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Identificationandquantificationofcannabinoidsinwholeblood
P.KINTZ*(1),V.CIRIMELE(1),G.PEPIN(2),P.MARQUET(3),M.DEVEAUX(4),PMURA(5)
TOXICORAMA1996,n2
(1)InstitutdeMdecineLgale,STRASBOURG
(2)Laboratoired'expertisesToxlab,PARIS
(3)ServicedePharmacologieetToxicologie,CHRUDupuytren,LIMOGES
(4)InstitutdeMdecineLgale,LILLE
(5)LaboratoiredeBiochimieetToxicologie,CHUPOITIERS
*Auteurquiadresserlacorrespondance:P.KINTZ
InstitutdeMdecineLgale11,rueHumann67000STRASBOURG
RSUM
Cet article prsente une mthode de chromatographie gazeuse couple la spectromtrie de masse pour
l'identification et la quantification du delta9THC et de son mtabolite principal l'acide 11nor delta 9 THC
COOHdanslesangtotal,2mldesangsontextraitsdansuneverreriepralablementsilanise,parlemlange
hexaneactate d'thyle (9: 1, v/v) en milieu acide (acide actique 10 %) en prsence de standards internes
deutrs.Aprsvaporation,l'extraitestmthyl,puisinjectdansunecolonnecapillaireHP5MS.Lesionsm/z
285,313et328sontutilisspourl'identificationetlaquantificationduTHCetlesionsm/z313,357et372pour
cellesduTHCCOOH.Leslimitesdequantificationsontrespectivementde1.0et0,5ng/mlpourleTHCetleTHC
COOH.
Motscls:Cannabis,dosage,sang,GC/MS.
SUMMARY
Amethodforcannabistestinginhumanwholebloodispresented.Theprocdureinvolvesacidextractionof2
mlspecimeninasilanizedvialinpresenceofdeuteratedinternalstandardsintohexaneethylacetate.Limitof
quantificationis1.0and0.5ng/mlforTHCandTHCCOOH,respectively
Keywords:Cannabis,assayblood,GC/MS
Introduction
Le delta 9ttrahydrocannabinol (THC) est le principe psychoactif extrait des plants femelles de Cannabis
sativa.Hormisl'alcooletletabac,c'estladroguelapluslargementconsommeaumonde.Troisformessont
disponiblessurlemarchavecdesconcentrationsenTHCtrsvariables:l'herbe(0,210%),larsine(520%)
etl'huile(4080%).LeTHCn'estpasunalcalode,puisquelamolculenecontientpasd'atomed'azote.Dans
lecadredesrflexionssurladpnalisation,leseffetspharmacologiquesduTHCsontlargementdiscuts,mais
ilsemblequ'uneseulecigarettesoitcapabledemodifierlavigilanced'unsujetpendant24heures(1).Lavoie
principaledemtabolisationestlaformationdedrivshydroxylspolaires,commele11OHTHCoul'acide
11nordelta9THCcarboxylique (THCCOOH), la plupart des mtabolites urinaires sont sous forme
glucuronoconjugue(6080%).Aucontraire,danslesang,lesformescirculantessontessentiellementlibres.
Danscesconditions,ilneserapasncessaired'hydrolyserleschantillonsplasmatiquesousanguins.
Plusieurstudes,tantenFrance(2)qu'l'tranger(3)ontmontrlaprvalenceduTHCchezlesconducteurs
impliqusdansdesaccidentsdelaroute.AfinderpondreauxproccupationsdesForcesdel'Ordreetdela
Justice, le laboratoire de Toxicologie Strasbourg a dvelopp une procdure analytique permettant
l'identification et le dosage simultan dans le sang total ( partir des chantillons pour la dtermination de
l'alcoolmie)duTHC,duTHCCOOHetdu11OHTHC.
Matrieletmthode
Ractifs
L'hexane,letolune,I'isooctane,lemthanoletl'actated'thylesontdequalitHPLC.Touslesautresractifs
sontdequalitpouranalyse.LeTHC,leTHCd3,leTHCCOOHetleTHCCOOHd3onttobtenusauprsdela
socit Promochem (Molsheim, France). Le 11OHTHC a t achet chez Sigma. La solution d'hydroxyde de
ttramthylammonium (TMAH, Fluka 87741) est prpare par solubilisation de 2,49 g de la forme
pentahydratedans5mld'eau.
Silanisationdelaverrerie:Afind'viterl'absorptiondescannabinodessurlaverrerie,ilconvientdemasquer
lessitesactifsparsilanisation.Prparerunesolutiondedimthyldichlorosilane(SigmaD3879)5%dansdu
tolune.Danslesflaconsextractionoudrivation,introduire13ml(selonlataille)decettesolution.Agiter
pendant10min.Rincerensquencepar5mldetolune,puismthanol,toluneetenfinmthanol.Scher20
min.80C.
RsuItats
L'ensembledesparamtresdevalidationestprsentdansletableau11.LalimitedequantificationduTHC1
ng/mlsembleraisonnableetsuffisantecomptetenudestudesantrieures.Laquantificationsimultanedu
THCetduTHCCOOHpermetd'accrotrelaspcificitdelamthode.Enoutre,leratioTHCCOOH/THCpermet
d'approcher le moment de la dernire exposition, selon l'quation Log T (en heures) = (0,576 x log THC
COOH/THC))0,176(4).
Larptabilitdelamthodeatvalueenanalysant8chantillonssurchargs5ng/mlenTHCetTHC
COOH.Lecoefficientdevariationestde8,9%pourleTHCetde6,3%pourleTHCCOOH.
Tableaul:Tempsdertentionetionsqualifiants
Lesionssoulignssontutilisspourlaquantification
TableauIl:Paramtresdevalidation
Rfrences:
(1)V.LeirerJ.Yesavage,D.Morrow
Marijuanacarryovereffectsonaircraffpilotpeformance.
Aviat.SpaceandEnviron.Med.,199,62,221.
(2)J.M.Schermann.
Evaluationdurisqued'accidentdelacirculationlil'absorptiondedroguesillicites.ConventionDirectionde
lascuritroutire.
Rapportfinal.23dcembre1992.
(3)J.Garriott,V.DiMaio,R.Rodriguez.
Detectionofcannabinoidsinhomicidevictimeandmotorvehiclefatalities.
J.ForensicSci.,1986,31,1274.
(4)M.Huestis,J.Henningfield,E.Cone.
Bloodcannabinoids.II.Modelsforthepredictionoftimeofmarijuanaexposurefromplasmaconcentrations
ofTHCandTHCCOOH.
J.Anal.Toxicol.,199216,283.