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MTODOS INMUNOLGICOS

Los mtodos inmunolgicos o inmunoensayos son mtodos analticos basado


en la reaccin Antgeno- Anticuerpo (Ag-Ac).

Se entiende como antgeno (Ag) cualquier molcula que puede ser reconocida
especficamente por cualquiera de los componentes sistema inmunitario (SI)
que protege al organismo de una amplia variedad de agentes infecciosos. En
un sentido ms restrictivo un Ag es cualquier molcula capaz de inducir la
produccin de anticuerpos (Ac) especficos.

Los anticuerpos (Ac), tambin


conocidos como inmunoglobulinas,
son un grupo de molculas sricas
que producen los linfocitos B. Los
diferentes tipos de Ac tienen una
estructura bsica comn a todos
ellos, siendo especfico de cada uno el
sitio por el que se unen al Ag. La zona
de la molcula del Ag a la que se une
el Ac se denomina eptopo. Un
antgeno puede presentar un nmero
variable de eptopos de estructura
nica o repetitiva. La complejidad
estructural de las protenas favorece que stas presenten por lo general un
nmero elevado de eptopos. Los reactivos para anticuerpo se desarrollan a
partir de anticuerpos policlonales y monoclonales.

Los inmunoesayos se pueden clasificar en:

1) Inmunoensayos Directos. Medida directa del complejo Ag-Ac.


2) Inmunoensayos con Reactivos Marcados o Indirectos. Requieren el uso de
material marcado para medir la concentracin de antgeno o anticuerpo
presente. Estos a su vez se clasifican:

A) Segn el TIPO DE MARCADOR

Radioinmunoensayos La reaccin Ag-Ac se pone de manifiesto por


la competicin entre el Antgeno o el Anticuerpo que estemos
estudiando y una concentracin conocida del mismo compuesto
marcado radiactivamente.
Fluoroinmunoensayos Para la realizacin de estas tcnicas el
anticuerpo se marca con un fluorocromo detectndose la formacin
del complejo Ag-Ac por la fluorescencia emitida.
Enzimoinmunoensayos Utilizan una enzima como marcador para
amplificar la seal obtenida de la reaccin entre un antgeno y un
anticuerpo. Dentro de los enzimoinmunoensayos hay que destacar los
Quimioinmunoensayos, en los cuales la enzima cataliza la
oxidacin de un sustratio.

B) Segn el MTODO DE SEPARACIN

Heterogneos. El Ag marcado unido al Ac (Ac-Ag*) debe de ser


fsicamente separado del Ag marcado que permanece libre en la
disolucin (Ag*). El procedimiento de separacin puede llevarse a
cabo por precipitacin de los Ac o por la adicin de un segundo Ac
que atrapa y precipita el Ac original.
Homogneos. No requieren la separacin de la unin anti Ac-Ag*
del Ag* libre.

C) Segn el DISEO DEL ENSAYO

Competitivos. En los formatos competitivos, el analito sin marcar


(generalmente antgeno) en la muestra se mide por su capacidad
para competir con un antgeno marcado en el inmunoensayo. El
antgeno sin marcar bloquea la capacidad del antgeno marcado de
unirse puesto que ese punto de unin en el anticuerpo ya se
encuentra ocupado. En el formato competitivo de un solo paso tanto
el reactivo del antgeno marcado (Ag*) como la muestra sin marcar
(o analito de la muestra) compiten por una cantidad limitada de
anticuerpo. La concentracin de antgeno es inversamente
proporcional a la concentracin de la seal.

No competitivos o sandwich. El analito est unido (como un


sandwich) entre dos reactivos de anticuerpo muy especficos. En los
ensayos no competitivos, la medicin del analito marcado,
generalmente un anticuerpo, es directamente proporcional a la
concentracin de antgeno presente en la muestra, lo que puede
representarse por medio de una curva de respuesta a la
concentracin. El eje X traza la concentracin de un antgeno. El eje Y
traza la respuesta, que en este caso se trata de la seal. As, cuanto
mayor sea la cantidad de antgeno presente, ms anticuerpos
marcados se unirn.