 Untuk elute molekul target dari affnity media interaksi dapat dibalik, baik specifcally

menggunakan ligan kompetitif, atau non-specifcally, dengan mengubah pH, kekuatan ionik
atau polaritas
 eberapa khas interaksi biologis, sering digunakan dalam affnity kromatografi, tercantum di
bawah ini:
Enzim substrat analog, inhibitor, kofaktor.
Antibodi antigen, virus, sel.
Lektin polisakarida, glikoprotein, permukaan sel
reseptor, sel.
Asam nukleat komplementer dasar urutan, histones, polimerase asam nukleat, protein
pengikat asam nukleat.
Hormon, vitamin reseptor protein pembawa.
Glutathione glutathione-S-transferase atau GST fusi protein.
Logam ion Poli (nya) fusi protein, asli protein dengan histidine, Sistein dan/atau triptofan
residu pada permukaan mereka
 Gunakan air berkualitas tinggi dan bahan kimia. Solusi harus disaring melalui 0.45 µm atau
0.22 filter µm.
Jika media afinitas yang digunakan secara rutin, perawatan harus diambil untuk memastikan
bahwa kontaminasi dari sampel mentah dapat dihilangkan dengan prosedur yang tidak
merusak ligan.
Sampel harus jelas dan bebas dari partikel.
Jika mungkin, menguji afinitas ligan: menargetkan molekul interaksi.
Afinitas terlalu rendah akan menghasilkan hasil yang miskin karena target protein dapat
mencuci melalui atau bocor dari kolom selama contoh aplikasi.
Afinitas yang terlalu tinggi akan menghasilkan hasil yang rendah karena molekul target
mungkin tidak terlepas dari ligan selama elution
 Untuk interaksi dengan kuat affnity antara ligan dan target molekul yang cepat mencapai
keseimbangan, sampel dapat diterapkan pada tingkat tinggi fow.
 Ketika bekerja dengan afinitas sangat lemah interaksi yang lambat untuk mencapai
keseimbangan, mungkin berguna untuk menghentikan aliran setelah menerapkan sampel
untuk memungkinkan lebih banyak waktu untuk interaksi terjadi sebelum melanjutkan
untuk mencuci kolom.
 Jangan mulai elution zat target sampai semua bahan unbound telah dibasuh melalui kolom
oleh mengikat buffer (ditentukan oleh UV absorbansi di 280 nm). Hal ini akan meningkatkan
kemurnian substansi eluted target.
 Analisis hasil dari pemisahan pertama dapat mengindikasikan jika pemurnian perlu
ditingkatkan untuk meningkatkan hasil, mencapai kemurnian lebih tinggi, mempercepat
pemisahan atau meningkatkan jumlah sampel yang dapat diproses dalam menjalankan satu.
 Varian tertentu di mana kekhasan biologis unik analyte dan ligan interaksi ini digunakan
untuk pemisahan kromatografi
 Sebuah molekul tertentu yang terikat ke tahap stasioner dirancang untuk bereaksi terhadap
beberapa analyte khusus dan mengikat untuk itu.
 Itu menggunakan spesifik interaksi antara satu jenis zat terlarut molekul dan kedua molekul
yang bergerak pada fase stasioner.
 Sebagai contoh, molekul bergerak mungkin antibodi beberapa protein tertentu.
 Ketika terlarut berisi campuran protein disahkan oleh molekul ini, hanya protein tertentu
bereaksi terhadap antibodi ini, mengikat ke tahap stasione
 Di afinitas kromatografi, protein dipisahkan sesuai dengan kemampuan mereka untuk
mengikat ligan spesifik yang terhubung ke manik-manik resin.
 Setelah protein yang tidak mengikat ligan dicuci melalui kolom, terikat protein menarik
adalah eluted oleh larutan yang mengandung ligan gratis