UNIVERSIDAD NACIONAL DE PIURA

FACULTAD DE ZOOTECNIA
ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA VETERINARIA

“Año del Buen Servicio al Ciudadano”

INFORME DE PRÁCTICA N° 3

TEMA:

“Técnicas Básicas para la Preparación de Muestras: Tinción Simple y
Observación en Fresco”
CURSO:

Bases de la Vida Animal

PROFESOR:
Méd. Vet. Peña Córdova, Kleyber

ALUMNA:

Márquez Gallardo, Asly Luciana

AÑO:

y bacterias. por la falta de contraste entre la célula y el medio que la rodea. Durante la práctica observamos protozoos mediante la observación en fresco. por lo que se recurre a la utilización de colorantes. las mismas que fueron realizadas en el Laboratorio de Bromatología. las cuales tienen un tamaño tal que la mayoría de sus células resultan difíciles de ver con el microscopio óptico. . INTRODUCCIÓN El presente informe pone en manifiesto las técnicas básicas de tinción.I.

posteriormente.2. que se han ido desarrollando para la detección de los diferentes agentes infecciosos –en los que se incluyen bacterias. 4. L. AQUIAHUATL. III.1.II. VOLKE. protozoos y hongos. por los que no se observarán con facilidad en un microscopio óptico de campo claro por la falta de contraste entre las células y el medio circundante.1. por lo que es necesario fijarlos y teñirlos en un frotis. REVISIÓN BIBLIOGRÁFICA 4.1. IV.  Se usa un único reactivo. Hay una gran variedad de tinciones. se fija a la superficie con calor o solventes orgánicos. 2012 señala que los microorganismos vivos o activos son por lo general incoloros (excepto algas y cianobacterias).1. La tinción puede ser uniforme o presentar algunos gránulos en su interior. que preferentemente es de tipo básico y contiene un cromógeno (compuesto que da color . IMPORTANCIA JÁCOME. Desde hace más de un siglo han ayudado a resolver problemas de etiología microbiana. 2012 señala que la tinción simple se basa en la afinidad del colorante por los componentes celulares. parásitos. para que se vean las formas y las estructuras celulares básicas. OBJETIVO  Iniciar al estudiante en el correcto desarrollo de técnicas básicas de coloración. 2013 señala que las tinciones en microbiología son las primeras herramientas que se utilizan en el laboratorio para el diagnóstico de las enfermedades infecciosas. Un frotis se prepara distribuyendo una pequeña suspensión de los microorganismos sobre una superficie transparente que. T. M.  Se utiliza para destacar el microorganismo completo. lo que causará la inactivación o muerte celular y algunas modificaciones de sus características. TINCIÓN SIMPLE 4.

2. sin fijación ni tinción. se emulsionará en una gota de agua . Si se utiliza un mordiente (sustancia química utilizada para intensificar la coloración). cristal violeta y azul de metileno son colorantes básicos. todas las células absorberán el colorante y quedarán teñidas del mismo color.  Se denominan colorantes básicos si el cromóforo (porción coloreada) de la molécula está cargada positivamente. Si el material procede de una toma en medio sólido o de una toma directa. 2009 cita que la observación en fresco consiste en observar los microorganismos vivos que puede haber en el producto examinado. sus características morfológicas y su movilidad. Es una técnica de fácil realización. fuchina básica y verde malaquita. así los colorantes básicos son los más eficaces. Se utilizan solo para incrementar el contraste. Por tanto. M. hay que añadirlo justo antes del colorante  Se usa un único colorante. safranina). Otros colorantes de esta categoría utilizados con frecuencia en bacteriología son safranina. al tinte) con carga positiva. DÍAZ.  Bajo condiciones normales de crecimiento. por ejemplo. la tinción simple mejora la observación de la célula completa.0) y una superficie celular cargada negativamente. que siempre es de tipo básico (azul de metileno. ya que la pared celular de las bacterias posee componentes con carga negativa que atraen y enlazan el cromógeno. OBSERVACIÓN EN FRESCO 4. 4.2. la mayor parte de los procariotas tienen un pH interno próxima la neutralidad (pH 7.1. pudiendo objetivar su cantidad. en la que el producto a examinar se sitúa entre porta y cubreobjetos. en suspensión acuosa.

LÓPEZ. El volumen de la gota debe ser adecuado a las dimensiones del cubreobjetos ya que. en caso contrario. un exceso de líquido se traducirá en un desbordamiento de éste bajo los límites del cubre.2. 2010 señala que la observación en fresco. destilada o solución salina. 4. Las preparaciones en fresco permiten observar a los microorganismos suspendidos en un líquido en condiciones de vida normal. en general. .2. no sufren cambios o alteraciones en cuanto a su forma. Su uso se recomienda para el estudio de parásitos en heces. La microscopía de contraste de fases y de campo oscuro facilita mucho la visión en fresco. como el caso de las soluciones fisiológicas. con objetivo de 40x en microscopio de campo claro. Estos métodos no suelen dar sin embargo la máxima visualización del objeto. para ello los objetos deberán ser observados tal como existen o máximo inmersos en un medio similar. A. así como para observar la movilidad. Es muy útil para observar especies que se dañarían al teñirlas o fijarlas. fenómenos de multiplicación y esporulación. o un cubre "flotante" que dificultará nuestra observación por la formación de corrientes líquidas. estructura o composición química o sentido de vitalidad de los mismos. Si el producto va a permanecer mucho tiempo en el portaobjetos. Si el material es líquido se depositará directamente entre porta y cubre. como espirilos. de secreciones corporales. mediante los cuales los objetos a investigarse. etc. Solo así podrán ser estudiados en su real y verdadera naturaleza. son todas aquellas formas o métodos de observación. La observación se realiza. es conveniente prevenir la desecación mediante la aplicación de parafina en los bordes inferiores del cubreobjetos.

En una lámina portaobjetos limpia.TINCIÓN SIMPLE 6.Láminas portaobjetos 5. 6.2.2. Observar en el microscopio.Piseta con agua destilada 5. 6.4.3. Cubrir la extensión con cuatro gotas de azul metileno o safranina por 1’. Observación microscópica. la cual previamente debe esterilizarse en el mechero. .V. 6.7.1. 6. En una lámina portaobjetos.7.1. 6. 6. colocar una gota de agua estancada.3.1.2.6.1.2.1. Fijar en el mechero 6.Material biológico (cultivo bacteriano y agua estancada) VI. MATERIALES 5. Lavar la extensión.1.2.Asa de siembra 5. 6. 5.8.1.3. Con una laminilla cubreobjetos.4.Mechero 5. deposita una gota de cultivo bacteriano con el asa de siembra.Azul de metileno o safranina.1. por capilaridad proteger la gota de agua estancada. PROCEDIMIENTO 6.OBSERVACIÓN EN FRESCO 6.1. Fijar la extensión del mechero. 6.Laminillas cubreobjetos 5.5.2. Con la misma asa de siembra extenderla suavemente.6.1.5.2.Microscopio óptico 5.1.

RESULTADOS 7.1.VII.OBSERVACIÓN EN FRESCO Fig.02 Observación en fresco de agua estancada (40x) .2.01 Tinción simple de cultivo bacteriano con safranina (40x) 7.TINCIÓN SIMPLE Fig.

diplococos y racimos) y protozoarios (movimientos y formas). Fig. 2012. M.ar/SeminarioTinciones.03 Observación en fresco de protozoarios (40x) VIII. Vol. Salazar “Manual de Microbiología General”-Universidad Autónoma Metropolitana. Prado. M. .uba. Durán. Disponible en: http://www. IX..pdf .fcen.com/pdfs/invdis/ir- 2014/ir141b.scribd.htm  Aquiahuatl.mx/ceu/publicaciones/MMBG/files/manual_microbi ologia_general.uam. CONCLUSIÓN El adecuado uso del microscopio y la aplicación de las normas de bioseguridad. .qb.microinmuno. M. la nítida observación a través del microscopio de microorganismos como las bacterias (cocos.com/doc/80998594/Tincion-Simple http://www. 2013.pdf  Jácome. 1. BIBLIOGRAFÍA CONSULTADA  Volke T. L. L. 2012 “Tinción Simple” Disponible en: https://es. 3. y por ende.izt. Ortega “Las tinciones básicas en el laboratorio”-Investigación en discapacidad. Núm.medigraphic. nos permitirá las correcta realización de las técnicas de tinción simple.S. C. Disponible en: http://www. Colín.

02 Clases de Bacterias Fig.X.03 Protozoarios .01 Colorantes para la tinción de células Fig. ANEXOS Fig.