SELECCIN

EL ORGANISMO DEBE EXPRESAR LAS

PROPIEDADES DE INTERS EN EL AMBIENTE
DE DONDE SON AISLADOS
SELECCIN
1. La cepa a utilizar debe ser genticamente estable.
2. Su velocidad de crecimiento debera ser alta.
3. La cepa debe estar libre de contaminantes,
includos fagos.
4. Sus requerimientos nutricionales deberan ser
satisfechos a partir de medios de cultivo de costo
reducido.
5. Debe-ser de fcil conservacin por largos
perodos de tiempo, sin prdida de
sus caractersticas particulares.
6. Debera llevar a cabo el proceso fermentativo
completo en un tiempo corto.
7. Si el objetivo del proceso es un producto, ste
debera ser de alto rendimiento
y de fcil extraccin del medio de cultivo.
AISLAMIENTO
FUENTES:
Naturales (agua, suelo, plantas,
deshechos
Coleccin de cultivos
ATCC - USA
CNCM Francia
NRRL USA
NCTC-iNGLATERRA
TECNICAS DE AISLAMIENTO

a)Aislamiento directo (en placa)

(proceso debe ser lo mas rpido evitar
alteraciones de la capacidad de mo
Pruebas de antagonismo y de inhibicn
Deteccin de productores de factores de
crecimiento : aminocidos y
nucletidos(bacterias auxtrofas-
lisado del mo
TECNICAS DE AISLAMIENTO
b)Enriquecimiento del cultivo con o sin
pretratamiento de la muestra
Se favorece el crecimiento de un tipo de mo y se
perjudica el crecimiento de otros mo. Esto se
logra mediante sustratos especficos e
inhibidores.
NOTA: EL MO DE INTERS DEBE CONSTITUIR EL
CRECIMIENTO DOMINANTE EN EL CULTIVO PRIMARIO
TECNICAS DE AISLAMIENTO
FUENTE

CULTIVO PRIMARIO (SOLIDO O LIQUIDO)

CULTIVOS PERIODICOS EN MEDIOS FRESCOS

MO SELECCIONADO

PURIFICACION

CONSERVACION
CONSERVACION O MANTENIMIENTO DE LOS CULTIVOS

a) Preservar la pureza gentica del cultivo sin prdida de

ninguna de sus propiedades bioqumicas.

b) Preservar los niveles de su productividad inicial

c) Lograr que el cultivo pueda ser transportado y manejado

con facilidad.

Esto ltimo puede ser un factor esencial en la seleccin de un

mtodo de preservacin.
Tanto para el mantenimiento, preparacin y
propagacin de inculos se deben usar mtodos
reproducibles que no produzcan variaciones o prdidas
de las caractersticas de la cepa empleada.

Se debe conocer las caractersticas morfolgicas y bio

qumicas del mo

El conocimiento de las caractersticas del cultivo es

esencial en la eleccin de un mtodo de
preservacin.
IDENTIDAD DEL CULTIVO
CARACTERISTICAS DE CRECIMIENTO
EN UNO O MS MEDIOS ESPECFICOS
ENSAYOS BIOQUMICOS
INMUNOLGICOS
BIOLOGICOS
GENETICOS
EVALUACION DE TECNICA DE CONSERVACION
(Antes y despus de la conservacin)
-Cambios pigmentacin
-Cambios en la morfologa
-Reacciones fermentativas
-Propiedades microscpicas
-Recuento de colonias
METODOS DE CONSERVACION O MANTENIMIENTO
Subcultivos: Repique peridico en medio nutritivo
fresco y luego conservado a 4C (15 das y 2
meses)
Desventajas:
a) Incremento de la posibilidad de mutacin con
cada transferencia, con prdida de las
caractersticas del organismo;
b) riesgo de contaminacin;
c) alteraciones en el medio de cultivo, durante la
estada en fro (desecacin gradual del mismo
METODOS DE CONSERVACION O MANTENIMIENTO

Mantenimiento bajo capa de aceite : (t ambiente/4C por

varios aos
Cultivo en agar cubierto con aceite mineral o vaselina
estril (mutaciones despus de 3 aos de manteni
miento)

Congelacin: (se conservan por aos)

Congeladores domsticos -18C
Nitrogeno lquido )-196C
Sistemas de congeladores (-70C
Consideraciones para el congelamiento:
a)Cultivo en fase estacionaria y densidades
altas
b)Uso de crioprotectores: 5-20%
Glicerol 10%
DMSO
Glucosa, sacarosa, extracto de malta,
suero conejo
c) Cultivo distribuido en alcuotaas pequeas,
en recipienes bien sellados
Cultivo en tierra
Tierra estril + medio de cultivo= esporas bacilos
aerobios y anaerobios
CULTIVO EN MEDIO MINERAL ESTRIL Y SECO: SOLO PARA
ESPORAS (para que no germinen)

Preservacin en celulosa: (2 aos T amb)

clulas en papel filtro (suero, glutamato
de sodio, secadas al vaco

Liofilizacin: cultivo secado al vaco a -40C

Medios protectores:
Leche descremada 10 al 20%(+ a. ascrbico
Suero equino, mezclas de cuero
Glucosa, Extracto de levadura
Suero fetal bovino