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JLIA GABRIELA MOREIRA

ESTUDO FITOQUMICO DA SEMENTE DA SUCUPIRA-PRETA (Bowdichia


virgilioides Kunth)

PATOS DE MINAS

2017
JLIA GABRIELA MOREIRA

ESTUDO FITOQUMICO DA SEMENTE DA SUCUPIRA-PRETA (Bowdichia


virgilioides Kunth)

Projeto de pesquisa realizado como requisito


de avaliao total da disciplina Trabalho de
concluso de Curso I, sob orientao da
professora Mestre Maria Perptua Oliveira
Ramos e da coorientadora Doutora Lorrayne
Barros Bosquetti.

PATOS DE MINAS

2017
SUMRIO

Contedo
1 INTRODUO ............................................................................................................. 5
2 OBJETIVOS .................................................................................................................. 6
2.1 OBJETIVO GERAL ............................................................................................... 6
2.2 OBJETIVOS ESPECFICOS ................................................................................. 6
3 JUSTIFICATIVA .......................................................................................................... 7
4 REVISO DA LITERATURA ..................................................................................... 8
4.1 FAMLIA FABACEAE .......................................................................................... 8
4.2 CARACTERIZAO DA Bowdichia virgilioides KUNTH ................................. 8
4.3 FITOQUMICA ...................................................................................................... 9
4.4 METABLITOS ESPECIAIS ............................................................................. 10
4.4.1 Metabolismo ................................................................................................... 10
4.4.2 Metabolismo Vegetal Secundrio .................................................................. 10
4.4.3 Taninos ........................................................................................................... 11
4.4.4 Quinonas......................................................................................................... 12
4.4.5 Flavonides .................................................................................................... 12
4.4.6 Saponinas ....................................................................................................... 13
4.4.7 Esterides / Triterpenos .................................................................................. 13
4.4.8 Alcalides ....................................................................................................... 14
4.5 CIDOS GRAXOS .............................................................................................. 14
5 MATERIAIS E MTODOS ........................................................................................ 15
5.1 COLETA DO MATERIAL .................................................................................. 15
5.2 OBTENO DO EXTRATO .............................................................................. 15
5.3 TESTE PARA ANALISE DE PERFIL DE CIDOS GRAXOS ........................ 16
5.3.1 Preparo da amostra ......................................................................................... 16
5.3.1.1 Hidrlise e metilao de leos ................................................................. 16
5.3.2 Mtodo de anlise........................................................................................... 16
5.3.2.1 Cromatografia Gasosa ............................................................................. 16
5.4 CROMATOGRAFIA EM COLUNA DE SILICA ............................................... 17
5.5 TESTE DE IDENTICAO DE ESTERIDES/TRITERPENOS ..................... 17
5.6 TESTE DE IDENTICAO DE FLAVONOIDES ............................................ 17
5.7 TESTE DE IDENTICAO DE TANINOS ....................................................... 17
5.8 TESTE DE IDENTICAO DE SAPONINAS .................................................. 18
5.8 TESTE DE IDENTICAO DE QUINONAS.................................................... 18
6 RECURSOS NECESSRIOS ..................................................................................... 19
REFERNCIAS ............................................................................................................. 21
5

1 INTRODUO

O cerrado um dos principais biomas brasileiro, tendo uma grande biodiversidade


resultante do seu alto potencial aqufero. Apresenta uma grande poro de espcies endmicas.
Do ponto de vista da diversidade biolgica, o cerrado brasileiro reconhecido como a savana
mais rica do mundo, abrigando 11.627 espcies de plantas nativas j catalogadas. Existe uma
grande diversidade de habitats, que determinam uma notvel alternncia de espcies entre
diferentes fitofisionomias. (BRASIL, 2017).
Atualmente h vrios estudos para identificao dos elementos qumicos presentes
nas plantas do cerrado brasileiro, tendo a finalidade de diagnosticar componentes fitoterpicos
e fitofrmacos. E para isso necessrio a identificao fitoqumica dos constituintes dessas
plantas.
A pesquisa ou estudo fitoqumico tem por objetivo conhecer os constituintes
qumicos de espcies vegetais ou avaliar sua presena. Quando no h estudos de uma planta
de interesse, o estudo fitoqumico preliminar indica os grupos de metablicos especiais
relevantes da mesma (SIMES, 2004).
Os metablitos especiais vegetais so compostos finais ou intermedirios do
metabolismo primrio da fotossntese. No passado, os metablitos eram vistos como produtos
de desperdcio resultantes de enganos do metabolismo primrio. No entanto, j est claro que
os metablitos secundrios so componentes chaves em muitos mecanismos ecolgicos
vegetais. (LARCHER, 20001 apud JACOBSON, 2007).
Dentre as vrias espcies encontradas no serrado brasileiro a Bowdichia virgilioides
Kunth, da famlia Fabaceae, conhecida popularmente como sucupira-preta, uma arvore que
apresenta grande potencial fitoqumico. Segundo Lorenzi (2002) uma rvore extremamente
ornamental quando em flor, sendo que sua madeira empregada para acabamentos internos,
alm de ser pioneira e adaptada em terrenos secos e pobres.
De acordo com Cruz, 1965 2 apud Leite Et al, 2014, no nordeste brasileiro as
sementes de Virgilioides kunth so utilizadas para tratamento de reumatismo, artrite e doenas
de pele.

1
Larcher, W. 2000. Ecofisiologia Vegetal. So Carlos, Editora RiMa, 531 p..
2
Cruz GL. 1965. Livro Verde das Plantas Medicinais e Industriais do Brasil. Ed. Helmus, Belo
Horizonte, Brasil.
6

2 OBJETIVOS

2.1 OBJETIVO GERAL

O objetivo geral do presente projeto ser realizar estudo fitoqumico do extrato


clorofrmico de sementes de sucupira-preta (Bowdichia virgilioides Kunth).

2.2 OBJETIVOS ESPECFICOS

Realizar um levantamento bibliogrfico acerca de informaes sobre a planta escolhida


para o estudo, sua constituio qumica e metabolitos especiais;
Obter o extrato clorofrmico bruto de sementes da Bowdichia virgilioides Kunth;
Realizao de testes de identificao dos metabolitos especiais presentes nas sementes
da Bowdichia virgilioides Kunth: saponinas, flavonoides, antraquinonas, fenois, taninos,
cumarinas, alcaloides;
Isolar e purificar substncias bioativas presentes no extrato atravs de mtodos
cromatogrficos convencionais, como cromatografia em coluna (cc) e cromatografia em
camada delgada (ccd);
Determinar a estrutura qumica dos constituintes presentes por meio de estudos em
RMN de H1, RMN de C13 e IV.
7

3 JUSTIFICATIVA

O cerrado o bioma com a segunda maior formao vegetal brasileira. Assim, na


atualidade esto surgindo vrios estudos que envolvem plantas do cerrado buscando novas
descobertas na rea medicinal. Para isso necessrio investigao e estudos visando
descoberta e obteno de substancias qumicas naturais para o uso na farmacologia.
Uma das arvores mais tpicas do cerrado brasileiro a sucupira-preta (Bowdichia
virgilioides Kunth), bastante utilizada em programas de reflorestamentos e tambm utilizada
na medicina popular para combater diversas doenas como o diabetes, inflamaes e
reumatismo.
O estudo da semente sucupira-preta (Bowdichia virgilioides Kunth) se torna
complacente medida que a investigao sobre a sua constituio qumica e presena de
metabolitos especiais apresenta um alto potencial fitoqumico, e grande importncia na rea
medicinal, podendo ser usando para a produo de frmacos. Alm que, quanto mais se
estudarem a flora do cerrado brasileiro, mais iniciativas de proteo iro surgir para preservar
as espcies ameaadas de extino.
8

4 REVISO DA LITERATURA

4.1 FAMLIA FABACEAE

A famlia Fabaceae ou Leguminosae compreende aproximadamente 727 gneros e


19325 espcies, sendo considerada a terceira maior famlia de Angiospermae (Lewis et al.
20053 apud Andrade et al., 2009). Segundo Lima (2000)4 apud Andrade et al. (2009) Fabaceae
considerada a maior famlia no Brasil, com 2100 espcies e 188 gneros, das quais 31 so
endmicos, estando representadas em todos os biomas brasileiros.
De acordo com Jardine e Barros 5 , 2015 apud Cruz, 2016 a famlia Fabaceae
apresenta uma grande importncia econmica, pois oferece vasta variedade de espcies: gro-
de-bico (Cicer arietnum), ervilha (Pisum sativum), feijo (Phaseolus vulgaris), lentilha (Lens
cultivaris), feijo-mungo (Vigna radiata), e a soja (Glycine max), todos utilizados na
alimentao humana.
As plantas da famlia Fabaceae proporcionam uma grande variedade de metablitos
especiais, tais como alcalides, aminocidos no proticos, aminas, fenilpropanoides,
flavonides, isoflavonides, compostos fenlicos, esterides e steres de cido graxo
(IGNOATO6, 2012 apud CRUZ, 2016).

4.2 CARACTERIZAO DA Bowdichia virgilioides KUNTH

Bowdichia virgilioides Kunth uma arvore arbrea pertencente famlia Fabaceae,


conhecida popularmente como sucupira-preta, sucupira-acari, sucupira-au, sucupira-do-

3
Lewis, G.P., Schrire, B., Machinder, B. & Lock, M. 2005. Legumes of the World. Royal Botanic
Gardens, Kew.
4
Lima, H.C. 2000. Leguminosas arbreas da Mata Atlntica: uma anlise da riqueza, padres de
distribuio geogrfica e similaridades florsticas em remanescentes florestais do Estado do Rio de
Janeiro. Tese de Doutorado, Universidade Federal do Rio de Janeiro, Rio de Janeiro.
5
Jardine, J. G.; Barros, T. D. rvore do conhecimento, agroenergia. Soja. EMBRAPA. 2015.
http://www.agencia.cnptia.embrapa.br/gestor/agroenergia/arvore/CONT000fbl23vmz02wx5eo0sawqe
3vtdl7vi.html. Acesso em 25 de agosto de 2015.
6
Ignoato, M. C. Contribuio ao estudo fitoqumico e atividades biolgicas de Aeschynomene
fluminensis e de Machaerium hirtum (Fabaceae) de Porto Rico Paran. 2012. 209 f. Tese (Doutorado
em Qumica) - Universidade Estadual de Maring. Maring, 2012.
9

cerrado, paricarana, angelim-amargoso. Tem ocorrncia no cerrado, mata e mata mesoftica,


com predominncia nas regies norte, centro oeste e sudeste. (ALMEIDA et al., 1998).
A sucupira-preta tem o perodo de florao de maro a setembro, variando com o
ambiente, mas geralmente de junho a setembro. Tendo frutificao de outubro a dezembro.
uma rvore hermafrodita de at 20 m, com folhas alternas, compostas imparipinadas ou
paripinadas por aborto do fololo terminal. Suas flores tm aproximadamente 1,5 cm de
comprimento, curto-pediceladas, sendo de cor lils. (ALMEIDA et al., 1998).
A madeira empregada para acabamentos internos, como assoalhos, lambris,
molduras, painis e portas. A rvore extremamente ornamental quando em flor e
particularmente til para arborizao de ruas estreitas. Planta pioneira e adaptada a terrenos
secos e pobres, sendo tima para reflorestamentos heterogneos de reas degradadas.
(LORENZI, 2002).

Figura 1 - Aparncia da Bowdichia virgilioides K. e seus componentes

Fonte: Lorenzi, 2002, p. 210.

4.3 FITOQUMICA
10

De acordo com Simes et al. (2004, p. 229) a pesquisa fitoqumica tem por
objetivos conhecer os constituintes qumicos de espcies vegetais ou avaliar sua presena.
Quando no se dispe de estudos qumicos sobre a espcie de interesse, a anlise fitoqumica
preliminar pode indicar os grupos de metablitos especiais relevantes da mesma..
Retirar. Vc falou na introduo.

Explicar aqui, o que fitoqumica.

4.4 METABLITOS ESPECIAIS

4.4.1 Metabolismo

Emprega-se o nome de metabolismo o conjunto de reaes qumicas que


continuamente esto ocorrendo em cada clula. A presena de enzimas especifica garante certa
direo a essas reaes, estabelecendo o que se denomina de rotas metablicas.. (SIMES et
al., 2004, p. 403).
A vida dos organismos depende de transformaes qumicas executadas pelos seus
metabolismos primrios e especiais. A bioqumica investiga a qumica de seus produtos naturais
do metabolismo primrio, que produz substncias amplamente distribudas nos seres vivos:
aminocidos, lipdios, carboidratos e macromolculas (protenas, polissacardeos, cidos
nuclicos). A qumica de produtos naturais do metabolismo secundrio (especializado)
estudada por qumicos orgnicos, frequentemente reconhecidos como qumicos dos produtos
naturais. As substncias biofabricadas pelo metabolismo secundrio so mais caractersticas de
grupos taxonmicos, tais como famlia e gnero. (BRAZ FILHO, 1994).

4.4.2 Metabolismo Vegetal Especial (secundrio)

Segundo Mann (1987) apud Simes (2004, p. 410) na maioria das clulas e
organismos, as rotas metablicas de sntese, degradao e interconverso das molculas
essenciais, bem como as reaes que visam conservao de energia, so similares
(metabolismo primrio ou intermedirio). As rotas metablicas dos metablicos secundrios,
entretanto, no so to gerais e talvez s sejam ativadas durante alguns estgios particulares de
crescimento e desenvolvimento ou em perodos de estresse causados por limitaes nutricionais
ou ataque microbiolgico.
Para Wink (1990) apud Simes et al. (2004) a produo de metablitos secundrios
o resultado de complexas interaes entre biossntese, transporte, estocagem e degradao.
11

Simes et al. (2004) dizem que embora qualquer tecido ou clula vegetal tenha a capacidade de
biossintetizar metabolitos secundrios, parece que isso ocorre somente em alguns tecidos ou
mesmos em clulas especiais, em funo do grau de diferenciao e desenvolvimento dos
mesmos. Em alguns casos, a produo pode estar restrita a um estgio especfico do
desenvolvimento do vegetal ou a determinadas condies ecolgicas ou ambientais.
Assim, de acordo com Simes (2004, p. 411), a origem dos metablitos
secundrios pode ser resumida a partir do metabolismo da glicose, via dois intermedirios
principais, o cido chiquimco e o acetato. O cido chiquimco origina os aminocidos
aromticos, precursores da maioria dos metablitos secundrios aromticos.. Esse resumo
encontra-se esquematizado na figura 2.

Figura 2 - Ciclo Biossinttico dos metablitos secundrios.

Fonte: Simes et al., 2004, p.411.


4.4.3 Taninos

Taninos condensados e hidrolisveis se distribuem no reino vegetal seguindo


padres significativamente diferentes. Os taninos condensados em geral esto largamente
distribudos em plantas lenhosas, j os taninos hidrolisveis sucedem em dicotiledneas
12

herbceas e lenhosas, porm dentro de limites taxonmicos bem definidos (SIMES et al.,
2004).
Segundo Simes (2004, p.629) as atividades farmacolgicas dos taninos so
devidas pelo menos em parte, a trs caractersticas gerais que so comuns em maior ou menor
grau aos dois grupos de taninos, condensados e hidrolisveis: 1) complexo com ons metlicos
(ferro, mangans, vandio, cobre, alumnio, clcio, entre outros), 2) atividade antioxidante e
seqestradora de radicais livres e 3) habilidade de complexar com outras molculas incluindo
macromolculas tais como protenas e polissacardeos.
Testes in vitro realizados com extratos ricos em taninos ou com taninos puros foram
identificados diversas atividades biolgicas como ao bactericida, fungicida, antiviral entre
outros (SIMES, 2004).

4.4.4 Quinonas

Quininas so compostos orgnicos resultantes da oxidao dos fenis, onde da


mesma forma a reduo de quinonas pode originar os correspondentes fenis. Sua principal
caracterstica a presena de dois grupos carboxlicos que formam um sistema conjugado com
pelo menos duas ligaes duplas C-C. Existem trs grupos principais de quinonas conhecidos
atualmente: benzo-, nafto- e antraquinonas. As quinonas tem um papel na defesa da planta
contra insetos e outros patognicos. So muito encontradas no lenho de espcies de
leguminosas, apresentando uma toxidade para cupins, assim aumentando a resistncia da
madeira. Outra funo de defesa atribuda as quinonas a atividade aleloptica, ou seja, a
produo e excreo para o ambiente de substancias capazes de inibir a germinao de outras
espcies nas proximidades (SIMES, 2004).
As quinonas possuem atividade laxante, e seus grupos possuem atividades
antibactericida, antifngica e antitumoral e esto includas entre pigmentos naturais utilizados
em corantes alimentcios (SIMES, 2004).

4.4.5 Flavonides

Flavonides so compostos polifenlicos biossintetizados a partir da via dos


fenilpropanides e do acetato, precursores de vrios grupos de substncias como aminocidos
13

alifticos, terpenides, cidos graxos dentre outros (Mann, 1987 7 apud Dornas 2007). Os
flavonides so subdividas em Flavonas, Flavonis, Flavononas, Flava-3-ol, Isoflavonas,
Flavanol e Antocianidinas.
Os flavonides apresentam um esqueleto carbonado com 15 tomos, dos quais
nove se originam da via shikimato e os outros seis a partir da via malonato ou acetato. O fato
de serem amplamente distribudos entre as angiospermas, aliado diversidade estrutural,
caracterizada por uma relativa estabilidade molecular, refora a propriedade de sua utilizao
como marcadores taxonmicos (Gershenzon & Mabry, 19838 apud Silva, 2007).
Diversas funes so atribudas aos flavonides nas plantas. Entre elas, pode-se
citar a proteo contra a incidncia de raios ultravioleta, proteo contra microrganismos
patognicos, ao antioxidante, ao aleloptica e inibio enzimtica (SIMES, 2004).

4.4.6 Saponinas

So considerados glicosdeos de esteroides ou de terpenos policclicos. Possuem


elevada massa molecular (600 a 2000), e de modo geral, apresentam misturas complexas
devidas ao comparecimento concomitante de estruturas com numero variado de aucares ou
ainda devido presena de diversas agliconas (SIMES, 2004).
De acordo com Simes (2004), as saponinas em soluo aquosa formam espuma
persistente e abundante. Alm de apresentarem elevada solubilidade em gua, muitas saponinas
so capazes de causar sorganizao das membranas das clulas sanguneas (ao hemoltica)
ou das clulas das brnquias em peixes (ao ictiotoxica). Os componentes das saponinas so
muito importantes para a ao de muitas drogas vegetais, sendo tradicionalmente utilizadas
como expectorantes e diurticas.

4.4.7 Esterides / Triterpenos


De acordo com Dewick, 20009 apud Santos, 2010, os triterpenos so compostos
muito difundidos na natureza, principalmente no reino vegetal e pertencem a uma classe de

7
Mann J. Secondary metabolism. Oxford: Clarendon Press; 1987. p.374
8
Gershenzon J & Mabry T. (1983) Secondary metabolites and the higher classification of
angiosperms. Nordic Journal of Botany, 3: 5-34.
9
Dewick, P. M. Medicinal natural products: a biosynthetic approach. 2a ed. John Wiley & Sons
Ltd, p. 212 e 168, 2002.
14

substncias qumicas conhecidas como terpenides (terpenos). Estes compostos so todos


formados pela unio de unidades de isopreno (C5H8) que se unem, formando cadeias maiores.
Os triterpenos so uma ampla classe de produtos naturais cuja variedade estrutural
inclui uma larga disposio de grupos funcionais. Muitos compostos deste grupo possuem
interessantes atividades biolgica, farmacolgica ou medicinal (HONDA et al, 2000 10 apud
SOUDI, 2007).

4.4.8 Alcalides
Alcalides so compostos nitrogenados farmacologicamente ativos e so
encontrados predominantemente nas angiospermas. Devido ausncia de uma separao mais
precisa entre alcalides propriamente ditos e aminas complexas de ocorrncia natural temse
uma dificuldade de uma definio para essa classe. Assim para contornar esses problemas,
Pelletier (199811 apud SIMES, 2004) formulou a seguinte definio:
Um alcalide seria uma substancia orgnica de origem natural, cclica
contendo um nitrognio em um estado de oxidao negativo e cuja
distribuio limitada entre os organismos vivos (SIMES, 2004, p 765).
Assim, com essa definio Simes (2004) chegou-se a concluso que os compostos
nitrogenados (aminas simples, aminocidos, protenas, cidos nuclicos, nucleotdeos,
porfirinas, vitaminas e compostos nitro e nitroso) foram excludos do grupo dos alcalides.
Os alcalides podem ser encontrados em todas as partes dos vegetais, contudo em
um ou mais rgos haver maior concentrao dessa sustncia. Tem sido observado que muitas
plantas que produzem alcalides so evitadas por animais ou insetos em sua dieta, isso se deve
ao fato que a maioria das plantas que possuem essa substancia serem amargas ou serem txicas.
E devido a essas caractersticas os alcalides so usados como repelentes de herbvoros
(SIMES, 2004, p 765).

4.5 CIDOS GRAXOS

Os cidos graxos podem ocorrer na natureza na forma livre e esterificada. A maior


parte dos cidos graxos naturais encontra-se esterificada com o glicerol, formando

10
Honda, T., Rounds, B. V., Bore, L., Finlay, H.J., Favaloro Jr., F. G., Suh, N., Wang Y., Sporn, M.
B., Gribble, G. W.; Synthetic oleanane and ursane triterpenoids with modified rings A and C: A
series of highly active inhibitors of nitric oxide production in mouse macrophages. Journal of
Medicinal Chemistry, Vol 43, No 22, 4233-4246 (2000)
11
Pelletier, S. W. (ed).Alkaloids chemical and biological perspectives, v.1-6. New York: Willey,
1983-1988.
15

triglericerdeos ou triacilgliceris, que so componentes dos leos e gorduras comestveis. Os


leos e gorduras so os lipdeos mais distribudos na natureza (BRAZ FILHO, 1996).
Os cidos graxos naturais formam biosteres, tambm com monolcoois de alto
peso molecular para formar as ceras, misturas que juntamente com os triacilgliceris
caracterizam o grupo dos lipdeos simples ou neutros (BRAZ FILHO, 1996, p. 400).
Os cidos graxos tambm podem estar presentes na forma de steres nos
esfingolipdios, cerebrosdios, lipoprotenas, colesterol, fitoesteris, vitaminas lipossolveis,
entre outras (SWERN, 197912 apud BRAZ FILHO, 1996).
Os cidos graxos livres ou esterificados so monocarboxlicos e possui nmero par
de tomos de carbonos dispostos numa cadeia linear, isso acontece devido bioproduo a
partir de unidade acetato. Nos cidos graxos saturados, os tomos esto ligados entre si por
ligaes simples e os insaturados por ligaes duplas (BRAZ FILHO, 1996).
Segundo Braz Filho (1996), os cidos graxos que tem maior ocorrncia na natureza
so conhecidos pelos seus nomes comuns, como nos casos dos cidos butrico, cprico, lurico,
mirstico, palmtico, esterico, araqudico, behnico, entre os saturados, oleico, linoleico,
linoleico, araquidnico e ercico, que pertencem ao grupo dos insaturados.

5 MATERIAIS E MTODOS

5.1 COLETA DO MATERIAL

O material vegetal a ser utilizado, sementes de Bowdichia virgilioides K foram


coletados na regio onde? de Patos de Minas-MG no perodo de setembro a dezembro de 2016.
O material foi descascado, como? Especifique.... limpo e devidamente armazenado at a
extrao do extrato bruto.

5.2 OBTENO DO EXTRATO

Os procedimentos para a obteno do extrato sero realizados nos laboratrios de


Qumica Orgnica, Qumica Geral e Central Analtica do Centro Universitrio de Patos de

12
Swern, D. Baileys industrial oil and fat product.; Ed., 4th ed. John Wiley & Sons: New York,
1979.
16

Minas Unipam. Para a obteno do extrato, devero ser utilizados sementes de Bowdichia
virgilioides K, que depois de trituradas em liquidificador qual?, sero submetidas a uma
extrao exaustiva em um extrator soxhlet, usando como solvente clorofrmio P.A(A.C.S) P.M
119,38 da Synth. A seguir o extrato obtido ser rotaevaporado para remoo do solvente. O
extrato ser condicionado em um frasco de vidro previamente pesado, etiquetado e levado a
capela, remoo final do solvente. Aps a completa evaporao do solvente dever ser realizado
o clculo do rendimento de extrato obtido.

5.3 TESTE PARA ANALISE DE PERFIL DE CIDOS GRAXOS

Os Procedimentos de analise do perfil de cidos Graxos sero realizados no


Laboratrio de Cromatografia no Departamento de Qumica da Universidade Federal de Minas
Gerais, localizado na Av. Antonio Carlos, 6627-Campus Pampulha- Belo Horizonte.

5.3.1 Preparo da amostra

5.3.1.1 Hidrlise e metilao de leos


Ira dissolver, em tubo criognico de 2ml, 12 mg da amostra de leo em 100 ul de
uma soluo de etanol (95%)/ hidrxido de potssio 1mol/l (5%). Aps agitao em vrtex por
10 s, o leo ser hidrolisado em um forno de microondas domstico (Panasonic NN-ST254W),
potncia 60% (420W), durante 6 minutos. Aps resfriamento, ira adicionor-se 400l de cido
clordrico a 20%, uma ponta de esptula de NaCl (~20mg) e 600 l de acetato de etila. Aps
agitao em vrtex por 10 s e repouso por 5 min, uma alquota de 300l da camada orgnica
ser retirada, colocada em tubos de microcentrfuga e seco por evaporao, obtendo-se assim
os cidos graxos livres. (W. W. Christie, Gas Chromatography and Lipids, 1989, Pergamon
Press). Posteriormente, os cidos graxos livres sero metiladas com 100 l BF3 / metanol (14%)
por aquecimento durante 10 minutos em banho de gua a 60C. Os cidos graxos metilados
sero extradas com 500 ul de hexano e analisados por Cromatografia Gasosa.

5.3.2 Mtodo de anlise

5.3.2.1 Cromatografia Gasosa


As anlises iro ser realizadas em um Cromatgrafo a Gs HP7820A (Agilent)
equipado com detector por ionizao de chamas. Programa de aquisio de dados EZChrom
Elite Compact (Agilent). Utilizara uma coluna BP20 15m x 0,22mm x 0,25 m (SGE) com
gradiente de temperatura: 120C, 0min, 10C/min at 240C; injetor (split de 1/50) a 250C e
17

detector a 260C. Hidrognio como gs de arraste (3.0 ml/min) e volume de injeo de 1l. A
identificao dos picos ser feita por comparao com padres de cidos graxos metilados
Supelco37 Fame mix (Supelco cat no 47885-U). retirar tudo isso.

5.4 CROMATOGRAFIA EM COLUNA DE SILICA

Os procedimentos do experimento de cromatografia em coluna de slica sero


realizados no laboratrio Central Analtica do Centro Universitrio de Patos de Minas Bloco
M- UNIPAM.
Em uma coluna ira adicionar-se 180g de slica Silicagel 60(0,04-0,063mm), aps
ir acrescentar o hexano como solvente, deixando cerca de 2 cm acima da slica. Aps ir
adicionar-se 6g de extrato viscoso diretamente na coluna. A partir desse momento comear a
coleta de alquotas da mistura em pequenos frascos de vidro de 10 ml.
Como devera utilizar muito hexano como solvente, dever ser realizada a extrao
do mesmo atravs do Rotaevaporador da marca Alfa Mare com numero de serie 009317 a 75C
e 40 rpm, isto com a finalidade de reutilizar esse hexano extrado.

5.5 TESTE DE IDENTICAO DE ESTERIDES/TRITERPENOS

Os testes de identificao de Esterides/Triterpenodes ser realizado pela reao


de Luberman-Burchard (anidrido actico + cido sulfrico concentrado). Tomando-se 2 gotas
(0,5 ml) do extrato e misturado a 1 ml de clorofrmio/1 ml de anidrido actico/10 gotas de acido
sulfrico concentrado. A apresentao de Azul/evanescente seguida de verde indicara a
presena de esterides. E rseo/lils presena de triterpenos (MATOS, 1997)

5.6 TESTE DE IDENTICAO DE FLAVONOIDES

O tente de flavonides ser realizado atravs do teste de cianidina ou Shinoda (HCl


concentrado e magnsio). Onde adiciona 4 gotas (1 ml) de extrato, aproximadamente 0,5 cm de
magnsio em fita com 2 ml de cido clordrico concentrado. O fim da reao ser pelo termino
de efervescncia. O aparecimento de uma colorao que varia de parda para vermelha indicara
presena de flavonides (MATOS, 1997).

5.7 TESTE DE IDENTICAO DE TANINOS

Em um tubo de ensaio contendo 4 gotas de extrato adiciona-se 3 gotas de soluo


alcolica de FeCl3, agitando fortemente, observando qualquer varincia de cor. A formao de
18

uma precipitao de tonalidade azul indicara presena de taninos hidrolisveis, e verde a


presena de taninos condensados (MATOS, 1997).

5.8 TESTE DE IDENTICAO DE SAPONINAS

Em um bquer contendo 4 gotas do extrato adiciona-se 5 ml de gua, aps ira


agitar. A formao de uma espuma persistente indicara a presena de saponinas (MATOS,
1997).

5.8 TESTE DE IDENTICAO DE QUINONAS

Colocar 1,0 g do extrato em tubo de ensaio devera adicionar 8,0 ml de soluo de


EtOH a 25%; Aps ferver na chama por 1 min; Filtrar por algodo para um tubo de ensaio
contendo 4 ml de soluo H2SO4 a 5% e aquecer levemente; Resfriar na torneira e adicionar 5
ml de CHCl3 (clorofrmio) ou Et2O (ter etlico); Extrair cuidadosamente por cerca de 3 min;
Decantar a camada orgnica para um tubo de ensaio; Adicionar 5 ml de soluo de NH3.H2O
Agitar fortemente e deixar em repouso. Reao Positiva quando apresentar colorao rsea ou
avermelhada na fase aquosa (COSTA, 1995). Olhe o que coloquei a seguir.
MELHORE A DESCRIO A SEGUIR.
5.3 CARACTERIZAO FITOQUMICA PARA IDENTIFICAO DE METABLITOS
ESPECIAIS

O extrato obtido ser submetido a uma srie de reaes para caracterizao


fitoqumica e avaliar a presena de diferentes metablitos especiais, por meio de mtodos
convencionais na identificao destes compostos (FARMACOPIA BRASILEIRA, 1988).
Ser avaliada a presena de saponinas (teste de espuma-agitao), flavonoides (reao de cido
clordrico com fita de magnsio), antraquinonas (reao com tolueno e hidrxido de amnio),
fenis e taninos (reao com cloreto frrico), cumarinas (extrao com ter etlico, observao
sob UV), alcaloides (reativos de Dragendorff com carbonato de bismuto e iodeto de potssio)
e acares redutores (Reao de Benedict: Fehling A, usando sulfato cprico como reagente e
B, usando hidrxido de sdio, tartarato de sdio e potssio) (RAMOS et al., 2016).
A interpretao do resultado dos testes de prospeco fitoqumicos ser realizada
pela observao de resultados caractersticos esperados, ou no que indiquem resultados
positivos ou negativos respeitando as particularidades de cada substncia avaliada. (MATTOS,
1997 apud RAMOS et al., 2016).
19

5.4 FRACIONAMENTO, ISOLAMENTO E PURIFICAO DO EXTRATO

O extrato obtido a partir da casca de C. antisyphilitica ser fracionado em coluna


cromatogrfica de slica gel 60 at posterior isolamento de constituintes qumicos. Para este
processo sero empregadas tcnicas de cromatografia em coluna (CC) e cromatografia em
camada delgada (CCD). A slica utilizada no processo de separao e purificao das
substncias isoladas ser recuperada com adio de perxido de hidrognio a 20%, repouso por
12 horas, lavagens sucessivas com gua destilada, lavagem com hipoclorito de sdio e secagem
em estufa por 2 horas a 100C. Estes procedimentos sero realizados no Laboratrio de Qumica
Orgnica do UNIPAM de acordo com mtodos usuais.

5.5 CARACTERIZAO DAS SUBSTNCIAS ISOLADAS

A caracterizao das substncias isoladas pelos mtodos de fracionamento (item


5.4) ser realizada por meio de anlises comparativas e espectromtricas utilizando regies de
Ultra Violeta-Visvel (UV), Infravermelho (IV) e Ressonncia Magntica Nuclear (RMN) de
hidrognio (1H) e carbono (13C). Estes testes sero realizados em parceria com os laboratrios
de anlises do Departamento de Qumica do ICex-UFMG.

6 RECURSOS NECESSRIOS

QUADRO 1 Oramento global

Recursos humanos (X) No se aplica


Descrio Quantidade Valor unitrio (R$) Total (R$)
- - - -
Material permanente (X) No se aplica
Descrio Quantidade Valor unitrio (R$) Total (R$)
- - - -
Material de consumo ( ) No se aplica
Descrio Quantidade Valor unitrio (R$) Total (R$)
20

Clorofrmio 4 litros - -
Hexano 5 litros - -
Silica gel 60 para ccd 200 gramas - -
Silica gel 60 para cc 200 gramas
cido sulfrico 100 mL - -
Anidrido actico 100 mL - -
cido clordrico 100 mL - -
Magnsio 10 g - -
Cloreto Frrico 50 g - -
Etanol 1L - -
ter etlico 1L - -
NH3.H2O 100 mL - -
Total xxx
Fonte: Autoria prpria, 2017.

7 CRONOGRAMA

QUADRO 2 Cronograma de trabalho.

ANO: 2017 1 Semestre MESES

ATIVIDADES Fev. Mar. Abr. Maio Jun.

Escolha do tema. X

TCC I Levantamento bibliogrfico e


X
Elaborao webliogrfico.

do Leitura e fichamento. X
projeto. Redao da introduo. X

Formulao dos objetivos. X


21

Elaborao da justificativa. X

Redao da reviso de literatura. X X

Determinao da metodologia. X
Elaborao do instrumento de
X
coleta de dados (Apndice).

Redao final do projeto. X


Entrega do projeto para
X
coordenao de TCC.

ANO: 2017 2 Semestre MESES

ATIVIDADES Jul. Ago. Set. Out. Nov.

Coleta de dados. X
Tabulao dos dados. X

Anlise de dados. X

Discusso de resultados. X

Redao do artigo. X
TCC II
Reviso final por parte do
Elaborao X
orientador.
do artigo
Entrega do artigo para a banca. X

Preparao dos slides para defesa. X

Defesa oral (pblica) do artigo. X

Correes sugeridas pela banca. X

Entrega do artigo corrigido para X


arquivar.

Fonte: Autoria prpria, 2017.

REFERNCIAS

ALMEIDA, S. P. et al. Cerrado: espcies vegetais teis. Planaltina: Embrapa-cpac, 1998.

ANDRADE, A. L. P; MIOTTO, S. T. S; SANTOS, E. P. A subfamlia Faboideae (Fabaceae


Lindl.) no Parque Estadual do Guartel, Paran, Brasil. Hoehnea, SP, 2009. Disponvel
em: < http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S2236-89062009000400012 >.
Acesso em: 22 mar. 2017.
22

BRAZ-FILHO, R. cidos Graxos naturais: importncia e ocorrncia nos alimentos. Qumica


Nova, Rio de Janeiro, v. 19, n 4, p.400-407, 1994.

BRAZ-FILHO, R. Qumica de produtos naturais: importncia, interdisciplinaridade,


dificuldades e perspectivas. A peregrinao de Pacatupano. Qumica Nova, Rio de Janeiro, v.
17, n 5, p.405-445, 1994.

BRASIL. Ministrio do Meio ambiente. O bioma cerrado. 2017. Disponvel em:


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COSTA, Alexandre Sylvio Vieira da; PESSANHA, Gilberto Gastim; CARVALHO, Mario
Geraldo; BRAZ FILHO, Raimundo. Identificao de substancias secundarias utilizados
em leguminosas utilizadas como adubo verde. Revista CERES, 42 (248): 584-598.1995.

CRUZ, Simoni Aparecida Barbosa. Avaliao da atividade txica e do perfil fitoqumico


de duas espcies da famlia fabaceae: bowdichia virgilioides kunth e pterodon emarginatus
Vogel. 2016, 54 f. Trabalho de Concluso do Curso de Licenciatura Plena em Qumica,
Instituto Federal de Gois, Campus Anpolis. Anpolis. 2016.

JACOBSON, T. K. B. et al. Estudo preliminar da concentrao de fenis totais e taninos


no extrato alcolico de folhas de schefflera macrocarpa (araliaceae) e vochysia
thyrsoidea (vochysiaceae). Anais do VIII Congresso de Ecologia do Brasil, 23 a 28 de
Setembro de 2007, Caxambu MG.

LEITE, L. H. et al.; Composio qumica e estudo da atividade antibacteriana de


Bowdichia virgilioides Kunth (Sucupira) Fabaceae Papilonoidae. Blacpma- Boletn
Latinoamericano y del Caribe de Plantas Medicinales y Aromticas 13 (5): 477 - 487 ISSN
0717 7917. 2014.

LORENZI, H. rvores brasileiras: manual de identificao e cultivo de plantas arbreas


nativas do Brasil. 4. ed. Nova Odessa: Instituto Plantarum, 2002. v. 1 368 p. il.

MATOS, F.J. A. Introduo Fitoqumica Experimental. 2. ed. Fortaleza: Edies UFC,


1997, 141p.

SANTOS, Almeida Fonseca Santos. Avaliao das propriedades biolgicas dos derivados
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Qumica)- Universidade Federal da Bahia, Salvador, 2010.

SIMES, C. M. O. S. et al. Farm, Florianpolis: Editora da UFRGS/ Editora da UFSC, 2004.

SOLDI, Cristian. Derivados sintticos dos triterpenos e -amirina e avaliao das


propriedades analgsicas e antifngicas. 2007. 103 f. Dissertao (Ps-Graduao em
Qumica)- Universidade Federal de Santa Catarina, Florianpolis, 2007.