UNIVERSIDAD VERACRUZANA

 

 

FACULTAD DE QUÍMICA FARMACÉUTICA BIOLÓGICA
 

Validación del método analítico por HPLC para
disolución de levonorgestrel 1.5 mg grageas
 

TESIS
 

QUE PARA OBTENER EL TITULO DE:

QUÍMICO FARMACÉUTICO BIÓLOGO
 

PRESENTA

BERTHA ANGELICA HERNANDEZ BALLESTEROS

DIRECTOR EXTERNO:

Q.F.B. JORGE ANTONIO CAMPOS CAMPOS

DIRECTOR INTERNO:

DR. LUIS MORALES DE LA VEGA

Xalapa-Enríquez.,Ver. ENERO/2014
 

 

 

AGRADECIMIENTOS:

En primer lugar a Dios por haberme acompañado a lo largo de mi carrera, por ser mi fortaleza en los
momentos de debilidad y por brindarme una vida llena de aprendizajes, experiencias y sobre todo
felicidad.

Quiero expresar mi más profundo agradecimiento al Dr. Luis Morales de la Vega y al Q.F.B. Jorge
Antonio Campos Campos mis asesores de tesis por su entrega de conocimientos y preocupación
otorgadas desinteresadamente, además del tiempo, apoyo, guía y comprensión.

A los integrantes del Comité de Tesis: Q.F.B. Izmit Camacho de la Cerda, Q.F.B. Mauro Villanueva
Lendechy, M.F. Magda Olivia Pérez Vázquez, Q.F.B. Guadalupe Magaña Pérez por su paciencia y
comprensión.

Al Director de Planta Q.F.B Jorge Rico y al Gerente de Control de Calidad Q.F.B. Rosa Martha
Santamaría Uribe por las facilidades prestadas en la realización de este trabajo en el Laboratorio de
Control Fisicoquímico del Área de Control de Calidad, Planta Farma Orizaba de Bayer de México S.A.
de C.V.

A mis hermanos: Ana Lilia, María Elena, Miguel Antonio, Jorge Luis, José Juvenal que son parte
primordial en mi vida por todo su apoyo, cariño y comprensión, a mis sobrinos Arantxa e Irving Yair
por impulsarme a realizar cosas nuevas y ser mejor cada día.

A los grandes amigos con los que tuve la oportunidad de compartir toda esta aventura: Alejandro,
Aracely, Rosario, Michelle, Amada Guadalupe, César, Juan Carlos, Carlos Sánchez, Oswaldo, Sixto,
Irma, Francisco, Carlos Hernández, Patricia, Catalina, Berenice, Abigail por todo el apoyo
incondicional y a todos mis demás compañeros de la carrera sin ellos el camino no hubiese sido
divertido.

ii 

 

MI MADRE Y MI PADRE Han visto pasar mi vida estando allí en cada momento. Por tantas cosas Gracias una vez más iii    .DEDICATORIA: A los dos pilares y grandes seres humanos que me han dado lo más hermoso que tengo la vida y una gran familia. Han sabido hacer de mí una mujer que se ha sentido siempre tan envuelta en cariño y comprensión para contar lo que cualquier hijo esconde. Ni un consejo sin razón encuentro en una colección de mil momentos que quedaran ahí grabados. Prueba de un amor eterno que dará siempre alimento a una vida que dos personas crearon.

INDICE
                     

  Pág. 
INDICE.……………………………………………………………………………………………………………………………………  iv 
LISTA DE  TABLAS......………………………………………………………………………………………………………………  v 
LISTA DE FIGURAS ………………………………………………………………………………………………………………….  vi 
RESUMEN……………………………………………………………………………………………………………………………….    1 
ANTECEDENTES.……………………………………………………………………………………………………………………..     2 
1. INTRODUCCIÓN………………………………………………………………………………………………………………….    4 
    1.1 VALIDACION………………………………………………………………………………………………………………….   4 
          1.1.1 CRITERIOS DE VALIDACION A ESTUDIAR EN FUNCION DEL TIPO METODO…………….   5 
    1.2 CALIFICACION DEL INSTRUMENTAL……………………………………………………………………………….   8 
          1.2.1 ETAPAS DE UNA CALIFICACION……………………………………………………………………………..   8 
    1.3 DISOLUCION………………………………………………………………………………………………………………….  10 
    1.4 LEVONORGESTREL…………………………………………………………………………………………………………  15 
          1.4.1 PROPIEDADES FARMACOLOGICAS………………………………………………………………………..  18 
2. JUSTIFICACION……………………………………………………………………………………………………………………  19 
3. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA………………………………………………………………………………………  20 
4. OBJETIVOS………………………………………………………………………………………………………………………….  21 
DIAGRAMA DE TRABAJO…………………………………………………………………………………………………………  22 
5. PARTE EXPERIMENTAL………………………………………………………………………………………………………..  23 
    5.1 CALIBRACION MECANICA DEL DISOLUTOR SOTAX  Y HANSON………………………………………  23 
    5.2 CALIBRACION ANALITICA DEL DISOLUTOR SOTAX  Y HANSON……………………………………….  29 
    5.3 METODOLOGIA  DISOLUCION DE LEVONORGESTREL (HPLC)………………………………………….  32 
           5.3.1 PROCEDIMIENTO DE DISOLUCION………………………………………………………………………..  34 
           5.3.2 EVALUACION DE LAS CONDICIONES DE DISOLUCION DEL PRINCIPIO ACTIVO……….  38 
           5.3.3 VALIDACION DEL METODO ANALITICO POR HPLC………………………………………………… 39 
6. RESULTADOS………………………………………………………………………………………………………………………  42 
7. DISCUSIÓN………………………………………………………………………………………………………………………….  57 
8. CONCLUSIONES………………………………………………………………………………………………………………….  58 
9. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS………………………………………………………………………………………….. 59 
ANEXO  I MATERIAL Y EQUIPO UTILIZADO EN LA CALIBRACION MECANICA DEL DISOLUTOR   
          SOTAX Y JANSON……………………………………………………………………………………………………..    63 
ANEXO  II VALORES DE LA DISTRIBUCION “t” DE DUNNET………………………………………………………     65 
ANEXO III CERTIFICADOS DE LOS MATERIALES Y EQUIPOS UTILIZADOS …………………………………  66 
 
 
 

 

 

 
iv 

 

LISTA DE TABLAS

    Pág. 
Tabla 1 Parámetros de desempeño analíticos en función del método analítico aplicado……………… 6
Tabla 2 Parámetros a evaluar en un sistema HPLC………………………………………………………... 10
Tabla 3 Especificación mecánicas disolutor Sotax AT7 y Hanson SR8 Plus……………………………. 23
Tabla 4 Especificaciones de dimensiones disolutor Sotax AT7 y Hanson SR8 Plus …………………… 23
Tabla 5 Límites de porcentaje disuelto de tabletas USP Tipo No Desintegrantes de Ácido salicílico… 29
Tabla 6 Límites de porcentaje disuelto de tabletas USP Tipo Desintegrantes de Prednisona………… 29
Tabla 7 Condiciones de ensayo del método de disolución de levonorgestrel grageas.………………… 34
Tabla 8 Verificación de temperatura del medio de disolución lauril sulfato de sodio 0.1% en HCl 0.1N 42
Tabla 9 Bamboleo de las varillas y paletas agitadoras disolutor Sotax AT7.…………………………….. 43
Tabla 10 Bamboleo de las varillas con canastillas disolutor Sotax AT7……………………………………. 43
Tabla 11 Velocidad de giro de las paletas agitadoras disolutor Sotax AT7 ……………………………….. 43
Tabla 12 Velocidad de giro de las varillas con canastas disolutor Sotax AT7 …...……………………….. 44
Tabla 13 Criterios de aceptación de las dimensiones de las paletas del disolutor Sotax AT7…………. 44
Tabla 14 Resultado de dimensiones de las paletas disolutor Sotax AT7 ……………...…………………. 44
Tabla 15 Resultados de disolución de tabletas de Prednisona……………………………………………... 45
Tabla 16 Resultados de disolución de tabletas de Ácido salicílico…………………………………………. 45
Tabla 17 Resultados de temperatura del baño y velocidad de agitación………………………………...... 46
Tabla 18 Resultados de vibración, altura, diámetro interno de los vasos y temperatura del medio de
disolución……………………………………………………………………………………………….. 46
Tabla 19 Dimensiones de las paletas agitadoras disolutor Sotax AT7 ………...…………………………. 46
Tabla 20 Resultados de disolución tabletas de prednisona…………………………………………………. 47
Tabla 21 Resultados de disolución tabletas de Ácido salicílico……………………………………………... 47
Tabla 22 Perfil de disolución de levonorgestrel grageas 1.5 mg ..………………………………………….. 48
Tabla 23 Selectividad de los componentes relevantes, respuestas en tiempo de retención…………….. 49
Tabla 24 Evaluación respuesta en unidades de área del estándar de levonorgestrel …………………… 52
Tabla 25 Porcentaje de recuperación………………………………………………………………………….. 53
Tabla 26 Linearidad del sistema………………………………………………………………………………... 53
Tabla 27 Estabilidad de la muestra tiempo 0 y 24 h de almacenamiento………………………………….. 55
Tabla 28 Intervalo de confianza………………………………………………………………………………… 56
Tabla 29 Comparación de resultados de disolución Sotax (Equipo 1)/Hanson (Equipo 2).……………… 56
     

 

LISTA DE FIGURAS

    Pág. 
Figura 1 Instrumento de verificación de distancia de la paleta agitadora del disolutor…………. 25
Figura 2 Ajuste de laminillas del cople de la paleta agitadora …………………………………….. 25
Figura 3 Instrumento de verificación de bamboleo de la paleta agitadora...…….………………. 26
Figura 4 Medición de la velocidad de giro de las paletas agitadoras……………………………... 26
Figura 5 Medición del bamboleo a la altura de la varilla con canasta…………………………….. 27
Figura 6 Medición del bamboleo a la altura de la canasta…………………………………………. 27
Figura 7 Medición de la velocidad de giro de las varillas con canastas…………………………. 28
Figura 8 Esquema de trabajo de la válvula de 6 vías en el HPLC………………………………… 37
Figura 9 Verificación de la distancia de las varilla paletas agitadoras……………………………. 42
Figura 10 Gráfica del perfil de disolución de levonorgestrel disuelto en intervalos de 15 a 45
minutos………………………………………………………………………………………… 48
Figura 11 Cromatograma de la solución blanco………………………………………………………. 50
Figura 12 Cromatograma de la solución placebo…………………………………………………….. 50
Figura 13 Cromatograma de la solución estándar……………………………………………………. 51
Figura 14 Cromatograma de la solución muestra…………………………………………………….. 51
Figura 15 Gráfica de regresión lineal de Levonorgestrel…………………………………………….. 54

vi 

 

previo al inicio de la validación. altura de los aparatos 1 y 2 con respecto al fondo del vaso.75 mg. Como parte del Plan de validación del método analítico para disolución de PAE 1. RESUMEN La validación de un método analítico. linealidad del sistema.7% y finalmente en la tolerancia se obtuvo un valor de 1.PLM02209.0%. así como también la calibración analítica de las tabletas desintegrantes y no desintegrantes cumplen con los límites establecidos en los certificados de dichas tabletas. es estable ya que después de 24 horas de almacenamiento se obtuvo un porcentaje de disolución de 100. Definidas las condiciones. es precisa ya que para la repetibilidad se obtiene una RSD de 0. En los cuales cumplen los parámetros de temperatura. En cuanto a los parámetros de validación se demuestra mediante los procedimientos estadísticos empleados. porque los excipientes de la formulación no interfieren en la determinación del principio activo ya que no se detecta ninguna respuesta significativa en el cromatograma.999311. se realizó un ensayo de adecuación del sistema. Se realizó una revisión de la documentación de los equipos y materiales que fueron utilizados durante la validación los cuales se encontraban calibrados y/o calificados. precisión del método. con el cual se comprobó el buen funcionamiento del sistema de bombeo. y para la reproducibilidad se obtiene una RSD de 0. VP_PV.5%. precisión del sistema.4%. estabilidad de la muestra y tolerancia. bamboleo. Se presentan los resultados obtenidos en la validación del método analítico por cromatografía líquida de alta resolución (HPLC). constituye un instrumento importante para garantizar la calidad del medicamento. Así mismo se realizó la calibración química y mecánica de los disolutores de acuerdo al procedimiento No. comprimido recubierto.PLM00711. A33108 con fecha de emisión del 25. la diferencia de los valores promedio entre ambos equipos es menor de 3. En el presente trabajo se demostró la aplicabilidad del método analítico de Casa Matriz por cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) para la determinación de levonorgestrel en la disolución de grageas (de acuerdo al reporte de validación del método de disolución evaluado No. S.07.5%. vibración. que el método analítico es selectivo.5 mg y 0. velocidad de giro y dimensiones. inyector. 1    . No. es lineal porque se obtiene un coeficiente de correlación r= 0. se analizaron los parámetros: selectividad. De esta manera se comprobó experimentalmente la utilidad del procedimiento establecido para la validación del método analítico. utilizada para pruebas de liberación y estudios de estabilidad.07 de Casa Matriz). horno y detector.

75 mg administrada poco después de un coito sin protección era. y la validación constituye un instrumento importante a este respecto. por lo que necesita de un vehículo. a una condición de pH ácida.5 mg grageas. actúa siempre buscando mejorar la calidad del medicamento a lo largo del proceso que lo crea. Por otra parte los métodos analíticos deben validarse para cumplir con las exigencias contempladas en la Comisión Federal para la Protección contra Riesgos Sanitarios (COFEPRIS) de acuerdo a las Buenas Prácticas de Fabricación (NOM-059-SSA1-2006). de C. estos primeros estudios sugirieron que el levonorgestrel podrá ser útil en anticoncepción de emergencia postcoital. que el medicamento cumpla los parámetros de calidad establecidos. Una característica del Levonorgestrel es que es un activo prácticamente insoluble en agua. La industria farmacéutica consiente de su alta responsabilidad. puesto que le confiere fiabilidad a los resultados obtenidos en el análisis..A. 1994. el medicamento seguro. Por lo que fue necesario realizar la validación del método de análisis por cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) para levonorgestrel 1. la cual deriva de la hormona masculina testosterona. este origen hace que tenga una acción dual. en este caso un surfactante (tensoactivo) como lauril sulfato de sodio. A principios de los años 70. El levonorgestrel fue la base de los primeros anticonceptivos orales combinados y también es usado para la llamada Anticoncepción de Emergencia o Píldora el Día Después. Esta validación ha sido realizada en el Laboratorio de Control Fisicoquímico del Área de Control de Calidad. ANTECEDENTES La validación garantiza la calidad del medicamento. 68). el cual garantizará que los resultados que se obtendrán son confiables. estable y eficaz.V. Sin embargo presentaba una alta incidencia de alteraciones menstruales al usarse como anticoncepción postcoital de rutina. es por un lado similar a la hormona femenina progesterona y por otro lado tiene efectos masculinizantes que antagonizan la acción de las hormonas femeninas (L. pág. que permita la solubilidad del activo en el agua. 2    . Planta Farma Orizaba de Bayer de México S. eficaz para prevenir el embarazo. El objetivo es uno y es importante conseguirlo plenamente. es un compuesto químico sintético derivado de la 19-nortestosterona. Sin embargo. asegurando así. investigadores de varios países comenzaron a realizar estudios con dosis variables de levonorgestrel para su uso de anticoncepción postcoital de rutina los resultados de los primeros estudios mostraron que una dosis única de 0. esto es.

sistema o proceso. en el método analítico y en la calidad de los resultados. La Validación de un método analítico contribuye a garantizar la calidad del medicamento. debido a su insolubilidad tiende a contrarrestar la tendencia del otro. con evidencia convenientemente documentada. que un método. es así como el antagonismo entre estas dos secciones de su molécula y el equilibrio entre ellas es la que da al compuesto sus propiedades activas de superficie. con el consiguiente ahorro de los costos asociados y consecuentemente cumplir con los plazos previstos de análisis. confiables y adecuadas para tal fin. Un laboratorio de análisis debe tener como uno de sus propósitos principales la producción de datos analíticos de alta calidad por medio del uso de mediciones analíticas que sean precisas. sin las cuales un determinado producto no sería utilizado por los consumidores. que puedan provocar la inmediata retirada del producto incluso el cierre del Laboratorio fabricante. Este propósito puede alcanzarse de una manera eficaz si se cuenta con un sistema planificado y documentado de la calidad de las actividades. además de que permite un conocimiento profundo del método. así mismo es necesaria porque proporciona un alto grado de confianza. 3    . Este conocimiento y seguridad en el método analítico que ha sido validado se traduce en: disminución en el número de fallas y repeticiones. al igual que en otras industrias. El grupo hidrófilo ejerce un efecto solubilizante y tiende a llevar a la molécula a disolución completa. El consumidor es especialmente sensible a los productos farmacéuticos y los laboratorios fabricantes cuidan mucho la calidad de estos. dentro de intervalos definidos”. que impone una exigencia de calidad. El grupo hidrófobo. así como de sus características de funcionamiento. ya que cualquier deficiencia puede originar problemas sanitarios. está sometida a las reglas del mercado. en ocasiones graves. en cambio. cumple y se desarrolla tal y como estaba previsto. La industria farmacéutica. Por todo esto es muy importante el llevar a cabo la validación de los métodos analíticos ya que “Validar es comprobar y certificar. Las propiedades generales y comportamiento de los agentes tensoactivos se deben al carácter dual de sus moléculas (grupo hidrófilo y lipófilo).

Para asegurar la confiabilidad. (61)(62) La validación del método ayuda a confirmar la calidad del medicamento. que puede ser de carácter prospectivo o retrospectivo y comprobar si el método es lo suficientemente confiable y si los resultados previstos se obtienen dentro de las especificaciones de identificación y cuantificación del principio activo que compone al medicamento y no al análisis completo de las especificaciones que este debe cumplir. los métodos analíticos se someten a un proceso de validación (45). que impone una exigencia de calidad. La industria farmacéutica consciente de su alta responsabilidad. Para el cumplimiento de las buenas prácticas de laboratorio (NOM-059) de la validación (62) (66) es un requisito imprescindible que está establecido por agencias regulatorias (59) (60) y por comisiones de Farmacopeas para el registro de los medicamentos. Este propósito puede alcanzarse de una manera eficaz si se cuenta con un sistema planificado y documentado de la calidad de las actividades. está sometida a las reglas del mercado. sin las cuales un determinado producto no sería utilizado por los consumidores. Este control debe realizarse de acuerdo con especificaciones establecidas y comprobadas durante la elaboración del producto. al igual que en otras industrias. (41) Un laboratorio de análisis debe tener como uno de sus propósitos principales la producción de datos analíticos de alta calidad por medio del uso de mediciones analíticas que sean precisas. De aquí viene la importancia de la validación.1. así como también para los ya existentes en el mercado es imprescindible la utilización de un método analítico que permita cuantificar el producto mayoritario en forma de materia prima o como principio activo de una formulación. distribución y venta. Cualquier deficiencia puede originar problemas sanitarios. que puedan provocar la inmediata retirada del producto incluso el cierre del laboratorio fabricante.1 VALIDACION El control analítico de un producto farmacéutico o de sus ingredientes es necesario para asegurar su eficacia y seguridad durante todas las etapas de su período de vida útil incluyendo su almacenamiento. (4) 1. por lo tanto. (34) 4    . confiables y adecuadas para tal fin. puesto que le confiere fiabilidad a los resultados obtenidos en el análisis. La industria farmacéutica. es necesario definir debidamente tanto las condiciones en que la metodología ha de emplearse como el objetivo previsto para la misma. El laboratorio necesitará operar bajo un sistema de garantía de calidad que incluya una extensa documentación de sus actividades (34) siguiendo las Buenas Prácticas de Laboratorio y las Buenas Prácticas de documentación. actúa siempre buscando mejorar la calidad del medicamento a lo largo del proceso que lo crea y la validación constituye un instrumento importante a este respecto. INTRODUCCION Para el desarrollo químico-farmacéutico de un nuevo medicamento. en ocasiones graves. pues su objetivo principal es el de asegurar que una metodología analítica seleccionada dará resultados reproducibles y confiables que sean adecuados para el propósito previsto.

se traduce en: disminución en el número de fallas y repeticiones.1. Corresponde a realizar pruebas o ensayos a un equipo que es vital en un proceso de fabricación. Precisión.1 Criterios de Validación a estudiar en función del tipo de Método Analítico El procedimiento de los ensayos varía de acuerdo a las determinaciones que se quieren evaluar. Límite de Cuantificación. Considerando esta variedad para los ensayos. es lógico que diferentes métodos requieran diferentes esquemas de validación. los procedimientos. La validación de un método analítico se fundamenta en la determinación de estos parámetros. Las características de desempeño analítico habituales que deben considerarse en la validación de un método analítico son (40): Exactitud. que las características de desempeño de la metodología cumplen los requisitos para las aplicaciones analíticas previstas (40). Linealidad. La etapa previa a la validación de un método analítico. sistemática y documentada de que el equipo es el más adecuado para los fines previstos. exacta y precisa bajo los rangos especificados. La calificación de equipos es establecer evidencia documentada de que un equipo funciona correctamente. La Validación de un método analítico que garantiza la calidad del medicamento. es decir. Selectividad. comparar los resultados contra especificaciones o normas de calidad internacionales o nacionales y así determinar si es apto para asegurar un producto final de calidad. y que los resultados son altamente confiables. con el consiguiente ahorro de los costos asociados y consecuentemente cumplir los plazos previstos de análisis. Este conocimiento y seguridad en el método analítico que ha sido validado.  Permite un conocimiento profundo del método. asegurándonos que es lineal. la calificación de los equipos utilizados durante el desarrollo del proceso. 1. Intervalo. a continuación de describen los más comunes: 5    . Límite de Detección. seguridad en el método analítico y en la calidad de los resultados. el personal y la materia prima involucrados en él. Es la comprobación formal. así mismo es necesaria porque:  Proporciona un alto grado de confianza. La calificación es una premisa necesaria para poder validar. así como de sus características de funcionamiento. Para llevar a cabo la misma se procede a la calibración del equipo y a la comprobación de métodos y sistemas. que se aplican de acuerdo con la categoría a la que pertenezcan. La validación de un método analítico es el proceso que establece por medio de estudios de laboratorio. corresponde al estudio de todo aquello involucrado en el proceso que pueda afectar la calidad del producto final.

TIPO II Métodos analíticos para la determinación de impurezas en un granel de sustancias o componentes de degradación en producto terminado. TIPO III Método analítico para determinar las características de selectividad. Se realiza para asegurar la identidad de un analito en una muestra comparando con un estándar de referencia. Cualquiera de los dos pretende reflejar las características de pureza de la muestra.TIPO I Métodos analíticos para cuantificar el componente activo o componentes principales del producto farmacéutico terminado (incluyendo conservadores). Aquí se determinan valores límites para el control de impurezas. dependiendo de la naturaleza del ensayo. 6    . En la tabla 1 se observa que los ensayos para cada categoría requieren diferentes tipos de análisis: PARAMETROS DE ENSAYO ENSAYO ENSAYO ENSAYO TIPO III DESEMPEÑO ANALITICO TIPO I TIPO II TIPO IV CUANTITATIVAS PRUEBAS LIMITES (IMPUREZAS) EXACTITUD SI SI * * NO PRESICION SI SI NO SI NO SELECTIVIDAD SI SI SI * SI LIMITE DE DETECCION NO NO SI * NO LIMITE DE CUANTIFICACIÓN NO SI NO * NO LINEALIDAD SI SI NO * NO RANGO SI SI * * NO TABLA 1: PARAMETROS DE DESEMPEÑO ANALÍTICOS EN FUNCIÓN DEL MÉTODO ANALÍTICO APLICADO (*)Puede requerir. Pueden ser pruebas cuantitativas o una prueba cualitativa para determinar si la impureza está presente en la muestra por encima o por debajo de un valor límite especificado. límite de detección y precisión del producto terminado (por ejemplo: Disolución: Liberación del principio activo). TIPO IV Prueba de identificación.

las pruebas de límite solamente fundamentan que cantidad del analito está por encima o por debajo de un nivel de seguridad. Límite de cuantificación El límite de cuantificación es una característica de las valoraciones cuantitativas de compuestos que se encuentran en baja concentración en la matriz de una muestra. Selectividad Es la capacidad de un método analítico para medir exacta y específicamente el analito sin interferencias de impurezas. Se expresa como el grado de inexactitud del método. (46) Límite de detección El límite de detección es una característica de las pruebas de límite. Es la cantidad menor de analito que puede determinarse con precisión y exactitud aceptable en una muestra. La exactitud debe ser reportada como porcentaje de recuperación de una cantidad conocida de analito añadida a la muestra o como la diferencia entre la media y un valor aceptado como real en conjunto con los intervalos de confianza. precisión intermedia y reproducibilidad. Debe evaluarse utilizando: un mínimo de 9 determinaciones que cubran el intervalo especificado para el procedimiento (por ejemplo. Precisión Expresa el grado de concordancia entre resultados individuales cuando el método se aplica repetidamente a múltiples muestras de una mezcla homogénea. con el mismo equipo. La exactitud debe establecerse a lo largo del intervalo especificado del procedimiento analítico. productos de degradación o excipientes que pueden estar presentes en la muestra. 3 réplicas de cada una de 3 concentraciones) o. bajo las condiciones experimentales establecidas. se evalúa utilizando un mínimo de 9 determinaciones en un mínimo de 3 niveles de concentración que cubran el intervalo especificado (por ejemplo. pero no necesariamente cuantificarse. Repetibilidad Expresa la precisión bajo las mismas condiciones de operación en un corto periodo de tiempo. A continuación de describen los parámetros de una validación analítica: Exactitud La exactitud de un método analítico es la cercanía de los resultados de la prueba obtenidos por dicho método al valor aceptado como verdadero. Es la cantidad más baja de analito que puede detectarse. La precisión de un método analítico es generalmente expresada como la desviación estándar. De esta manera. 3 réplicas en cada una de tres concentraciones del procedimiento analítico total). un mínimo de 6 determinaciones en el 100% de la concentración de la prueba. como por ejemplo impurezas en materias primas y productos de degradación en productos farmacéuticos terminados. Es también llamada precisión intra-análisis. 7    . bajo las condiciones experimentales establecidas. Este parámetro es muy importante en el caso de los métodos analíticos diseñados para la cuantificación del analito en formulaciones y estudios de estabilidad. da idea de errores aleatorios y puede ser considerada en tres niveles: repetibilidad. utilizando el mismo analista.

por diferentes analistas. Un método analítico es robusto cuando proporciona resultados con precisión y exactitud aceptables en condiciones de trabajo ambientales y/o analíticas diferentes. instrumentos. Es determinada por el análisis de alícuotas de lotes homogéneos en diferentes laboratorios. lotes de reactivos. Manifiesta la influencia que tienen pequeñas alteraciones en el método de análisis sobre los resultados. Robustez La robustez de un método analítico es el grado de reproducibilidad de los resultados obtenidos del análisis de las mismas muestras bajo diversas condiciones tales como diferentes laboratorios. El analista debe establecer los efectos de eventos aleatorios (variaciones como días. temperaturas. La evaluación de la robustez debe considerarse durante la fase de desarrollo y depende del tipo de procedimiento en estudio. etc. exactitud y linealidad del método tal cual está escrito. días. etc. Precisión intermedia Expresa la variación dentro del laboratorio. es el intervalo entre los niveles superior e inferior (incluyendo estos valores). o con diferentes analistas o equipo dentro del mismo laboratorio. en diferentes días. (47) 1. Linealidad La linealidad de un método analítico es su capacidad para demostrar que los resultados de la prueba son directamente proporcionales (o se convierten en directamente proporcionales mediante una transformación matemática bien definida) a la concentración del analito dentro de un rango dado.1 ETAPAS DE UNA CALIFICACIÓN: La calificación de un equipo se realiza en tres etapas sucesivas: 8    .) en la precisión del procedimiento analítico. analistas. analistas. en el que se ha demostrado un nivel adecuado de precisión. 1.2. equipo. así como el software y el hardware que lo controla. en condiciones ambientales y operacionales que pueden diferir pero dentro de los parámetros especificados en el ensayo.2 CALIFICACION DEL INSTRUMENTAL. Rango El rango de un método analítico. La calificación del equipo HPLC es en esencia la verificación del rendimiento del instrumento elegido para una técnica analítica en particular. La evaluación de la precisión intermedia depende de las circunstancias bajo las cuales se usará el procedimiento.

Las cuales pueden ser:  Nombre del equipo  Nombre del fabricante. 9    . dispositivos visualizadores y cualquier otra indicación de operación y función. Asegura que el equipo está instalado adecuadamente. interruptores. En esta etapa se recolecta toda la información de identificación. Calificación de Instalación (IQ) Es la verificación documentada de que todos los aspectos claves de la instalación están de acuerdo con las recomendaciones del fabricante. las conexiones y toda medida de seguridad del equipo que sea preciso documentar. En esta etapa se someten a prueba todos los controles de operación bajo condiciones normales y bajo condiciones extremas como por ejemplo el reinicio de un equipo después de un corte de luz. los requisitos de servicios básicos. CALIFICACION DEL HPLC Los parámetros a evaluar en un sistema HPLC se encuentran detallados en la tabla 2. Demuestra que funciona según lo previsto. sobre todo en el rango de los parámetros operacionales para los que han sido diseñados. todos los puntos de alarma. Es realizado por el técnico calificado. Corresponden a las especificaciones aprobadas en el diseño. la ubicación. modelo o tipo  Número de serie  Fecha en la que fue recibido  Condiciones en las que fue recibido (nuevo o usado)  Aspectos verificados para su aceptación de recepción  Fecha en la que el equipo fue puesto en servicio por el laboratorio  Localización del equipo en el laboratorio  Manual de operación  Manual del mantenimiento Calificación Operacional (OQ) Es la verificación de que los equipos funcionan en forma esperada y son capaces de operar satisfactoriamente.

10    . estado cristalino. identificación. Es la verificación que el equipo funciona en la forma esperada y es capaz de operar satisfactoriamente sobre todo el rango de los parámetros operacionales para el que ha sido diseñado. Módulo Parámetro Importante para: Reproducibilidad de flujo Reproducibilidad/TR/A/H Bomba Precisión de gradiente Transferencia del método Reproducibilidad Precisión de resultados Inyector Residuo de muestra Exactitud de precisión de resultados Reproducibilidad de T˚ TR/A/H/forma de pico Horno Ruido Sensibilidad Energía de lámpara Sensibilidad Detector Relación señal/ruido Sensibilidad Precisión de longitud de onda Sensibilidad. como comprimidos y cápsulas. 2) guiar el desarrollo de nuevas formulaciones. Trasferencia de datos Linealidad Precisión de resultados Forma de pico Columna Proceso de datos. tales como cambios en la formulación. (27) Existen diversos factores que afectan la velocidad de disolución como los relacionados con las propiedades fisicoquímicas del principio activo: tamaño de partícula. el sitio de fabricación y el aumento en escala del proceso de fabricación. y 3) asegurar la calidad y el rendimiento continuo del producto. después de ciertos cambios. el proceso de fabricación. bajo condiciones normales de operación. polimorfismo. por ello se utilizan las pruebas de disolución in vitro para las formas de dosificación oral sólidas. Resolución. Asimetría de pico reproducibilidad TR. trabajando con estándares certificados. la evaluación de la velocidad de disolución in vitro puede ser una predicción del comportamiento in vivo (27).3 DISOLUCION La absorción de un fármaco. platos teóricos TR= tiempo de retención A= área H= altura TABLA 2: PARAMETROS A EVALUAR EN UN SISTEMA HPLC Calificación de Desempeño (PQ) Se realiza para demostrar la efectividad y reproducibilidad del proceso. para: 1) evaluar la calidad de un producto medicinal lote a lote. y bajo condiciones límites de operación. tras la administración oral desde una forma de dosificación sólida depende de la liberación principio activo del producto y de su disolución o solubilización del fármaco bajo condiciones fisiológicas y la permeabilidad por el sistema gastrointestinal. Debido a la naturaleza de estos factores. 1. Es verificado por el usuario.

que son los de canastillas (aparato 1) y de paletas (aparato 2) el diseño del aparato afecta los resultados de la disolución debido a diversos factores entre los que se incluyen: la geometría y la estructura del recipiente. la influencia de los excipientes durante el proceso de elaboración de los preparados sólidos. A partir de la ecuación para describir los procesos de primer orden pueden calcularse parámetros como la constante de velocidad de disolución. la temperatura y la composición del solvente. En general el proceso de disolución de un fármaco contenido en un medicamento. (26) Es una curva característica que representa la concentración de fármaco disuelto contra el tiempo. (30) La prueba de disolución es una prueba físico química que determina el porcentaje de fármaco que se disuelve por unidad de tiempo bajo condiciones estandarizadas de la interfase líquida/sólida.etc. es un 11    . Estos factores a su vez afectan la velocidad de erosión del preparado sólido intacto sobre las partículas. la homogeneidad del líquido de disolución y finalmente la reproducibilidad del sistema de una corrida a otra. Los perfiles de disolución por su parte comprenden la determinación múltiple de la concentración del fármaco disuelto durante el proceso de disolución a fin de demostrar la intercambiabilidad de los medicamentos genéricos. Por otra parte es posible analizar diversos parámetros de disolución desde el punto de vista cinético a partir de los datos experimentales de porcentaje disuelto en función del tiempo. Por otra parte es un ensayo empleado desde el comienzo del desarrollo de la formulación y utilizado en fases posteriores a éste. Los equipos y técnicas de disolución se clasifican de acuerdo a la hidrodinámica asociada. es decir. Los más utilizados son los establecidos por la farmacopea de los Estados Unidos Americanos (USP/NF) los cuales corresponden a los métodos con cubetas. existen dos categorías generales: los métodos con cubetas y los sistemas con compartimentos abiertos con flujo abierto. Así como también la comparación y estudio de calidad intralotes e interlotes. tiempo medio de disolución. está en función de la cantidad de principio activo presente. así como la composición y el volumen del medio de disolución. estas condiciones se especifican en base a las propiedades intrínsecas del fármaco y su comportamiento de disolución. la velocidad de agitación y el porcentaje del fármaco que deberá disolverse en un tiempo determinado (Valor Q.. es básico e imprescindible para la liberación de cada lote de las formas farmacéuticas sólidas fabricadas. De acuerdo a la Norma Oficial Mexicana NOM-177-SSA1-1998 se realiza el cálculo del factor de similitud f. el tipo y la intensidad de la agitación. Para llevar a cabo la comparación de los estudios de los perfiles de disolución existen diversas metodologías. porque permite el estudio de los mecanismos de liberación del principio activo en las formulaciones de liberación controlada y no controlada y permite la obtención de un perfil de disolución predeterminado y reproducible. Las monografías de cada producto farmacéutico en la FEUM actual describen el medio de disolución. éste último permite una evaluación comparativa de las distintas formulaciones. Un valor de f comprendido entre 50 y 100 indica perfiles de disolución similares. presenta una cinética de primer orden. así como los requisitos a que se deberán sujetar los establecimientos que lleven a cabo dichas pruebas. que se define como la cantidad de ingrediente activo (fármaco) disuelto expresado como un porcentaje del contenido declarado). además de considerar los efectos de la fuerza de compresión sobre la velocidad de disolución. el cual relaciona los porcentajes disueltos tanto del medicamento de referencia como del de prueba. la dispersión de las partículas desintegradas.

Esto permitirá relacionar los resultados de disolución con el comportamiento del producto in vivo.1 N (pH 1.2 (sin enzimas)  Fluido intestinal simulado a pH 6.  Verificación de la bioequivalencia.  Ayuda a seleccionar excipientes.2 a 6.  Productos de liberación controlada: Provee evidencia de características de liberación retardada en productos con cubierta entérica (ej. generalmente se prueban:  HCl 0. Los objetivos de disolución son que la forma farmacéutica libere la máxima cantidad de fármaco vehiculizado.8.indicador de estabilidad del preparado farmacéutico y predice la biodisponibilidad y bioequivalencia in vitro de productos farmacéuticos sólidos orales. Durante el desarrollo de una forma farmacéutica sólida. Disolución de dos etapas).  Verificación rutinaria de la calidad de la producción para asegurar la uniformidad entre los lotes fabricados. nivel de humedad.  Ayuda a controlar parámetros de manufactura: presión de compresión. solvente residual.8  Fluido gástrico simulado a pH 1. densidad de la capa.5  Buffer de fosfatos a pH 6. (42) La FDA recomienda que se utilicen medios acuosos dentro del rango de pH de 1.  Asiste en cumplir los requisitos legales. Frecuentemente la velocidad de absorción de un fármaco la determina la velocidad de disolución de los comprimidos. Está prueba se realizó principalmente debido a que el ensayo de desintegración no garantizaba que la formulación liberase el fármaco. si es posible.2)  Buffer de acetatos USP a pH 4.8 (sin enzimas) 12    .  Guía para el desarrollo de nuevas formulaciones en las diferentes etapas y procesos de fabricación. provee información necesaria para poder establecer correlaciones in vitro-in vivo. Principales funciones del ensayo de disolución:  Optimización de la efectividad de la forma farmacéutica: Durante el desarrollo de un producto y en la evaluación de su estabilidad. lo más cerca del 100% o del porcentaje especificado en cada caso y que la velocidad de liberación del lote sea uniforme para que todos sean clínicamente efectivos. ya que los comprimidos deben primero disolverse (después de disgregarse) en el tracto gastrointestinal para absorberse. provee evidencia de un perfil de disolución que es lento y controlado. la FDA recomienda que la disolución se evalúe en condiciones fisiológicas.

Si el fármaco es poco soluble en agua. es decir. y también pueden cambiar durante la prueba debido a la influencia de los ingredientes activos e inactivos. Las condiciones de la prueba deben basarse en las características fisicoquímicas del medicamento y las condiciones ambientales de la forma de dosificación pueden estar expuestas tras la administración oral. se recomienda para mejorar la solubilidad.2 a 6. (42) El volumen del medio de disolución es generalmente de 500. Un pH más alto se debe justificar. Esta acción es la que permite que fármacos hidrofóbicos mejoren sus características de disolución en presencia de tensioactivos. En el tracto gastrointestinal. La necesidad de enzimas en el fluido gástrico simulado y fluido intestinal simulado debe ser evaluado sobre una base caso por caso y debe ser justificado. en el ensayo de disolución “in vitro” las condiciones “sink” existen cuando el volumen del medio de disolución es de 5 a 10 veces mayor que el volumen requerido para hacer una solución saturada de un fármaco (C < 0. Para la mayoría de los fármacos.C) dQ = -KCs dt dt 13    . (42) Los agentes tensioactivos pueden mejorar la humectación de las partículas favoreciendo el contacto entre éstas y el disolvente. El uso de solventes orgánicos no se recomienda. es necesaria una gran cantidad de medio de disolución para asegurar las condiciones “sink”. quede explicada en base a la Cs de la siguiente manera: dQ = -K (Cs . Para simular el fluido intestinal. la concentración del principio activo no debe exceder del 10%-15% de su máxima solubilidad en el medio de disolución seleccionado. Un medio acuoso con un rango de pH 1.15Cs o C <<Cs). En consecuencia. por lo que la concentración de la disolución del principio activo en el líquido de la zona de absorción está siempre muy lejos de la concentración a saturación. De esta manera. Para el agua o productos farmacéuticos ligeramente insolubles en agua. el estricto cumplimiento al medio ambiente gastrointestinal no tiene que ser utilizado en las pruebas disolución de rutina. la utilización de alrededor de 1 litro de medio de disolución es más que suficiente para mantener las condiciones “sink”. (42) El uso de agua como medio de disolución no se recomienda porque las condiciones de prueba como el pH y la tensión superficial pueden cambiar dependiendo de dónde se obtuvo el agua. Cuando se cumplen estas condiciones. cuando la concentración del soluto es inferior al 10%-20% de su concentración a saturación. La experiencia reciente con productos de cápsula de gelatina indica la necesidad del uso enzimas (pepsina con fluido gástrico simulado y pancreatina con fluido intestinal simulado) para disolver partículas que pueden formarse e impedir disolución del fármaco. el uso de un surfactante como lauril sulfato de sodio. no debe exceder de PH 8.2 se debe de emplear sin enzimas. un medio de disolución de pH 1.8 (fuerza iónica de buffers igual que en USP) debe ser utilizado. la superficie libre para el ataque por el líquido disolvente es acrecentada. La necesidad y la cantidad de tensioactivo se justifica. (15) Este hecho hace que la ley de Noyes-Whitney en la que se basan los ensayos de biodisponibilidad de fármacos. para minimizar el efecto de gradiente de concentración y mantener las condiciones “sink”. Sin embargo. se habla de condiciones “sink”. caso por caso y. un medio de disolución de pH 6. Para simular el fluido gástrico.8 debe ser empleado.0. un fármaco que se disuelve es absorbido instantáneamente. 900 o 1000 ml condiciones de inmersión deseables pero no obligatorias. en general.

de una u otra manera procuran la eliminación de la substancia disuelta desde el medio de disolución a medida que ésta se va disolviendo. (43) La finalidad es determinar la velocidad con la que el medicamento se disuelve. Los resultados se expresan como concentración del fármaco existente en el medio de disolución en función del tiempo. temperatura incorrecta. verticalidad de los vástagos. También es la manera rutinaria de control de calidad sobre producto terminado. excentricidad de los agitadores. fotosensibilidad del producto que se está analizando. en cuyo último caso deben reponerse las alícuotas del volumen tomado). la velocidad de disolución va disminuyendo con el tiempo. esto es. vibraciones. 14    . se trata de establecer una velocidad de liberación a partir de liberación de las formas sólidas que. adyuvantes lipídicos. formas farmacéuticas que flotan. vasos en mal estado. evaporación del medio. en la mayoría de los casos no son enteramente solubles y que esta velocidad no solo está condicionada por la solubilidad de principio activo y forma farmacéutica sino por naturaleza física de la parte no soluble (humectación. por consiguiente. pH. porosidad. (15) Cuando una substancia se disuelve en un medio líquido cualquiera las moléculas disueltas provocan una disminución del gradiente de concentración y. con el fin de mantener la concentración constante y a un nivel muy bajo. sistemas filtrantes no idóneos. no son obligatorias. derivados de la celulosa. En estas ecuaciones. tomas de muestra incorrectas. Los resultados del análisis pueden ser afectados debido a una serie de factores a tener en cuenta que son: volumen dispensado incorrecto. como la cantidad de fármaco remanente en la forma farmacéutica con respecto al tiempo bajo condiciones estandarizadas o el tiempo en que un porcentaje concreto del fármaco es liberado. y según las condiciones fisicoquímicas imperantes en el tracto gastrointestinal.). Los métodos "sink" parecen ser bastante adecuados. K la constante de proporcionalidad del proceso (constante de disolución). etc. y de las uniones entre el soluto y algunos constituyentes insolubles en el disolvente (intercambio de iones. y es necesario que en cada instante la solución sometida a prueba sea de tal concentración que refleje la cantidad de soluto realmente disuelto.). mala desgasificación. Los denominados métodos "sink" comprenden todas aquellas técnicas que. Bajo condiciones “sink” la constante de velocidad de disolución (dQ/dt = K) se puede calcular fácilmente y representa un proceso cinético de orden cero. sobre todo si se imagina que "in vivo". Normalmente en la industria farmacéutica interesa obtener 2 tipos de datos: Porcentaje disuelto: Cantidad de principio activo disuelto en un determinado tiempo. el medicamento va siendo absorbido a medida que se disuelve desde el líquido de disolución. reposición de medios (puede hacerse continuamente o de forma intermitente. Si bien las condiciones “sink” son las recomendadas para desarrollar todo ensayo de disolución. Cs la concentración de una disolución saturada y C la concentración de la disolución a un tiempo determinado. dC/dt representa la velocidad de disolución. Generalmente se utiliza para productos de liberación inmediata. velocidad de agitación incorrecta. etc. la disolución de fármacos se realiza conforme a un modelo semejante ya que generalmente. centrado de los vasos.

con el fin de obtener una curva de disolución del principio activo. medidas que a todas luces son ineficaces y fuertemente peligrosas. El procedimiento de disolución está considerado principalmente como una herramienta de control de calidad para una forma farmacéutica sólida específica y como señal de biodisponibilidad y de bioequivalencia. Generalmente se utilizan los perfiles de disolución para productos de liberación prolongada que requieren por lo menos 3 puntos de muestreo cubriendo el perfil de disolución. (50) El entendimiento de las hormonas femeninas para la regulación de la ovulación y el embarazo.4 LEVONORGESTREL Desde siempre se ha reconocido la necesidad de la anticoncepción oral. obtenido a partir de plantas. Para mediados del Siglo XX laboratorios Syntesis y simultáneamente G.D. Perfil: Caso particular del ensayo de disolución que consiste en tomar muestras intermedias durante toda la duración del mismo. quedando por establecerse la dosificación adecuada que tuviese un 15    . mercurio y arsénico con fines anticonceptivos. Una forma farmacéutica debe disolverse rápidamente y liberar no menos del 85% del contenido indicado en su etiqueta en un período de 30 minutos utilizando el Aparato 1 de la USP a 100 rpm con el mismo intervalo de pH. Al mismo tiempo en Alemania. son el verdadero punto de partida científico para la posterior anticoncepción hormonal. Los perfiles de disolución también se utilizan para aceptar la similitud de dos o más productos después de cambios basados en SUPAC (Scale Up and Post-Approval Changes). En 1944 Russell Marker comenzó a producir progesterona a partir de un compuesto llamado Diosgenina. hallado en la raíz de la planta denominada "Cabeza de negro". Searle anunciaron la elaboración de dos derivados de la progesterona: la Noretindrona y el Noretinodrel. Inhoffer realizó investigaciones con la Etisterona. Se puede realizar un cálculo logarítmico para efectuar estudios comparativos entre curvas. (15) Previo a la ejecución de la prueba de disolución además de controlar los factores internos así como externos que pueden afectar al equipo también deben tenerse controlados los siguientes puntos:  Equipos calificados  Instrumentos calibrados  Métodos Analíticos validados  Personal formado  Procedimientos estandarizados  Interconexión con medios de servicios requeridos La disolución es el mejor sustituto del biocomportamiento cuando se logra establecer una correlación in vitro-in vivo (IVIVC). Años después se encontró que en la raíz del barbasco había 10 veces más cantidad de Diosgenina. 1. un derivado de la progesterona. Himes hace más de 2000 años aconsejaba la toma de estricnina.

es por un lado similar a la hormona femenina progesterona y por otro lado tiene efectos masculinizantes que antagonizan la acción de las hormonas femeninas.C. En 1998 son introducidos en Colombia los anticonceptivos orales combinados. inhiben mejor la ovulación que grandes cantidades de estrógeno o gestágeno solos. los de gran uso y de amplia evaluación actual. microdosis que asocian 20 μg de Etinilestradiol y 75 μg de Gestodeno. en combinación. Aun así. Sin embargo presentaba una alta incidencia de alteraciones menstruales al usarse como anticoncepción postcoital de rutina. 16    . Norgestimato y Desorgestrel. (55) ANTICONCEPCION DE EMERGENCIA El LEVONORGESTREL usado para la llamada Anticoncepción de Emergencia o Píldora del Día Después. 5. eficaz para prevenir el embarazo. conforman los anticonceptivos de última generación. que tienen al parecer un impacto metabólico favorable mucho mayor que sus predecesores. Estos a la larga serían los gestágenos de los primeros anticonceptivos orales utilizados. donde el sinergismo es evidente. se conseguía administrar una menor concentración total de gestágenos.E. la cual deriva de la hormona masculina testosterona. especialmente los 17-α-hidroxi derivados. siendo el Microgynon el primer microdosis introducido. en 1985. La combinación de uno de estos. los resultados de los primeros estudios mostraron que una dosis única de 0. (50) La ciencia médica ha avanzado a pasos agigantados. El levonorgestrel fue la base de los primeros anticonceptivos orales combinados que incluían 30 μg de Etinilestradiol. este origen hace que tenga una acción dual. (52) Para disminuir estos efectos metabólicos adversos se sintetizaron nuevos gestágenos (53) y se disminuyó considerablemente su concentración. entregando a la mujer beneficios que van más allá de la sola anticoncepción.U.10.75 mg administrada poco después de un coito sin protección era. investigadores de varios países comenzaron a realizar estudios con dosis variables de levonorgestrel para su uso de anticoncepción postcoital de rutina. es un compuesto químico sintético derivado de la 19-nortestosterona. Las pequeñas cantidades de estrógeno y gestágeno. Por la misma época la Worcester Foundation for Experimental Biology patrocina los trabajos de John Rock en Harvard. (56) A principios de los años 70. estos primeros estudios sugirieron que el levonorgestrel podría ser útil en anticoncepción de emergencia postcoital. El levonorgestrel hizo parte de los primeros anticonceptivos orales trifásicos. régimen 6. Chang en Worcester. dentro de los primeros días posteriores a una relación sexual sin protección.U.mínimo de efectos secundarios. (52) A los preparados monofásicos se han sumado las presentaciones trifásicas. también el grupo de los Gonano. (54)Durante la década de los ochenta se introdujeron el Gestodeno. (51) Con un diseño que imitaba el ciclo menstrual normal. en 1973. con el Etinilestradiol. Gregory Pincus y M. La anticoncepción de emergencia se refiere a métodos que las mujeres pueden usar como respaldo y en caso de emergencia. (51) Para la misma época se observó que algunos gestágenos. las cuales tienen una gran aceptación por las usuarias y se encuentran disponibles en el mundo entero. con el objetivo de prevenir un embarazo no deseado. al combinarlos con estrógenos también predisponían a enfermedad cardio-vascular. introducidos en Alemania en 1979 y en los E.

Formula molecular: C21H28O2 17    . Se desarrollo a finales de los setenta como método de control de natalidad postcoital. era tan eficaz como el método de Yuzpe y causaba menos efectos secundarios. incluso puede alterar el transporte del ovocito o del espermatozoide. Previene embarazos no deseados en tres diferentes caminos. El levonorgestrel representa la generación más reciente en anticoncepción de emergencia. En Hong-Kong el primer estudio comparativo patrocinado por la OMS en 834 mujeres. El estudio multicéntrico siguiente realizado por la OMS en 21 centros de 24 países que involucró a 1988 mujeres confirmó estos resultados. Si las tabletas de macrodosis no están disponibles. No es necesario un examen físico antes de administrarlo. Una vez que se ha producido la implantación no es eficaz y no puede interferir o provocar un aborto. durante las primeras 72 horas después del coito sin protección y repetir la ingesta 12 horas más tarde. (57) Se cree que el levonorgestrel actúa como anticonceptivo de emergencia principalmente retrasando la ovulación o interfiriendo con la fertilización (alterando el transporte de los espermatozoides y/o óvulos a través de las Trompas). QUIMICAS Y FARMACOLOGICAS DE LEVONORGESTREL El levonorgestrel (o l-norgestrel o D-norgestrel) es una progestina sintética biológicamente activa derivada de la hormona progesterona.75 mg repetida 12 horas más tarde) era al menos tan eficaz como el régimen Yuzpe dentro de las 72 horas siguientes y era mucho mejor tolerado. Neogynon). No se han asociado complicaciones serias con el tratamiento del levonorgestrel. Sin embargo. pueden administrarse 4 tabletas de microdosis que incluyan 30 μg de Etinilestradiol y 150 μg de Levonorgestrel (Nordette. dependiendo del estado del ciclo menstrual en el cual ocurren las relaciones sexuales sin protección: suprime la ovulación. (57) El Método de Yuzpe es un método anticonceptivo que consiste en administrar 2 tabletas de anticonceptivo oral de macrodosis que incluya 50 μg de Etinilestradiol y 250 μg de Levonorgestrel (Noral. usado dentro de 48 horas después de un coito sin protección anticonceptiva. Microgynon) en las primeras 72 horas después del coito sin protección y tomar otras 4 píldoras 12 horas más tarde. más eficaz es su acción. El estudio de la OMS demostró que cuanto antes se tome el método anticonceptivo de emergencia después de un coito sin protección. se recomienda realizar un examen físico o pélvico de seguimiento si existe cualquier duda con respecto a la salud general de la mujer o si se sospecha de un embarazo. que en muy pocos casos implican náuseas como efectos secundarios. Es un método seguro. económico y accesible. sugirió que el levonorgestrel sólo. aunque también modifica el endometrio e impide la normal implantación. es seguro para la mayoría de las mujeres. PROPIEDADES FISICAS. Utilizado correctamente. Este estudio mostró que el régimen levonorgestrel (en dosis de 0. Además es probable que inhiba la implantación mediante la alteración del endometrio. Su mecanismo de acción es la inhibición o el retraso de la ovulación para prevenir la fertilización.

el levonorgestrel se usa como un anticonceptivo oral en formulaciones monofásicas y trifásicas de grageas combinadas. deriva de la hormona masculina testosterona. peso molecular: 312. 17% de la aldosterona sobre el receptor mineralocorticoide. Su afinidad de ligandos relativos in vitro en los receptores para la hormona esteroides son: 100% de progesterona sobre su receptor de progesterona. 18    .Formula estructural (IUPAC):                                 Su denominación química: 13β-etil-17α-etilin-17β-hidroxi-4-gonen-3-ona.02% del estradiol sobre el receptor del estrógeno (48). y deben ser tomadas antes de que transcurran tres días del sexo no protegido. su metabolismo es a nivel hepático. es un polvo cristalino blanco o casi blanco.5% del cortisol sobre el receptor glucocorticoide. soluble en cloroformo. En dosis bajas. ligeramente soluble en alcohol. 75 μg y 125 μg. ligeramente insoluble en agua.446 g/mol. que antagonizan la acción de las hormonas femeninas. (49) o dos dosis de 750 μg cada una (separadas por 12 horas). Es usado como píldora anticonceptiva de emergencia a dosis única elevada de 1500 μg. y <0. que tenga efectos masculinizantes. poco soluble en cloruro de metileno. (64) 1. Este origen hace que el levonorgestrel tenga una acción dual: por un lado similar a la hormona femenina progesterona (que favorece la gestación) y por otro. Es una progestina gonano derivado del 19-nortestosterona.1 Propiedades farmacológicas: Químicamente el levonorgestrel es una hormona esteroidea activa y enantiómero de la mezcla racémica norgestrel.4. de acuerdo al Sistema de Clasificación Biofarmacéutica (SCB) se encuentra dentro de la clase II debido a su baja solubilidad y alta permeabilidad. se une a proteínas en un 55%. 7. su biodisponibilidad es de aproximadamente 100%. Las dosis monofásicas varían entre 100 y 250 μg y las dosis trifásicas entre 50 μg. punto de fusión: entre 232°C y 239°C. 58% de la testosterona sobre su receptor androgénico (AR). (58) la cual a su vez.

A. construida con el estándar de referencia del principio activo. exactitud. Se debe utilizar una curva de calibración apropiada. tanto las de la metodología analítica como las del aparato de disolución.V. JUSTIFICACION El análisis de Disolución es una herramienta valiosa como prueba de rutina en Control de Calidad para la medición del desempeño de un medicamento. que el producto farmacéutico sea seguro. asegurando así. estabilidad.2. debido a que dicho método fue desarrollado en casa matriz para su registro ante las autoridades sanitarias de nuestro país es necesario llevar a cabo la validación del método analítico para comprobar que este es reproducible. y de ayuda para el desarrollo de una formulación. implica el uso de un método analítico que permita a través de esta prueba in vitro la completa liberación del activo en el tiempo establecido para estar biodisponible. La Validación ayuda a confirmar la calidad del medicamento. 19    . puesto que le confiere confiabilidad a los resultados obtenidos en el análisis. de C. precisión. selectividad y rango. ya que no se trata de un método farmacopeico. a través de la evaluación de su disolución.5 mg de Bayer de México S. estable y eficaz. El método analítico que se utilice para cuantificar el fármaco debe estar debidamente validado y cumplir con requisitos apropiados de linealidad. En estas circunstancias. para interpolar las concentraciones del fármaco disuelto. la concentración de levonorgestrel en su presentación comercial Oportuna grageas de 1. Así como también deben ser validadas todas las variables involucradas en el sistema.

20    . Las condiciones a utilizar son las recomendadas en la norma de análisis interna No. prescripción y dispensación de un medicamento tienen como objetivo común obtener eficacia adecuada para el paciente. D-0359/1 de Postinor 1. tableta SH No. y 58% si se emplea entre las 48 y 72 horas).5 mg) de fecha 27.3.06 (Método de disolución P2-LN-HP). A33108 de Bayer Schering Pharma AG. 85% entre las siguientes 24-48 horas.06. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA La contracepción postcoital tiene como objetivo prevenir el embarazo en aquellas mujeres que han tenido un coito sin protección anticonceptiva. Se ha estimado que el levonorgestrel evita un 85% de los embarazos esperados.07 y reporte interno de validación No. Por lo que es importante asegurar través control físico. ya que el riesgo de embarazo tras un coito no protegido oscila en torno a un 8% por término medio. El motivo de la validación del método analítico para disolución se debe a la alta concentración del principio activo (Levonorgestrel) y a su baja solubilidad en agua surge la necesidad de cambiar las condiciones del medio de disolución y la velocidad de agitación (rpm) del método de disolución general transferido en el reporte interno “Lab to Lab” de fecha 06. y administrando levonorgestrel se reduce la contracepción postcoital hormonal hasta un 2%. esta protección es menor cuanto mayor es el tiempo transcurrido de administración de medicamento tras el coito (95% dentro de las primeras 24 horas. T03551C (Levonorgestrel 1.05. químico y biológico que el medicamento sea liberado oportunamente para tener eficacia en la prevención de embarazos no deseados. por lo que la fabricación.

que el medio de disolución y las condiciones de análisis seleccionadas para el método analítico de disolución en Levonorgestrel grageas 1. VP_PV.  Establecer un Protocolo de Validación de la Metodología analítica a validar (Levonorgestrel gragea 1.4. 21    .  Revisar que la calificación del Sistema HPLC Waters No.5 mg).1 OBJETIVO GENERAL  Demostrar a través de evidencia documentada obtenida por estudios de laboratorio. OBJETIVOS 4.  Demostrar el uso indistinto del disolutor Sotax AT7 y Hanson RS8 Plus.5 mg cumplen con los criterios de aceptación establecidos para cada parámetro de desempeño analítico de acuerdo al plan de validación No.5 mg.2 OBJETIVOS ESPECIFICOS  Calibrar analíticamente los disolutores SOTAX AT7 y HANSON SR18 Plus.  Calificar mecánicamente los disolutores SOTAX AT7 y HANSON SR18 Plus y que estos cumplan con los criterios de aceptación establecidos para cada disolutor. 4. por el Laboratorio de Control Fisicoquímico.  Verificar que los materiales a utilizar durante la validación sean adecuados para este efecto y los Instrumentos se deben encontrar calibrados y el estándar a utilizar durante la validación debe contar con su respectivo certificado de análisis. 1 se encuentra debidamente documentada y se cumplen con todos los criterios de aceptación establecidos para cada módulo del sistema.  Validar la metodología analítica de los parámetros analíticos más relevantes a ser evaluados para la prueba de disolución y el método HPLC usado para la determinación del principio activo Levonorgestrel.PLM02209. después de la disolución de Levonorgestrel gragea 1.

DIAGRAMA DE TRABAJO          Parte experimental Calibración mecánica disolutor  Calibración analítica disolutor  Metodología de  disolución de   Sotax y Hanson  Sotax y Hanson levonorgestrel  (HPLC)  Pruebas mecánicas:  Tabletas tipo   Tabletas tipo no   Nivel: con respecto al plano  Desintegrantes   Desintegrantes  horizontal (Prednisona) (Ácido salicílico) Vibración del equipo Temperatura del medio de disolución Condiciones de disolución: Para el método HPLC: Velocidad de rotación (rpm) Evaluar medio de disolución Selectividad Concentricidad con respecto al y velocidad de agitación Precisión del sistema eje de rotación Linealidad del sistema Altura de los aparatos 1 y 2 con Precisión del método respecto al fondo del vaso (repetibilidad al 100%) Oscilación (bamboleo) de las Estabilidad de la paletas. ejes de agitación y muestra Tolerancia Medición de dimensiones: Vaso Eje Seguro de retención Canastillas Paletas 22    .

0 mm Cuerda menor: 41.0 mm 23    .0 Diámetro sin teflón: 9.3 mm Diámetro externo tamiz 21. SEGURO DE RETENCION Orificio de salida: 1. Criterios de aceptación: Tabla 3.2 – 23.6 – 5. PARTE EXPERIMENTAL 5.5 mm / 9. Especificaciones mecánicas disolutor Sotax y Hanson PARAMETRO ESPECIFICACIÓN LÍMITES Nivel Con respecto al plano horizontal N/A No más de Vibración 0.0 mm PALETAS Altura de la hélice: 18.0 – 5.4 – 10.5 – 19.5 mm Altura: 4.0 – 75.0  2. 0.0 mm (paletas) con respecto al fondo del vaso.1 mm Soporte de acero inoxidable con 3 grapas. Especificaciones de dimensiones disolutor Sotax y Hanson PARAMETRO DETERMINACIÓN LÍMITES Altura: 160 – 210 mm VASO Diámetro interno: 98 – 106 mm EJE Diámetro: 6.0 – 40.1 mm Espesor de la hélice: 3.025 mm) transmitido al vaso Temperatura Temperatura seleccionada  0.0 mm CANASTILLAS Diámetro interno 20.0 – 28. Tabla 4.5 – 2.0 mm Altura del tamiz 26.5 mm Cuerda mayor: 74.0 mm respecto al eje de rotación Altura de los aparatos 1 (canastillas) y 2 25.4 – 10.6 mm Tamiz 40 x 40.5˚C Velocidad (rpm) Velocidad seleccionada  4.254 mm Altura total: 34.0% Concentricidad (excentricidad) con Desviación máxima de 2.1 mils (0.0 – 43.1 CALIBRACION MECANICA DISOLUTOR SOTAX Y HANSON Material y equipo utilizado ver anexo I.5.0 – 28.0 mm ejes de agitación y canastillas. Deflexión máxima de 1. Oscilación (bamboleo) de las paletas.2 mm Diámetro externo arillo 22.3 – 6.1 – 20.

0 y 40. el sistema de transmisión no debe presentar desgaste. 4. Encender el disolutor y programar el control de temperatura del baño a 37˚C. Programar en el disolutor: una temperatura de 35. vaciar el agua purificada del baño de los vasos. 37. Cerrar la barra de alimentador de muestras. introducir en el vaso No. TEMPERATURA DEL BAÑO (SOLO DISOLUTOR HANSON) 1. 2 VERIFICACION DE LA DISTANCIA DE LA ORILLA INFERIOR DE LA PALETA AGITADORA AL FONDO DEL VASO Levantar la cubierta del disolutor y desmontar la paleta agitadora del vaso No. Reportar en la hoja de resultados. VERIFICACION DE LA TEMPERATURA DEL MEDIO EN LOS VASOS DEL DISOLUTOR Llenar el baño del disolutor con 18 l de agua purificada y los vasos del disolutor con 900 ml de agua purificada cada uno. 24    .REVISIÓN GENERAL. Introducir en la paleta agitadora el indicador de distancia. 3. Aparato No. debe responder a 50. 2. 1. Con la función de “continuidad” del multímetro digital verificar la integridad del fusible y visualmente verificar que la capacidad de éste sea de 10 A. Al término de 1 h. Los resultados deberán cumplir con los parámetros establecidos en la tabla de especificaciones mecánicas. 1 el RTD a través de la abertura para pipeta. verificar rotores y mandriles deben de estar completos sin presentar juego. los disolutores deben de funcionar y estar libres de vibraciones excesivas. Encender el sistema en el orden siguiente: regulador de voltaje (en caso de contar con alguno) y disolutor. 2. montar la paleta agitadora y cerrar la cubierta del disolutor.0. sacar el termómetro del vaso y esperar 2 minutos para volverlo a introducir. Verificar la temperatura del baño con un termómetro calibrado y certificado. 5. Al término de la prueba. cuando el indicador de control de temperatura del disolutor muestre 37˚C esperar 1 hora para que la temperatura del medio en los vasos (agua purificada) se estabilice. y el sistema de control de velocidad. Inspeccionar el sistema mecánico del equipo. Esperar 5 minutos a que se estabilice el RTD y realizar la primera lectura registrando el valor de la temperatura del medio en los vasos del disolutor. repetir el procedimiento anterior para cada uno de los vasos restantes. 100 y 150 rpm.0˚C y dejar que se estabilice el tiempo necesario. 1. realizar un total de tres lecturas. Verificar que la orilla inferior de la paleta agitadora esté dentro de las marcas del indicador. Realizar el procedimiento anterior para cada uno de los vasos restantes.

Verificar que la aguja indicadora del medidor de bamboleo se mueva en forma uniforme con cada bamboleo de la varilla. Ajuste de laminillas del cople de la paleta agitadora Atornillar el soporte del medidor de bamboleo a la brida. registrando el valor más alto. iniciar el cronómetro y durante 30 s realizar la lectura del bamboleo. después de los 30 s. registrando el valor más alto. apagar el control de velocidad. programarlo para una velocidad de 100 rpm. Instrumento de Verificación de distancia de la paleta agitadora del disolutor VERIFICACION DEL BAMBOLEO DE LAS PALETAS AGITADORAS Levantar la cubierta del disolutor. apretar el tornillo del soporte para fijar el medidor. 1. encenderlo nuevamente y durante 30 s realizar la lectura del bamboleo. Montar la paleta agitadora e introducir el medidor de bamboleo en el orificio superior del soporte (para medir el bamboleo a la altura de la varilla de la paleta agitadora). 25    . Introducir el calibrador de acoplamiento con su abertura más grande en el cople de la paleta agitadora para ajustar sus laminillas. quitar los vasos y el baño. Figura 2. Figura 1. Colocar en el borde de sellado para el vaso No. la brida y cerrar su broche. Después de haber realizado el procedimiento anterior. deslizar el medidor hasta que toque la varilla cuidando que la aguja indicadora del medidor permanezca en el cero. sacar el calibrador de acoplamiento e introducirlo nuevamente en el cople de la paleta agitadora pero ahora con su abertura más pequeña. quitar el medidor de bamboleo e introducirlo en el orificio central del soporte (para medir el bamboleo a la altura de la paleta agitadora). Programar el control de velocidad del disolutor para una velocidad de 50 rpm y encenderlo.

Montar la paleta y programar el control de velocidad del disolutor para una velocidad de 50 rpm y encenderlo. quitar los vasos y el baño. Colocar el tacómetro óptico a una distancia de 15 cm y con un grado de inclinación de 20˚ de la etiqueta reflejante. Realizar las mediciones para velocidades de 50 y 100 rpm. El disolutor Hanson se programa a una velocidad de 50. Presionar el botón de encendido del tacómetro y cuando las lecturas sean estables. iniciar el cronómetro. En la paleta agitadora del vaso No.deslizar el medidor hasta que toque la parte superior de la paleta cuidando que la aguja indicadora del medidor permanezca en el cero. Repetir los procedimientos anteriores para cada una de las paletas agitadoras restantes y anotar los resultados. Repetir el procedimiento anterior para cada una de las paletas agitadoras restantes. registrando el valor más alto y el valor más bajo de velocidad. Figura 4. Medición de la velocidad de giro de las paletas agitadoras 26    . colocar una etiqueta reflejante en una de las aletas y en la parte trasera de la misma. Realizar lecturas durante 30 s. 1. 150 y 200 rpm. apretar el tornillo del soporte para fijar el medidor. Figura 3. Instrumento de verificación de bamboleo de la paleta agitadora VERIFICACION DE LA VELOCIDAD DE GIRO DE LAS PALETAS AGITADORAS Levantar la cubierta del disolutor. 100. guiándose de las instrucciones dadas anteriormente para las pruebas a la varilla. colocar un pedazo de papel (para evitar doble lectura en el tacómetro). Repetir el procedimiento anterior a una velocidad de 100 rpm registrando los valores.

montar la varilla con canasta y cerrar la cubierta del disolutor. Realizar el procedimiento anterior para cada uno de las varillas restantes. 1. quitar los vasos y el baño. Realizar el mismo procedimiento de la determinación de velocidad en las paletas agitadoras y anotar los resultados. Medición de bamboleo a la Figura 6. Realizar el mismo procedimiento indicado para la determinación de bamboleo en las paletas agitadoras después de ajustar las laminillas y registrar los resultados.Aparato No. Figura 5. Introducir el calibrador de acoplamiento con su abertura más grande en el cople de la varilla con canasta para ajustar sus laminillas. VERIFICACION DEL BAMBOLEO DE LAS VARILLAS CON CANASTAS Levantar la cubierta del disolutor. como se ajustaron en el bamboleo de las paletas agitadoras (ver figura 3). Introducir en la varilla con canasta el indicador de distancia. quitar los vasos y el baño. En la paleta agitadora No. Verificar que la orilla inferior de la canasta esté dentro de las marcas del indicador. 1 VERIFICACION DE LA DISTANCIA DE LA ORILLA INFERIOR DE LA CANASTA AL FONDO DEL VASO Levantar la cubierta del disolutor y desmontar la paleta agitadora del vaso No. colocar una etiqueta reflejante en una de las varillas con canasta y montar la varilla con canasta. Medición del bamboleo a la altura de la varilla con canasta altura de la canasta VERIFICACION DE LA VELOCIDAD DE GIRO DE LAS VARILLAS CON CANASTA Levantar la cubierta del disolutor. 1. 27    . sacar el calibrador de acoplamiento e introducirlo nuevamente en el cople de la varilla con canasta pero ahora con su abertura más pequeña.

Programarlo a una velocidad de 25 rpm. Anotar los resultados. Medición de la velocidad de giro de las varillas con canastas EXCENTRICIDAD (DISOLUTOR HANSON) Encender el sistema en el orden siguiente: regulador de voltaje (en caso de contar con alguno) y disolutor. Figura 7. realizar las mediciones especificadas en la tabla 4 de especificaciones de dimensiones. Utilizando un medidor de desplazamiento calibrado y certificado. 28    . Los resultados deberán cumplir con los parámetros establecidos en la tabla de especificaciones mecánicas. DIMENSIONES Utilizando un vernier calibrado y certificado. determinar el desplazamiento existente en el centro de cada vaso con respecto al eje de rotación de los aparatos 1 y 2 de disolución que les correspondan.

Tomar con la jeringa y el dispositivo para toma de muestras 20 ml de cada una de las muestras y filtrar con membrana Durapore HV 0. Límites del porcentaje disuelto de las tabletas USP Tipo No Desintegrantes de Ácido Salicílico de 300 mg Lote: Q0D200 % DISUELTO APARATO EN 30 MINUTOS A 100 RPM Canastillas 23 . Tomar 10 ml de filtrado e introducir en un matraz aforado de 50 ml. aforar con agua grado inyectable. PREPARACIÓN DE LAS SOLUCIONES PROBLEMAS Introducir en cada uno de los 6 vasos de vidrio una tableta de Prednisona 10 mg USP con base de lactosa y agitar durante 30 minutos.2 CALIBRACION ANALITICA DEL DISOLUTOR SOTAX Y HANSON Material ver anexo I. 2) Tabla 6. 1) Paletas 17 . 29    . Límites del porcentaje disuelto de las tabletas USP Tipo Desintegrantes de Prednisona de 10 mg Lote: P0E203 % DISUELTO APARATO EN 30 MINUTOS A 100 RPM Canastillas 47 .82 (USP No. desechar los primeros 5 ml de filtrado.25 (USP No. Criterios de aceptación: Tabla 5. 1) Paletas 30 . el resto depositarlo en una vaso de precipitado.57 (USP No.45 μm. 2) Calibración con las tabletas Tipo desintegrante CONDICIONES PARA EL ENSAYO:  Medio de disolución: agua grado inyectable  Volumen de llenado: 500 ml  Temperatura: 37˚C  Velocidad de agitación 50 y/o 100 min-1 según los especifique el certificado de la tableta.30 (USP No.5.

CÁLCULOS (DISOLUTOR SOTAX AT7): Abs1 x 500 x 50 x 100 x W Std x 10 % disuelto de Prednisona/Tab. Tomar las lecturas en el espectrofotómetro de las extinciones de las soluciones Estándar y problema a 242 nm en celdas de cuarzo de 1 cm. de esta solución se aforan a 100 ml con agua grado inyectable.PREPARACIÓN DE LA SOLUCIÓN ESTÁNDAR (DISOLUTOR SOTAX AT7) En un matraz aforado de 50 ml disolver 2 mg de Prednisona.0% en comparación con la concentración a la que se llega con las tabletas en el medio de disolución. que equivale al 100. Estándar USP (peso Std) con 5 ml de Etanol GR y aforar con agua grado inyectable hasta la marca 10 ml. = --------------------------------------- Abs2 x W std teórico Donde: Abs1 = Extinción de la solución problema Abs2 = Extinción de la solución estándar W std = Peso real del estándar P std = Pureza del estándar W std teórico = Peso de estándar teórico 30    . = ----------------------------------------------- Abs2 x 1 x 10 x 50 x 100 x 10 Donde: Abs1 = Extinción de la solución problema Abs2 = Extinción de la solución estándar W std = Peso real del estándar CÁLCULOS (DISOLUTOR HANSON SR8 PLUS): Abs1 x W std x P std x 100 % disuelto de Prednisona/Tab. PREPARACIÓN DE LA SOLUCIÓN ESTÁNDAR (DISOLUTOR HANSON SR8 PLUS) Pesar con exactitud aproximadamente de 20 mg de estándar de Prednisona. contra un blanco de agua grado inyectable. Realizar una dilución de 10 en 100 ml con agua. Concentración final de activo de 20 μg/ml. disolver en 10 ml de etanol y aforar a 100 ml con agua.

Tomar con la jeringa y el dispositivo para toma de muestras 20 ml de cada una de las muestras y filtrar con membrana durapore HV 0. aforar con solución Buffer.Calibración con las tabletas tipo no desintegrante CONDICIONES PARA EL ENSAYO:  Medio de disolución: Buffer-Fosfato 0.3 mg de estándar de Ácido salicílico y disolver en 1 ml de etanol y aforar a 100 ml con Buffer de Fosfatos. disolver y aforar a 10 000 ml (10 litros) con agua grado inyectable. PREPARACIÓN DE LAS SOLUCIONES PROBLEMA Introducir en cada uno de los 6 vasos de vidrio una tableta de Ácido salicílico de 300 mg USP y agitar durante 30 minutos.04 g de dihidrógeno Fosfato de Potasio (KH2PO4) y 14.05M.05M. Estándar USP (Peso Std). adicionar con una pipeta 0.Fosfato 0. Tomar las lecturas en el espectrofotómetro de las absorbancias de las soluciones Estándar y problema a 296 nm en celdas de cuarzo de 1 cm. desechar los primeros 5 ml del filtrado.45 μm.40 0.05  Volumen de llenado: 900 ml  Temperatura: 37˚C  Velocidad de agitación: 50 y/o 100 min-1 según lo especifique el certificado de las tabletas calibradoras. REACTIVOS Solución Buffer-Fosfato 0.40 Pesar 68. Tomar 10 ml de filtrado e introducir en un matraz de 50 ml.05M pH 7.5 ml de Etanol GR y aforar con solución Buffer-Fosfato 0.05M. aforar con solución Buffer-Fosfato 0. PREPARACIÓN DE LA SOLUCIÓN ESTÁNDAR (DISOLUTOR HANSON SR8 PLUS) Pesar con exactitud aproximadamente 33.0% en comparación con la concentración a la que se llega con las tabletas en el medio de disolución. PREPARACIÓN DE LA SOLUCIÓN ESTÁNDAR (DISOLUTOR SOTAX AT7) En un matraz aforado de 50 ml disolver 3 mg de Ácido salicílico. el resto depositarlo en un vaso de precipitado. contra un blanco de solución Buffer-Fosfato 0. La concentración final de activo de 333 μg/ml.05M. que equivale al 100. 31    .7 g de Hidróxido de sodio (NaOH). Tomar 10 ml de esta solución e introducir en una matraz de 50 ml.05M pH 7. Realizar una dilución de 10 en 100 ml con agua.

CÁLCULOS (DISOLUTOR SOTAX AT7)

Abs1 x 900 x 50 x 100 x W Std x 10
% disuelto de Ac. salicílico/Tab. = --------------------------------------------------
Abs2 x 1 x 10 x 50 x 50 x 300

Donde:
Abs1 = Extinción de la solución problema
Abs2 = Extinción de la solución estándar
W std = Peso real del estándar

CÁLCULOS (DISOLUTOR HANSON SR8 PLUS)

Abs1 x W std x P std x 100
% disuelto de Ac. salicílico/Tab. = -----------------------------------------
Abs2 x W std teórico
Donde:

Abs1 = Extinción de la solución problema
Abs2 = Extinción de la solución estándar
W std = Peso real del estándar
P std = Pureza del estándar
W std teórico = Peso de estándar teórico

5.3 METODOLOGIA DISOLUCIÓN DE LEVONORGESTREL (HPLC)

Material ver anexo I.

Equipos:
Los equipos utilizados en la presente validación han sido calibrados, calificados y verificados, y
se detallan a continuación:

 Balanza analítica Sartorius BP-210-S
 Microbalanza analítica Sartorius MC-5
 Cromatógrafo de líquidos de alta resolución (HPLC No.1) equipado con los siguientes módulos:
Detector de Fluorescencia Modelo: 474 Marca: Waters
Detector UV Modelo: 486 Marca: Waters
Inyector automático Modelo 717plus Marca: Waters
Bomba A Modelo: 510 Marca: Waters
Bomba B Modelo: 510 Marca: Waters
Válvula de 10 vías Marca: Waters
Desgasificador de solventes Modelo: ERC Marca: Waters

32 

 

 Disolutor Sotax AT7
 Disolutor Hanson SR8 Plus
 Software Empower 2
 Termómetro Indicador de temperatura con RTD Marca: Kaye/Burs Engr Modelo: FTM-
100/604406
 Tacómetro No: TAC-001 Marca: Jaquet, Modelo: DHO 907
 Vernier Electrodigital: VER-009 Marca: Mitutoyo, Modelo: 9699
 Material de vidrio en la cantidad necesaria para los ensayos (pipetas volumétricas, matraces
aforados, con certificado clase A), tulipanes para pesaje, etc.

Criterios de aceptación:

Para las condiciones de disolución

Parámetro analítico Criterios de aceptación
Medio de disolución Confirmar que el lauril sulfato de sodio 0.1% en HCl 0.1 N
utilizado medio de disolución evaluado es capaz de liberar
al principio activo Levonorgestrel. Q= 75%, t= 45 min
CV ≤ 10.0%.
Velocidad de agitación Confirmar que la velocidad de agitación (100 rpm) indicada
en el método evaluado es la adecuada para la liberación
del principio activo. Q= 75%, t= 45 min CV ≤ 10.0%

Para el método HPLC

Parámetro analítico Criterios de aceptación
Selectividad Confirmar que el método evaluado es capaz de separar y
cuantificar las sustancias activas de los excipientes, sin
que exista interferencia de otras sustancias presentes.
Precisión del sistema CV ≤ 2.0%
Linealidad del sistema r ≥ 0.99
r2 ≥ 0.98
CVFR ≤ 2.0%
Precisión del método CV ≤ 3.0%
(Repetibilidad al 100%)
Estabilidad de la muestra La muestra es estable si, el intervalo de confianza (IC)
para la diferencia de la media de la muestra con respecto
a la media del análisis inicial, incluye el valor de cero y/o
la magnitud del efecto (Factor I) no excede de 97.0 a
103.0%
Tolerancia La diferencia de los valores promedio entre el disolutor
Sotax y Hanson (valor absoluto) debe ser ≤ 3.0%
33 

 

5.3.1 Procedimiento de disolución

La disolución del principio activo se realiza según la F. Eur 2.9.3., USP <711>, y JP 6.10. La
determinación posterior de los principios activos disueltos se realiza por HPLC en una columna de
fase inversa con conmutación de columnas (F. Euro. 2.2.29, USP <621>, JP).
Realizar el análisis de las muestras inmediatamente después de la disolución.

Condiciones de ensayo:

Aparato Aparato de paletas, según la PH. Eur., USP
y JP
Número de muestras n= 6
Medio de disolución Lauril sulfato de sodio 0.1% en HCl 0.1N
Volumen de llenado 900 ml
Temperatura 37˚C ± 0.5˚C
Velocidad de agitación 100 rpm
Duración de la prueba 45 min
Volumen de la prueba 10 ml
Filtración Sí, descartar los primeros 6 ml

Tabla 7: Condiciones de ensayo del método de disolución de levonorgestrel grageas

Preparación de las soluciones problema
Introducir 1 gragea en cada uno de los seis recipientes de vidrio que contienen 900 ml de medio
de disolución preparado. Agitar hasta el tiempo de muestreo según la especificación. En el tiempo
indicado se toman 10 ml de solución de cada recipiente de aparato de análisis.
Filtrar separadamente alícuotas de 10 ml de cada solución problema a través de un filtro de
membrana de celulosa regenerada Spartan 30/0.45 RC Whatman de diámetro de poro ≤ 0.45 μm
usando una jeringa de 10 ml, desechar los primeros 6 ml.

Las soluciones límpidas se usan como las soluciones problema.

Solución de referencia R1
Lauril sulfato de sodio 0.1% en HCl 0.1N (medio de disolución)

Preparación de la solución de referencia R2 (patrón al 100%)
Preparar una solución con 0.333 μg/ml (0.300 μg/ml) de levonorgestrel disolviendo patrón de
trabajo de levonorgestrel en metanol grado cromatografico y diluyendo con R1 (medio de disolución).
La cantidad máxima de metanol es 1.0% del volumen final R2= CR.

Ejemplo:
Pesar exactamente y disolver 3.333 mg (3.000 a 3.666 mg) de patrón de trabajo de
levonorgestrel en metanol grado cromatografico en un matraz aforado de 50 ml y aforar = Solución A.

34 

 

35    .8 y 1.0 mm Fase estacionaria: Corasil C18. S1 a S6. El factor de simetría (T) del pico de levonorgestrel debe estar entre 0. aforar con R1 (medio de disolución) = solución CR. Preparación de la solución de referencia R3 (placebo) Se transfirió una gragea placebo a un vaso del disolutor. 37 a 55 μm Columna: Acero. previamente llenado con medio de disolución. R2. Conmutar la válvula de 6 vías y separar la muestra en la columna analítica con fase móvil 2.0 ml de metanol grado cromatografico. R2. Realización del HPLC Purgar 100 μl de cada una de las soluciones problema S1 a S6.50 ml de la solución A en un matraz aforado de 100 ml. longitud 10 cm. R2 Inyectados: 100. R1. Ver diagrama de flujo de la válvula de 6 vías y los tiempos de conmutación de las columnas. Introducir 2. La inyección de R1 se usa para identificar los picos del sistema.0 mm Fase estacionaria: NovaPak. diámetro interno 4. longitud 33 mm. y se agitó por 30 minutos.8. se adicionan 38. R1 Detector: Detector UV a 242 nm Columna de enriquecimiento: Acero.3 ml por min Temperatura de la columna: 25  3˚C Tiempo de adquisición de datos: 10 min Prueba de idoneidad del sistema: El coeficiente de variación (CV) del área de los picos de levonorgestrel de 6 inyecciones de R2 no debe superar 3% para el pico de levonorgestrel (UV). Condiciones de ensayo de HPLC Volúmenes de S1 a S6. diámetro interno 4. 4 mm Fase móvil 1: Agua grado inyectable Fase móvil 2: Acetonitrilo + Metanol + Agua (350 + 150 + 500 ml) Medir los volúmenes separadamente y mezclar Caudal de la fase móvil 1: 2 ml por min Caudal de la fase móvil 2: 1.0 μl Secuencia de inyección: R1. o 100 μl de la solución de referencia R2 del automuestrador con fase móvil 1 a través de una válvula de 6 vías en la columna de enriquecimiento y concentrar.

Diagrama de flujo de la válvula de 6 vías y tiempos de conmutación de columnas      Bomba 1    (Fase móvil  Ciclo 1:        Lavado         Auto‐               muestreador          Válvula automática de 6  vías           Columna (Fase móvil 1)   Columna      analítica        Lavado    Detector     Sistema de datos  Bomba 1 (Fase móvil 1)  Ciclo 2:         Auto‐  muestreador  Lavado       Válvula de 6 vías           automática   Columna    (Fase móvil 1)    Columna      analítica     Bomba 2    (Fase móvil 2)         Lavado  Sistema de datos  B      Detector 36    .

Figura No. la fase móvil 1 fluye a través de columna de enriquecimiento y la fase móvil 2 fluye a través de la columna analítica. Inicio Ciclo 1 Ciclo 2 Ciclo 3 Final 2 minutos 6 minutos 2 minutos Ciclo 1: La muestra se transfiere a la columna de enriquecimiento usando fase móvil 1. la muestra se transfiere con la fase móvil 2 desde la columna de enriquecimiento hasta la columna analítica y se separa. Ciclo 3: La válvula se pone en la posición de partida. 8 Esquema de trabajo de la válvula de 6 vías en el HPLC 37    . Ciclo 2: La válvula se conmuta.

Disolución de levonorgestrel en porcentaje.  Velocidad de agitación: Desarrollar el perfil de disolución con los adecuados puntos de muestreo (15. Reportar la media. inyector y detector.Cálculos y resultados: Al ingresar las variables de cálculo al método. 5.8 y 1.3. Mediante la determinación de los siguientes parámetros cromatográficos:  Número de platos teóricos (N) mayor a 2000  Factor de simetría (T) entre 0. la desviación estándar y el coeficiente de variación de los valores obtenidos.1% en HCl 0.8  Coeficiente de variación (RSD) ≤ 3% Se comprobará el funcionamiento de: el sistema de bombeo. valores individuales AS x C1 x FV x 100 x cR AS x C1 x FV x cR = -----------------------------------. = ------------------------------ AR x C2 x 100 AR x C2 AS = áreas de levonorgestrel en los cromatogramas de las soluciones problema S1 a S6 (en UA) AR = áreas de levonorgestrel en los cromatogramas de la solución de referencia R2 (en UA) C1 = contenido del patrón de trabajo de levonorgestrel (en porcentaje) C2 = contenido declarado de levonorgestrel por comprimido recubierto (en mg) cR = concentración de levonorgestrel en R2 (en mg/ml) FV = volumen de llenado en ml UA = unidades de área Ensayo de adecuabilidad del sistema. el cual se realizó inyectando sucesivamente 6 veces la solución estándar.1N. Previo a la validación del método analítico se realiza un ensayo de adecuabilidad del sistema. así como la gráfica del perfil de disolución. la desviación estándar y el coeficiente de variación de los valores obtenidos.1% en HCl 0. velocidad de agitación 100 rpm. del medio de disolución lauril sulfato de sodio 0. 30 y 45 minutos) en Lauril sulfato de sodio 0. 38    .1% en HCl 0. Reportar la media.2 Evaluación de las condiciones de disolución del principio activo Levonorgestrel: Los parámetros evaluados fueron: Para las condiciones del ensayo de disolución  Medio de disolución: Probar la influencia del medio de disolución (Lauril sulfato de sodio 0.1N.1N) en el comprimido recubierto usando la condición de pH establecida en la norma de análisis. se obtienen los resultados directamente por generación del Software Empower 2. así como la gráfica del perfil de disolución.

desechar los primeros 6 ml.3 Validación del método analítico por HPLC De acuerdo a los criterios mencionados anteriormente. La solución límpida se usa como la solución problema. es decir se analizarán los siguientes parámetros: 1. Filtrar separadamente una alícuota de 10 ml de la solución problema a través de un filtro de membrana de celulosa regenerada Spartan 30/0. Selectividad Soluciones de análisis: Solución blanco (medio de disolución) Solución placebo Solución de referencia Solución muestra Preparación del placebo: Introducir 1 gragea placebo en uno de los seis recipientes de vidrio que contienen 900 ml de medio de disolución preparado. para el presente trabajo corresponde al TIPO III. Precisión del sistema Evaluar la precisión del sistema con seis inyecciones de solución estándar al 100%. adicionar 38. Preparación de la solución de referencia: Pesar exactamente y disolver 3. desechar los primeros 6 ml.5. 39    . Agitar hasta el tiempo de muestreo según la especificación.45 RC Whatman de diámetro de poro ≤ 0.45 RC Whatman de diámetro de poro ≤ 0.0 ml de metanol para cromatografía. Preparación de la muestra: Introducir 1 gragea en cada uno de los seis recipientes de vidrio que contienen 900 ml de medio de disolución preparado. Introducir 2. En el tiempo indicado se toman 10 ml de solución de cada recipiente del aparato de análisis. 2.45 μm usando una jeringa de 10 ml. Filtrar separadamente alícuotas de 10 ml de cada solución problema a través de un filtro de membrana de celulosa regenerada Spartan 30/0. aforar con R1 (medio de disolución) = solución cR. Reportar el tiempo de retención de los componentes separados.45 μm usando una jeringa de 10 ml.333 mg de patrón de trabajo de levonorgestrel en metanol para cromatografía en un matraz aforado de 50 ml y aforar = Solución A.3. En el tiempo indicado tomar 10 ml de solución de cada recipiente de aparato de análisis. Las soluciones límpidas se usan como las soluciones problema.50 ml de la solución A en un matraz aforado de 100 ml. Agitar hasta el tiempo de muestreo según la especificación. Inyectar separadamente cada preparación conforme a las condiciones cromatográficas indicadas en la norma de análisis.

Concentración: 0.1% en HCl 0.1 N (medio de disolución).1N (medio de disolución). Linealidad del sistema Se determinó construyendo una curva de calibración utilizando 5 diluciones preparadas a partir de la misma solución patrón.1% en HCl 0. Concentración: 0. El intervalo de concentraciones medidas fue del 70 al 130% e incluyó la concentración seleccionada como el 100%.400 mg de Levonorgestrel con metanol y aforar.1% en HCl 0.1% en HCl 0.5 mg como el 100%.0 ml de metanol para cromatografía.666 mg) de patrón de trabajo de levonorgestrel en metanol para cromatografía en un matraz aforado de 50 ml y aforar.95 mg. Estándar al 130%: Medir 6.5 ml de la solución patrón en un matraz aforado de 100 ml.0 ml de metanol y aforar con lauril sulfato de sodio 0. De esta solución hacer diluciones por duplicado de acuerdo a lo siguiente: Estándar al 70%: Medir 3. considerando la concentración de 1. adicionar 38. Concentración: 0.0 ml de la solución patrón en un matraz aforado de 25 ml.Estándar al 100%: Pesar exactamente y disolver 3. 3. adicionar 9.5 ml de metanol y aforar con lauril sulfato de sodio 0.1% en HCl 0. aforar con lauril sulfato de sodio 0. Concentración: 0. adicionar 38.00119 mg/ml.1N. Estándar al 100%: Medir 1.0 ml de metanol y aforar con lauril sulfato de sodio 0.6 ml de metanol y aforar con lauril sulfato de sodio 0.000 a 3.00204 mg/ml.1N (medio de disolución).00221 mg/ml.1N (medio de disolución).00170 mg/ml.5 ml de la solución patrón en un matraz aforado de 100 ml.0 ml de la solución patrón en un matraz aforado de 20 ml. adicionar 19. Estándar al 120%: Medir 3. se trabajó por duplicado para cada dilución. adicionar 38. 40    . es decir el rango de concentraciones estudiadas fue de 1. Solución Patrón: En un matraz aforado de 100 ml se disuelven 3.1% en HCl 0.50 ml de la solución anterior en un matraz aforado de 100 ml. Calcular el coeficiente de variación de las seis áreas obtenidas. adicionar 7.333 mg (3.00136 mg/ml.05 a 1.0 ml de metanol y aforar con lauril sulfato de sodio 0. Introducir 2. Estándar al 80%: Medir 1. Concentración: 0.0 ml de la solución patrón en un matraz aforado de 50 ml.1N (medio de disolución).

Precisión del método Preparar una solución stock de Levonorgestrel en metanol. filtrar las soluciones e inyectar bajo las condiciones cromatográficas establecidas en la norma de análisis. Nota: El análisis y reanálisis deberán ser llevados a cabo por el mismo analista en cada tiempo de análisis (0 y 24 horas). con las áreas obtenidas. Analizar a las condiciones establecidas en la norma de análisis. el coeficiente de determinación (r2) y el coeficiente de variación (CV) del factor de respuesta. Llevar a cabo la cuantificación usando método de calibración externo. Llevar a cabo la cuantificación usando método de calibración con estándar externo. Analizar las muestras usando diferentes aparatos de disolución: 1) Sotax. 2) Hanson. Reportar el coeficiente de correlación (r). 41    . 5. Estabilidad de la muestra Soluciones de análisis: preparar la solución problema. por sextuplicado y analizar a la longitud de onda indicada en la norma de análisis. Calcular el coeficiente de variación de los seis resultados obtenidos. Calcular el promedio de los seis valores obtenidos con cada disolutor. usando el mismo estándar de referencia para muestras dependientes y/o utilizando un estándar de referencia fresco para la realización del ensayo para muestras independientes. 4. Tolerancia Preparar seis muestras de acuerdo a la norma de análisis. grageas junto con placebo gragea dentro de los vasos de disolución individualmente. Reanalizar a las 24 horas de almacenamiento a temperatura ambiente. 6. Reportar el intervalo de confianza IC y la media del factor I. Después de llevar a volumen (total de 900 ml con medio de disolución) agitar por 45 minutos a 100 rpm. pesando 15 mg de levonorgestrel en un matraz aforado de 100 ml y transferir alícuotas de 10 ml correspondiendo aproximadamente al contenido de Levonorgestrel.

9 37.9 36.9 36. RESULTADOS 6.9 37.9 Cumple        VERIFICACIÓN DE LA DISTANCIA DE LA ORILLA INFERIOR DE LA PALETA AGITADORA AL FONDO DEL VASO Resultado: Cumple Figura 9.0 36.9 36. el sistema de transmisión no presenta desgaste.1 CALIBRACION MECANICA DISOLUTOR SOTAX REVISION GENERAL La capacidad del fusible es de 10A.9 36. Verificación de temperatura del medio de disolución lauril sulfato de sodio 0.9 37.1% en HCl 0. VERIFICACIÓN DE LA TEMPERATURA DEL MEDIO EN LOS VASOS DEL DISOLUTOR SOTAX Tabla 8.1N Temperatura ˚C en los vasos (37 ˚C ± 5°C) No. Sistema mecánico todos los rotores y mandriles están completos.9 36. 100 y 150 rpm. el disolutor funciona correctamente y se encuentra libre de vibraciones excesivas.9 36.9 36.9 36.9 36.9 36. Verificación de la distancia de paletas agitadoras del disolutor 42    .0 36.0 36.9 36.9 36.9 36.9 36. de vaso 1 2 3 4 5 6 7 36.6. el sistema de control de velocidad corresponde a 50.

26 0.17 0.28 0.27 0.13 con canastilla 100 0.9 99.11 0.11 0.23 0.12 0.61 100.46 0.08 0.49 50.83 50.11 0.16 0.76 100.15 0.16 0.16 Varilla  1 mm 50 0.34 49.4 99.15 0.36 0.20 0.28 0.14 canastilla 100 0.51 49.23 Paletas 100 0.26 0.7 99.67 50. Velocidad de giro de las paletas agitadoras disolutor Sotax AT7 Paletas agitadoras 1 2 3 4 5 6 7 Limites RPM Min Max Min Max Min Max Min Max Min Max Min Max Min Max 50 49.13 0.18 0.23 100.38 49. Bamboleo de las varillas y paletas agitadoras disolutor Sotax AT7 Bamboleo rpm 1 2 3 4 5 6 7 Especificación 50 0.18 0.52 50.62 50.21 Cumple        VERIFICACIÓN DE LA VELOCIDAD DE GIRO DE LAS PALETAS AGITADORAS Límites: 50 rpm  2 rpm 100 rpm  4 rpm Tabla 11.8 99.47  2 rpm 100 99.28 0.67 49.18 0.16 Varillas 100 0.20  1 mm 50 0.68 100.21 0.18 0.34 0. Bamboleo de las varillas con canastillas disolutor Sotax AT7 Bamboleo rpm 1 2 3 4 5 6 7 Especificación Varilla sin 50 0.15 0.10 0.7 99.71 50.09 0.21 0.21 0.27 0.17 0.39 0.33 0.23 49.59 50.66 100.14 0.4 99.20 0.20 0.13 0.15 0.49 0.26 Cumple        VERIFICACIÓN DEL BAMBOLEO DE LAS VARILLAS CON CANASTAS Tabla 10.30 0.24 49. VERIFICACIÓN DEL BAMBOLEO DE LAS VARILLAS Y PALETAS AGITADORAS Tabla 9.19 0.22 0.32 0.13 0.7  4 rpm Cumple        43    .65 100.73 100.13 0.

9 9.72 50.39 49.6 99.99 4.92 42.73 41.97 18.1  Espesor de la hélice  3.97 3.64 100.94 41.42 50.41 49.35  2 rpm 100 99.34 74.0 – 5.91 9.6 50.56 49.96 3.97 Altura de la hélice  19.03 41.66 50.8  4 rpm Cumple        VERIFICACIÓN DE LAS DIMENSIONES DE LAS PALETAS                   Tabla 13.47 74.81 50.01 3.89 9.96 Espesor de la hélice 3.0 – 43.9 99.35 100. Criterios de aceptación de las dimensiones de las paletas disolutor Sotax AT7  Criterios de aceptación:  mm  Diámetro del eje  9.44 74.8 99.85 50.98 3.98 Cumple        44    .38 74.5 – 19.4 74.9 9.96 41.65 49.7 100. Resultado de dimensiones de las Paletas del disolutor Sotax AT7 Paleta Dimensiones 1 2 3 4 5 6 7 Diámetro del eje 9.74 100.93 9.03 18.8 99. VERIFICACIÓN DE LA VELOCIDAD DE GIRO DE LAS VARILLAS CON CANASTAS Tabla 12.03 Cuerda mayor  74.91 9. Velocidad de giro de las varillas con canastas disolutor Sotax AT7 Varillas con Canastas 1 2 3 4 5 6 7 Limites RPM Min Max Min Max Min Max Min Max Min Max Min Max Min Max 50 49.38 100.04 18.0  Altura de la hélice  18.44 49.01 19.5  Cuerda mayor  74.9 99.23 49.05 42.97 19.44 Cuerda menor  41.0 – 75.65 100.0        Tabla 14.96 19.43 74.99 3.0  Cuerda menor  41.6 99.4 – 10.77 100.69 50.

4  0. Resultados de disolución tabletas de Ac.5 Volumen del medio: 900 ml Temperatura: 37˚C Velocidad de agitación: 100 rpm Tiempo: 30 minutos Tabla 16. de Vaso 1 2 3 4 5 6 Límites Aparato 1 58 69 62 55 65 62 47 – 82% Aparato 2 39 44 39 40 38 40 37 – 70% Cumple       Calibración con tabletas no desintegrantes de ácido salicílico Condiciones: Medio de disolución: Solución Buffer de fosfato pH 7. Resultados de disolución tabletas de Prednisona No.6. de Vaso 1 2 3 4 5 6 Límites Aparato 1 25 25 26 25 27 25 23 – 30% Aparato 2 19 18 19 20 18 20 17 – 25% Cumple       45    . salicílico No.2 CALIBRACION ANALITICA DEL DISOLUTOR SOTAX AT7 Calibración con tabletas desintegrantes Condiciones: Medio de disolución: Agua grado inyectable Volumen del medio: 500 ml Temperatura: 37˚C Velocidad de agitación: 50 rpm Tiempo: 30 minutos Tabla 15.

0 – 5.8˚C Temperatura del baño Temperatura 37°C  0.54 74.03 104.5 mm 19.02 19.63 Temperatura 37°C  0.18 Diámetro interno 98.09 166.52 9.0 1.9 36.9 Tabla 19.3 CALIFICACION MECANICA DISOLUTOR HANSON: Tabla 17.0 mm 26.00 Cuerda menor 41.06 19.0 mm 104.5 – 19.69 167. diámetro interno de los vasos y temperatura del medio de disolución POSICION LÍMITES 1 2 3 4 5 6 VASOS Identificación V1 V2 V3 V4 V5 V6 Vibración No más de 0.5 1.0 mm 0.05 0.51 9.6.41 103.5 26.54 74.87 4.0 mm 1.018 Altura 160.0 – 75. Resultados de vibración. altura.42 41. Resultados de temperatura del baño y velocidad de agitación PARAMETRO ESPECIFICACIÓN LÍMITES RESULTADOS Nivel del instrumento Con respecto al plano horizontal NIVELADO NIVELADO Temperatura 35°C  0.9 36.0 – 43.42 42.54 103.43 42.9 36.9 36.010 0.008 0.0 0.4 – 10.25 42.36 Cuerda mayor 74.89 42.5˚C 36.0 – 106.95 165.1 mm 9.9˚C Temperatura 40°C  0.0 25.5˚C 36.07 19.65 103.03 19.04 19.33 0.0 – 27.0 mm 4.52 9.52 9.12 165.9˚C Velocidad: 50 rpm 48 – 52 rpm 50 rpm Velocidad: 100 rpm 96 – 104 rpm 100 rpm Velocidad (rpm) Velocidad: 150 rpm 144 – 156 rpm 150 rpm Velocidad: 200 rpm 192 – 208 rpm 200 rpm Tabla 18.5 1.0 mm 165.41 No más de 1.54 46    .38 103.83 4.0 fondo del vaso Diámetro del eje 9.13 0.1 mils 0.1 mm Espesor de la hélice 3.5˚C 34.012 0.0 mm Altura con respecto al 23.010 0.52 9.5 25.52 9.08 0.83 4.5 26.0 1.5˚C 39.81 4. Dimensiones de las paletas agitadoras disolutor Sotax AT7 PALETAS LÍMITES P1 P2 P3 P4 P5 P6 Excentricidad No más de 2.5 Bamboleo No más de 1.5 25.9 36.53 74.20 0.51 74.53 74.0 – 210.0 mm 42.84 Altura de la hélice 18.50 164.010 0.0 mm 74.4 – 10.84 4.

00 22. S MX 029 S11.4  0.2 30 – 57% Cumple       Calibración tipo no desintegrante con tabletas de Ácido salicílico Condiciones: Medio de disolución: Solución Buffer de fosfato pH 7.4 CALIBRACION ANALITICA DEL DISOLUTOR HANSON SR8 Calibración tipo desintegrante con tabletas de Prednisona Condiciones: Medio de disolución: Agua grado inyectable Volumen del medio: 500 ml Temperatura: 37˚C Velocidad de agitación: 50 rpm Tiempo: 30 minutos Tabla 20.0 18.0 19.9 39. 47    .6 38.00 22.0 20. Resultados de disolución tabletas de Ácido salicílico 1 2 3 4 5 6 Límites Aparato 2 21.6. Resultados de disolución tabletas de Prednisona 1 2 3 4 5 6 Límites Aparato 2 41.0 17 – 25% Cumple       6.1 37.3 37.9 37.5 Volumen del medio: 900 ml Temperatura: 37˚C Velocidad de agitación: 100 rpm Tiempo: 30 minutos Tabla 21.5 EVALUACION DE LAS CONDICIONES DE DISOLUCION DEL PRINCIPIO ACTIVO LEVONORGESTREL Medio de disolución y Velocidad de agitación Se examinó la influencia del medio de disolución en la liberación del principio activo de Levonorgestrel gragea bajo la condición del pH establecida en la norma de análisis No.

(%) 1. Gráfica perfil de disolución de Levonorgestrel disuelto en intervalos de 15 a 45 minutos. Los resultados se presentan en la tabla siguiente: Tabla 22. 1. est. la evaluación se realizó a la velocidad de agitación de 100 rpm.1 N con intervalos adecuados de muestreo (15.47 0.56 Mínimo 92 97 98 Máximo 95 99 99 Figura 10.55 C. Para esto se desarrolló un perfil de disolución en lauril sulfato de sodio 0.65 0.1% en HCl 0.63 0. 30 y 45 minutos).57 0. 48    .V. Perfil de disolución de levonorgestrel grageas Tiempo de disolución (minutos) 15 30 45 Levonorgestrel (% teórico declarado) Muestra 1 95 98 98 Muestra 2 95 98 99 Muestra 3 94 98 98 Muestra 4 95 99 99 Muestra 5 92 97 98 Muestra 6 92 98 99 Media (%) 94 98 99 Desv.

la cantidad de principio activo disuelto se corrigió por cálculo. Solución blanco -----------. 6. la capa tiene que disolverse antes de que ocurra la disolución del principio activo. 7. S MX 029 S11. se inyectaron separadamente y conforme a las condiciones cromatográficas indicadas en la norma de análisis No. 49    .1N.713 (S-Lote: 1004) En los cromatogramas obtenidos de levonorgestrel presenta tiempo de retención de aproximadamente 7. Selectividad de los componentes relevantes.1% en HCl 0. una solución de referencia (estándar de levonorgestrel al 100%) y una solución muestra de levonorgestrel gragea Lote: 1004 (S). respuestas en tiempo de retención. En el perfil de disolución el volumen tomado del recipiente de disolución no se sustituyó.647 (R2-estándar al 100%) 4. ésta puede explicarse por la composición del producto como gragea. principio activo Tiempos de retención y excipiente (en minutos Excipiente Levonorgestrel (placebo) 1. Puede observarse una liberación inmediata de levonorgestrel a los 15 minutos. Tabla 23. 7. preparadas de acuerdo a la norma de análisis. Solución placebo (R3) -----------. Solución muestra -----------.713 minutos. De conformidad con los resultados obtenidos el medio de disolución y la velocidad de agitación son los adecuados para la disgregación de los comprimidos recubiertos. Solventes. una solución placebo (Placebo gragea Lote: 1464). Solución de referencia -----------. ------------ (R1-medio de dislución) 2. ------------ 3.6 Parámetros de validación del Método HPLC Selectividad La selectividad fue evaluada con una solución blanco (lauril sulfato de sodio 0.

Cromatograma solución placebo 50    . Cromatograma de solución blanco SOLUCIÓN PLACEBO (R3) Figura 12. SOLUCIÓN BLANCO (R1-MEDIO DE DISOLUCIÓN) Figura 11.

Cromatograma de solucion estándar SOLUCION MUESTRA (S-Lote: 1004) Figura 14. Cromatograma de solución muestra 51    . SOLUCION REFENCIA (R2-ESTANDAR AL 100%) Figura 13.

día y misma calibración).0 404926 6 100.0 404312 3 100.0 405536 n 6 media 404248 s 1434.4% Precisión del método Repetibilidad al 100% Se preparó una solución patrón metanólica de Levonorgestrel (15 mg en 100 ml = 0. mismo instrumento. de esta solución se tomaron alícuotas de 10 ml y se transfirieron seis veces junto con un comprimido placebo a seis recipientes de disolución distintos.0% 0. se llevó a un volumen de 900 ml. Se confirmó que el método es capaz de separar y cuantificar la sustancia activa de los excipientes sin que existiera interferencia de otras sustancias presentes. de Concentración Respuesta inyección Porcentual teórica (Unidades de área) 1 100. 52    . lo cual demostró la selectividad adecuada del método.8 CV < 2. Las condiciones para las 6 repeticiones fueron idénticas (mismo operador. Se calculó el coeficiente de variación de los 6 resultados. Tabla 24 Evaluación respuesta en unidades de área del estándar de levonorgestrel No. La cuantificación se realizó usando un método de calibración con estándar externo (Levonorgestrel).0 401448 2 100. Se evaluaron las áreas estadísticamente.0 404500 5 100.0 404765 4 100. Posteriormente se trataron conforme al ensayo de disolución. Las soluciones filtradas se inyectaron después de agitar durante 45 minutos.15 mg/ml correspondientes a aproximadamente el contenido declarado en el producto). Precisión del sistema La precisión del sistema fue evaluada con 6 inyecciones de 100 μl de solución estándar al 100% (solución de referencia).

Porcentaje de recuperación de levonorgestrel Concentración Concentración % de Adicionada Recuperada recobro (mg/gragea) (mg/gragea) 1.500 1. Linealidad del sistema Porcentaje Alícuota Alícuota de Aforo Conc. La preparación de las soluciones de prueba fue realizada por duplicado.503 100 1. Las soluciones de prueba se prepararon por duplicado a cada nivel de concentración.0017 mg/ml. Preparación de la solución de Referencia: En un matraz aforado de 100 ml se disuelven 3.500 1.500 1.512 101 1.0 ml 19. Preparación de las soluciones estándares de trabajo: De la solución estándar de referencia de levonorgestrel.570 mg) de Levonorgestrel estándar de trabajo en metanol para cromatografía y se lleva al aforo.5 ml 25 ml 0.513 101 1.0 ml 100 ml 0.5 ml 38.518 101 n 6 media 100.00204 120A 503864 120B 501144 130% 6.5 CV < 3.0 ml 7. considerando que la concentración al 100% equivale a 0.400 mg (3.1% en HCl 0.6 ml 20 ml 0.500 1.0 ml 9.00221 130A 551802 130B 544637 *Diluente: Lauril sulfato de sodio 0. (mg/ml) Concentración Respuesta de la metanol para con de porcentual (unidades solución cromatografía diluente* Levonorgestrel teórica de área) Stock (X) (y) 70% 3.516 101 1.00170 100A 419822 100B 418823 120% 3.230 – 3.5% Linealidad del sistema La linealidad del sistema fue evaluada con 5 niveles de concentración diferentes.00136 80A 336622 80B 335725 100% 1.00119 70A 296308 70B 304416 80% 1. hacer diluciones por duplicado de acuerdo al siguiente esquema: Tabla 26.503 100 1.1N (medio de disolución) 53    .0% 0. Tabla 25.500 1. según método analítico.500 1. utilizando solución estándar de Levonorgestrel en un rango de 70% a 130%.0 ml 50 ml 0.0 ml 100 ml 0.7 s 0.5 ml 38.

Datos estadísticos Fórmula de calibración lineal y = a + bx Ordenada al origen a = 7380.7 Pendiente b = 4139. r2 1.9986 y = 4139. también es proporcional en el rango estudiado. LINEALIDAD DEL SISTEMA Corrida A Respuesta en Unidades de Area y = 4945.0%.998622 Coeficiente de correlación = 0.36x + 7380.0). El modelo lineal representa de manera correcta la relación entre concentración porcentual teórica y respuesta en unidades de área.8576 R2 = 0.8x ‐ 106442 Corrida B R² = 0.98.36 Coeficiente de variación = 0. Grafica de regresión lineal de Levonorgestrel en el rango de concentración para disolución de 70.7 Concentración Porcentual Teórica Figura 15. r 1. Estabilidad de la muestra analitica 54    . Variación de la concentración de levonorgestrel.0%. La regresión lineal (concentración en % / área) fue calculada conforme al método de mínimos cuadrados usando las áreas y concentraciones para cada inyección como réplica independiente.2 < 2. Los criterios de aceptación se cumplen para el: CVFR 1.930479 Coeficiente de determinación = 0.99.00 > 0.00 > 0.0% a 130.999311 Los cálculos estadisticos se realizaron con el software para análisis estadistico de Validación de Métodos Analíticos (SAEVMA W-2.

2(c + 1) grados de libertad y una probabilidad acumulada de 0. Las estabilidad de la muestra analitica fue evaluada con un lote de levonorgestrel grageas. Formulas Intervalo de confianza: IC=(Yn – Y0)  t* x Spn2 (2/3) . Media del factor I: I = ΣIn/N Factor I = (Yn / Y0) x 100 Resultados: Tabla 27.8585 confianza Inferior IC1= -3.5000 S12= 6. Estabiliad de la muestra tiempo 0 y 24 h almacenamiento. Se prepararó una solución estándar y seis soluciones problema.2222 IC0 = intervalo Superior IC1= 4. en el anexo.. Ambiente (Y1) % recobro % recobro 103 106 98 99 99 100 100 100 101 101 102 101 Media: Y0= 100. Ver tabla de la distribución “t” de Dunnett. Los matraces se conservaron a aproximadamente 20˚C  2˚C (temperatura ambiente) con luz de día y fueron analizadas después de 24 horas de almacenamiento bajo las mismas condiciones de operación por el mismo analista.86 2S02 + 2S02 Varianza ponderada: sp2n = ----------------. Análisis inicial (Y0) A Temp.975 α =6 (equivalente al 95% de confianza). alicuotas de las soluciones se almacenaron en matraces aforados de vidrio incoloro y transparente.5251 El valor resultante del ensayo inicial se utilizó para comparar el valor del ensayo a las 24 horas de almacenamiento. las cuales fueron evaluadas inmediatamente después de su preparación (tiempo cero).1667% Sp2= Varianza ponderada Sp12= 3.5000% Y1= 101. 55    .1667% Varianza: S02= 3. t* = 2. 2(c + 1) t* = Valor de la t de Dunnett con “c” comparaciones.

5% El resultado obtenido cumple con lo establecido en el criterio de aceptación 1. Tolerancia Se prepararon 2 pares de seis muestras de Levonorgestrel grageas como se describe en la norma de análisis No. 2) Hanson. La cuantificación se realizó usando método de calibración con estándar externo.0%.9 I2 101.7 no excede el  3%. S MX 029 S11. aproximadamente 20  2˚C (temperatura ambiente) con luz diurna.7% La diferencia de los valores promedio de Levonorgestrel de las soluciones problema S es menor de 1%. Los resultados obtenidos cumplen con lo establecido en los criterios de aceptación. 56    .0 Ī = Media del factor I Ī1= 100.0 I3 101.5251 incluye el valor de cero y el Factor I1 = 100. Estas muestras se analizaron usando los aparatos de disolución: 1) Sotax. Tabla 28. Intervalo de confianza I1 102.0% 100.8585 a -3. Resultados: Tabla 29.0 I6 99.0%.0 I5 100. El intervalo de confianza (IC) 4. lo cual demuestra la estabilidad de la solución estándar y la solución problema durante 24 horas de almacenamiento. Se analizaron con las condiciones establecidas en la norma de análisis. La diferencia de los valores promedio entre ambos equipos es menor del 3. Comparación de resultados disolutor Sotax (Equipo1) y Hanson (Equipo 2) Equipo 1 Equipo 2 103% 103% 98% 98% 99% 99% 98% 100% 98% 101% 98% 102% Media: 99. Se calculó el valor promedio de los seis porcentajes resultantes. No son necesarias precauciones especiales.5 < 3.0 I0= Factor I0 I4 100.

647 min). la diferencia de los valores promedio entre ambos equipos es menor del 3. altura de los aparatos 1 y 2 con respecto al fondo del vaso.0%. eje.998622.5%.7.8585 a -3. obteniéndose un tiempo de retención a los 7. obteniéndose una desviación estándar relativa CV de 0. De esta manera se comprobó experimentalmente la utilidad del procedimiento establecido para la validación del método analítico.98. dimensiones (de vaso. y un coeficiente de determinación r2= 0.0%. siendo el valor máximo < 3. 100%. Tolerancia. incluye el valor cero y/o la magnitud del efecto (Factor I) 100. La estabilidad de la muestra fue evaluada después de 24 horas de almacenamiento. vibración. canastillas y paletas) establecidos. Linealidad del sistema. 80%. DISCUSION Los resultados obtenidos en la calibración mecánica de los disolutores Sotax y Hanson cumplen con los parámetros de temperatura. se calculó el intervalo de confianza (IC) 4. siendo el valor mínimo de 0. siendo el valor máximo de 2.0%.647 minutos de la solución muestra y de la solución de referencia.0%.0% a 103. siendo el valor mínimo de 0.5%. Se tienen registros de todos los pasos realizados durante el proceso de calibración y los certificados de los instrumentos y materiales utilizados. mientras que la solución blanco y placebo no muestran ninguna respuesta en el tiempo indicado. seguro de retención.999311. El estudio de precisión del método mostró una buena reproducibilidad de los resultados.4%. Estabilidad de la muestra analítica.0017 mg/ml) las cuales al ser evaluadas estadísticamente. El método analítico es selectivo.5251 para la diferencia de la media de la muestra con respecto a la media del análisis inicial. obteniéndose una desviación estándar relativa (RSD) de 0. Se analizaron las siguientes concentraciones: 70%. 120% y 130% (siendo el 100% igual a 0. Precisión. lo que demuestra que existe regresión (relación lineal) entre las variables concentración y sus respuestas. El estudio de precisión del sistema mostró una buena repetibilidad de los resultados.99.713 y 7.713 y 7. 57    . se observó que por el rango entre 70% y 130% se obtienen un coeficiente de correlación r= 0. Todos los resultados obtenidos en la validación del método analítico permiten asegurar que el método analítico es confiable. velocidad de giro. En cuanto a la validación de los parámetros de HPLC: Selectividad. Se calculó el valor promedio de los seis porcentajes resultantes de cada equipo siendo el valor 1.7% no excede de 97. así como también la calibración analítica de las tabletas de ácido salicílico (no desintegrantes) y tabletas de prednisona (desintegrantes) cumplen con los límites establecidos en los certificados de dichas tabletas. bamboleo. porque los excipientes de la formulación no interfieren en la determinación del principio activo ya que no se detecta ninguna respuesta significativa en el cromatograma. Así mismo los tiempos de retención son similares tanto para el estándar como para la muestra (7.

También se comprobó que la solución estándar y las muestras a la concentración de trabajo son estables durante 24 horas de almacenamiento. también se comprobó la linealidad con el coeficiente de variación de los factores de respuesta y se corroboró que el valor de la pendiente es significativamente distinta de cero y que el intercepto no está estadísticamente alejada del cero.0%. Los resultados obtenidos de la prueba de perfil de disolución del medicamento conteniendo levonorgestrel como principio activo muestran que el comportamiento de disolución in vitro es confiable ya que cumple satisfactoriamente con todos los criterios de aceptación de validación reportados en la NOM-177-SSA-1-1998. pues no se presentaron picos que interfieran con el levonorgestrel.V. Al realizar la validación del método de disolución de levonorgestrel grageas en el medio de disolución los resultados indican que el método para cuantificar levonorgestrel es confiable.V. La metodología es selectiva frente a los excipientes. registros obtenidos y resultados podemos concluir que los disolutor SOTAX AT7 y el disolutor Hanson SR8 plus cumplen con los criterios de aceptación establecidos en la calificación inicial y se encuentran aptos para realizar análisis y validaciones. siendo la diferencia de los valores promedio entre ambos equipos es menor de 3. 58    . No son necesarios precauciones especiales. 20˚  2˚C (temperatura ambiente) con luz diurna. S MX 029 S11 para la categoría tipo III. Por todos los resultados obtenidos queda demostrado que la metodología cumple con los parámetros mínimos descritos en la norma de análisis No. Por lo tanto con base en toda la documentación. Se demostró que para el análisis pueden utilizarse los equipos de disolución SOTAX AT7 y Hanson SR8 Plus ya que la prueba de tolerancia arrojo valores similares entre ambos. Se establece que la metodología analítica para levonorgestrel grageas es lineal en el intervalo de concentración estudiado debido al valor obtenido para el coeficiente de correlación. menor al 3%. Se tienen registrados todos los pasos realizados durante el proceso de calibración.8. con lo que se concluye que la metodología es precisa. La metodología aprobó los ensayos de precisión del sistema y del método al ser el C. CONCLUSION Los resultados obtenidos de la calibración mecánica de los disolutores Sotax AT7 y Hanson SR8 Plus cumplen con los parámetros establecidos así como también los resultados obtenidos de la calibración analítica cumplen con los límites establecidos de % disuelto de las tabletas de ácido salicílico (no desintegrantes) y prednisona (desintegrantes). y de los certificados de los instrumentos y materiales utilizados en el Informe de Calibración de los disolutores Sotax AT7 y Hanson SR8 Plus. menor al 2% y aprobó el ensayo de reproducibilidad al ser el C.

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45 μm.05 M pH 7. T. T. Estándar USP Lote: N0E330  Tabletas de Ácido salicílico 300 mg USP Lote: Q0D200  Ácido salicílico. ANEXO I MATERIAL Y EQUIPO UTILIZADO EN LA CALIBRACION MECANICA DEL DISOLUTOR SOTAX Y JANSON Material:  Agua grado inyectable Equipo:  Manual de operación del disolutor SOTAX AT7 y HANSON SR8 PLUS  Cronómetro con certificado vigente de calibración  Calibrador electrodigital con certificado vigente de calibración  Indicador de temperatura con RTD con certificado vigente de calibración  Multímetro digital  Kit de verificación MATERIAL UTILIZADO EN LA CALIBRACION ANALITICA DEL DISOLUTOR SOTAX Y JANSON Material:  Tabletas de Prednisona 10 mg USP Lote:P0E203  Prednisona. Estándar USP Lote: K0F112  Etanol GR  Agua grado inyectable  Buffer de fosfato 0. Baker Lote: L31481 63    .05  Membranas durapore HV 0. Baker Lote: A45161  Hidróxido de sodio Proveedor: J.4  0. Millipore  Dispositivo de filtración  Jeringas de plástico de 20 ml  Matraces aforados de 50 y 100 y 5000 ml  Pipetas volumétricas de 5 y 10 ml  Dispositivo para toma de muestras  Dihidrogeno fosfato de potasio Proveedor: J.

45 μm Whatman 64    .05.T.08  Lauril sultato de sodio Proveedor Merck Lote: K36293334648  Ácido clorhídrico Proveedor: J.MATERIAL UTILIZADO EN LA METODOLOGIA DISOLUCION DE LEVONORGESTREL (HPLC) Material:  Acetonitrilo para cromatografía Proveedor: Burdik & Jackson Lote: CV962  Metanol para cromatografía Proveedor: Burdik & Jackson Lote: CV822  Agua para cromatografía (Grado inyectable) Lote: 24.45 RC de diámetro de poro 0. Baker Lote: C32C24  Estándar de trabajo de Levonorgestrel Proveedor: Bayer Schering Parma Lote: AS2546  Levonorgestrel gragea Lote: 1004  Placebo gragea Lote: 1464  Membrana de celulosa regenerada Spartan 30/0.

84 2.58 2.18 2.02 3.04 2.10 3.26 3.02 3.70 2.95 3.57 2.95 D 24.77 2.00 2.63 2.46 2.44 2.89 2.86 2.61 2.73 2.54 2.41 3.85 2.39 2.19 3.77 2.41 A 9.71 2.59 2.83 2.14 D 13.60 2.42 2.51 2.00 2.58 2.24 S 11.51 2.75 2.87 2.90 30.55 2.57 3.69 2.22 3.00 2.69 65    .54 2.65 2.67 2.73 2.39 3.975 COMPARACIONES 1 2 3 4 5 6 7 8 9 5.71 G 7.61 2.92 2.12 3.86 2.65 2.64 3.00 2.73 3.51 2.03 3.35 2.24 2.20 3.27 2.91 2.90 2.89 2.41 2.87 2.80 2.26 3.32 2.00 2.12 2.38 2.57 2.14 2.47 2.92 2.97 3.94 2.68 2.44 2.69 2.81 2.57 3.13 3.97 3.44 2.02 2.73 2.45 2.00 2.26 2.09 3.21 2.61 2.82 2.98 3.97 6.19 12.97 3.00 3.00 2.00 2.04 I 16.99 3.75 2.00 2.00 E 18.00 2.90 2.07 L 15.47 3.41 2.06 2.77 120.84 2.06 3.76 2.81 2.09 2.14 3.98 2.29 3.61 2.68 2.00 2.00 2.23 2.72 2.20 2.66 2.53 2.65 2.96 2.29 2.95 3.68 2.48 3.02 3.38 2.69 2. ANEXO II VALORES DE LA DISTRIBUCION "t" DE DUNNETT CON UNA PROBABILIDAD ACUMULADA DE 0.29 3.02 B 17.75 2.56 2.80 2.88 3.11 2.00 2.49 3.04 3.00 2.82 3.00 3.10 2.98 R 19.00 2.95 3.86 3.31 2.81 2.00 2.89 2.72 2.24 3.94 3.58 2.50 2.09 2.00 2.00 2.90 3.00 2.65 2.05 3.53 R 8.48 2.81 2.82 2.36 2.14 3.32 D O 10.00 1.08 3.76 2.00 2.16 2.55 2.76 2.96 T A 20.10 E 14.35 3.40 2.78 2.81 60.87 2.62 2.62 3.13 2.39 2.07 3.47 2.66 2.14 3.78 2.33 3.90 2.94 3.73 2.64 2.73 ͚ 1.00 2.86 40.

Certificado de inspección y calibración Speed Sensor. Certificado USP Tabletas de Ácido salicílico 5. Certificado de Calibración Tacómetro digital 14. Vibration Sensor 11. Temperature Prob. Certificado de entrenamiento 12. Certificado de Calibración Cronometro digital 15. Certificado de Trazabilidad y Calibración Distek Model 170 Center Chek Gauge 0 to 5 mm 6. Certificado de Trazabilidad y Calibración Distek Model 180 Height Chek Gauge 21 to 29 mm 7. Informe de Calibración Calibrador Digital 8. Level sensor. Certificado USP Estándar Prednisona 2. Wobble Gauge. Certificado de inspección y calibración QAIIC Satation Model 12-0550 10. ANEXO III CERTIFICADOS DE MATERIALES DE LOS MATERIALES Y EQUIPOS UTILIZADOS 1. Certificado de Calibración Calibrador electrodigital 66    . Certificado de Calibración Indicador de temperatura tipo vástago fijo 16. Certificado USP Estándar Ácido salicílico 4. Certificado de Calibración Indicador de Temperatura con RTD de 100Q 13. Certificado USP Tabletas de Prednisona 3. Certificado de Trazabilidad 10” Spindle Calibration Shaft 9.

67    .

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