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Caractristiques
Milieu proche du King A, favorise la production de pyocyanide.
Milieu relativement pauvre.
Acide nalixidique : inhibiteur des Gram
Ctrimide : inhibiteur des Grams + donc des Gram par extension.
Ensemencement en cadran.
Usage
Recherche des Pseudomonas, notamment Pseudomonas earuginosa.
Lecture
Incubation 24h 37C :
Dveloppement Pseudomonas aeruginosa et ventuellement Pseudomonas putida,
Pseudomonas stutzeri et Pseudomonas maltophilia.
Incubation 24h 42C :
Dveloppement presque exclusif de Pseudomonas aeruginosa.
Pyocyanine : milieu bleu
Pyoverdine : milieu jaune-vert indicateur de la prsence de Pseudomonas
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Caractristiques
Permet la croissance des bactries halophiles.
Trs forte concentration en NaCl permettant linhibition des Gram-
Permet ltude de lattaque du mannitol (si baisse du pH, alors teinte jaune)
Ensemencer richement en stries ou cadran.
Incubation : 24-48h
Usage
Isolement de Staphylococcus aureus.
Numration des staphylocoques.
Lecture
Si Staphylococcus aureus : colonie jaunes avec halo clair. Mannitol +
Les autres colonies sont Mannitol -.
Contamination possible par Enterococcus et certains Bacillus.
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Caractristiques
Cristal violet : inhibe les bactries Gram +
Dsoxycholate de sodium : inhibe les bactries Gram +
Slectionne les bactries Gram
Inoculation en cadran.
Usage
Isolement des entrobactries.
Lecture
Bactries lactose + : colonies jaunes (utilisation du lactose)
Bactries lactose - : colonies bleu-vert
Lexique
Mannitol : utilis pour tudier sa voie dattaque par les bactries (fermentation).
Bleu de Bromothymol : vert (basique) et jaune (acide)
Entrobactries : bactries se trouvant dans les cavits internes des tres vivants comme
lappareil digestif.
Rouge de phnol : rouge (basique) jaune (acide)
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Caractristiques
Sels biliaires : limitent le dveloppement des Gram +
Fuschine : vire au rose sil y a production daldhyde.
Favorise Salmonelle et Shigella du fait des peptones.
Mise en vidence de la production dH2S
Usage
Isolement des entrobactries pathognes : principalement pour vrifier la prsence de
Shigella et Salmonella.
Lecture
Aspect des colonies :
Attaque Production
H2S
glucide aldhyde
Saumon - + +
Saumon et
+ + +
centre noir
Bleu-vert - - -
Bleu-vert
et centre + - -
noir
Interprtation :
o Saumon : Escherichia, Levinea, Citrobacter, Klebsiella, Enterobacter, Serratia,
Yersinia.
o Saumon et centre noir : Proteus vulgaris.
o Bleu-vert : suspicion de Shigella ou Salmonella.
o Bleu-vert et centre noir : suspicion de Salmonella.
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Usage
Dtermination de la voie dattaque des Glucides, utiliss comme principale source
dnergie par les bactries.
Lutilisation du glucose acidifie le milieu, le BBT va alors virer au jaune.
Technique
Rgnrer les 2 tubes : cration gradient doxygne.
Les ramener 45C.
Ajouter aseptiquement quelques gouttes dune solution de glucose strile.
Concentration finale dans le tube environ 10g/L.
Agiter le tout pour rpartir le glucose dans tout le tube.
Solidifier les deux tubes en les plongeant dans leau froide.
Ensemencer chaque tube par piqre centrale avec la pipette Pasteur.
Recouvrir lun des deux tubes de paraffine ou vaseline strile.
Incubation 24h 37C.
Tube recouvert = tube ferm
Tube non recouvert = tube ouvert
NE PAS REVISSER A FOND LES BOUCHONS.
Lecture
Il peut y avoir formation de gaz par les bactries.
Rsultats aprs
Interprtation
cultures 24h 37C
Le glucose est
dgrad en
arobiose et en
anarobiose :
bactrie
fermentative du
glucose.
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Le glucose est
dgrad en
anarobiose
uniquement :
bactrie
fermentative du
glucose.
Utilisation du
glucose
uniquement en
arobiose :
bactrie
oxydative.
La bactrie
nutilise pas le
glucose : elle est
inerte vis--vis du
glucose.
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Composition King B
Mlanges dacides amins, facteurs de croissance : polypeptone
Glucide et drivs : glycrol
Autres molcules carbones : /
Indicateurs S2- : /
Inhibiteurs : /
Divers : /
Indicateurs de pH : /
Ions minraux : MgSO4 (sulfate de magnsium), K2HPO4 (hydrognophosphate de
potassium)
Agar : oui
Eau : oui
Caractristiques
La glose est incline dans un tube.
Ensemencement en stries.
Le chlorure de magnsium et le sulfate de potassium favorisent la production de
pyocyanine.
Le sulfate de magnsium et le phosphate bipotassique favorisent la production de
pyoverdine.
King A : recherche de production de pyocyanine.
King B : recherche de production de pyoverdine.
Usage
Identification des Pseudomonas par la prsence de pyocyanine ou de pyoverdine.
Technique
Inoculer un tube de milieu A et un tube de milieu B en faisant une strie mdiane la
surface de la glose avec une anse de culture prise dans un bouillon ou sur une glose.
Replacer la capsule sur chaque tube sans la reviser.
Lecture
Aspect aprs 24h minimum 30C :
o King A : culture colore en bleu-vert (pyocyanine +) et parfois en brun-rose
(pyoverdine +).
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Caractristiques
Sels biliaires : inhibiteur des Gram +
Cristal violet : inhibiteur des Gram +
Si la bactrie fermente le lactose, le milieu devient rouge du fait de lacidification du
milieu.
Ensemencement en cadrans.
Incubation 18 24h 37C
Usage
Dtermine si la bactrie fermente le lactose ou pas.
Utilis pour Shigella et Salmonella.
Lecture
Lactose + : colonies rouges entoures dun halo opaque de la mme couleur d la
prcipitation des sels biliaires.
Lactose - : colonies jaunes ou incolores.
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Caractristiques
Utilisable uniquement pour les bactries fermentives.
Ensemencement par piqre centrale au fil droit par pipette Pasteur.
Ne pas oublier de rgnrer le milieu et de le laisser refroidir.
Usage
Recherche de la dgradation du mannitol
Recherche de la mobilit de la bactrie.
Recherche de mobilit par prsence dune Nitrate rductase.
Lecture
Aspect aprs 24h
Interprtation
37C
Mannitol -
Mobilit -
Mannitol -
Mobilit +
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Mannitol +
Mobilit -
Mannitol +
Mobilit +
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Caractristiques
Il ny a pas de source de carbone : les bactries ne se multiplient pas. Il faut donc
lensemencer abondamment.
Absence de peptones : alcalinisation du milieu due lhydrolyse de lure.
Milieu complexe synthtique.
Fournit un ensemble de donnes permettant lidentification des entrobactries et
autres bactries.
Usage
Permet la recherche de 3 activits enzymatiques :
o Lurase
o La tryptophane dsaminase (TDA)
o La production dindole grce une tryptophanase.
Technique
Interprtation :
Toutes les bactries hydrolysent lure : O=C(NH2)2 + H2O H2N-COOH + NH3
Seules les bactries ayant une urase trs active arrivent : H2N-COOH CO2 + NH3
Le CO2 et le NH3 se combinent pour former du carbonate dammonium : CO2 + NH3
2NH4+ + CO32-.
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Interprtation :
En prsence de TDA, le tryptophane donne de lacide -indole peruvique. Ce dernier, en
prsence de perchlorure de fer donne une coloration brune.
o TDA + : coloration brune. Proteus, Providencia, Morganella
o TDA - : coloration jaune-orange.
Interprtation :
Grce une tryptophanase, les bactries peuvent dgrader le tryptophane en indole,
acide pyruvique et NH3.
o Indole + : anneau rouge
o Indole - : anneau brnatre.
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