I Curso sobre Bioindicación en

EDARS de fango activo.
ESTUDIO DE:
CARACTERÍSTICAS MACRO- Y MICROSCÓPICAS,
BACTERIAS FILAMENTOSAS Y
MICROFAUNA DE UN FANGO ACTIVO.

Laura Isac, Eva Rodríguez y Natividad Fernández

ESTUDIO DE LAS CARACTERÍSTICAS MACRO- Y
MICROSCÓPICAS DE UN FANGO ACTIVO

Características macro- y microscópicas de un fango activo
1. Introducción a la microbiología en depuradoras de fangos activos
2. Evaluación de las características macroscópicas y microscópicas de un
fango activo
2.1. Observación macroscópica del fango activo
2.2. Observación microscópica del fango activo
2.3. Preparación de muestras para observación microscópica
3. Relación entre el estado estructural de un fango activo y los
rendimientos de depuración en planta
Bacterias filamentosas en el fango activo
4. Estudio de las claves de identificación de bacterias filamentosas:
principales características taxonómicas
5. Técnicas de tinción de bacterias filamentosas
5.1. Tinción Gram (Método Hücker modificado)
5.2. Tinción Neisser (Método de Eikelboom y van Buijsen, 1981)
5.3. Procedimiento de observación de muestras fijadas y teñidas
6. Cuantificación de bacterias filamentosas en una muestra
7. Protocolo para la identificación de organismos filamentosos
Microfauna de un fango activo
8. Nociones básicas en bioindicación.
9. Conocimientos básicos sobre Protistas.
10. Índice biótico de fangos (SBI, Sludge Biotic Index) o Método
Madoni.
11. Instrucciones para la observación microscópica.
12. Formatos de recogida de datos.
13. Bibliografía.

I CURSO SOBRE BIOINDICACIÓN EN EDARS DE FANGOS ACTIVOS

Características macro- y microscópicas, bacterias filamentosas y microfauna de un fango activo. L. Isac, E. Rodríguez y N. Fernández. 2

facilitando la agregación de las bacterias y presentando también importantes implicaciones en las características de sedimentabilidad del fango. Ciliado sésil Figura 1.. Zoogloea sp.. en un proceso de asociación facilitado por una “matriz” mucilaginosa que es aportada por la propia secreción microbiana (Figura 1). la formación de estos agregados o flóculos permite un hecho indispensable en el proceso de depuración: el paso de los contaminantes de la forma suspendida no sedimentable a la suspendida sedimentable. las observaciones microscópicas se han centrado en el desarrollo de las técnicas de bioindicación. E. L. en las que los principales implicados son los protozoos ciliados. que permiten la formación del flóculo al proporcionar una extensa superficie por unidad de volumen para que los microorganismos se adhieran. En cualquier caso. Tradicionalmente. Fernández. El flóculo se define como un conglomerado de bacterias floculantes y bacterias filamentosas sobre el que se agregan diminutas partículas minerales.y microscópicas. 2001). circunstancia necesaria para que ocurra la separación sólido-líquido en el decantador secundario. Isac. Flóculo de fango activo (100x) en cuya estructura se observa al organismo floculante Zoogloea sp. Introducción a la microbiología en depuradoras de fangos activos. Rodríguez y N. Sin embargo. Es decir. 3 . ampliado a 400x en el recuadro. otro importante campo de seguimiento de la marcha del proceso depurador es aquel que emplea técnicas de observación microscópica dirigidas a evaluar las propiedades estructurales del flóculo de fango activo (Jiménez et al. polímeros orgánicos e inorgánicos y excreciones metabólicas. las células microbianas producen sustancias poliméricas extracelulares. eficiencia y nivel de actividad del proceso de depuración. I CURSO SOBRE BIOINDICACIÓN EN EDARS DE FANGOS ACTIVOS Características macro. Características macro. bacterias filamentosas y microfauna de un fango activo. los EPS (extracellular polymeric substances). importantes indicadores del desarrollo.y microscópicas de un fango activo 1.

En esta sesión teórica abordaremos estos tres puntos claves en el estudio microbiológico de un fango activo: . La presencia de organismos filamentosos en el flóculo confiere una cierta consistencia que evita la rotura a causa de la propia turbulencia en el tanque. la presencia de filamentos condiciona la morfología del flóculo..o microestructura del flóculo de fango activo (Jenkins et al.1. que básicamente resulta de dividir el valor obtenido en la V30 entre la concentración de sólidos en el reactor biológico (SSLM). constituyendo la base para la formación del flóculo. que se agrupan formando un armazón sobre el que se dispone la microestructura.Bacterias filamentosas en el fango activo y . E. Rodríguez y N. Fernández. La macroestructura está representada por los microorganismos filamentosos. Observación macroscópica del fango activo.Características macro. bacterias filamentosas y microfauna de un fango activo. . los problemas de decantabilidad en el clarificador se considera que son debidos a alteraciones en la macro. En la sesión práctica comprobaremos que la V30 puede aportar información adicional al volumen ocupado por el fango decantado. Sin embargo. 1993). Evaluación de las características macroscópicas y microscópicas de un fango activo. L.y microscópicas. La valoración de las características macroscópicas del fango activado se realiza principalmente a través del ensayo de la V30. De hecho. tras un periodo de 30 minutos. Este ensayo es rutinario en todos los laboratorios de aguas residuales para obtener el Índice de Mohlmann o Índice volumétrico de fangos (IVF). 2. Se trata de analizar las propiedades del proceso de decantación y las características del clarificado. Es decir. el flóculo de fango activo se desarrolla en la dirección de crecimiento de las bacterias filamentosas. condicionando en consecuencia las propiedades de sedimentabilidad. Valores superiores a 300-400 mL/g.y microscópicas. indican alteraciones en la sedimentabilidad del lecho de fango de los decantadores secundarios. agregación y biofloculación. haciendo que predomine la forma alargada sobre la forma esférica propia de la microestructura. El IVF se define como el volumen en mL ocupado por un gramo de sólidos en suspensión del licor mezcla e indica el grado de decantabilidad del fango. al valorar otros parámetros como puedan ser la turbidez o los flóculos en suspensión del clarificado. Isac. Algunos autores han sugerido que el flóculo de fango activo presenta dos niveles de estructura denominados “microestructura” y “macroestructura” (Jenkins et al. 4 . La microestructura es el resultado de los procesos de adhesión microbiana. que determina la cantidad de fango activado que decanta en una probeta o cono Imhoff..Microfauna de un fango activo 2. I CURSO SOBRE BIOINDICACIÓN EN EDARS DE FANGOS ACTIVOS Características macro. 1993).

I CURSO SOBRE BIOINDICACIÓN EN EDARS DE FANGOS ACTIVOS Características macro. etc. estructura. Observación microscópica del fango activo. entendida ésta como el compendio de las características macroscópicas deducidas de la V30 (apartado anterior) y el conjunto de características microscópicas recogidas durante la observación al microscopio óptico (presente apartado).2. 5 . al grado de actividad biológica del proceso de depuración. representado por las poblaciones de bacterias filamentosas y de protozoos (principalmente ciliados).y microscópicas. tamaño. textura. La evaluación de estas características proporciona información sobre las propiedades de decantación y compactación del fango activo durante la fase de clarificación del licor mezcla. aludiendo. indicando este último situaciones como septicidad. etc.) y al examen del componente biótico del "ecosistema fango activo". Rodríguez y N. presencia de vertidos. así como del nivel y estado de colonización de la microfauna. Tales características microscópicas se refieren al examen del estado morfológico y estructural del flóculo de fango activo (forma. Fernández. 2. E. Isac. cobertura. bacterias filamentosas y microfauna de un fango activo. indirectamente. L. Las características valoradas sobre este ensayo son: Turbidez: Alta: visibilidad clara a través de la probeta Media: situación intermedia entre las categorías "alta" y "baja" Baja: visibilidad muy baja a través de la probeta Flóculos en suspensión: Alta: abundancia de microflóculos Media: presencia de microflóculos Baja: prácticamente ausencia de microflóculos Sedimentabilidad: Alta: la mayor parte del fango decanta en los 10 primeros minutos del ensayo y el fango esta muy compactado Media: la mayor parte del fango decanta entre 10-20 minutos y se observa un ligero esponjamiento Baja: la mayor parte del fango decanta después de 20 minutos y se observa un claro esponjamiento Olor: característica macroscópica del fango activado que se define como correcto o incorrecto. El informe biológico de una muestra de fango activo está dirigido a aportar la información necesaria sobre la calidad del fango.

L. Filamentos en el flóculo: Menos de 5 filamentos por flóculo Entre 5-20 filamentos por flóculo Más de 20 filamentos por flóculo Filamentos en disolución: característica que cuantifica la existencia de filamentos libres entre los espacios interfloculares del licor mezcla. Fernández. presencia/ausencia de fibras orgánicas. etc. presencia/ausencia de bacterias helicoidales. Diversidad de protozoos: Menos de 4 especies De 4-7 especies Más de 7 especies Otras observaciones: presencia/ausencia de crecimiento disperso. Cobertura: característica que valora si la unión de todos los flóculos presentes en el ocular de 10X cubren menos del 10% de su superficie. 6 . del 10-50% o más del 50%. presencia/ausencia de partículas inorgánicas. Si no son observables será “baja”. bacterias filamentosas y microfauna de un fango activo. presencia/ausencia de Zoogloea sp.. Los parámetros caracterizados a nivel microscópico son: Forma: característica que define la morfología externa del flóculo como regular si aparece de forma redondeada e irregular si difiere de esta configuración.y microscópicas. mientras que si se observan normalmente será “alta”. Rodríguez y N. estableciéndose las categorías “fuerte” y “débil” en función a la ausencia o presencia de disgregación de los flóculos. Tamaño: Pequeño: tamaño menor de 150 µm Medio: tamaño entre 150 y 500 µm Grande: tamaño mayor de 500 µm Estructura: Compacto: no existen prácticamente huecos en la estructura interna del flóculo Medio: se detectan algunos huecos Abierta: existen bastantes huecos dentro del flóculo que rompen la unidad interna Textura: característica que alude al grado de cohesión entre las partículas que forman el flóculo. I CURSO SOBRE BIOINDICACIÓN EN EDARS DE FANGOS ACTIVOS Características macro. tras punción sobre el cubreobjetos. Isac. E. respectivamente.

3. 6. Fernández. 400x y 1. Se recomienda. 1. 2.y microscópicas. Proceder al análisis microscópico de la preparación utilizando los distintos objetivos. Preparación de muestras para observación microscópica: Observación microscópica de una muestra de fango activado a diferentes aumentos (100x. Tomar una gota con pipeta Pateur de boca ancha o entre 25 y 50 µL con una micropipeta y depositarlos en un portaobjetos (previamente limpiado y desengrasado). 7 . Para observar la muestra sin alterar la estructura flocular y la disposición del entramado filamentoso. bacterias filamentosas y microfauna de un fango activo.3. E.2. Las observaciones a realizar se efectuarán sobre muestras in vivo. Especialmente indicado para la observación cualitativa de protozoos ciliados. Agitar con suavidad la muestra para homogeneizar. seguir el procedimiento anterior. Observar. Para inmovilizar organismos y observar estructuras visibles sin necesidad de tinción. Colocar encima de la gota un cubreobjetos. como complemento. el análisis de los MLSS.000x). I CURSO SOBRE BIOINDICACIÓN EN EDARS DE FANGOS ACTIVOS Características macro. V30 e IVF. 4. L. colocar el cubreobjetos y prensar suavemente. 5. empleando los dispositivos de contraste de fases y la iluminación en campo claro. 2-3 preparaciones de la muestra. Isac. Rodríguez y N. El de 100x u objetivo de inmersión emplea aceite y se utiliza para observar estructuras en detalle. al menos.

993. 2002). Cambios en la comunidad vegetal. De hecho. La descomposición y el reciclado de la materia orgánica presentan comportamientos semejantes en toda clase de sistemas. Isac. Si tenemos en cuenta los datos aportados por el Ministerio de Medio Ambiente (2001) sobre la depuración. pueden ser causa de severos déficits de oxígeno disuelto que resultan mortales para los organismos más sensibles (Mainstone y Parr. L.3..) coinciden frecuentemente con la contaminación orgánica y complican la dinámica de los respectivos ecosistemas (Margalef. Andalucía presenta una población equivalente de 13. la eutrofización de muchas zonas acuícolas es patente. factores ambientales que han operado raramente y que no han sido internalizados por la evolución (metales pesados.431 euros (Leal et al. cuya conservación debe implicarnos a todos.385 con un porcentaje de depuración correcto del 37 %. presentando aumentos en los niveles de nutrientes consecuencia de la descarga de aguas residuales (Stapleton et al. La Urban Waste Water Treatment (organismo incluido en el Instituto Europeo de Policía Ambiental. siendo las aglomeraciones urbanas. un 20 % en construcción y un 43 % no depurado.. IEEP) ha clasificado todas las áreas sensibles de los Estados miembros con riesgo de eutrofia que necesitan la eliminación de nitrógeno y fósforo (Mainstone y Parr. en algunos estados de Europa dónde las medidas de saneamiento empezaron a implantarse en los años setenta.694.y microscópicas. Esta situación se está solventando con las medidas legislativas recogidas en la Directiva 271/91 y con su incorporación en España mediante el RDL 11/1995 y RD 509/1996 (Tabla I). Fernández. 2000). lo que genera proliferaciones de organismos oportunistas que degradan el sistema. El agua se cuenta como uno de los recursos más preciados en el mundo. asciende a 25. Relación entre el estado estructural de un fango activo y los rendimientos de depuración en planta. a su vez. E. plaguicidas. En la legislación medioambiental. 1983). los usos agrícolas y la deforestación los principales causantes de este fenómeno. 1997). Sin embargo. I CURSO SOBRE BIOINDICACIÓN EN EDARS DE FANGOS ACTIVOS Características macro. Los vertidos incontrolados pueden provocar el desarrollo masivo de algas. bacterias filamentosas y microfauna de un fango activo. Esta situación provoca problemas colaterales como pueden ser los malos olores y el deterioro sanitario y paisajístico de las aguas. Rodríguez y N. Las inversiones realizadas en Andalucía gracias a la financiación en un 80 % de los Fondos de Cohesión Europeos de las Obras de Saneamiento y Depuración de aguas residuales en núcleos de la red de Espacios Naturales de la Comunidad Autonómica de Andalucía. INTRODUCCIÓN. 2002). 2002). Desgraciadamente. un punto importantísimo es el control de los vertidos de las zonas con riesgo de eutrofia. se ha producido la recuperación de la calidad físico-química de las aguas (Prat. 8 . etc.

A.000 h-eq) FÓSFORO TOTAL 80% 1 mg P/L (>100. Tal índice de fango (IF). PARÁMETRO CONCENTRACIÓN % RED. L. podrían estar representadas por el control de la formación flocular en el reactor biológico. es obvia la necesidad de una gestión óptima. comparable y protocolo sencillo.000-100.000 h-eq) Esta favorable evolución choca en muchas ocasiones con procesos de depuración inadecuados en muchas ciudades. en parte.Tabla I. se plantea la posibilidad de realizar un estudio simplificado del fango activo que genere. los estudios de formación flocular del fango activo requieren tiempo. en el desarrollo de su metodología ha tomado como base información especializada. Estas medidas. Por ello es necesario disponer de medidas de control complementarias a los parámetros físico-químicos. cuyo resultado final es la evaluación de la calidad de un fango biológico. en función de las características macroscópicas y microscópicas de éste.A.D.R. bacterias filamentosas y microfauna de un fango activo. Isac. un valor de índice de fango que esté directamente relacionado con los porcentajes de reducción de SS.000 h-eq) NITRÓGENO TOTAL 70-80% 10 mg N/L (>100. Límites de vertidos (limitaciones de nutrientes en zonas sensibles cuyas aguas sean eutróficas o tengan tendencia a serlo en un futuro próximo). Nitrógeno y Fósforo en la E. el cual aporta información adicional sobre el proceso y permite con personal técnico especializado controlar varias estaciones depuradoras de fangos activos con una dotación extra de laboratorio escasa (microscopio óptico y material de tinciones). supeditados a las condiciones socio- económicas.. proporciona la posibilidad de obtener un histórico de valores de calidad biológica de forma rápida. que no permiten a los municipios el mantenimiento de la E.y microscópicas. DBO. DQO. personal especializado y una ardua tarea de identificación y análisis de los resultados que normalmente no están al alcance de todos los laboratorios. Este sistema de análisis.. niveles de vida y rentas per cápita imperantes (Leal et al. Sin embargo y como contrapartida. E.000 h-eq) SS 90% 60 mg/L (20. 1999).000-10. Si a esto le añadimos que durante los meses de verano en muchos lugares de la costa mediterránea el flujo de los ríos consiste esencialmente en agua residual tratada o no (Angelakis et al. de la que se destacaría el " Manual de Laboratorio para el análisis de las aguas residuales y lodos de depuración” (Departamento de Agua y I CURSO SOBRE BIOINDICACIÓN EN EDARS DE FANGOS ACTIVOS Características macro. 2002).000-100. tras su puesta en marcha. MÍNIMO DBO5 25 mg/L 70-90% DQO 125 mg/L 75% 35 mg/L (>10. Rodríguez y N.000 h-eq) 2 mg P/L (10.000 h-eq) 15 mg N/L (10.R. además.D. en la que el balance entre costes de mantenimiento y vertido depurado sea el menor posible. 9 . Fernández. En este trabajo.

Rozhich. extraídas del aspecto del fango activado y del clarificado de la V30. se encuentran recogidos en la Tabla II junto con las distintas variantes con las que dichas características quedaron definidas. Respecto a estas últimas. 10 . Como características macroscópicas se entienden aquellas observables a simple vista. Este valor se denomina Índice de Fango (IF) (Jiménez et al. es conveniente agitarla con suavidad previamente. Fernández. Mientras que las características macroscópicas presentan como valor máximo de puntuación 30 unidades sobre el valor del IF. requisitos indispensables para la obtención de resultados representativos del estado del sistema. 1993. La suma de puntuaciones para ambos grupos de características se traduce en un valor final de índice de fango del que se definen cinco categorías. 2001). A continuación. Suárez. 1982. 1996.Saneamiento del Ayuntamiento de Madrid. 1975 y 1977. 1998). las microscópicas presentan un máximo de puntuación de 70 puntos. denominados características macro y microscópicas. a la vez que comparables. de Saneamiento del Ayto de Madrid. 1997) y apoyadas en distintos artículos que tratan el tema (Eikelboom.. Laboratorio Central del Dep. DESARROLLO INVESTIGADOR DEL “ÍNDICE DE FANGO” Y RESULTADOS La selección de los parámetros que definen y valoran las características del fango activo. Isac.y microscópicas. Como características microscópicas se definen aquellas otras observables a través del microscopio bajo un objetivo de 10x. lo que permitió someter a estudio el índice elaborado así como la unificación de criterios para los componentes del grupo de trabajo. Rodríguez y N. bacterias filamentosas y microfauna de un fango activo. aclarar que las observaciones deben realizarse al menos por duplicado y con la muestra viva (sin teñir). L. para homogenizar evitando la rotura de los flóculos. cada una de las cuales alude a una calidad distinta del fango (Tabla III). constituyó uno de los pasos previos en la elaboración del índice. se obtiene un valor final comprendido entre 0-100 con el que quedaría definida la calidad de dicha suspensión biológica. E. A partir de la puntuación de una serie de características macroscópicas del fango (observables a través de la V30) y microscópicas (observables a través de un objetivo de 10X). en el que se estudiarón diversas muestras de fangos activos de toda Andalucía. Ésta. I CURSO SOBRE BIOINDICACIÓN EN EDARS DE FANGOS ACTIVOS Características macro. que ha de ser lo más fresca posible. Las identificaciones bacterianas se han realizado en base al manual Microorganismos filamentosos en el fango activo (EMASESA. 1997). Los parámetros seleccionados para constituir el IF. al considerarse que son éstas las que definen con mayor exactitud el IF. se estableció un periodo de contraste de resultados de algo más de un año. Moro.

Tabla II.5 Baja 9 Sedimentabilidad Alta 9 Media 4. CARACTERÍSTICAS MACROSCÓPICAS Turbidez Alta 0 Media 4.y microscópicas.5 Baja 0 Olor Agradable 3 Desagradable 0 CARACTERÍSTICAS MICROSCÓPICAS Forma Regular 4 Irregular 0 Tamaño Grande 4 Medio 7 Pequeño 0 Estructura Compacta 18 Media 9 Abierta 0 Textura Fuerte 4 Débil 0 Cobertura < 10% 0 10-50% 7 >50% 3. Isac. 11 .5 Baja 9 Flóculos en suspensión Alta 0 Media 4. L. Valoración del IF.5 Filamentos en flóculos >20 0 5-20 7 <5 14 Filamentos en disolución Alta 0 Baja 3 Diversidad de Protozoos >7 especies 13 4-7 especies 7 <4 especies 0 ÍNDICE DE FANGO TOTAL I CURSO SOBRE BIOINDICACIÓN EN EDARS DE FANGOS ACTIVOS Características macro. Fernández. Rodríguez y N. E. bacterias filamentosas y microfauna de un fango activo.

DQO. Isac. Categorías de IF. DBO. DBO. los cuales aparecen reflejados en la Tabla IV. cuando los datos fueron agrupados según la categoría de IF. Sin embargo. No obstante. AWWA y WPCF. una relación directa entre los porcentajes de reducción de SS y DQO respecto al IF. DQO. al no detectarse diferencias significativas entre los porcentajes de reducción una vez que los índices de fango superan la calidad “pésima”. la relación establecida entre la DBO y el Índice de fango no es del todo clara. la extrema variabilidad y escasa reproducibilidad de esta determinación (APHA. No se ha encontrado explicación a esta falta de proporcionalidad entre la calidad del fango estimada mediante el IF y el porcentaje de reducción de DBO. tal y como se muestra en la Figura 1. ÍNDICE DE FANGOS: 0-19 pésimo 20-39 malo 40-59 regular 60-79 bueno 80-100 óptimo De los estudios realizados en distintas EDAR se obtuvieron distintos resultados de IF que se relacionaron con los porcentajes de reducción de SS. se encontró. AWWA y WPCF. Del periodo de estudio se obtuvieron 109 datos. N y P. 1992). y a los que se realizó un análisis estadístico de correlaciones. si bien esta relación es más clara para el caso de los sólidos en suspensión que para la DQO. Los análisis de estos últimos se realizaron según los Métodos Normalizados (APHA. Rodríguez y N. Fernández. I CURSO SOBRE BIOINDICACIÓN EN EDARS DE FANGOS ACTIVOS Características macro. L. DBO. bacterias filamentosas y microfauna de un fango activo. 1992). 12 . Relación de datos obtenidos en el estudio de cada uno de los participantes. DQO. Como se observa en esta misma figura. N y P tanto del agua de entrada como de salida.y microscópicas. En tal estudio se pretendía buscar una posible relación entre el valor del IF y los parámetros que definen tanto el influente como la calidad del efluente (SS. Tabla IV. son razones suficientes para que este resultado sea tomado con precaución. Total datos Participante 1 10 Participante 2 38 Participante 3 13 Participante 4 19 Participante 5 29 El análisis de los datos demostró la ausencia de una relación directa entre el Índice de fango y los SS. E. junto con la inferioridad de datos aportados respecto a los SS y DQO. N y P). Tabla III.

por tanto.A. DQO y DBO 90 85 80 SS 75 DQO DBO 70 20-40 40-60 60-80 80-100 Rango de IF Figura 1. Fernández.R. Rodríguez y N. ya que parece conveniente ampliar el banco de datos antes de determinar la tendencia más clara posible. Una observación general del fango activado que puede durar unos veinte minutos.s de fangos activos. 100 95 % Reducción SS. que nos aporta información para modificar las condiciones del cultivo y de esta forma mejorar la eficacia de la reducción de la DQO y los SS en las E.R. convencional. 13 . Reflexiones similares se pueden hacer con respecto a los datos de reducción de Nitrógeno y Fósforo (Figura 2). Por lo tanto. si bien la tendencia es a una mejora gradual de los porcentajes de reducción de ambos nutrientes frente al aumento de puntuación del índice. CONCLUSIONES El parámetro IF ha resultado ser un buen sistema de control rápido con el que obtener un índice de formación flocular. las diferencias más claras se encuentran entre la categoría “malo” y el resto. L. Estos resultados. podemos definir el Índice de Fango (IF) como un parámetro indicador del estado de floculación en el reactor biológico. bacterias filamentosas y microfauna de un fango activo.A. En general. Isac. “regular” y “bueno”).A. habrían de ser tomados con reservas. Relación entre el rango de IF y el porcentaje de reducción de SS (n = 109). DQO (n = 109) y DBO (n =67). en los que los resultados obtenidos están adscritos a tres categorías de fango (“malo”.s. orientativo del estado del cultivo biológico.R. que nos aproxima a los rendimientos de depuración en las E. E. tomándose con reserva las relaciones que mantiene con la DBO.D.D. nos proporcionará idea del estado de éste y de la respuesta esperable de la E.y microscópicas.D. I CURSO SOBRE BIOINDICACIÓN EN EDARS DE FANGOS ACTIVOS Características macro. Nitrógeno y Fósforo.

45 40 35 30 % Reducción N y P 25 20 15 P 10 N 5 0 20-40 40-60 60-80 Rango de IF Figura 2. 2002). extracellular exopolymers). L..y microscópicas. Thiotrix spp. Por otra parte. los cuales son considerados como los principales responsables de la adhesión de las células microbianas a la estructura flocular y de la cohesión del conjunto.s.R. dónde con reducidos costes un mismo especialista puede controlar las condiciones de explotación de varias E. alteraciones en la línea de fango producen reboses a cabecera sépticos que generan una microfauna especializada para el metabolismo del azufre. Cercobodo spp. En plantas pequeñas se presenta como un sistema idóneo.A. La valoración del estado de floculación de la materia orgánica permite tomar medidas encaminadas a la mejora de este proceso para así obtener buenos clarificados y reducir de esta forma la emisión de contaminantes.. lo que lleva aparejado el escape de organismos (Bodo spp. Es necesario aumentar el número de datos y proseguir con el estudio antes de poder definir claramente al IF respecto a los porcentajes de reducción de DBO. Relación entre el rango de IF y el porcentaje de reducción de nitrógeno y fósforo (n=67).) que llegan al medio acuícola desarrollándose y alterando el ecosistema. 14 . E. Las propiedades adsorbentes de los EPS han sido bien documentadas por distintos autores en términos de bioadsorción de contaminantes y tóxicos (iones I CURSO SOBRE BIOINDICACIÓN EN EDARS DE FANGOS ACTIVOS Características macro. Isac. la aplicación del IF como parámetro complementario sería muy deseable... Fernández. bacterias filamentosas y microfauna de un fango activo. El IF es un complemento analítico aplicable a plantas depuradoras de fangos activos de grandes núcleos de población. es sabido que una gran proporción de la estructura del flóculo de fango activo está compuesta por polímeros extracelulares (EPS. en las que a través de la observación del estado de floculación se podrá valorar la calidad del proceso de depuración. como un recurso para optimizar la reducción de la emisión de nutrientes y materia orgánica al cauce receptor. N y P.. Rodríguez y N. entendida ésta como rendimientos depuradores. Si a esto último añadimos que muchas de estas plantas pequeñas se encuentran localizadas en zonas sensibles (Oron et al. Sphaerotilus spp..D. En determinadas situaciones.. Esta microfauna está normalmente asociada a alteraciones en la decantabilidad de los fangos y por lo tanto a la fuga de sólidos al cauce receptor.

W. A. H. Barcelona. WPCF (1992). Mainstone. (1977). el papel de los EPS en la eliminación biológica de nutrientes como el nitrógeno o el fósforo no ha sido abordado hasta muy recientemente debido a la falta de herramientas adecuadas. Cloete. (1983). Res.y microscópicas. D. Aparición de organismos filamentosos en fangos activos. Phosphorus in rivers.. Navarro. AWWA. 15 . (1998). Depuración de aguas residuales en espacios naturales protegidos de Andalucía. T. Departamento de Agua y Saneamiento del Ayuntamiento de Madrid (1997). sino también al EPS como reservorio de este elemento. Asano. L. es de un 57-59% del total. T. Ingeniería Química. Publicación del Exmo. EMASESA. (1975). Ayuntamiento de Madrid. Isac. Eikelboom. Publicación de la Empresa Municipal de Abastecimiento y Saneamiento de Aguas de Sevilla. D. 33. S. Estos mismos autores encontraron que los EPS aislados de muestras biológicas de igual procedencia. (2002). The status of wastewater reuse practice in the Mediterranean basin: need for guidelines. The Science of the total Environment 282-283. Madrid. Díaz de Santos. A. (2002). M. Res. 25-47. Viñas. 35. por sí solos. Ecology and management. 9. A. repercutiendo positivamente sobre el medio ambiente.D. Con esta explicación. C. Fernández. Omega. Estos resultados sugieren que la eliminación de fósforo en el fango activo podría ser debida no sólo a los organismos acumuladores de fosfato.A. (1999). y Oosthuizen. y Martínez. Departamento de Aguas Residuales (1997). 365-388. sino también de nutrientes a los cauces receptores. (EMASESA). Ed. Cloete y Oosthuizen (2001) haciendo uso del análisis mediante EDS (Energy Dispersive Spectrometry) y microanálisis con rayos X. H. Métodos Normalizados para el análisis de aguas potables y residuales. L. Consejería de Medio Ambiente. Wat.. lo que quiere significarse es que la detección precoz mediante el IF de alteraciones en el estado de floculación. (2001). evitará en buena proporción no sólo la liberación de sólidos con el efluente. López. P. Limnología.. Res. Junio 1998. por ejemplo). bacterias filamentosas y microfauna de un fango activo. Eikelboom. H.. Manual de laboratorio para el análisis de aguas residuales y lodos de depuración. 3595-3598. 97-106. 10. Bontoux. D. Rodríguez y N. Marecos do Monte. Wat. J. 8. R. Leal. L. Tech. The role of extracellular exopolymers in the renoval of phosphorus from activated sludge. Identification of filamentous organisms in bulking activated sludge. E. M.metálicos. Filamentous organisms observed in activated sludge. 15.A. y Parr. Junta de Andalucía. han estimado que la proporción de fósforo en los cúmulos bacterianos de una muestra de fango activo procedente de una planta en la que existe eliminación biológica de fósforo. M. APHA. Ed. el IF se establece como un sistema práctico del control de la formación flocular en la E. E. Microorganismos filamentosos en el fango activo. entre el 27-30% del total del fósforo estimado.R. retuvieron. 2201-2217. J. Wat. Wat. y como un útil complemento en la determinación de las condiciones de explotación. En definitiva.. Sin embargo. Moro. BIBLIOGRAFÍA Angelakis. I CURSO SOBRE BIOINDICACIÓN EN EDARS DE FANGOS ACTIVOS Características macro.. Margalef. F.

AUTORES: Grupo Bioindicación Sevilla www. C. 16 . Kay. Suárez. L.net/content/view/full/32380 I CURSO SOBRE BIOINDICACIÓN EN EDARS DE FANGOS ACTIVOS Características macro. Trends and opportunities for small-scale wastewater treatment and reclamation plants in the Eastern Mediterranean Basin. 146-151.. D. M.pdf Rozhich.R.us. N.ecoportal. Jackson. T. 20-22 de marzo. J.y microscópicas. 54. Estado ecológico de los ecosistemas acuáticos en España. Rodríguez y N.Oron. y Mogollón.s. 3. Wat. F. V. 787-796. G. Prat Fornells.es/ciberico/narcisprat. 34. (2002). M. A. Isac..P. Microorganismos filamentosos en las E. Llorente. D. y Gillerman.com DOCUMENTACIÓN DISPONIBLE EN: http://www.. Sevilla. L. y Wyer. E. Enero 1993. www. G.D. Ingeniería Química.C. Fernández. Bicj. Estimated inorganic nutrient inputs to the coastal waters of Jersey from catchment and waste water sources.F. Journal W. 113-130. F..grupobioindicacionsevilla.A. Stapleton. (1993). Libro de ponencias principales del Congreso Internacional de Tecnologías de Pequeña Escala para la Depuración y Gestión de aguas residuales en el Ámbito Mediterráneo. Res. 2002. (1997). (1982). (2000). Control of algal filamentous bulking at the southerly wastewater treatment plant. 3. bacterias filamentosas y microfauna de un fango activo.

Este tipo de crecimiento suele darse sobre bacterias filamentosas que poseen vaina o cubierta y normalmente ocurre de forma perpendicular al filamento utilizado como soporte. Bacterias filamentosas en el fango activo 4. Rodríguez y N. utilizándolo como sustrato o soporte.y microscópicas. E. Consiste en una discontinuidad en los bordes del filamento. coincidiendo con los septos celulares. Estudio de las claves de identificación de bacterias filamentosas: Principales características taxonómicas en bacterias filamentosas. 17 . L. Crecimiento epifítico: consiste en el crecimiento de células bacterianas sobre la superficie del filamento estudiado. I CURSO SOBRE BIOINDICACIÓN EN EDARS DE FANGOS ACTIVOS Características macro. Crecimiento epifítico abundante Crecimiento epifítico moderado Ausencia de crecimiento epifítico Septos celulares: son los tabiques o separaciones que en algunas ocasiones son observables entre las células contiguas del filamento. Isac. SEPTOS CELULARES VISIBLES SEPTOS CELULARES NO VISIBLES Constricciones celulares: implican la posibilidad de observar los septos celulares en el filamento. Fernández. En otras ocasiones existen pero no son observables con microscopía óptica. bacterias filamentosas y microfauna de un fango activo.

E. 18 . I CURSO SOBRE BIOINDICACIÓN EN EDARS DE FANGOS ACTIVOS Características macro. Vaina Rosetas: algunas bacterias filamentosas (Thiothrix spp. Isac. La presencia o ausencia de esta estructura puede observarse mediante la tinción específica de vainas. y Tipo 021N) presentan la capacidad de asociarse en estructuras llamadas rosetas. la pérdida de algunas células en el filamento pone de manifiesto la presencia de vaina. en algunas ocasiones. bacterias filamentosas y microfauna de un fango activo. Se piensa que podrían estar relacionadas con la reproducción del filamento. Rodríguez y N. Gonidios: son células ovales o bacilares localizadas en el extremo del filamento. radiando hacia el exterior desde un punto común. L.y microscópicas. en las que se encuentran agrupadas y unidas por sus células basales. Fernández. El crecimiento epifítico abundante también es indicativo de la presencia de vaina. La morfología de estas células se diferencia de las restantes.Vaina o cubierta: es una estructura tubular que actúa como revestimiento del filamento y del conjunto de células individuales que lo constituyen. Sin embargo.

Ramificación falsa es aquella en la que no existe continuidad citoplasmática. Fernández. RAMIFICACIÓN FALSA RAMIFICACIÓN VERDADERA Morfología del tricoma: TRICOMA ENRROLLADO CADENA LIBRE DE CÉLULAS TRICOMA RECTO. L. Rodríguez y N. Isac. bacterias filamentosas y microfauna de un fango activo. 19 . tan sólo una superposición de tricomas a la altura media del filamento. LIGERAMENTE CURVO Morfología celular: ESFÉRICA. E.y microscópicas. COCO-BACILAR BACILAR I CURSO SOBRE BIOINDICACIÓN EN EDARS DE FANGOS ACTIVOS Características macro.Ramificaciones: se entiende como ramificación verdadera a la continuidad citoplasmática presente en los tricomas que se disponen formando una ramificación.

empleadas en la identificación de bacterias filamentosas de un fango (Tabla 1). Características morfológicas y reactiva a tinciones de bacterias filamentosas. E. PRINCIPALES CARACTERÍSTICAS MORFOLÓGICAS Y REACTIVA A TINCIONES EN BACTERIAS FILAMENTOSAS DEL FANGO ACTIVO PRESENCIA DE RAMIFICACIÓN Sí. L. tricoma enrrollado.y gránulo Neisser + I CURSO SOBRE BIOINDICACIÓN EN EDARS DE FANGOS ACTIVOS Características macro. Tabla 1. todos sitios CRECIMIENTO EPIFÍTICO Si No MORFOLOGÍA CELULAR Cuadrada. Isac. tricoma torcido. tricoma ramificado (micelial) PRESENCIA DE VAINA Si No LOCALIZACIÓN DEL TRICOMA Libre. bacilar. oscuro FILAMENTO MORFOLOGÍA DEL Recto.y microscópicas. rectangular. cocos SEPTOS CELULARES VISIBLES Si No CONSTRICCIONES EN LOS Si No SEPTOS CELULARES INCLUSIONES CELULARES: Si No GRÁNULOS DE “S” (in situ) INCLUSIONES CELULARES: Si No GRÁNULOS DE “S” (in situ) INCLUSIONES CELULARES: Si No GRÁNULOS DE “S” (S-test) INCLUSIONES CELULARES: Si No GRÁNULOS DE “PHB” REACCIÓN A GRAM Gram + Gram - REACCIÓN A NEISSER Neisser +/. verdadera No Sí. oval. extendiéndose del floculo. tonel. Fernández. Rodríguez y N. bacterias filamentosas y microfauna de un fango activo.En la siguiente tabla se presenta un resumen de las principales características observables mediante microscopía óptica. discoidal. falsa COLORACIÓN IN VIVO DEL Transparente. cadena FILAMENTO (TRICOMA) irregular de células. interior. medio. 20 . ligeramente curvo.

Teñir durante 1 min con la Solución III. Técnicas de tinción de bacterias filamentosas. Rodríguez y N. goteando. 1993). mezclados con 100 mL de agua destilada. Tinción Gram.de color rosado. Aplicar durante 1 min la Solución II y lavar con agua destilada.y microscópicas. Decolorar con etanol 95% gota a gota durante 20-25 s y lavar posteriormente. en los que la muestra se ha distribuido homogéneamente dejándola caer cuidadosamente en forma de gotas sobre un portaobjetos. Las tinciones que se exponen a continuación requieren de la preparación de frotis fijos en portaobjetos. Procedimiento Teñir durante 1 min con la Solución I y aclarar con agua destilada. 5. Los filamentos Gram + se observarán de color azul y los Gram . Fernández. la duración máxima de cada una es de un mes. Dejar secar y observar bajo objetivo 100x y campo claro. E. en función del grado de permeabilidad de las paredes celulares al disolvente aplicado durante la tinción. Una vez secos y sin necesidad de fijar a la llama. bacterias filamentosas y microfauna de un fango activo. L.. Tomar 1 g de iodo y 2 g de ioduro potásico y enrasar hasta 300 mL con agua destilada. lavar y eliminar el exceso de agua con papel secante. desde un extremo del portaobjetos hacia el otro. Se trata de una técnica de tinción diferencial que permite distinguir entre bacterias Gram + y Gram -.5% (p/v) en etanol 95% (v/v). Gram - Gram + I CURSO SOBRE BIOINDICACIÓN EN EDARS DE FANGOS ACTIVOS Características macro. Solución III Solución de safranina: 10 mL de safranina al 2. A. Por separado. B.5. Reactivos Solución I (A+B) Las soluciones A y B se mezclan en el momento de ser utilizadas y se desechan a las 24 h. Solución II Preservar esta solución de la luz y desecharla al mes. en ambos casos. 21 . Solución de cristal violeta: 20 mL de cristal violeta al 10% (p/v) en etanol 95% (v/v). los frotis son sometidos al protocolo que determine la tinción.1. Isac. Método Hücker modificado (En: Jenkins et al. Oxalato amónico: 80 mL de oxalato amónico al 1% (p/v) en agua destilada.

Seleccionar el objetivo de inmersión o 100X y proceder a la observación. Para la observación de una muestra fijada y teñida: 1. 2. Solución II Tomar 33. con 6. junto con las características morfológicas y estructurales deducidas de la observación in vivo. El azul de metileno es catiónico y se une a los sitios aniónicos de las cadenas de polímeros de polifosfato. 3. Conservar A y B por separado. Reactivos Solución I (A+B) Desechar al mes de ser preparada. Neisser + Neisser - 5. Una vez concluido el análisis microscópico. E. L. Esta tinción pone de manifiesto la presencia de gránulos de reserva de polifosfato en el interior celular. Si por el contrario el tricoma filamentoso presenta color marrón claro y ausencia de gránulos. Rodríguez y N. Neisser. Si el tricoma es Neisser – con presencia de gránulos. Procedimiento de observación de muestras fijadas y teñidas (frotis fijos). Procedimiento Teñir durante 30 s con la Solución I y lavar con agua destilada. 22 .3 mL de una solución de marrón de Bismark al 1% (p/v) en solución acuosa y enrasar hasta 100 mL con agua destilada. se considerará Neisser +.7 mL de etanol 95% y 100 mL de agua destilada.5. Teñir durante 1 min con la Solución II.y microscópicas. realizadas sobre frotis fijos de fango activo permiten. retirar el objetivo con cuidado y limpiarlo con un paño suave impregnado en la solución éter-etanol 3:1. Colocar una gota de aceite de inmersión sobre el frotis. La respuesta de los organismos filamentosos a las Tinciones Gram. B. 1993). observados con color negro-azulado. aclarar y escurrir el exceso de agua. PHB. se considerará Neisser -. Método de Eikelboom y van Buijsen. Tinción Neisser. Fernández. bacterias filamentosas y microfauna de un fango activo. Mezclar 3.3.2.. Mezclar 0. I CURSO SOBRE BIOINDICACIÓN EN EDARS DE FANGOS ACTIVOS Características macro. etc.3 mL de cristal violeta al 10% (p/v) en etanol 95% (v/v). 10 mL de ácido acético glacial y 100 mL de agua destilada.2 g de azul de metileno con 10 mL de etanol 95% (v/v). 1981 (En: Jenkins et al.. que ha sido teñido según el protocolo convenido. será gránulo Neisser +. perfectamente seco. A. su identificación. Isac. Dejar secar y observar al microscopio óptico con el objetivo de 100x en campo claro. En el caso de que todo el tricoma presente la coloración azulada.

Estimación cualitativa de la abundancia de bacterias filamentosas. bacterias filamentosas y microfauna de un fango activo. Isac. (1993). Un procedimiento útil y de aplicación sencilla en la cuantificación de bacterias filamentosas es el método cualitativo presentado en Jenkins et al. pero no en todos ellos 3 Comunes Se observan filamentos en todos los flóculos pero en pequeña cantidad (1-5 filamentos por flóculo) 4 Muy comunes Se observan filamentos en todos los flóculos.y microscópicas. Cuantificación de bacterias filamentosas. etc. 1993) o Arnáiz et al. VALORACIÓN DE FILAMENTOS EN FUNCIÓN DE LA ABUNDANCIA RELATIVA VALOR ABUNDANCIA SIGNIFICADO NUMÉRICO 0 Ninguno 1 Pocos Hay filamentos pero se observan sólo en algunos flóculos 2 Alguno Se ven filamentos en los flóculos. L. hay más filamentos que flóculos Otros métodos tienen su base en el cómputo de intersecciones de los filamentos presentes en la suspensión biológica con la cuadrícula de una cámara de recuento. tras sucesivas observaciones y una vez adquirida una cierta práctica. el contorno del ocular o del monitor de televisión conectado al microscopio.6. pero con una densidad media (5-20 por flóculo) 5 Abundantes Hay filamentos en todos los flóculos y con densidad alta (>20/flóculo) 6 Excesivos Filamentos presentes en todos los flóculos. Fernández. establece su propio criterio de abundancia de los organismos filamentosos presentes en una suspensión biológica (Tabla 2).. Rodríguez y N. E. 23 . (2000). quienes emplearon la cámara de recuento Neubauer. 1979 (En: Jenkins et al. Este es el planteamiento de autores como Pipes. basado en la valoración del analista que. I CURSO SOBRE BIOINDICACIÓN EN EDARS DE FANGOS ACTIVOS Características macro. Tabla 2.

y microscópicas. Fernández. 24 . Protocolo para la identificación de organismos filamentosos. MUESTRA Nº: LOCALIZACIÓN DE LA MUESTRA: FECHA: OBSERVACIONES: CARACTERÍSTICAS FÍSICO-QUÍMICAS SSLM (mg/L) SSVLM (mg/L) V30 (mL/L) IVF (mL/g) FILAMENTO 1 2 3 4 5 Reacción a Gram Reacción a Neisser (tricoma) Reacción a Neisser (gránulos) Reacción PHB Gránulos de S in vivo Gránulos de S (S-test) Vaina Morfología celular Septos celulares Constricciones en los septos celulares Tamaño celular (ancho/largo en µm) Morfología del tricoma Crecimiento epifítico Localización del filamento Dimensiones del tricoma (ancho/largo en µm) Otras observaciones (gonidos. Isac. bacterias filamentosas y microfauna de un fango activo. 7. Rodríguez y N. L. rosetas) IDENTIFICACIÓN ABUNDANCIA EFECTO SOBRE EL FLÓCULO OTRAS OBSERVACIONES (FILAMENTOS EN DISOLUCIÓN) I CURSO SOBRE BIOINDICACIÓN EN EDARS DE FANGOS ACTIVOS Características macro. E.