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PRACTICA 02

PROPIEDADES DE LAS PROTENAS

I. INTRODUCCIN
En los organismos se encuentran cuatro tipos diferentes de molculas orgnicas en gran
cantidad; carbohidratos, lpidos, protenas y nucletidos. Todas estas molculas
contienen carbono, hidrogeno y oxigeno. Adems, las protenas contienen nitrgenos y
azufre, y los nucletidos, as como algunos lpidos, contienen nitrgeno y fosforo.

En esencia, la qumica de los alientos es la qumica de los compuestos que contiene


carbono o sea, los compuestos orgnicos.

El carbono es singularmente adecuado para este papel central, por el hecho de que es
el tomo ms liviano capaz de formar mltiples enlaces covalentes. A raz de esta
capacidad, el carbono puede combinarse con otros tomos de carbono y con tomos
distintos para formar una gran variedad de cadenas fuertes y estables y ce compuestos
con forma de anillo. Las molculas orgnicas derivan sus configuraciones
tridimensionales primordialmente de sus esqueletos de carbono. Sin embargo, muchas
de las propiedades especficas dependen de grupos funcionales. Una caracterstica
general de todos los compuestos orgnicos es que libran energa cuando se oxidan.

Protenas
Es as que las protenas, debido al gran tamao de sus molculas pueden formar
soluciones coloidales si se les adiciona agua. Estas soluciones pueden precipitar con
formacin de cogulos al ser calentadas a temperaturas superiores a los 70C o al ser
tratadas con soluciones salinas, cidos, alcohol, etc. La coagulacin de las protenas es
un proceso irreversible, debido al proceso de desnaturalizacin que sufren; es decir
cambia su estructura nativa. La mayora de las protenas pierden su funcin cuando son
desnaturalizadas. Por ejemplo, cuando se cocina un alimento, algunas de sus protenas
se desnaturalizan. Es as que en la presente prctica se identifica, se observa reacciones
de desnaturalizacin y precipitacin de protenas.

II. OBJETIVOS
Reconocer cualitativamente las protenas presentes en muestras biolgicas.
Reconocer de aminocidos azufrados.
Identificar los factores que intervienen en la desnaturalizacin de protenas
Analizar la precipitacin de protenas por precipitacin de sales
Analizar la precipitacin de proteinas por adicin de aniones y cationes
Determinar el punto isoelctrico de la casena
III. MATERIALES Y REACTIVOS
- Tubos de ensayo
- Mechero
- Placas Petri
- Vasos precipitados
- Gradillas para tubos de ensayo

Reactivo

- SO4Cu2 al 1%
- Hidrxido de sodio al 40%
- Hidrxido sdico al 20%.
- Acetato de plomo al 5%.
- cido Clorhdrico al 1%
- Hidrxido de sodio al 3%
- Alcohol
- cido actico 0,01N
- cido actico 0,1N
- cido actico 1,0N
- NaOH 1N
- Solucin de clara de huevo al 10% en solucin salina.
- Solucin saturada de sulfato de amonio
- Cristales de sulfato de amonio
- Hidrxido de sodio al 10%
- Acetato de plomo al 2%
- Sulfato cprico al 2%
- Cloruro frrico al 2%

Del estudiante:

- Clara de huevo
- Solucin de almidn.
- Leche.

IV. METODOLOGA

4.1. Reconocimiento de protenas

Reaccin de biuret
Se debe a los componentes que presenta: el hidrxido de sodio y sulfato de cobre; el
cual el agente desnaturalizante de las protenas es el hidrxido y el reactante es el
sulfato de cobre. Las protenas despus de ser desnaturalizadas facilitan la interaccin
del cobre con los pares de electrones sin compartir del grupo amino del pptido
mediante enlaces de coordinacin con la formacin de un complejo coloreado purpura
violceo

El criterio para determina si la muestra de estudio resulta positiva o negativa, se debe a


que el reactivo, de color azul, cambia a violeta en presencia de protenas, y vira a rosa
cuando se combina con polipptidos de cadena corta. Por lo cual si la solucin final nos
da una coloracin violeta, se refiere a que se ha detectado una presencia de protenas
o mejor dicho de enlaces peptidicos.

Experimento:
- Rotular tres tubos, en el primero agregar 1 ml de albumina de huevo, en el segundo
tuvo leche y en el tercero la solucin de almidn.
- Anadir 0.5 ml de NaOH al 40% y 4 gotas de sulfato de cobre al 1% a cada tubo.

Tubos Clara de Leche Sol. NAOH 40% SO4CU2 1%


huevo Almidn
1 1 ml 0.5 ml 4 gotas
2 1 ml 0.5 ml 4 gotas
3 1 ml 0.5 ml 4 gotas
Observar la formacin de color violeta en los tubos que presentan protenas.

4.2. Reconocimiento de aminocidos azufrados.


Se basa esta reaccin en la separacin mediante un lcali, del azufre de los aminocidos,
el cual al reaccionar con una solucin de acetato de plomo, forma el sulfuro de plomo.

Tubo 1 Tubo 2
Albmina de huevo 2 ml 2 ml
Hidrxido sdico al 20%. 2ml 2ml
Acetato de plomo al 5%. 10 gotas 10 gotas

Calentar el tubo hasta ebullicin.


Si se forma un precipitado de color negruzco nos indica que se ha formado sulfuro de
plomo, utilizndose el azufre de los aminocidos, lo que nos sirve para identificar
protenas que tienen en su composicin aminocidos con azufre.
4.3. Desnaturalizacin de protenas
Las cadenas de protenas que hay en la clara de huevo son protenas globulares y por
ejemplo al juntarlo con el alcohol, este hace que las protenas cambien su estructura
globular. Lo mismo sucede si se pone a frer o a cocer dicha clara. Este proceso se
conoce con el nombre de desnaturalizacin.

Componentes Tubo
1 2 3 4
Clara de huevo 2 ml 2 ml 2 ml 2ml
Agua 2ml
Acido 2ml
Clorhdrico al
1%
Hidrxido de 2ml
sodio al 3%
Alcohol 2ml

4.4. Precipitacin de protenas por precipitacin de sales


El sulfato de amonio es una de las sales ms utilizadas para la precipitacin salina de
protenas. Es muy soluble y el ion sulfato divalente permite alcanzar altas fuerzas
inicas. Las protenas en solucin son menos solubles cuando se aumenta la fuerza
inica y esto se puede lograr adicionando sales solubles como el sulfato de amonio
((NH4)2SO4).

Las protenas, como otros coloides son precipitadas por soluciones concentradas de
sales de amonio [NaCl. (NH4)2SO4 y NaSO4]. Aparentemente la precipitacin se debe a
la neutralizacin y deshidratacin de la molcula, seguida de agregacin y precipitacin.

Esta tcnica se basa en la solubilidad o insolubilidad de las protenas en una solucin de


sulfato de amonio. La sal extrae el agua unida a las protenas y por tanto estas precipitan
al perder solubilidad. Es as que la albumina precipita nicamente si la solucin en la
que se encuentra es saturada con sulfato de amonio, mientras que las globulinas
precipitan cuando la solucin se encuentra en un 50% (m/V) de concentracin de sulfato
de amonio.
Componentes Tubo
1 2 3 4
Solucin de 2,5 ml 2,5 ml 2,5ml 2,5ml
clara de huevo
al 10% en
solucin salina.
Solucin 2,5ml 2.5ml
saturada de
sulfato de
amonio
Cristales de 2.5 ml 2.5 ml
sulfato de
amonio

Filtre
Vierta 3 ml del filtrado en otro tubo de ensayo.
Aada sulfato de amonio en cristales hasta saturar la solucin
Observe

4.5. Precipitacin de proteinas por adicin de aniones y cationes

Toda proteina si se encuentra en una solucin a un pH por dedajo de su punto


isoelectrico, tiene carga positiva y reacciona con aniones de acidos. La ovoalbumina
(albumina presente en clara de huevo ) tiene un punto isoelectrico alrededor de 4.7.
si a una solucin de esta proteina se le agrega un acido, el pH disminuye y los
aniones reaccionan con la ovoalbumina; el producto es insoluble en la solucin y
precipita.

Por el contrario, si la proteina se encuentra en una solucin a un pH mayor de su


punto isoelectrico, tiene carga negativa y, en este caso reacciona con cationes de
metales; el producto tambien precipita.

Componentes Tubo
1 2 3 4
Solucin de 2,5 ml 2,5 ml 2,5ml 2,5ml
clara de huevo
al 10% en
solucin salina.
Hidrxido de 1 gota 1 gota
sodio al 10%
Acetato de 1 ml
plomo al 2%
Sulfato cprico 1 ml
al 2%
Cloruro frrico 10 gotas 10 gotas 10 gotas 10 gotas
al 2%

4.6. Determinacin de punto isoelctrico de la casena

El pH en el que precipitan las protenas se denomina punto isoelctrico (pI), ya que


se encuentran en el equilibrio las cargas positivas y negativas presentando una carga
neta de 0 y la protena presenta su mxima posibilidad para ser precipitada ya que
la partculas se agregan. Debido a la composicin en aminocidos de la protena, los
radicales libres pueden existir en tres formas dependiendo del pH del medio:
catinicos, neutros y aninicos, y as cada protena tendr un pI diferente.

Aislamiento de la casena:

Caliente en un vaso de precipitados 150ml de agua destilada a 38 C, aada 50ml de


leche y luego gota a gota y con agitacin, adicione cido actico 2M hasta que
observe que se forma un precipitado (la leche se corta). Deje sedimentar, decante y
filtre sobre papel de filtro rpido, luego lave el precipitado con 20ml de etanol en el
mismo filtro y seque el precipitado colocando varias toallas de papel absorbente.
Luego adicione al 5 ml de ter de petrleo y homogenice bien. Decante el
sobrenadante y seque el precipitado en papel filtro dentro de una estufa a 60C.

Preparacin de la casena:

Coloque 250 mg de casena en un erlenmeyer de 150ml, agregue 20ml de agua


destilada y 5 ml de NaOH 1N; agite hasta lograr una solucin total de la casena.
Una vez disuelta la casena, adicione 5 ml de cido actico 1N y diluya con agua
destilada hasta 50ml y mezcle bien. La solucin debe ser clara y limpia y si no es
as, debe volver a filtrar.

En nueve tubos de ensayo limpio y seco adicione exactamente los volmenes de


los reactivos segn la siguiente tabla:
Confirme el valor de pH resultante de cada tubo con un potencimetro o con papel
indicador universal. Luego agregue a cada tubo 1ml de la solucin de casena, agite
inmediatamente el contenido del tubo y djelo reposar durante 20 minutos.

El mayor grado de turbidez, significa que hay un mayor contenido de precipitado y


ser el valor de pH ms cercano al punto isoelctrico de la protena.

V. Resultados y discusiones
VI. Conclusiones
VII. Bibliografa.