobacillus thiooxidans Cells . 58(11):3767-3769 2. Berger.1085/jgp. S.1007/BF00424909 5. DOI: 10. Journal of Bacteriology. Journal of Bacteriology. W. 5. P.aspx 10. Consultado el: 11/05/17. 3.com/soilsci/Citation/1941/05000/The_Necessity_for_Direct_Contact_in_Sulfur. THE METABOLISM OF Thiobacillus thioparus.89 4. 8. Parker. T. 64(3): 365–368. 2008. 9. DOI: 10. RELEVANCIA AMBIENTAL Y BIOTECNOLOGÍA . RUTAS METABÓLICAS DE OXIDACIÓN DEL AZUFRE EN BACTERIAS QUIMIOLITOAUTÓTROFAS.C. The respiration of Thiobacillus thiooxidans on sulfur 26(1):89. Journal of general microbiology.Vishniac. TAKEUCHIO.L.(1953) The oxidation of inorganic compounds of Sulphur by various sulfur bacteria. (8):334-364. G. (1941). Vloger. C... (1952). J. 92 (6):1842-1843. : The Oxidation of Thiosulfate. Archiv für Mikrobiologe. Sep. 64(3):363-373. CHAN. (2010). Vogler. Le Borgne.1.ISAMU SUZUKI. 79:338. 7.106. Tesis. Vishniac W. L. Inglaterra.1. Departamento de Procesos y Tecnología. K. W. (1942).26. Revah. disponible en: http://journals.Byung Hong. Journal of Bacteriology. S.lww. 362-363 . UAM-Cuajimalpa. 3. Kempner.. The necessity for direct contact in sulfur oxidation by Thiobacillus thiooxidans [EN LINEA]. Bacterial Physiology and Metabolism. Silvaji Rao. pps.