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Efeito da toxicidade de Cr (VI) e Zn (II) no crescimento

Artigo Tcnico
do fungo filamentoso Aspergillus niger
isolado de efluente industrial
Toxicity effect of Cr (VI) and Zn (II) on growth of filamentous fungi Aspergillus
niger isolated from industrial effluent

Maria do Socorro Vale


Qumica Industrial e Mestre em Qumica Inorgnica pela Universidade Federal do Cear (UFC). Doutora em Engenharia Civil
rea de concentrao em Saneamento Ambiental pela UFC

Katiany do Vale Abreu


Qumica pela Universidade Estadual do Cear (UECE). Mestranda em Ecologia e Recursos Naturais pela UFC

Sandro Thomaz Gouveia


Graduado em Qumica pela UFC. Mestre em Qumica pela Universidade Federal de So Paulo (Unifesp). Doutor em Qumica pela
Universidade Federal de So Carlos (UFScar). Professor adjunto I da UFC

Renato Carrh Leito


Engenheiro Civil. Pesquisador da Embrapa Agroindstria Tropical. Mestre em Hidrulica e Saneamento. Doutor em Cincias Ambientais
pela Universidade de Wageningem, Holanda

Sandra Tdde Santaella


Qumica e Mestre em Qumica pela UFSCar. Doutora em Engenharia Civil pela Escola de Engenharia de So Carlos (EESC-USP). Professora-Associada da UFC

Resumo
Processos convencionais de tratamento de efluentes utilizam microrganismos vivos, o que sugere limitaes relativas toxicidade de metais para os
microrganismos. O experimento consistiu em adicionar solues monoelementares de Cr (VI) e Zn(II) em diferentes concentraes (0, 20, 50, 100, 200, 300,
400, 500 mg.L-1) ao meio de crescimento e observar a influncia dos metais no crescimento micelial e germinativo do fungo Aspergillus Nger por verificao
visual da expanso radial do miclio e da germinao de esporos, seguida de registro fotogrfico. Os resultados mostraram que o metabolismo do fungo foi
completamente inibido em concentraes acima de 500 mg Zn (II).L-1 e 150 mg Cr (VI).L-1. O ED50 (concentrao de ingrediente ativo capaz de inibir 50% do
crescimento micelial do fungo) para os dois ons metlicos, nas condies estudadas, est na faixa entre 100 e 150 mg.L-1.

Palavras-chave: metais pesados; inibio; crescimento micelial; Aspergillus niger; ED50.

Abstract
Many standard processes of wastewater treatment use live microorganisms, which suggests limitations on a metal toxicity to the microorganism. The experiment
consisted in adding mono elementary solutions of Cr (VI) and Zn (II) at different concentrations (0, 20, 50, 100, 200, 300, 400, 500 mg.L-1) to the growth mean, and
to observe the influence of metals on mycelial and germinative growth of the Aspergillus niger fungus, by means of visual observation of the radial expansion of
the mycelius and the germination of spores, followed by photograph registration. The results showed that the metabolism of the fungus was completely inhibited
at concentrations above 500 mg Zn (II).L-1 and 150 mg Cr (VI).L-1. The ED50 (concentration of active ingredient capable of inhibiting 50% of mycelial growth of the
fungus) for both metal ions, under the studied conditions, is in the range between 100 and 150 mg.L-1.
Keywords: heavy metals; inhibition; mycelial growth; Aspergillus niger; ED50.

Endereo para correspondncia: Maria do Socorro Vale Instituto de Cincias do Mar Avenida da Abolio, 3.207 CEP: 60165-081 Meireles Fortaleza (CE),
Brasil Tel: (85) 3366-7031 Fax: (85) 3366-7002 E-mail: svaleufc@gmail.com
Recebido: 01/02/10 Aceito: 02/05/11 Reg. ABES: 020 10

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Vale, M.S. et al

Introduo viride, Trichoderma atroviride tm sido usados para remoo de me-


tais em despejos sintticos (YIN et al., 1998; PORCEL, et al., 2005;
Nas ltimas dcadas, o aumento populacional e o consequen- ERRASQUN; VZQUEZ, 2003, MUKHOPADHYAY, et al., 2007).
te incremento das atividades industriais contriburam para o agra- Os fungos possuem propriedades que influenciam a diminuio
vamento dos problemas ambientais (LUCAS et al., 2007). Neste da toxicidade de metais, incluindo a formao da ligao metal-pro-
aspecto, o lanamento de guas residurias industriais que contm tena, precipitaes orgnicas e inorgnicas, transporte ativo, com-
metais pesados afeta diretamente ambientes aquticos de corpos re- partimentao intracelular, enquanto que os constituintes da parede
ceptores, tornando-se uma ameaa para os seres vivos (GADD, 1992; celular do fungo, como a quitina, possuem capacidade de adsorver
DURUIBE et al., 2007). metais (GADD et al., 2001).
Metais pesados e alguns semimetais so elementos qumicos que Alguns metais so essenciais para o metabolismo dos fungos,
possuem densidade superior a 5 g.cm-3 (TOES et al., 2004; MALIK, no entanto, so txicos quando presentes em excesso (BALDRIAN,
2004). Geralmente so txicos aos organismos vivos, mesmo em 2003). Os metais essenciais ao metabolismo dos fungos incluem co-
baixas concentraes, como por exemplo, 0,01 mg(Pb).L1, 0,05 bre, ferro, mangans, molibdnio, zinco e nquel (GADD, 1993), e
mg(Cr).L em guas doces (CONAMA, 357), sendo considerados
-1
so identificados como txicos em concentraes poucas vezes su-
poluentes. Os metais podem ser encontrados na gua por meio de periores s requeridas para o metabolismo (HUHES et al., 1991). Os
processos naturais, como o intemperismo de rochas ou o resulta- nveis de toxicidade de cada metal variam de acordo com a espcie de
do de atividades antropognicas, tais como a minerao, metalur- microrganismo, especiao do metal e pH (VALIX; LOON, 2003).
gia, esgotos, resduos slidos e uso de combustveis (PATINO et al., Metais txicos podem inibir o crescimento de fungos, alm de cau-
2003). Alguns elementos como cromo, cdmio, chumbo e merc- sar mudanas morfolgicas e fisiolgicas e afetar a reproduo. Esses
rio (LACERDA; MALM, 2008) ocasionam srios transtornos sade tambm reduzem o nmero, a diversidade e selecionam populaes
humana quando ingeridos em doses inadequadas (ANSARI; MARR; microbianas resistentes ou tolerantes (EZZOUHRI et al., 2009).
TARIQ, 2004). O cromo um metal pesado que ocorre naturalmente em rochas,
Uma vez lanados no ambiente, os metais pesados sofrem trans- plantas, solos e poeira vulcnica (EZZOUHRI et al., 2009), altamen-
formaes qumicas que podem resultar em espcies qumicas muito te reativo e origina uma variedade de compostos txicos. O grau de
mais txicas do que os ons isolados, como ocorre com cromo, ars- toxicidade do cromo varia com o estado de oxidao (GUPTA; BABU,
nio e mercrio, cujas toxicidades dependem da forma qumica e do 2009), e as duas formas de cromo predominantes no meio ambiente
estado de oxidao (LEITE, 2002). so: Cr (III) e Cr (VI), sendo que o Cr (VI) solvel, txico e carcino-
O interesse da utilizao de processos biolgicos para remoo de gnico (ACKERLEY et al., 2004). O Cr (III) um on essencial para
metais pesados tem aumentado principalmente por ser um tratamen- o desenvolvimento humano e animal, mais estvel que o Cr (VI),
to eficiente, de baixo gasto de energia e que no utiliza produtos qu- a oxidao a Cr (VI) favorecida em pH menor que 5, o que torna
micos para tratar efluentes (VEGLIO; BEOLCHINI, 1997). Reatores preocupante a presena deste on em efluentes (MICHALAK et al.,
biolgicos so mais compactos que os tratamentos convencionais 2007). A maior toxicidade do Cr (VI) se deve s elevadas solubilida-
(por exemplo, lagoas de estabilizao) e a grande concentrao de des e mobilidades em gua (DONG et al., 2009).
biomassa leva a uma maior taxa de remoo de poluentes (SANTOS, O zinco um metal encontrado em guas residurias industriais,
2007). principalmente de atividades de minerao e de galvanoplastia (KING
Os microrganismos so usados nos processos de biotransforma- et al., 2008). Dependendo da concentrao, este metal pode limitar o
o ou de biossoro para transformar ou adsorver metais. Nestes pro- crescimento de fungos filamentosos e ser txico para alguns micror-
cessos, as clulas microbianas vivas ou mortas e os produtos do seu ganismos, como fungos, bactrias e microalgas (ARUNAKUMARA;
metabolismo podem ser bioacumuladores eficientes (KOVACEVIC et XUECHENG, 2008; VALIX; LOON, 2003; HEINLAAN et al., 2008).
al., 2000). A biomassa fngica possui porcentagem de material de H vrios mecanismos de resistncia utilizados pelos microrga-
parede celular relativamente alta e este material excelente ligante de nismos como defesa em resposta direta ao contato com os metais,
metais (SRIVASTAVA et al., 2007). entre eles podem ser citados: precipitao extracelular, complexao
Algumas espcies de fungos, tais como Coriolus versicolor, e cristalizao e transformao de metais (WHITE; SAYER; GADD,
Phanerochaete chrysosporium e Aspergillus niger, possuem capacidade 1997), alm de biossoro na parede celular, diminuio do trans-
de remover poluentes orgnicos recalcitrantes, por exemplo, o fenol porte, compartimentao intracelular, impermeabilidade, sistema
(FOUNTOULAKIS et al., 2002; HAI et al., 2006; SANTAELLA et al., de extruso de substncias txicas e imobilizao (BRUINS; KAPIL;
2009; PASSOS et al., 2009) e os metais (YUN-GUO et al., 2006), por OEHME, 1999; ZAFAR; AQIL; AHMAB, 2007).
meio de atividades metablicas, pela produo de enzimas e proprie- A presena de metais pesados nas guas residurias pode redu-
dades de adsoro. Aspergillus niger, Aspergillus terreus, Trichoderma zir intensamente a atividade microbiana no tratamento biolgico, pois

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Efeito da toxicidade de Cr(VI) e Zn(II) no crescimento do fungo Aspergillus niger

causa efeitos txicos biota do tratamento, uma vez que dentro das A soluo padro-estoque de Zn(II) foi preparada dissolvendo-
clulas os ons metlicos podem se ligar a protenas, deslocando alguns se 4,550 g de Zn(NO3)2.6H2O (Vetec) em 1 L de gua destilada. A
ons de suas posies habituais e prejudicando as suas funes metab- partir das solues padro-estoque, foram preparadas as solues de
licas (CHIPASA, 2003; GADD, 1992). Devido crescente utilizao do trabalho (20, 50, 100, 150, 200, 300, 400, 500 mg.L-1 de Zn(II) e de
tratamento biolgico de guas residurias (CHAALAL; ZEKRI; ISLAM, Cr(VI) utilizadas nos experimentos.
2005), torna-se notria a necessidade do estudo da toxicidade de me-
tais sobre a diversidade microbiana do sistema de tratamento. Efeito da concentrao dos metais Cr(VI) e Zn(II)
Muitos ons metlicos tm influncia direta sobre os processos na germinao de Aspergillus niger
fisiolgicos e bioqumicos de microrganismos. Como o crescimento
do microrganismo reflete o metabolismo celular, este tem sido usado Preparou-se meio de cultura agar sabouraud dextrose (Acumedia
como um indicador-chave da toxicidade de metais pesados para mi- manufacturers), 65 g.L-1 para cada metal, e este foi distribudo em pla-
crorganismos (URUNAKUMARA; XUECHENG, 2008). cas de petri estreis, juntamente com alquotas de 0,50; 1,25; 2,50;
Este trabalho teve como objetivo determinar a toxicidade de 3,75; 6,25; 7,50; 10,00; 12,50 mL da soluo-estoque do metal de
Cr(VI) e Zn(II) pela avaliao do crescimento de Aspergillus niger iso- interesse, de modo que as concentraes deste nas placas fossem de
lado de um efluente de indstria petroqumica. 20, 50, 100, 150, 200, 300, 400 e 500 mg.L-1, respectivamente. Aps
a solidificao do meio de cultura com a soluo de metal, as pla-
cas foram inoculadas com 2,6 x 106 esporos.mL-1 que a concen-
Materiais e mtodos
trao tima utilizada em reatores biolgicos de escala laboratorial
Fungo (RODRIGUES, 2010) , incubadas a 30 2C e observadas por 144
horas. O controle consistiu de placa com concentrao 0 mg.L-1 de
O fungo filamentoso, Aspergillus niger, foi isolado de uma gua re- soluo de metal. O teste foi feito em triplicata, totalizando 27 placas
siduria que contm leo, compostos nitrogenados e metais pesados para cada metal.
(WAKE, 2005), proveniente da LUBNOR (Lubrificantes e Derivados Nesta etapa, foi observada a concentrao mxima de metal em
de Petrleo do Nordeste), uma refinaria de petrleo da Petrobrs que houve crescimento do fungo por verificao visual da expanso
e identificado no Laboratrio de Fitopatologia da EMBRAPA radial e da germinao de esporos, seguido de registro fotogrfico.
Agroindstria Tropical, de acordo com as chaves taxonmicas cls-
sicas (KLICH, 2002). Efeito da toxicidade de metais Cr(VI) e Zn(II) no
O isolamento do fungo (TUITE, 1971) consistiu retirar o mic- crescimento micelial de Aspergillus niger
lio fngico diretamente do efluente com o auxlio de uma ala de
platina flamabada, e transferi-lo para placas de Petri contendo meio Placas de petri contendo meio de cultura agar saboraud dextrose
de Batata-Dextrose-gar (BDA), acrescido de 100 mg de sulfato de (Acumedia) foram inoculadas com 2,6 x 106 esporos de Aspergillus
estreptomicina/ litro de meio, a fim reduzir o crescimento bacteriano. niger e incubadas em estufa bacteriolgica, a 30 2C por 72 horas.
As placas foram incubadas em uma sala com temperaturas variando Aps esse perodo, foram retirados discos de 4 mm de dimetro do
de 25 a 32C, com 12 horas de escuro e 12 horas de iluminao. miclio desenvolvido nas placas, com auxlio de um vazador, para
Decorridos 7 dias aps o isolamento, os fungos foram identificados posterior inoculao (MENTEN et al., 1976). Novas placas foram pre-
com base em suas caractersticas morfolgicas. paradas com o mesmo meio de cultura e alquotas (0,5; 1,25; 2,50;
3,75; 6,25; 7,50; 10,00; 12,50 mL) da soluo-estoque de metal de
Teste de toxicidade em placa interesse para obteno de concentraes de 20, 50, 100, 150, 200,
300, 400, 500 mg.L-1, respectivamente. O controle do experimento
A tolerncia do Aspergillus niger aos metais Cr(VI) e Zn(II) foi ava- foi feito em placa sem soluo de metal. Para cada metal, foram pre-
liada por estudos de toxicidade para cada metal separadamente. Este paradas 27 placas, trs para cada concentrao.
teste foi dividido em duas etapas: efeito da concentrao dos metais No centro de cada placa, foi colocado um disco de miclio com
na germinao dos fungos e no crescimento micelial. os esporos voltados para baixo e, em seguida, as placas foram incu-
badas em estufa bacteriolgica a 30 2C, durante 144 horas, tempo
Soluo estoque em que a placa controle foi totalmente preenchida. O crescimento
radial foi obtido a partir da medida do dimetro mdio do miclio
A soluo padro-estoque 1.000 mg.L-1 de ons de Cr(VI) foi pre- do fungo a cada 24 horas. A inibio do crescimento micelial (PIC)
parada dissolvendo-se 2,830 g de K2Cr2O7 (dinmica), previamente foi calculada pela Equao 1, descrita por Edgington, Khew e Barron
seco temperatura de 140C, em 1 L de gua destilada. (1971) e modificada por Menten et al. (1976).

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causando inibio da respirao e da germinao dos esporos


%PIC = CRTE - CRT X100 Equao 1 (BABICH; STORTZKY, 1978). Neste trabalho, observou-se inibio
CRTE
na germinao e no crescimento do fungo em concentraes superio-
Onde, res a 100 mg Zn(II).L-1.
PIC: inibio do crescimento micelial;
CRTE: crescimento radial do controle (cm); Efeito da concentrao de Cr(VI) na germinao
CRT: crescimento radial do tratamento (cm). de Aspergillus niger em placas
Verificou-se a concentrao de ingrediente ativo capaz de inibir Na Figura 3 so mostradas as placas inoculadas com esporos de
50% do crescimento micelial do fungo (ED50) com base nos resulta- fungo, contendo soluo de Cr(VI) aps 144 horas de incubao.
dos PIC, ou seja, a faixa na qual o valor de PIC corresponde taxa de
inibio de 50%. A taxa de crescimento micelial do fungo em horas
para faixa de ED50 foi calculada, dividindo-se o crescimento micelial
A B
mdio (cm) pelo tempo total do experimento (144 horas). Os dados
de PIC foram avaliados estatisticamente pelo Teste de Tukey.

Resultados
Efeito da concentrao de Zn(II) na germinao
de Aspergillus niger em placas
Na Figura 1 so mostradas as placas inoculadas com Aspergillus Figura 1 Placa de controle do experimento: Placas sem soluo de
metais, inoculadas com esporos de Aspergillus niger aps 24 horas (A)
niger, sem soluo dos metais, aps 24 e 144 horas, que foram usadas
e aps 144 horas (B).
como branco do experimento.
Na Figura 2 so mostradas as placas, contendo adio de soluo
de Zn(II) ao meio de cultura, inoculadas com esporos do fungo, aps
144 horas de incubao.
No houve inibio na germinao de esporos do fungo pelo metal 20 mg.L-1 50 mg.L-1
100 mg.L-1 150 mg.L-1
em concentraes de 20 e 50 mg Zn(II).L-1 no perodo de 24 horas. Ao
contrrio, notou-se maior intensidade na germinao dos esporos em
comparao com a placa de controle para as mesmas condies, ocor-
rendo crescimento das hifas e, consequentemente, formao de mic- 200 mg.L-1 300 mg.L-1
400 mg.L-1 500 mg.L-1
lio. Como zinco um elemento essencial para o metabolismo do fungo
(BABICH; STOTZKY, 1978; ANSARI; MARR; TARIQ, 2004; GADD et
al., 2001; JI; SILVER, 1995), este deve ter sido usado para atividades Figura 2 Placas inoculadas com esporos de Aspergillus niger, contendo
concentraes de 20, 50, 100, 150, 200, 300, 400 e 500 mg Zn(II).L-1,
de germinao, o que pode ter favorecido maior desenvolvimento dos no meio de crescimento, aps 144 horas de incubao.
esporos na fase inicial da germinao. Entretanto, no decorrer do expe-
rimento, foi observado que a germinao tornou-se lenta, como con-
sequncia da inibio na fase de esporulao, porm sem interromper
completamente o desenvolvimento. Gadd et al. (2001) tambm ob-
servaram diminuio no desenvolvimento dos fungos de Trichoderma 20 mg.L-1 50 mg.L-1 100 mg.L-1 150 mg.L-1
viride e Rizhopus arrhizus em presena de zinco e outros metais.
O aumento da concentrao de zinco causou inibio a partir de
100 mg.L1, com completa inibio a partir de 200 mg.L1, ou seja,
ausncia de crescimento. 500 mg.L-1
200 mg.L-1 300 mg.L-1 400 mg.L-1
O zinco ajuda a manter a integridade de ribossomos, membra-
nas biolgicas e tambm requerido para o crescimento de micror-
Figura 3 Placas contendo concentraes de 20, 50, 100, 150, 200,
ganismos, contudo, concentraes elevadas deste metal podem ser 300, 400 e 500 Cr(VI) mg.L-1, no meio de crescimento, aps 144 horas
inibitrias ou txicas para as atividades celulares e de crescimento, de incubao.

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Efeito da toxicidade de Cr(VI) e Zn(II) no crescimento do fungo Aspergillus niger

Para a concentrao de 20 mg Cr(VI).L-1, no foi observada ini- O Zn (II) inibiu totalmente o crescimento micelial do Aspergillus
bio da germinao de esporos do fungo, ou seja, com 24 horas de niger em concentrao de 500 mg.L-1, e o Cr(VI) em concentrao
incubao a placa contendo 20 mg.L-1 de Cr(IV) apresentou cresci- acima de 150 mg.L-1 (Tabela 1), verificando-se assim que o fungo
mento dos esporos semelhante placa de controle. Aps 144 horas bem mais tolerante ao Zn(II) do que ao Cr(VI). Ezzouhri et al.
de experimento, observou-se esporulao compatvel com o controle (2009) estudaram a influncia de metais no crescimento micelial
para as mesmas condies. de fungos, e constataram que uma linhagem de Aspergillus niger
Nas placas contendo 50 mg Cr(VI).L-1, observou-se inibio isolada de solo contaminado com metais pesados tolerou maior
acentuada na fase germinativa do fungo. Entretanto, houve peque- concentrao de Cr(VI) (480 mg Cr(VI).L-1), do que a registrada
no desenvolvimento entre 96 e 144 horas, no chegando, porm, neste trabalho. Comparando os resultados obtidos neste trabalho
completa esporulao, isso indica que se o tempo de contato fosse com aqueles obtidos por Ezzouhri et al. (2009), pode-se observar
maior do que 144 horas, possivelmente haveria adaptao do fungo que em microrganismos de mesma espcie, devido capacidade
concentrao de metal, entretanto encerrou-se o experimento devido adaptativa dos fungos, as diferentes linhagens, isoladas de ambien-
contaminao nas placas. tes diferentes, apresentam capacidades de resistncia e adaptao
Para as concentraes superiores a 100 mg Cr(VI).L , no foi ob- -1
diferentes quando expostas ao mesmo metal.
servado desenvolvimento do fungo com 144 horas de experimento. O ED50 para os dois metais est na faixa de concentrao
De acordo com os resultados, o Cr(VI) foi mais txico ao fungo entre 100 e 150 mg.L-1, pois entre as concentraes de 100 e
que o Zn(II), apresentando maior capacidade de inibio na fase ger- 150 mg.L-1, observou-se 50% de inibio do crescimento mice-
minativa, pois tal inibio ocorreu em concentraes menores quando lial, identificado pelos valores de PIC (Tabela 1), para os metais
comparado com o Zn(II). O fato tambm foi observado por Ezzouhri estudados.
et al. (2009) quando testaram a tolerncia de fungos filamentosos Na Tabela 2 so apresentados os resultados de crescimento mi-
do gnero Alternaria aos metais Zn, Cr, Cu e Cd. As diferentes capa- celial mdio em cm e a taxa de crescimento em cm.h-1. A taxa de
cidades de resistir toxicidade por metais diversos deve ser devido crescimento do fungo no controle foi de 0,05 cm.h-1.Portanto, a taxa
presena e diferentes processos de tolerncia ou mecanismos de que corresponde ao ED50 50% do valor da taxa de crescimento no
resistncia desenvolvidos pelos microrganismos (EZZOUHRI et al., controle, ou seja, 0,025 cm.h-1. Com este valor e com os dados da
2009). Tabela 2, chegou-se faixa de concentrao entre 100 e 150 mg.L-1
para os dois metais, o que corrobora os valores da Tabela 1.
Efeito da toxicidade de metais Zn(II) e Cr(VI) no A partir da anlise dos dados expostos na Tabela 2, confirma-se
crescimento micelial de Aspergillus niger que o fungo apresentou maior tolerncia ao Zn(II) do que ao Cr(VI),
em condies controladas, pois houve maior crescimento do fungo
De acordo com os resultados apresentados na Tabela 1, no hou- na presena de maiores concentraes de Zn(II) do que de Cr(VI),
ve inibio no crescimento do fungo em concentraes menores que ratificando a menor toxicidade de zinco para o fungo, j que este
50 mg Zn(II).L e 50 mg Cr(VI).L , acima desta, foi observado au-
-1 -1 um elemento essencial (DURUIBE; OGWUEGBU; EGWURUGWU,
mento progressivo da inibio do crescimento micelial do fungo com 2007), menos txico aos seres humanos que o cromo (NIES, 1999;
o aumento da concentrao dos metais. BRUINS; KAPIL; OCHME, 1999).

Tabela 1 Efeito da dosagem de metais na percentagem de inibio Tabela 2 Crescimento mdio do miclio de Aspergillus niger e taxa de
do crescimento micelial (PIC) do Aspergillus niger, em 144 horas de crescimento em cm.h1 nas concentraes de 0 a 500 mg.L-1, de Cr(VI)
crescimento e de Zn(II), em 144 horas de experimento
PIC (%) Crescimento Taxa de crescimento
Concentrao (mg.L-1) mdio (cm) (cm.h1)
Zn(II) Cr(VI) Concentrao (mg.L-1)
Zn(II) Cr(VI) Zn(II) Cr(II)
0 0,00 0,00
0 8,00 8,00 0,05 0,05
20 0,00 0,00
20 8,00 8,00 0,05 0,05
50 0,00 0,00
50 8,00 8,00 0,05 0,05
100 29,38 11,00
100 5,65 7,12 0,03 0,04
150 59,13 100,00
150 3,27 0,00 0,02 0,00
200 72,88 100,00
200 2,17 0,00 0,01 0,00
300 77,88 100,00
300 1,77 0,00 0,01 0,00
400 86,25 100,00
400 1,10 0,00 0,007 0,00
500 100,00 100,00
500 0,00 0,00 0,00 0,00
Pelo teste de Tukey as mdias no diferem significativamente (p < 0,05).

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Vale, M.S. et al

A partir de 100 mg.L-1, observou-se o incio da inibio no cresci- vegetativa, apresentou maior tolerncia aos metais, o que signi-
mento micelial do fungo, tanto para Zn(II) quanto para Cr(VI), o que fica que, apesar da inibio ser menor na fase vegetativa, o cresci-
reflete em menor taxa de crescimento micelial na presena de ambos mento do fungo no impedido pela presena destes metais na fase
metais (Tabela 2). germinativa.
A presena de metais pode alterar tambm a colorao tpica do A linhagem de fungo Aspergillus niger estudada apresentou nveis de
fungo (EZZOUHRI et al., 2009). No caso da Linhagem de Aspergillus tolerncia diferentes para Zn(II) e Cr(VI) e seu uso, para tratamento de
niger estudada, foi observado um clareamento da pigmentao do mi- efluentes poludos com metais, deve ser objeto de estudos posteriores.
clio, tanto na presena de Zn(II) como na de Cr(VI). Tais mudanas
so comuns em espcies fngicas.
Discusso
Em presena de 300 mg Zn(II).L-1, houve inibio do cresci-
mento micelial em 77,80% em relao ao controle (Tabela 2). Em Como zinco um elemento essencial para o metabolismo do
seus experimentos, Babich e Stotzky (1978), adicionaram 300 mg fungo (BABICH; STOTZKY, 1978; ANSARI; MARR; TARIQ, 2004;
Zn(II).L-1 ao meio de crescimento e observaram reduo de apro- GADD et al., 2001; JI; SILVER, 1995), este metal deve ter sido
ximadamente 50% no crescimento micelial do controle (sem zin- usado para atividades de germinao, o que pode ter favorecido
co), de Fusarium solani, Cunnighamella echinulata, Aspergillus niger maior desenvolvimento dos esporos na fase inicial da germinao.
e Trichoderma viride. Comparando com a linhagem de Aspergillus
Entretanto, no decorrer do experimento, foi observado que a ger-
niger estudada neste trabalho observou-se que a mesma foi menos
minao tornou-se lenta, como consequncia da inibio na fase
tolerante ao Zn(II) que a linhagem estudada por Babich e Stotzky
de esporulao, porm sem interromper completamente o desen-
(1978). Esta tolerncia pode ser consequncia do requerimento
volvimento. Gadd et al. (2001) tambm observaram diminuio
deste metal como micronutriente essencial ao metabolismo de
no desenvolvimento dos fungos de Trichoderma viride e Rizhopus
fungos e tambm na participao da sntese de enzimas.
arrhizus em presena de zinco e outros metais.
Tambm foram observadas diferentes taxas de crescimento do
O zinco ajuda a manter integridade de ribossomos, membra-
fungo em presena de Zn(II) e Cr(VI), indicando que a tolerncia
nas biolgicas e tambm requerido para o crescimento de mi-
do fungo aos metais depende do tipo e concentrao de metal e da
crorganismos; contudo, concentraes elevadas desse metal po-
sua capacidade de adaptao, fato que corrobora com o estudo de
dem ser inibitrias ou txicas para as atividades celulares e de
Zafar, Aqil e Ahmad (2007), no qual os autores verificaram que a
crescimento, causar inibio da respirao e da germinao dos
variao na tolerncia deve-se a um ou mais tipos de mecanismos
esporos (BABICH; STORTZKY, 1978).
de resistncia, os quais podem ser produo de enzimas, como a
A presena de metais pode alterar tambm a colorao t-
redutase (SRIVASTAVA; THAKUR, 2006a); imobilizao de me-
pica do fungo (EZZOUHRI et al., 2009). No caso da linhagem
tais por formao de complexo, como os quelatos; bioacumulao
ou biossoro; entre outros (AHMAD et al., 2005; GUIBAL et al., de Aspergillus niger estudada, foi observado um clareamento da

1992). Desse modo, no foi possvel identificar o mecanismo de pigmentao do miclio, tanto em presena de Zn(II) como em

resistncia atuante devido falta de estudos genticos e molecu- presena de Cr(VI). Tais mudanas so comuns em espcies
lares para os fenmenos de tolerncia e detoxificao de metais, fngicas.
apresentados por microrganismos. Segundo Srivastava e Thakur Foram observadas diferentes taxas de crescimento do fun-
(2006b) e Ezzouhri et al. (2009), a detoxificao de Cr(VI) por go em presena de Zn(II) e Cr(VI), indicando que a tolerncia
Aspergillus niger mediada por enzimas antioxidantes, tais como do fungo aos metais depende do tipo e concentrao de metal,
as peroxidases, a catalase e o ascorbato peroxidase. e da sua capacidade de adaptao, fato que corrobora o estudo
Pela anlise do teste de crescimento micelial do fungo na pre- de Zafar, Aqil e Ahmad (2007), no qual os autores verificaram
sena dos metais, observou-se maior concentrao, com cresci- que a variao na tolerncia deve-se a um ou mais tipos de meca-
mento micelial de 400 mg.L-1 tanto para o Cr(VI) quanto para o nismos de resistncia. Tais mecanismos podem ser produo de
Zn(II). Esse crescimento foi gradativamente inibido com aumento enzimas, como a redutase (SRIVASTAVA; THAKUR, 2006a), imo-
da concentrao de 0 para 400 mg.L-1 para os dois metais estuda- bilizao de metais por formao de complexo, como os quelatos,
dos. Entretanto, a inibio foi mais acentuada para o Cr(VI). bioacumulao ou biossoro, entre outros (AHMAD et al., 2005;
Como os esporos so estruturas muito resistentes, espera-se GUIBAL et al, 1992), no sendo possvel identificar o mecanismo
que a fase vegetativa, aquela na qual o miclio j est formado, de resistncia atuante devido falta de estudos genticos e mole-
como no caso dos discos de miclio, seja bastante resistente s culares para os fenmenos de tolerncia e detoxificao de metais,
condies adversas. Se comparado com o mesmo teste para fase apresentados por microrganismos. Segundo Srivastava e Thakur
germinativa, observou-se que o fungo Aspergillus niger, na fase (2006b) e Ezzouhri et al., (2009), a detoxificao de Cr(VI) por

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Efeito da toxicidade de Cr(VI) e Zn(II) no crescimento do fungo Aspergillus niger

Aspergillus niger mediada por enzimas antioxidantes, tais como O Aspergillus niger um microrganismo potencialmente aplicvel
as peroxidases, catalase e ascorbato peroxidase. para remoo de metais pesados de ambientes contaminados, ten-
do em vista que se mostrou tolerante a metais. Porm, estudos mais

Concluses aprofundados so necessrios.

A linhagem de Aspergillus niger estudada foi mais resistente ao Agradecimentos


Zn(II) do que ao Cr(VI). O fungo foi completamente inibido em con-
centraes acima de 500 mg Zn(II).L-1 e 150 mg Cr(VI).L-1. O ED50 Coordenao de Aperfeioamento de Pessoal de Nvel Superior
para os dois ons metlicos, nas condies estudadas, est na faixa en- (Capes), ao Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientfico e
tre 100 e 150 mg.L-1. O fungo apresentou maior resistncia aos metais Tecnolgico (CNPQ) Edital universal processo. 470628/2006-5 e
estudados, Zn(II) e Cr(VI), na fase vegetativa do que na germinativa. a Lubnor.

Referncias

ACKERLEY, D.F. et al. Chromate reducing properties of soluble DONG, D.; ZHAO, X.; HUA, X.; LIU, J.; GAO, M. Investigation of the
Xavoproteins from Pseudomonas putida and Escherichia coli, Applied potential mobility of Pb, Cd and Cr(VI) from moderately contaminated
and environmental microbiology, v. 70, p. 873-882, 2004. farmland soil to Groundwater in Northeast, China, v. 162, p. 1261-1268,
2009.
AHMAD, I.; ZAFAR, S.; AHAMAD, F. Heavy metal biosorption potencial os
Aspergillus and Rizopus sp. Isolated from wastewater treated soil, Journal of DURUIBE, J. O.; OGWUEGBU, M. O. C.; EGWURUGWU, J. N. Heavy
applied Sciences and Environmental Management, v.9, n.1, p.123-126, 2005. metal pollution and human biotoxic effects. International Journal of
Physical Science, v. 2, n.5, p. 112-118, 2007.
ANSARI, T. M.; MARR, I. L.; TARIQ, N. Heavy metals in marine pollution
perspective: a mini review. Journal of Applied Sciences, v. 4, n. 1, p. EDGINGTON, L. V.; KHEW, K. L.; BARRON, G. L. Fungitoxic spectrum of
1-20, 2004. benzimidazoles compounds, Phytopathology, v. 61, p. 42-44, 1971.

ARUNAKUMARA, K. K. I. U.; XUECHENG, Z. Heavy metal bioaccumulation ERRASQUN, E. L.; VZQUEZ, C. Tolerance and uptake of heavy metals
and toxicity with special reference to microalgae, Journal of ocean by Trichoderma atroviride isolated from sludge, Chemosphere, v. 50, p.
university of china, v. 7, p. 60-64, 2008. 137-143, 2003.

BALDRIAN, P. Interactions of heavy metals with white-hot fungi. Enzyme EZZOUHRI, L. et al. Heavy metal tolerance of filamentous fungi isolated
and Microbial Technology, v. 32, 78-91, 2003. from polluted sites in Tangier, Morocco, African journal of microbiology
research, v. 3, n. 2, p. 35-48, 2009.
BABICH, H.; STOTZKY, G. Toxicity of zinc to fungi, bacteria and coliphages:
Influence of chloride ions, Applied and environmental microbiology, v.36, FOUNTOULAKIS, M.S.; DOKIANAKIS, S.N.; KORNAROS, M.E.; AGGELIS
p. 906-914, 1978. G.G.; LYBERATOS, G. Removal of phenolics in olive mill wastewaters
using the white-rot fungus Pleurotus ostreatus, Water Research, v. 36,
BRUINS, M. R.; KAPIL, S.; OEHME, F. W. Microbial resistance to metals pp. 4735-4744, 2002.
in the environment, Ecotoxicology and Environmental Safety, v. 45, p.
198-207, 1999. GADD, G. M. Interactions of fungi with toxic metals, News Phytology, v.
124, p. 25-60, 1993.
CHAALAL, O; ZEKRI, A. Y.; ISLAM, R. Uptake of Heavy Metals by
Microorganisms: An Experimental Approach, Energy Sources, v. 27, p. _______. Metals and microorganisms: A problem of definition, FEMS
87-100, 2005. Microbiology Letters, v. 100, p. 197-204, 1992.

CHIPASA, K. B. Accumulation and fate of selected heavy metals in a GADD, G. M.; RAMSAY, L.; JOHN, W. C.; RITZ, K. Nutritional influence
biological wastewater treatment system, Waste Management, v. 23, p. on fungal colony growth and biomass distribution in response to toxic
135-143, 2003. metals, FEMS Microbiology Letters, v. 204, p. 311- 316, 2001.

Eng Sanit Ambient | v.16 n.3 | jul/set 2011 | 237-244 243


Vale, M.S. et al

GUIBAL, E; ROULPH, C; LECLOUREC, P. Uranium biosorption by the PASSOS, C. T.; BURKET, J. F. M.; KALIL, S. J.; BURKET, C. A. V.
filamentous fungus Mucor miechei, pH effect on mechanisms and Biodegradao de fenol por uma linhagem de Aspergillus niger SP.
performance of uptake, Water Resource, v. 26, n. 8, p. 1139, 1992. Isolada de um solo contaminado do sul do Brasil, Qumica Nova, v. 32,
n. 4, p. 950-954, 2009.
HAI, F. I.; YAMAMOTO, K.; FUKUSHI, K. Development of a submerged
membrane fungi reactor for textile wastewater treatment, Desalination, v. PATINO, L. C.; VELBEL, M. A.; PRICE, J. R.; WADE, J. A. Trace element
192, p. 315-322, 2006. mobility during spheroidal weathering of basalts and andesites in Hawaii
and Guatemala, Chemical Geology, v. 202, p. 343- 364, 2003.
HEINLAAN, M.; IVASK, A.; BLINOVA, I.; DUBOURGUIER, H. KAHRU,
A. Toxicity of nanosized and bulk ZnO, CuO and TiO2 to bacteria PORCEL, E. M. R.; LOPEZ, J. L.; PEREZ, J. A. S.; SEVILLA, J. M. F.;
Vibrio fischeri and crustaceans Daphnia magna and Thamnocephalus CHISTI, Y. Effects of pellet morphology on broth rheology in fermentations
platyurus, Chemosphere, v. 71, p. 1308-1316, 2008. of Aspergillus terreus, Biochemical Engineering Journal, v. 26, p. 139-
144, 2005.
HUHES, M. N.; POOLE, R. K. Metal speciation and microbial growth- the
hard (and soft) facts, Journal of General Microbiology, v. 137, p. 725-734, SANTAELLA, S.T. et al. Tratamento de efluentes de refinaria de petrleo
1991. em reatores com Aspergillus niger, Engenharia Sanitria Ambiental, v.14,
n.1, p. 139-148, 2009.
JI, G.; SILVER, S. Bacterial resistance mechanism for heavy metals of
environmental concern, Journal of Industrial Microbiology, v. 14, p. 2707- SANTOS, A. B. Avaliao tcnica de sistemas de tratamento de esgotos.
2708, 1995. Fortaleza: Banco do Nordeste do Brasil, 2007. 205 p.

KING, P.; RAKESH, N.; LAHARIA, S. B.; KUMARB, Y. P.; PRASAD, V.S.R.K. SRIVASTAVA, S.; THAKUR, I. S. Evaluation of bioremediation n and
Biosorption of zinc onto Syzygium cumini L.: Equilibrium and kinetic detoxification potentialy of Aspergillus niger for removal hexavalent
studies, Chemical Engineering Journal, v. 144, p. 181-187, 2008. chromium in soil microcosm, Soil Biology & Biochemistry, v. 38, p. 1904-
1911, 2006a.
KOVACEVIC, F.Z.; SIPOS, L.; BRISKI, F. Biosorption of chromium,
copper, nickel and zinc ions onto fungal pellets of Aspergillus niger 405 ______. Biosorption potency of Aspergillus niger for removal of chromium
from aqueous solutions, Food Technology and Biotechnology, v. 38, n. (VI). Current Microbiology, v.53, p. 232-237, 2006b.
3, 211-216, 2000.
SRIVASTAVA, S.; AHMAD, A. H.; THAKUR. I. S. Removal of chromium
LACERDA, L. M.; MALM, O. Contaminao por mercrio em ecossistemas and pentachlorophenol from tannery e Zuents, Bioresource Technology,
aquticos: uma anlise das reas crticas, Estudos avanados, v. 22, n. v. 98, p. 1128-1132, 2007.
63, p. 173-190, 2008.
URUNAKUMARA, K. K. I. U.; XUECHENG, Z. Heavy metal bioaccumulation
LEITE, M. A. Anlise do aporte, da taxa de sedimentao e da and toxicity with special reference to microalgae, Journal of Ocean
concentrao de metais na gua, plncton e sedimento do reservatrio University of China, v. 7, n. 1, p. 60-64, 2008.
de Salto Grande, Americana-SP. 2002. Tese (Doutorado) Cincias
da Engenharia Ambiental da Universidade de So Paulo, So Carlos, VALIX, M; LOON, L. O. Adaptative tolerance behavior of fungi in heavy
2002. metals, Minerals Engineering, v. 16, p. 193-198, 2003.

LUCAS, A.; RODRGUEZ, L.; VILLASEOR, J.; FERNNDEZ, F.J. VEGLIO, F.; BEOLCHINI, F. Removal biosorption: a review,
Fermentation of agro-food wastewaters by activated sludge, Water Hydrometallurgy, v.44, p.301-316, 1997.
Research, v. 41, p. 1635-1644, 2007.
WHITE, C.; SAYER, J. A.; GADD, G. M. Microbial solubilization and
MALIK, A. Metal bioremediation through growing cells, Environment immobilization of toxic metals: key biogeochemical processes for
International, v. 30, p. 261-278, 2004. treatment of contamination, FEMS microbiology reviews, v. 20, p. 503-
516, 1997.
MENTEN, J. O. M.; MACHADO, C. C.; MINUSSI, E.; CASTRO, C.; KIMATI,
H. Efeito de Alguns fungicidas no crescimento micelial de Macro- YIN, P.; YU, Q.; JIN, B.; LING, Z. Biosorption removal of cadmium from
phomina phaseolina (TASS.) GOID. In vitro, Fitopatologia Brasileira, aqueous solution by using pretreated fungal biomass cultured from
v.1, n.2, p. 57-66, 1976. starch wastewater, Water Resource, v. 33, p. 1960- 1963, 1998.

MICHALAK, I.; ZIEKINSKA, A.; CHOJNACKA, K.; MATULA, J. Biosorption YUN-GUO, L. et al. Removal of cadmium and zinc ions from aqueous
of Cr(II) by microalgae: equilibrium of the process. American Journal of solutions by living Aspergillus niger, Transactions of Nonferrous Metals
agricultural and biological sciences, v. 2, n.4, p. 284-290, 2007. Society, v.16, p.681-686, 2006.

MUKHOPADHYAY, M.; NORONHA, S. B.; SURAISHKUMAR, G. K. Kinetic ZAFAR, S.; AQIL, F.; AHMAB, I. Metal tolerance and biosorption potencial
modeling for the biosorption of copper by pretreated Aspergillus niger of filamentous fungi isolated from metal contamined agricultural soil,
biomass, Bioresource Techonology, v. 98, p. 1781-1787, 2007. Bioresource Technology, v. 98, p. 2557- 2561, 2007.

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