Maual de Practicas de Laboratorio (Quimica Analitica) PDF

Manual de prcticas
de qumica analtica II
Jos Ramn Verde Calvo Ma. de Lourdes Escamilla Hurtado

Alberto Reyes Dorantes Frida Malpica Snchez
Casa abierta al tiempo

UNIVERSIDAD AUTONOMA METROPOLITANA
UNIDAD IZTAPALAPA
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
Ramn Verde Calvo es egresado

de la Facultad de Qumica de la
UNAM, en donde obtuvo su ttulo
de qumico farmacutico bilogo,
tecnlogo en alimentos. Poste-
riormente realiz sus estudios de
maestra en la Facultad de Ciencias
de la UNAM. Actualmente trabaja
en la UAM-Iztapalapa en el grupo de Enologa y Ali-
mentos Fermentados, en donde lleva a cabo investiga-
ciones sobre el cambio en el color del vino tinto du-
rante el aejamiento.
Mara de Lourdes Escamilla Hur-

tado realiz sus estudios de licen-
ciatura en la Facultad de Qumica
de la UNAM, obteniendo el ttulo
de qumica farmacutica biloga,
orientacin en Tecnologa de Ali-
mentos. Posteriormente obtuvo su
grado de maestra en la Universi-
dad de Hiroshima, Japn, en el rea de Tecnologa de
Fermentaciones. Posteriormente se ha desarrollado
profesionalmente como profesora-investigadora en la
Universidad Autnoma Metropolitana, Unidad Iztapa-
lapa, desde 1982, dirigiendo proyectos sobre fermen-
taciones lcticas en alimentos indgenas tradicionales,
produccin de aromas por fermentacin y enologa, de
los cuales surgieron diversas publicaciones nacionales
e internacionales. Tambin ha ejercido la docencia, tanto
en la UAM-Iztapalapa como en la Facultad de Qumica
de la UNAM, formando recursos humanos en los cam-
pos de microbiologa y biotecnologa alimentaria.
Manual de prcticas de
qumica analtica II
Casa abierta al tiempo UNIVERSIDAD AUTNOMA METROPOLITANA
Dr. Jos Luis Gzquez Mateos

Rector General
Lic. Edmundo Jacobo Molina

Secretario General
UNIDAD IZTAPALAPA
Dr. Luis Mier y Tern Casanueva
Rector
Dr. Eduardo Carrillo Hoyo

Secretario
Dr. Jos Luis Arredondo Figueroa

Director de la Divisin de Ciencias Biolgicas y de la Salud
Dr. Gerardo Saucedo

Jefe del Departamento de Biotecnologa
Ma. del Rosario Hoyos Alea

Jefa de la Seccin de Produccin Editorial
Manual de prcticas de
qumica analtica II
Jos Ramn Verde Calvo
Ma. de Lourdes Escamilla Hurtado
Alberto Reyes Dorantes
Frida Malpica Snchez
guc i
Cuidado de la edicin y correccin de estilo:

Ma. Guadalupe Olvera Arellano
Primera impresin: 1999
UNIVERSIDAD AUTNOMA METROPOLITANA

UNIDAD IZTAPALAPA
Av. Michoacn y La Pursima
Iztapalapa, 09340, Mxico, D.F.
ISBN: 970-654-363-5
Impreso y hecho en Mxico / Printed in Mxico
ndice
Presentacin 9
Captulo 1. CROMATOGRAFA DE GASES 11
Prctica 1. Anlisis cualitativo de cromatografa
de gases (dos columnas) 33
Prctica 2. Factor de respuesta en cromatografa de gases 37
Bibliografa 40
Captulo 2. CROMATOGRAFA LQUIDA DE

ALTA RESOLUCIN 43
Prctica 3. Cuantificacin de una muestra problema de anisaldehdo
(mtodo del patrn interno) 63
Prctica 4. Separacin y cuantificacin de una muestra de antocianinas

(mtodo del patrn externo) 69
Bibliografa 74
Captulo 3. ESPECTROFOTOMETR A 75
I. VISIBLE ULTRAVIOLETA 77
Prctica 5. Desarrollo de un mtodo espectrofotomtrico 85
Prctica 6. Determinacin por espectrofotometra de la

concentracin de cobalto y nquel en una mezcla 91
II. TURBIDIMETRA 95
Prctica 7. Cuantificacinturbidimtrica de sulfates 97
Bibliografa 101
Captulo 4-MTODOS ELECTROQUMICOS 103
Prctica 8. Determinacin potenciomtnca de constantes
de ionizacin 113
Prctica 9, Titulacin potenciomtnca del ferrocianuro con ceno 117
Bibliografa 125
Presentacin
El presente manual tiene como meta apoyar de la manera ms amplia el curso

terico-prctico de Qumica Analtica II, materia que se imparte en el sexto
trimestre de las carreras de ingeniera en alimentos e ingeniera bioqumica in-
dustrial. El material est elaborado pensando en el sistema trimestral de la
Universidad Autnoma Metropolitana, hecho que no restringe que cual-
quier curso de qumica analtica impartido en otra escuela pueda utilizar este
material.
En el manual se abordan temas como: cromatografa de gases y de lquidos
de alta resolucin, espectrofotometra y potenciometra. Cada captulo est
estructurado con una introduccin (los fundamentos tericos necesarios para
comprender los temas incluidos en la parte prctica), y presenta la descripcin
de los aparatos a utilizar, as como la forma correcta de operarlos.
El texto se compone de nueve prcticas, estructuradas con objetivos, intro-
duccin, material y reactivos, normas y reglas de seguridad, tcnicas, tratamiento
de datos experimentales, cuestionario y bibliografa. Esta ltima se presenta al
final de cada captulo e incluye textos de autores reconocidos, as como revistas
con artculos actualizados de apoyo a los experimentos.
Para la obtencin de mejores resultados, se recomienda relacionar am-
pliamente los conceptos tericos con las actividades experimentales.
Los autores
Captulo 1
CROMATOGRAFA DE GASES
Introduccin
Este captulo tiene como objetivo mostrar al alumno los fundamentos prcticos
de la cromatografa de gases: cmo funciona un cromatgrafo con detector de
conductividad trmica y cmo se obtiene e interpreta el cromatograma, in-
cluyendo una explicacin sobre los clculos para cuantificar muestras a partir
de compuestos puros.
La cromatografa de gases es la tcnica ms utilizada entre los mtodos
instrumentales de separacin, ya que identifica de manera sencilla y rpida el
nmero de componentes de una mezcla. El nico requisito para su imple-
mentacin es que las sustancias a separar sean estables a la temperatura ne-
cesaria para mantenerlas en estado gaseoso (Ewing, 1979).
Clasificacin de la cromatografa
Por sus caractersticas analticas la cromatografa puede ser:
a) Cromatografa cualitativa, que consiste solamente en la separacin

de los componentes de una mezcla.
b) Cromatografa cuantitativa o analtica, que permite identificar y
cuantificar cada uno de los componentes de la mezcla.
De acuerdo con la naturaleza de la fase estacionaria, la cromatografa de

gases se divide en dos:
a) Cromatografa gas slido (CGS), tambin conocida como croma-

tografa de adsorcin, en donde la fase estacionaria cuenta con un
material slido como el slice granular, la almina o el carbn. El soluto
se adsorbe en la superficie de las partculas slidas. Las separaciones se
llevan a cabo sobre adsorbentes, debido a que se crea un equilibrio
entre el adsorbente y las molculas de la fase mvil. Si las molculas de
un componente estn estrechamente ligadas al adsorbente, la sustancia
Manual de prcticas de qumica analtica II
no correr por la columna ya que es retenida fuertemente por sta. Si las

molculas tienen una baja atraccin por el adsorbente, tendern a moverse
con rapidez junto con la fase mvil (figura 1.1).
Soluto absorbido en la
superficie de la fase
estacionaria
Figura 1.1 Cromatografa de adsorcin.
La tabla siguiente muestra algunos ejemplos de columnas capilares comer-

ciales, utilizadas en cromatografa gas slido, mencionando su aplicacin
y la temperatura mxima de trabajo.
Tabla 1.1 Columnas capilares comerciales.
Temperatura
Columna Aplicacin
Mxima
HPSoM 200 C Hidrocarburos, gas natural
Poraplot Q 250 C Alcoholes voltiles en

agua,gases
Poraplot U 190C Compuestos voltiles polares,

aldehidos
HP Hewlett Packard
Columnas capilares, soporte; A12O3
14
Cromatografa de gases
b) Cromatografa gas lquido (CGL) o cromatografa de reparto, en

donde la fase estacionaria es una capa delgada de un lquido no voltil,
colocada sobre un soporte slido (figura 1.2).
La fase estacionaria forma una pelcula delgada en la superficie de un
soporte slido. El soluto se equilibra entre este lquido estacionario y
una fase mvil gaseosa. La cromatografa de reparto o de particin
presenta grandes ventajas, comparada con la cromatografa de adsorcin:
es mucho ms reproducible y, gracias a que el coeficiente de particin
se hace constante en un margen ms amplio de concentraciones, permite
que las bandas sean ms definidas y mucho ms simtricas.
Soluto disuelto en la fase

lquida que recubre la
superficie del soporte
slido
Figura 1.2 Cromatografa de reparto.
El soporte slido ideal no debe tener efecto en el proceso

cromatogrfico, slo debe servir como matriz mecnica para la fase
lquida. El soporte ms comn es la tierra de diatomeas, tambin conocida
como kieselguhr, material muy poroso que contiene muchos grupos
oxidrilo libres en su superficie.
15
Componentes importantes de un cromatgrafo de gases
Uno de los puntos ms importantes a considerar en la cromatografa de gases,

es el grado de separacin que puede lograrse entre diferentes componentes en
una columna dada. Son varios los factores que pueden influir en la separacin
deseada: dimensiones de la columna, temperatura, velocidad de flujo del gas
acarreador, volumen de la muestra y cada de presin en la columna.
Existen dos diferentes tipos de columnas: las empacadas y las capilares.
En las primeras el soporte se encuentra empacado en tubos de acero inoxidable
o vidrio, que comnmente tienen un dimetro de 3 a 6 mm y de uno a cinco
metros de longitud. Las columnas con mayor dimetro son utilizadas en trabajos
de preparacin para obtener una mayor cantidad de compuestos separados.
En las columnas capilares la longitud es mucho mayor, pudiendo llegar hasta
100 metros con un dimetro de 0.1 a 0.3 mm. Estas ltimas se caracterizan por
tener un mayor nmero de platos tericos, lo que implica mejor resolucin,
menor tiempo de anlisis y una mayor sensibilidad, aunque la cantidad de
muestra por correr debe ser menor (Harris, 1992).
Se pueden emplear muy diversos soportes slidos y fases lquidas esta-
cionarias. La eleccin depende bsicamente de la naturaleza de los compuestos
que se desean separar (tabla 1.2). La literatura informa acerca de gran cantidad
de soportes slidos que han resultado satisfactorios, y de un nmero aun mayor
de lquidos para la fase estacionaria. El lquido estacionario debe producir un
reparto diferencial de los diversos componentes de la mezcla de ensayo, y
poseer suficiente poder de disolucin sobre los componentes en estado vapor.
Por supuesto, el lquido estacionario no ha de ser voltil a las temperaturas de
trabajo, pues de otra manera se evaporara abandonando la columna. Si se
tiene inters por profundizar en este tema, se pueden consultar los trabajos de
Bens (1961), donde describe algunas propiedades y caractersticas de los
soportes ordinarios. Rohrschneider (1971) report una clasificacin de las fases
lquidas en funcin de su polaridad, y propuso una escala de 0 a 100 en la que
el escualeno es tomado como cero y el oxidipropionitrilo como cien.
La temperatura necesaria para efectuar la separacin de una mezcla est
determinada por dos factores: el grado de separacin que se considere suficiente
y el tiempo razonable para el anlisis. En general, cuanto ms baja es la tem-
peratura mayor es la separacin de los componentes, y mayor tambin el tiempo
16
de retencin de estos ltimos en la columna. Rowan (1961), al igual que Desty

(1965) y muchos otros autores (Meloan, 1973), analizan el efecto de la
temperatura en la cromatografa de gases.
La velocidad de flujo del gas portador vara con cada anlisis y puede cambiar
para diferentes tipos de compuestos por analizar. Tal velocidad influye en la
cuantificacin de la altura equivalente de un plato terico (AEPT). Para las
columnas empacadas de 0.63 cm de dimetro, se recomiendan flujos de 40 a
100 ml/min, que debern regularse con una precisin mayor de 1 ml/min.
Los gases portadores que se utilizan con ms frecuencia son: nitrgeno,
helio, argn y dixido de carbono. Su eleccin se basa, al menos en parte, en
el factor econmico, pero un criterio ms importante es el tipo de detector
empleado. Para un detector de conductividad trmica, los gases adecuados
son: nitrgeno, hidrgeno, argn y helio. El hidrgeno presenta altos valores de
conductividad trmica, factor muy importante en la deteccin de compuestos,
pero debido a su explosividad no es recomendable para la docencia. El helio
tambin tiene un alto valor de conductividad trmica, pero es un recurso no
renovable y de costo elevado. En cambio, el nitrgeno se utiliza ampliamente
por ser barato e inocuo, a pesar de no tener un valor alto de conductividad
trmica.
17
Tabla 1.2 Fases estacionarias lquidas de uso comn en

cromatografa de gases.
Nombre Temperatura
Descripcin Polaridad*
Comercial Iquido/C
Escualeno Escualeno I 20/100
Apienzon L Apienzon L I 50/300
SE-30 100% goma de silicona I 50/300
OV-1 100% goma de silicona I 50/300
UCW-982 goma del 99% metil, 1% vinil II 0/300
DC-200 100% de metil silicona lquida II 0/250
OV-101 100% de metil silicona lquida II 0/350
SP-2100 100% de metil silicona lquida II 0/350
SE-52 0 SE-54 fenilo al 5% II 50/300
Dexsii 300 Metil carbonato de silicona II 50/450
OV-17 Metil fenil silicona al 50% II 0/375
OV-25 Metil fenil silicona al 75% III 0/350
OV-210 3,3,3-trifluoropropilo al 50% III 0/275
Carbowax20M polietilen glicol IV 60/225
Carbowax20M polietilen glicol modificado

TPA con cido tereftlico IV 60/250
Carbowax1500 polietilen glicol IV 40/200
SilariOC Cianopropil silicona al 100% IV 0/250
* I a IV de menor a mayor polaridad.
18
La muestra lquida se introduce en el cromatgrafo inyectndola con una

jeringa a travs de un septo de goma, la temperatura vaporiza la muestra y el
gas acarreador lo lleva a lo largo de la columna. Las columnas analticas requieren
de 0.1 a 10 jal de muestra lquida, mientras que las columnas para trabajo
preparativo llegan a utilizar de 20 a 1000 jil. Las muestras gaseosas requieren
de jeringas con cierre hermtico o vlvulas de muestreo de gases. Para el trabajo
analtico se utilizan volmenes de 0.5 a 10 mi de gas, y para el anlisis preparativo
los volmenes pueden aumentar hasta un litro (Harris, 1992).
Detector de conductividad trmica. La capacidad de enfriamiento de un

gas est basada en la facilidad que tiene para transferir el calor que absorbe,
cualidad representada por su valor de conductividad trmica. Entre ms grande
sea el valor, la capacidad para transmitir el calor ser mejor. Por lo tanto, si se
suministra una cantidad constante de energa elctrica al filamento del detector,
su temperatura estar en funcin de la conductividad trmica del gas acarreador.
Con un gas puro, la temperatura del filamento es constante, pero al presentarse
cambios en la composicin del gas, la temperatura vara y se modifica la
resistencia elctrica. Por lo tanto, los filamentos deben ser resistentes a los
cambios de temperatura y a la corrosin qumica. Para su fabricacin se emplea
generalmente platino, tungsteno y nquel.
Los factores que afectan la sensibilidad de los filamentos son: su geometra,

la corriente que pasa a travs de los mismos, su resistencia y el valor de la con-
ductividad trmica del gas. La tabla 1.3 muestra la conductividad trmica de
los gases y de algunos compuestos utilizados en cromatografa.
19
Tabla 1.3 Conductividad trmica.
sustancia ct*
Nitrgeno 5.81
Helio 34.80
Argn 3.98
co2 13.52
Hidrgeno 41.60
Oxgeno 5.89
CO 5.63
Metano 7.21
Propano 3.58
n-Butano 3.22
tanol 3.50
Acetona 2.37
Cloroformo 1.58
* unidades de la conductividad trmica cal cnrr2 seg^2/C crrr1
Clculos en cromatografa
Con los datos de un cromatograma es posible realizar una serie de clculos

sencillos para conocer parmetros como la eficiencia de la columna, adems,
si aplicamos tcnicas de estndares se puede conocer tambin la concentracin
de muestras problema. A continuacin se desarrollan los clculos ms comunes
y tiles en cromatografa.
20
Nmero de platos tericos en una columna (n)
Un plato terico es el lugar donde se lleva a cabo el equilibrio de distribucin

de la muestra entre la fase mvil y la fase estacionaria. A mayor nmero de
platos tericos, la separacin en la columna es mejor.
w= 16
n - nmero de platos tericos

t^ = tiempo que transcurre desde la inyeccin hasta el centro del pico del
componente
Aw=ancho del pico del componente
tj^ y Aw se expresan en las mismas unidades (tiempo, volumen, distancia, etc.)
Altura equivalente de un plato terico (AEPT)
Un plato terico puede considerarse la longitud de columna necesaria para

establecer un equilibrio de distribucin entre la fase estacionaria del soluto y la
fase mvil.
AEPT = ^
AEPT = altura equivalente de un plato terico

L = longitud de la columna
n = nmero de platos tericos
21
Clculo del rea de un pico con forma de tringulo
Las curvas o picos en un cromatograma generalmente presentan una forma

gaussiana. Un mtodo sencillo para calcular el rea bajo la curva es transformarla
en un tringulo, extrapolando la tangente en los puntos de inflexin hacia la
lnea de referencia, como lo indica la figura 1.3.
tr o vr
Respuesta
del. Punto de inflexin
detector (parte ms j
inclinada de la /
curva) /
t =0 tiempo o volumen
inyeccin
Figura 1.3 Cromatograma ideal
Frmula para calcular el rea de un tringulo:
A b*h
A
A = rea
h = altura
b = longitud de la base
22
Clculo de la resolucin
Mide la separacin entre componentes. La figura 1.4 indica la manera de medir

los parmetros:
ECUACIN DE RESOLUCIN
Figura 1.4 Resolucin entre dos picos cromatogrficos.
V
V
-V
V
2 \
R
1/2 (Wx + W2)
Vx = distancia desde la aplicacin hasta el centro del pico 1

V2 = distancia desde la aplicacin hasta el centro del pico 2
FPj y fP2 = ancho de los picos 1 y 2
23
Anlisis cuantitativo
Existen diversos mtodos para el clculo de concentraciones en un sistema

cromatogrfico. Los hay sencillos, pero poco confiables, pues no utilizan ninguna
sustancia de referencia, y los hay ms elaborados con un mayor grado de
confiabilidad. Estos mtodos son:
1. Normalizacin
2. Calibracin absoluta
3. Estndar interno
4. Estndar externo
Normalizacin o porcentaje por reas
Con base en el cromatograma de una mezcla separada, es posible determinar

la concentracin de cada uno de sus componentes por el rea bajo la curva.
Primero hay que medir las reas individuales de cada pico, sumarlas y, con
base en el total, sacar el porcentaje de cada componente. Este porcentaje es
proporcional a la concentracin del componente en la mezcla, siempre y cuando
la conductividad trmica de los componentes sea la misma, o muy parecida, y
que la respuesta del detector de conductividad trmica tambin sea igual para
todos los componentes. Como esto no es posible en la mayora de los casos,
se requiere utilizar otros mtodos ms exactos.
Calibracin absoluta
Consiste en inyectar en la columna una cantidad conocida de sustancia pura

para medir el rea del pico resultante. Enseguida, bajo las mismas condiciones
de corrimiento cromatogrfico, se mide el rea del pico que resulte de la sustancia
en la mezcla desconocida.
Finalmente, estableciendo una proporcin, se puede encontrar la con-
centracin de la sustancia desconocida.
24
Estndar interno
Este mtodo se puede utilizar de dos formas, para calcular un factor de respuesta
o elaborando una curva estndar para encontrar la concentracin de una muestra
problema. El estndar o patrn interno es aquella sustancia que se inyecta
junto con la o las muestras problema en un cromatgrafo. Las condiciones que
esta sustancia debe cumplir son (Len, 1982):
No debe formar parte de la muestra que se desea analizar.

Tener similitud con los componentes del problema.
Proporcionar por s sola y junto con la muestra problema, picos bien resueltos
y de buena forma.
Eluir en un tiempo cercano al de los componentes del problema.
No debe reaccionar con los componentes de la muestra.
a) Factor de respuesta El mtodo se basa en calcular el factor de respuesta

para cada sustancia analizada, ya que los detectores no responden de la
misma manera a todos los solutos. La tcnica no es muy complicada y
consiste en medir el rea bajo los picos de cada compuesto, en relacin
con el rea de los picos de un patrn interno. El factor de respuesta est
definido por la relacin:
[P] \Ap
[S] = concentracin del soluto (cualquier unidad de masa/volumen)

[P] = concentracin del patrn (cualquier unidad de masa/volumen)
As = rea del soluto
Ap = rea del patrn
Este factor de respuesta se puede utilizar tanto con el mtodo de

normalizacin como con el del patrn interno.
b) Estndar interno con elaboracin de curva estndar. En este caso

tambin se requiere de la adicin de un compuesto de concentracin
conocida. Se utilizan mezclas conocidas del patrn (P) y del soluto o
analito (S) para construir una curva patrn, como en la figura 1.5. Si una
25
cantidad conocida de patrn se agrega a una muestra problema, la curva

de calibracin puede utilizarse para hallar la concentracin del soluto.
Cuando se use un estndar interno es recomendable que la curva de
calibracin se elabore cuando menos con tres puntos. Las unidades de
concentracin pueden ser moles/litro, g/1, mg/1, porcentuales, etc.
hs
~hp
[S] = concentracin del soluto hs = altura del soluto

[P] = concentracin del patrn hp = altura del patrn
Figura 1.5 Curva para estndares internos.
Estndar externo
Esta tcnica es menos complicada que el estndar interno, pero requiere de

mayor cuidado durante las separaciones cromatogrficas. Las curvas de
calibracin con patrones puros son elaboradas con base en varias concen-
traciones. Es importante cuidar que los volmenes de inyeccin sean los mismos
que para los compuestos de inters. Se construye una grfica de rea o altura,
en funcin de la concentracin, la cual puede estar en cualquier unidad de
masa/volumen, ya sea molaridad, % p/v, o tambin puede utilizarse el % p/p.
La concentracin del compuesto desconocido se interpola en el grfico, con
base en el dato de rea o altura del pico correspondiente (figura 1.6).
rea
o
altura
Concentracin
Figura 1.6 Curva para estndares externos.
26
Operacin del cromatgrafo

Gow-Mac modelo 69-350
Descripcin
Todos los controles de operacin del modelo 69-350 estn localizados en la

parte frontal del aparato (figura 1.7).
11
Figura 1.7 Cromatgrafo de gases Gow-Mac.
27
1. Puerto de inyeccin para la columna "A"

2. Control de ajuste del flujo de la columna "A"
3. Control de temperatura del puerto de inyeccin
4. Control de temperatura del detector
5. Control de temperatura de la columna
6. Sistema analgico de medicin
7. Selector de medicin
8. Control de encendido del cromatgrafo
9. Control de cambio de polaridad
10. Control de encendido del detector
11. Control de ajuste del cero
12. Control de atenuacin
13. Control de la corriente del detector
14. Control de ajuste de flujo de la columna "B"
15. Puerto de inyeccin para la columna "B"
16. Tapa del horno del cromatgrafo
Uso del cromatgrafo
1. Verifique que todos los controles estn apagados y siga las instrucciones,
en funcin de los parmetros a utilizar en cada una de las prcticas de
cromatografa de gases.
2. Abra la llave del tanque que contiene el gas acarreador y verifique que la
presin se encuentre entre 500 y 2 300 lb/in2, en caso de ser menor a
500 lb/in2, reprtelo al profesor.
3. La presin de entrada del gas al cromatgrafo debe ser de 30 lb/in2.
Mida la velocidad del flujo de salida de las columnas utilizando un
flujmetro de burbuja que tenga una disolucin de jabn al 3 %.
28
Marcas de
calibracin Burbuja
Flujo del gas del
cromatgrafo
_ Disolucin
jabonosa
u PERA
Figura 1.8 Medidor de flujo.
La metodologa es la siguiente: conecte la manguera del flujmetro a la

salida de la columna donde se quiere ajustar el flujo. Presione ligeramente
el bulbo lleno de disolucin jabonosa, para formar las burbujas que sern
arrastradas por el gas. Mida el tiempo en segundos, desde la marca
cero hasta la diez del aparato y calcule el flujo utilizando la siguiente
ecuacin:
600
Flujo = tseg
Con base en el resultado y utilizando el control correspondiente (columna

"A" o "B") ajuste el flujo requerido.
4. Ajuste los controles de temperatura y de inyeccin (tanto de la columna
como del detector). Fije la corriente de este ltimo.
5. Verifique que el registrador tenga papel y tinta para un buen funciona-
miento, encindalo y seleccione la velocidad de corrimiento.
Para su buen funcionamiento el cromatgrafo requiere aproximada-
mente de 2 horas para que se estabilice la lnea base. Durante este tiempo
se puede preparar la muestra, limpiar la jeringa y ajustar el cero.
6. Ajuste del cero: el atenuador del cromatgrafo debe marcar infinito
(nmero 12 de la figura 1.7). Con el control de cero del graficador,
coloque la plumilla donde desee la lnea base. Ponga el control de la
29
atenuacin del cromatgrafo en la posicin 1. Coloque el atenuador en

la posicin 256 y el cero con el control del cromatgrafo.
7. Inyeccin de la muestra. Se debe tener cuidado al introducir la j eringa,
si sta es de una capacidad de 5 o 10 |il, tanto el mbolo como la aguja
son muy delgadas y se doblan fcilmente. Debe colocarse la jeringa en
posicin perpendicular con respecto al cromatgrafo e introducirla en el
puerto de inyeccin de la columna. Efectuar la inyeccin con fuerza,
para asegurar que la muestra entre en la columna.
Con el fin de evitar contaminaciones, se debe enjuagar la jeringa
cuando menos cinco veces con el disolvente adecuado. Debe limpiarse
inmediatamente despus de usarla, para prevenir que la muestra se seque
y queden residuos en la jeringa o el mbolo.
8. Si los picos de la muestra se salen de escala, incremente la atenuacin y
corra nuevamente su sistema.
9. Una vez terminado el trabajo cromatografa) disminuyalas temperaturas
de la columna, inyector y detector, y apague la corriente de este ltimo.
Cuide que el flujo del gas contine hasta que la temperatura de la columna
descienda hasta 50 C o menos. Cierre l paso del gas acarreador y
limpie lajeringa.
Precauciones en el manejo del detector de conductividad trmica
a) Para evitar que se queme el filamento del detector, verifique que el gas
acarreador fluya a travs del cromatgrafo, antes de encender el
detector.
b) Apagar la corriente del filamento, antes de abrir el sistema, para evitar
que ste se oxide.
c) La velocidad de flujo del gas portador debe permanecer constante.
30
Metodologa para las prcticas de qumica analtica II
1. Los alumnos deben cubrir totalmente las nueve prcticas de este manual.
2. Cada alumno debe elaborar una bitcora, en la cual, adems de anotar
todas las observaciones de la prctica en cuestin, realizar las siguientes
actividades:
Dibuj ar un diagrama de bloques de la prctica que se va a realizar.
Anotar las propiedades fsicas, qumicas y txicas de cada uno de los
reactivos mencionados en el protocolo de la prctica (investigados
previamente en la biblioteca).
Realizar los clculos necesarios para la preparacin de las disoluciones
mencionadas en la prctica, tomando como base 100 mi de disolucin.
Prevencin de accidentes en el trabajo

con sustancias qumicas*
1. Al manipular sustancias corrosivas ser obligatorio el uso de equipo
personal de proteccin.
2. La transferencia de lquidos, especialmente los corrosivos o txicos,
debe hacerse con ayuda de pipeta y propipeta. Queda estrictamente
prohibido usar las pipetas succionando con la boca.
3. Al poner en contacto sustancias que reaccionan violentamente o al
calentar lquidos en tubos de ensayo o frascos, la cara deber apartarse
para que no sea alcanzada por posibles proyecciones. Se deben usar
anteojos protectores o careta de plstico.
4. Nunca vierta agua sobre cido sulfrico concentrado.
5. Todas las operaciones con sustancias voltiles debern hacerse en la
campana de extraccin.
6. Queda estrictamente prohibido probar cualquier sustancia qumica.
7. Las sustancias susceptibles de generar perxidos (THF, ter, etc.) debern
ser verificadas peridicamente.
* Las normas de seguridad indicadas en esta parte fueron extradas del Instructivo sobre
elfuncionamiento interno y operativo para regular el uso de los servicios e instalaciones
de los laboratorios de docencia de la UAM, aprobado por el Consejo Acadmico en su
sesin 133.
31
Prctica 1
Anlisis cualitativo de cromatografa de gases

(dos columnas)
Introduccin
Conocer y utilizar la cromatografa de gases es hoy en da un aspecto primor-

dial, tanto en la industria como en el campo cientfico. La elaboracin de
productos alimenticios o farmacuticos necesita de un buen control de calidad,
y muchas de las tcnicas utilizadas para esto requieren de la precisin del anlisis
cromatogrfico.
Uno de los primeros problemas en cromatografa es la seleccin de la fase
estacionaria o tipo de columna a utilizar. Existe una gran variedad de fases
lquidas disponibles para la cromatografa de reparto gas-lquido. Para resolver
este problema es necesario considerar que un soporte polar retendr ms
fuertemente un soluto polar y que, por lo tanto, las sustancias menos polares
saldrn con mayor rapidez de la columna, presentando tiempos de retencin
ms cortos.
En esta prctica se corrobora tal criterio, ya que son separados compuestos
de diferente polaridad corrindolos en una columna polar como la Carbowax
20 M. Posteriormente se efecta la misma separacin, pero utilizando la columna
DC-200 no polar.
Objetivo
El alumno aprender a utilizar el cromatgrafo de gases Gow-Mac, modelo
69-350, para el anlisis cualitativo de mezclas y observar la diferencia de
separar una misma muestra en dos columnas de diferente polaridad.
33
Manual de prcticas de qumica analtica I
Materiales y reactivos
Cromatgrafo de gases
Medidor de fluj o de burbuj a
Cronmetro
Jeringa para cromatografa de gases de 50 mi
5 tubos de ensayo de 10 x 150 mm con tapn de baquelita
5 vasos de precipitados de 50 mi
5 pipetas volumtricas de 1 mi
Propipeta
n-pentano
Tetrahidrofurano
2-butanona
n-propanol
En la parte terica de este captulo se encuentran las instrucciones de ope-

racin del cromatgrafo Gow-Mac, modelo 69-350 (p. 27).
Normas de seguridad
Maneje los disolventes con cuidado en un lugar ventilado, utilice

propipetas para hacer la mezcla. Asegrese de que no haya mecheros
prendidos y coloque letreros para indicar que est trabajando con
disolventes.
Cuando trabaje con el cromatgrafo, asegrese de que se encuentre
presente el profesor del laboratorio, quien le ayudar y brindar asesora
sobre el buen manejo del equipo.
Procedimiento
1. Mezcle un mililitro de cada uno de los siguientes disolventes: n-heptano,

tetrahidrofurano, 2-butanona y n-propanol. Guarde la mezcla en un re-
cipiente cerrado.
34
Anlisis cualitativo de cromatografa de gases
2. Las condiciones del cromatgrafo deben ser las siguientes:
Temperatura de la columna 130C
Flujo del gas 80 ml/min.
Corriente del detector 200 mA (si el gas es helio)

100 mA (si el gas es nitrgeno)
3. Tome en cuenta que el equipo requiere al menos de tres horas de ca-

lentamiento previo, con el fin de estabilizar la temperatura de la columna,
el flujo del gas acarreador y la corriente del detector, y para que todo
esto se refleje en una lnea base estable.
4. Verifique el flujo del gas en las dos columnas, utilice un medidor de
burbuja como se indica en la figura 1.8.
5. Trabaje primero con la columna de Carbowax. Fije el atenuador en 4 y
ponga a funcionar el graficador a una velocidad de 2.5 cm/min.
6. Con una jeringa de 50 fil, mida 3 \ de n-heptano y adicione otros 10 |Lil
de aire. Inyctelos en la columna y enjuague la jeringa.
7. Marque el punto de inyeccin en la carta, as como la informacin
relacionada con la muestra inyectada.
8. El primer pico que debe eluir es el pico de aire, seguido por el pico del
n-heptano.
9. Repita los pasos 5 y 6 con los otros tres componentes y, por ltimo,
inyecte la mezcla de los disolventes.
10. Baj o las mismas condiciones de trabaj o, repita todo el proceso utilizando
la columna DC-200. Cambie la polaridad del sistema para que los picos
salgan en el mismo sentido que con la columna polar.
Tratamiento de datos experimentales
Mida y tabule todos los tiempos y volmenes de retencin de todas las

corridas.
Con la ayuda de los tiempos de retencin de las sustancias puras,
identifique los componentes de la mezcla en los cromatogramas de las
dos columnas.
35
Calcule el nmero de platos tericos "n" y AEPT para cada columna,

utilizando los datos del n-heptano.
Calcule el porcentaje de cada componente de las mezclas, utilizando el
mtodo de normalizacin (por reas).
Cuestionario
i. En qu se basa la cromatografa de gases?
2. Cmo puede medirse la eficiencia de una columna?
3. Qu se entiende por cromatografa lquido-lquido y cromatografa gas-

lquido?
Qu ventajas tiene la programacin de temperatura en la cromatografa

de gases? Se puede hacer esta programacin en un cromatgrafo de
gases con detector de conductividad trmica? Justifique su respuesta.
Explique cules son las ventajas y desventajas de las columnas capilares

y las columnas empacadas.
Con base en los siguientes datos, obtenidos con el empleo de una columna
de ftalato de dodecilo, realice los ejercicios que se piden.
Compuesto Vr(ml)
Acetona 21.5
Butanona 58.0
3-pentanona 145.0
Acetilcetona 400.0
a) Calcular el nmero de platos tericos "n" y AEPT para cada compuesto.

b) Calcular el porcentaje de cada componente, utilizando el mtodo de
normalizacin.
36
Prctica 2
Factor de respuesta en cromatografa de gases
Introduccin
El uso de estndares internos es necesario en el anlisis cuantitativo. La

sensibilidad de los detectores de conductividad trmica difiere de un compuesto
a otro, ya que depende de la conductividad trmica del analito. A menor
conductividad trmica, mayor es la respuesta para una cantidad dada de
compuesto. Por lo tanto, debe medirse unfactor de respuesta emprico para
cada sustancia que se somete a un anlisis cuantitativo. El factor de respuesta
F est definido por la relacin:
[P] \ApJ
Objetivo
El alumno efectuar el anlisis de cromatografa de gases para conocer el
factor de respuesta con el n-heptano, empleando como estndar interno al
n-pentano.
Cromatgrafo de gases
Medidor de fluj o de burbuj a
37
Cronmetro
Jeringa para cromatografa de gases de 50 mi
2 tubos de ensayo de 10 x 150 mm con tapn de baquelita
Propipeta
n-pentano
n-butano
Normas de seguridad
Los compuestos a trabajar son muy voltiles y flamables, trabaje en un
rea ventilada y lejos de fuentes de calor. Tome en cuenta las reglas de
seguridad de la prctica 1.
Procedimiento
1. Prepare en tubo de ensayo una disolucin estndar, mezclando un mililitro
de n-heptano con otro de n-pentano.
2. Ajuste las condiciones del cromatgrafo con base en los siguientes datos:
Columna DC-200
Gas acarreador Helio
Flujo del gas 60 ml/min.
Temperatura 90 C
Atenuacin 4
Corriente del detector 200 mA
Velocidad de la carta 2.5 cm/min.
3. Verifique que la lnea base se encuentre estable.

4. Inyecte 3 (il de la disolucin estndar, repita por triplicado.
5. Solicite al profesor la muestra problema e inyecte 3 \9 repita por
triplicado.
38
Factor de respuesta en cromatografa de gases
Mida y tabule todos los tiempos y volmenes de retencin de todas las

corridas.
Con base en las reas y concentraciones de la disolucin patrn, calcular
el factor de respuesta para el n-heptano, utilizando el n-pentano como
estndar interno.
Calcular la concentracin del n-heptano en la muestra problema, utilizando
el factor de respuesta y las reas del segundo grupo de cromatogramas.
Cuestionario
1. Explicar qu se entiende por factor de respuesta.
2. Esta tcnica para el clculo del factor se puede utilizar con otros
detectores como el de ionizacin de flama o el de captura de electrones?
3. Cmo se seleccionan las temperaturas para el inyector, la columna y el

detector?
4. Problema: Para la cuantificacin de una muestra comercial del

antimicrobiano metil parabeno, se utiliz la tcnica del factor de respuesta
usando el propil parabeno como estndar interno. Se corrieron las mues-
tras en un cromatgrafo con detector de ionizacin de flama, columna
capilar BP5 con pelcula de 0.5 |Lim, temperatura inicial de 160 C y un
gradiente de 15 C/min. La temperatura final fue de 280 C. Para el
clculo del factor se utilizaron 0.98 mmol de metil parabeno y 0.75 mmol
de propil parabeno. Se obtuvieron las siguientes alturas respectivas: 180
y 165 mm.
Una segunda corrida cromatogrfica es utilizada para cuantificar la
muestra comercial. Se mezcla el problema con 1.2 mmol de propil
parabeno. Las alturas resultantes fueron 150 mm para el metil y 160 mm
para el propil parabeno. Calcular la concentracin del metil parabeno
en la muestra comercial.
39
Bibliografa
Baugh, P. J. (editor). 1993. Gas Chromatography A Praetical Approach.

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Pecsok, R. L. 1981. Mtodos modernos de anlisis qumico. Ed. Limusa,

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40
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Storch de Garca y Asensio, J. M. 1975. Fundamentos de la cromatografa

de gases. Alhambra, Espaa.
41
Captulo 2
CROMATOGRAFA LQUIDA
DE ALTA RESOLUCIN
Introduccin
La cromatografa de lquidos de alta resolucin en los pasados diez aos ha

incrementado su importancia en muchas de las reas del anlisis, tanto a nivel
investigacin como a nivel industrial. Muchas de las tcnicas de control de ca-
lidad de frmacos, alimentos, aditivos y contaminantes ya se estn efectuando
conHPLC.
Hace ms de 80 aos que se conoce la cromatografa de lquidos, pero slo
a partir de 1967 los avances tecnolgicos permitieron desarrollar un proceso
cromatogrfico para trabajar con altas presiones. Este proceso de ninguna
manera sustituye a la cromatografa de gases, slo es un complemento para el
anlisis de componentes que no toleran una fase mvil gaseosa o temperaturas
muy elevadas. De hecho, presenta las siguientes ventajas frente a la cromatografa
de gases:
Tiene una difusin mnima en la fase mvil, debido a la rapidez del anlisis.
No tiene efectos negativos por calor, ya que generalmente se realiza a
temperatura ambiente o ayudado por un calentador de columnas a
temperaturas menores de 100 C.
La muestra no se destruye, por lo que se puede recuperar para un uso
posterior.
La cromatografa de lquidos es una tcnica de separacin que utiliza una

fase mvil lquida, es ideal para la separacin de macromolculas de inters
biolgico y de compuestos inicos, ya que no depende de la volatilidad o es-
tabilidad trmica de los componentes. Se puede utilizar para separar protenas,
aminocidos, lpidos, cidos nucleicos. Otras aplicaciones industriales son el
anlisis de pesticidas, aceites, polmeros, antioxidantes, anlisis de agua,
contaminantes, sabores, colorantes, etc. La cromatografa de lquidos se basa
en la solubilidad de los compuestos: hay que escoger el disolvente o la mezcla
de disolventes apropiados para llevar a la muestra a travs del sistema, tambin
hay que tomar en cuenta que los compuestos se adsorben en menor o mayor
medida en la fase estacionaria y que gracias a las altas presiones con las que se
mueve la fase mvil, se puede obtener una rpida separacin de los componentes
de una mezcla.
La cromatografa de lquidos se puede clasificar en cuatro tipos, dependiendo
de su uso:
Cromatografa de lquido-slido
En este caso, la separacin depende de la afinidad de la muestra hacia la fase

slida o lquida. Si la muestra es muy afn a la fase estacionaria (compuesta por
partculas slidas pequeas) el tiempo de retencin ser mayor. El solvente
utilizado se conoce como eluyente y tambin influye de manera importante en
la separacin: si la muestra es ms afn a la fase lquida, los tiempos de retencin
sern ms cortos. La tabla 2.1 muestra una lista de disolventes segn su
capacidad para eluir solutos.
La seleccin de la fase mvil influye directamente en la separacin de las
muestras. Los solventes pueden ser de naturaleza orgnica o acuosa. Existen
muchas caractersticas que debe tener una buena fase mvil, entre las ms
importantes se encuentran: no alterar la columna ni su naturaleza, disolver la
muestra, ser de baja viscosidad y, una vez terminada la separacin, debe permitir
la recuperacin del soluto de manera simple (Watty, 1989).
En la cromatografa lquido-slido existen dos subdivisiones que estn en
funcin de su conformacin: la fase normal y la fase inversa.
Para l^fase normal se requiere de una fase estacionaria polar, por lo tanto,
la fase mvil debe ser no polar. Los empaques que se pueden utilizar en fase
normal son diol, slica y amino, entre otros.
En \difase inversa se necesita un empaque no polar y una fase mvil po-
lar. Los empaques ms comunes para la fase reversa son: ODS (C18), octyl,
dimetil, etc.
Otra variacin de este tipo de cromatografa se conoce como fase ligada
(bondedphase), que consiste en enlazar con el soporte de slica compuestos
que aumenten su carcter no polar (C2, C6, C8, Clg). En funcin del tamao de
la cadena de hidrocarburos que se haya unido, los tiempos de retencin de los
solutos que eluyan en estas columnas, tendern a aumentar, pues se retendrn
ms fuertemente.
46
Cromatografa lquida de alta resolucin
Tabla 2.1 Lista de disolventes.
Disolvente ndice de Longitud de Solubilidad en

polaridad onda de corte nm agua % p/p
cido actico 0.62 230 100

Acetona 5.10 330 100
Acetonitrilo 5.80 190 100
Benceno 2.70 280 0.18
N-butanol 3.90 215 7.81
Tetracloruro de carbono 1.60 263 0.08
Cloroformo 4.10 245 0.815
Ciclohexano 0.20 200 0.01
1,2-dicloroetano 3.50 225 0.81
Cloruro de metileno 3.10 235 1.6
Dimetil sulfxido 7.20 268 100
Dioxano 4.80 215 100
Acetato de etilo 4.40 260 8.7
Etanol 6.20 210 100
Dietilter 2.80 220 6.89
Heptano 0.00 200 0.0003
Hexano 0.00 200 0.001
Metanol 5.10 205 100
Pentano 0.00 200 0.004
N-propanol 4.00 210 100
Iso-propanol 3.90 210 100
Tetrahidrofurano 4.00 215 100
Tolueno 2.40 285 0.051
Tricloroetileno 1.00 273 0.11
Agua 9.00 200 100
Xileno 2.50 290 0.018
47
Cromatografa de intercambio inico
Consiste en cambiar iones de la fase estacionaria por iones que se encuen-

tran disueltos en la fase mvil. Aniones como el sulfito -SO3~ o cationes
[N-(CH3*)3+] se unen covalentemente con la fase estacionaria: los iones de
soluto, de carga opuesta a los de la fase estacionaria, son atrados por fuerzas
electrostticas (la fase mvil es un lquido, figura 2.1). Se puede efectuar
cromatografa de intercambio inico no solamente en HPLC, sino tambin en
capa fina, en columna y en papel impregnado de resina. En este mtodo la se-
paracin depende de las variables: fuerza inica, capacidad de carga de la
columna y del pH durante el proceso de separacin. El procedimiento deriva
de la cromatografa de lquido-slido, y se utiliza en la separacin de aminoci-
dos, en anlisis de trazas, en la separacin de metales por formacin de
complejos, etc.
Las resinas utilizadas en las columnas pueden estar o no polimerizadas. En el
mercado existen resinas intercambiadoras catinicas, tipo cido fuerte o dbil,
e intercambiadores amnicos tipo base fuerte o dbil. Tambin hay geles de
intercambio inico, que se utilizan para separar molculas pequeas con pesos
moleculares menores a 500. La tabla 2.2 muestra ejemplos de columnas de
intercambio inico comerciales, mencionando el tipo de iones que puede retener,
el pH de trabajo y la presin mxima a la que pueden ser utilizadas.
Aniones mviles
mantenidos cerca de
los cationes unidos
covalentemente a la
fase estacionaria
Figura 2.1 Cromatografa de intercambio inico (resina de intercambio

aninico, slo los aniones pueden ser atrados hacia ella).
48
Tabla 2.2 Columnas para HPLC de intercambio inico.
Columna Soporte pH Presin mx.
Syn Chropac SAX Slica 2a8 5 000 psi

Fuertemente aninica
Syn Chropac WAX Slica 2a8 5 000 psi

Dbilmente aninica
Syn Chropac SCX Slica 2a8 5 000 psi

Fuertemente catinica
TSKcatinica Resina 2a12 200 psi
Cromatografa de exclusin molecular
Con este mtodo las molculas se separan por su tamao y conformacin: si el

peso molecular les permite adentrarse en la red del gel y/o si la molcula es
globular, la retencin ser mayor, comparada con una molcula de peso supe-
rior al de la capacidad del gel o con una molcula de conformacin irregular
(figura 2.2). Las aplicaciones de esta tcnica son amplias, ya que permite separar
muestras con pesos moleculares entre 700 y ms de 150 millones, particular-
mente aquellas de inters bioqumico. Tambin es muy utilizada para la
separacin de polmeros (tabla 2.3). Los soportes utilizados pueden ser de gel
de slice unido a compuestos que aumentan su carcter hidroflico, como las
columnas Biosep-SEC-S; o pueden ser polmeros como los de la serie Polysep-
GFC-P (poliestireno, polihidroximetacrilato, estireno-divinilbenceno, etc.). En
el mercado de la cromatografa de exclusin molecular existe un gran nmero
de columnas que permiten seleccionar el intervalo de fraccionamiento que se
requiera (Phenomenex, 1994).
49
Manual de prcticas de qumica analtica
Molculas grandes
son excluidas
Molculas
pequeas
penetran el gel
Figura 2.2 Cromatografa de exclusin molecular.
Tabla 2.3 Columnas comerciales para la exclusin molecular.
Columna Rango PM Aplicaciones

Styagel HR 0.5 0 a 1 000 Aditivos, fenoles, epxidos, urea
Styagel HT 4 5 000 a 600 000 PM intermedio
8
Styagel HMW7 500 000 a 1x10 PM alto
Cromatografa de afinidad
Se basa en la interaccin especfica que existe entre un soluto de una mezcla y

un sitio activo presente en el gel de la fase estacionaria de la columna. Las
interacciones estn relacionadas ms con las caractersticas estructurales que
con la carga, tamao, solubilidad u otras propiedades que se aprovechan en
otros tipos de cromatografa. Ejemplos de aplicaciones son la relacin sustrato
enzima y la relacin antgeno anticuerpo (Day y Underwood, 1989).
Una mayor fuente de informacin sobre los mtodos cromatogrficos se
puede encontrar en los excelentes libros: Harris, 1992; Pecsok, 1981.
50
Operacin del cromatgrafo de

alta resolucin (HPLC)
El HPLC consta de cuatro partes: el sistema de bombas encargado de mantener

constante el flujo de la fase mvil; el sistema de inyeccin que permite introducir
la muestra a trabaj ar; la columna que tiene la funcin de separar los componentes
de la muestra y el sistema de deteccin de los solutos eluidos, el cual manda
una seal al sistema de registro.
Sistema de bombas
Este sistema es un componente importante del cromatgrafo de lquidos, el

cual requiere de una bomba de alta presin, comnmente de un mximo de
6 000 psi. La presin es necesaria para mover las partculas del soluto entre la
fase estacionaria de la columna. Una bomba para cromatografa de lquidos
debe tener un flujo continuo y libre de pulsaciones.
Existen dos tipos de sistemas de elucin: uno donde el disolvente no cambia
de composicin durante el proceso de aislamiento, conocido como elucin
socrtica, y otro que requiere de un gradiente para mejorar la separacin de
los componentes en una mezcla (elucin por gradiente).
Las bombas con pistones sincronizados son las ms empleadas en los sistemas
de HPLC. Un pistn siempre bombea disolvente, mientras el otro se llena. Es-
te arreglo proporciona un flujo relativamente libre de pulsos o pulsaciones.
Pueden evitarse muchos problemas con las bombas si se cuidan los solventes
utilizados: no deben tener un pH muy bajo ni formar precipitados con facilidad.
En columnas convencionales de 5 mm de dimetro interno y con flujos entre
1 y 2 ml/min, pueden resultar presiones de 400 bar, dependiendo de la longitud
de la columna, el tamao de partcula y el disolvente.
El sistema de bombas debe de mantenerse en ptimas condiciones si se
quiere tener reproducibilidad en las corridas cromatogrficas.
51
Figura 2.3 Control del sistema de bombas del HPLC
Figura 2.4 Sistema de bombas del HPLC
52
Operacin del sistema de bombas (figuras 2.3 y 2.4):
Se enciende el aparato con el botn rojo de la parte inferior derecha (nmero

8 de la figura 2.4). La parte frontal consta de (figura 2.3):
1. Pantalla digital para conocer la presin del sistema, la cual est dada en
libras por pulgada cuadrada (psi). El nmero que aparece en la pantalla
debe multiplicarse por 10, a fin de obtener la presin verdadera.
2. Botones que fij an la presin mnima y mxima de trabaj o durante el
proceso de separacin. Se recomienda establecer la presin baja en
cero psi y la mxima en 3 500 psi. El valor mximo depende del tipo de
columna a utilizar y de la viscosidad del disolvente o mezcla de ellos. Si
durante el proceso de separacin la presin del sistema rebasa estos
valores, el sistema de bombas se apaga automticamente.
3. Standby. Permite que el motor se apague y el sistema elctrico siga
funcionando.
4. Reset. Botn que reenciende las bombas y restablece elflujo y la presin
del sistema.
5. Led. Foco rojo que indica el apagado de las bombas y que el flujo del
sistema tiende a cero.
6. Control de fluj o. Consta de tres diales rotatorios individuales y permite
preseleccionar el flujo del sistema en ml/min. El flujo debe incrementarse
poco a poco (de dcima de mi en dcima de mi). Una lectura de 070
indica un flujo de 0.70 ml/min.
7. Vlvula de purga. Permite la purga hidrulica del sistema.
8. Botn de encendido o apagado.
Sistema de deteccin de solutos eluidos
Existen diferentes tipos de detectores utilizados en la cromatografa de lquidos,

los hay defluorescencia,ndice de refraccin, conductividad elctrica, de UV-
visible, arreglo de diodos, etc.
El tipo UV-visible es el ms ampliamente distribuido como detector en
HPLC, la mayora de los compuestos tienen cuando menos alguna absorbancia
en las regiones del UV o el visible. El fundamento cuantitativo de estas
53
Figura 2.5 Control del sistema de deteccin de solutos eluidos.
Figura 2.6 Detector UV-visible.
54
determinaciones se encuentra en la ley de Lamber y Beer, la cual relaciona la

absorbancia del soluto con su concentracin (c, en moles/1) y la longitud del
paso del haz de luz (b): A = 8be.
Los detectores de los equipos actuales tienen una mayorflexibilidadque los
espectros comunes, ya que pueden reportar valores menores de 0.001 unidades
de absorbancia.
Operacin del sistema de deteccin
Se enciende el aparato con el botn rojo de la parte inferior derecha. La parte

frontal (figuras 2.5 y 2.6) consta de:
1. Pantalla. Permite leer hasta diezmilsimas de unidades de absorbancia.

2. Botn de polaridad. Sirve para cambiar la seal de salida del sistema de
registro.
3. Botn de corte (short switch). Conecta o desconecta las terminales
positiva y negativa nulificando la seal del integrador o registrador. Este
efecto es lo mismo que si se mandara una seal de cero volts al registrador,
permitiendo ajustar el cero independientemente del ajuste hecho en el
registrador o integrador.
4. Mark. Este botn permite producir una marca en la carta y se utiliza
generalmente para indicar el momento de la inyeccin de la muestra.
5. Auto cero. Este botn permite definir la lnea base y tiene un intervalo de
0.7 UA (unidades de absorbancia). Cuando la lmpara parpadea indica
que la seal de salida de la lnea base excede el intervalo de trabajo del
auto cero.
6. Pantalla indicadora de la longitud de onda seleccionada.
7. Control de seleccin de longitud de onda. Ajusta la longitud de onda de
trabajo entre 190 y 700 nm con incrementos de 0.2 nm.
8. Intervalo de unidades de absorbancia (AUFS, Absorbance Units Full
Scale). Cuenta con doce posiciones diferentes que seleccionan la
sensibilidad de las unidades de absorbancia.
9. Botn de control. Consta de seis posiciones que se pueden seleccionar
y observar en la pantalla:
55
SE {Sample Energy). La pantalla reporta la energa UV de la celda

de la muestra problema.
RE (Reference Energy). Reporta la energa UV de la celda de
referencia.
AU (Absorbance Units). Se observan la unidades de absorbancia
presentes en la muestra problema.
Zero, cantidad en unidades de absorbancia que el aparato toma
como cero.
DLV(Deuterium Lamp Voltage). Reporta el voltaje de la lmpara
de deuterio.
DLC {Deuterium Lamp Current). Reporta la corriente del filamento
de la lmpara en miliamperios, una lectura de 300 es ideal y de 285
a 315 es aceptable.
10. Tiempo de respuesta. Son cinco posiciones que seleccionan los diferentes
tiempos de respuesta:
0.05 sea, respuesta rpida que provoca picos angostos y mucho

ruido en la lnea base.
0.10 sea, respuesta rpida con ruido ligeramente menor que la
anterior.
0.50 sea, ms rpida que la respuesta normal y con ruido ligeramente
mayor de lo normal.
1.00 sea, respuesta normal con picos angostos y una cantidad
pequea de ruido.
5.00 sea, respuesta lenta para una supresin mxima del ruido.
Operacin del integrador SP4400
Es un equipo que permite interpretar la seal mostrando no slo el croma-

tograma, sino tambin un reporte completo con los tiempos de retencin, las
reas y sus porcentajes. Si se requiere, tambin proporciona informacin sobre
las condiciones bajo las cuales se corri el sistema y cuenta con programas
para hacer clculos con patrones externos e internos (figura 2.7).
56
Figura 2.7 Integrador
Figura 2.8 Vista parcial del teclado del integrador.
57
Dentro de las ventajas que tiene utilizar un integrador, se encuentran los

mtodos numricos que permiten realizar diferentes tipos de clculos, como
los siguientes:
a) Mtodo numrico cero: MN = 0. Es un mtodo de porciento de rea

usado cuando los resultados de concentracin no son necesarios. Este
mtodo no utiliza factores de respuesta del detector y de esta manera no
requiere de calibracin. Una vez que el dilogo de rutina termina, se
selecciona el mtodo en el reporte, el cual incluye todos los picos del
cromatograma identificados por orden de elucin. Los nombres de los
componentes no son generalmente utilizados.
b) Mtodo numrico uno: MN = 1. Es el ms utilizado en cromatografa
de gases, en particular cuando todos los componentes de la muestra son
conocidos. Es muy similar al mtodo cero, con excepcin de que las
reas (o altura) de los picos son corregidos por factores de respuesta,
calculados previamente en una corrida con sustancias patrn de con-
centracin conocida.
c) Mtodo numrico dos: MN = 2. Requiere la utilizacin de estndares
internos para cuantificar de manera exacta los componentes de una mezcla.
Es de uso comn en anlisis de compuestos farmacuticos, aditivos ali-
mentarios, etc. La concentracin del estndar interno debe ser ligeramente
mayor, pero no pasar de un factor de 10, con respecto a los componentes
de inters en una mezcla.
Descripcin del teclado (figura 2.8)
Backspace: borra datos previos moviendo el cursor hacia atrs.

LCD status: Presenta un cuadro en pantalla donde indica el canal (C/z),
archivo (FI\ nmero de inyecciones en ese archivo (Biri), la velocidad
de la carta (Cs), atenuacin (Atteri), tiempo de corrimiento (Runtime),
nivel (Level) y capacidad de memoria.
Inj/endA: Tecla que se debe oprimir en el momento de efectuar la
inyeccin en la columna "A".
Shift inj/endA: Detiene el desarrollo del cromatograma sin dar el reporte
del mismo.
58
A tem Se usa para verificar la atenuacin en cualquier momento del

proceso cromato grfico. Cuando se presiona, aparecen en la pantalla
los valores numricos vlidos para cambiarla. Entre parntesis aparece
el valor que se est utilizando.
Chart speed: Se utiliza para verificar la velocidad de la carta en cualquier
momento del proceso cromatogrfico. Cuando se presiona, aparecen
en la pantalla los valores numricos vlidos para cambiarla. Entre
parntesis aparece el valor que se est utilizando. Se recomienda usar
velocidad 2 para cromatogramas con pocos picos y 2 o 4 para
cromatogramas ricos en picos.
PTeval: No debe utilizarse durante la corrida. Normalmente se ob-
serva su valor antes de inyectar nuevamente la muestra, ya que un valor
menor a 250 indica que ya no hay residuos de soluto del anlisis anterior
pasando por el detector.
Metodologa para el manejo del HPLC
1. Preparacin del disolvente y la muestra a analizar. Ambos deben ser

filtrados en membranas de 0.4 |um, para evitar que las impurezas entren
y contaminen la columna. El disolvente debe ser grado HPLC.
2. Revisar que el sistema de entrada y salida de los disolventes estn
sumergidos en sus respectivos recipientes.
3. Encender el sistema de bombas (nmero 8 de la figura 2.4).
4. Ajustar el flujo oprimiendo los botones respectivos (nmero 6 de la
figura 2.3) del sistema de bombas.
5. Seleccione la longitud de onda con base en el sistema a separar, moviendo
el dial correspondiente (nmero 7 de la figura 2.6). Al igual que el
cromatgrafo de gases, el HPLC requiere de un tiempo (20 a 30 minutos)
para que se estabilicen las condiciones de trabajo.
6. Encender el integrador y ajustar la velocidad de la carta y la atenuacin,
presionando primero la tecla Chart speed del teclado del integrador y
posteriormente la tecla Atten (figura 2.8). Se puede elegir entre una
serie de valores que van desde 0.5 hasta 4 096 en incrementos
geomtricos para la atenuacin. Si en una primera corrida los picos
59
rebasan la escala del integrador, se puede aumentar la atenuacin al

valor prximo, de manera que los picos reduzcan a la mitad su tamao
(siempre y cuando se utilicen las mismas condiciones de separacin).
7. Verifique el valor del PT evaluation: debe ser como mximo de 250.
8. Inyecte la muestra con una jeringa de 50 jal con aguja sin punta, mida
la cantidad establecida en el manual de prcticas de la muestra a correr
e introduzca la jeringa en la vlvula de inyeccin. El mecanismo de
inyeccin de la muestra (figura 2.9) es de dos posiciones: carga y
descarga. Presione el mbolo para que la muestra pase a la tubera de
acceso (loop). Mueva la palanca a la posicin de descarga para que la
muestra sea llevada a la columna, el lquido contenido en el loop ser
desplazado hacia la columna. El movimiento debe ser rpido para evitar
una cada brusca de presin que desconecte el sistema de bombas.
Posteriormente oprima la tecla inj/endA del integrador.
Terminado el tiempo de corrimiento vuelva a presionar la tecla inj/end
A, el integrador le dar un reporte completo de su sistema separado.
60
Flujo Flujo
Jeringuilla I
Hacia la
columna
Unin
Exceso
Alojamiento de de inyeccin
muestras
CARGAR INYECTAR
Figura 2.9 Vlvula de inyeccin para cromatgrafo de lquidos de alta

resolucin.
61
Prctica 3
Cuantificacin de una muestra problema de

anisaldehdo (mtodo del patrn interno)
Introduccin
El funcionamiento de un comatgrafo de alta resolucin empieza con el sistema

de bombas de alta presin, el cual impulsa el disolvente a travs de todo el
sistema. La muestra es inyectada por medio de una microj eringa, el volumen es
de unos cuantos microlitros para que la resolucin de los picos sea buena y la
separacin sea ms rpida. Una vez en la columna, se realiza la interaccin
soporte-soluto-disolvente, lo cual permite la separacin de los componentes
de la muestra. El detector est compuesto por una microcelda en forma de
"Z", a travs de la cual fluye la disolucin; es excelente para que los compuestos
no se mezclen y el flujo sea rpido. Por ltimo, en el integrador, la absorban-
cia es convertida en seal elctrica y as es reproducida como cromatograma.
En la cromatografa de lquidos de particin existen dos grupos de trabajo,
el ms frecuente se conoce como cromatografa de fase inversa, en ella la
fase estacionaria tiene un carcter no polar y se eluye con un disolvente polar.
El segundo grupo es la cromatografa de fase normal que utiliza un soporte
polar y un disolvente no polar. El sistema de elucin puede ser isocrtico o por
gradiente y el detector ms comn es el uv-visible, aunque tambin es utilizado
el de ndice de refraccin.
La cuantificacin de una muestra problema por medio de un estndar interno
se puede efectuar con la elaboracin de una curva estndar, la cual debe ser
hecha mnimo con tres puntos. En el laboratorio se debe tener especial cuidado
63
sobre las condiciones de separacin, en cuanto a volumen inyectado, flujo y

composicin de la fase mvil. La curva se desarrollar en funcin de la relacin
de alturas o reas de los picos del compuesto entre las del estndar (ver captulo
1: Clculos en cromatografa). En las abscisas se coloca la relacin de la
concentracin del soluto entre la concentracin de la sustancia patrn. La
concentracin de la muestra problema se interpola de la curva patrn.
Objetivo
El alumno aprender a utilizar el cromatgrafo de lquidos de alta resolucin

para cuantificar una muestra problema de anisaldehdo, utilizando el mtodo
del patrn interno.
Cromatgrafo de lquidos de alta resolucin
Columna Spherisorb ODS C]810 mm
Filtros de tefln de 0.4 mm
Jeringa de 50 mi, con aguja para HPLC
5 frascos viales de 5 mi con tapa
Anisaldehdo
Acetonitrilo
Tolueno
Muestra problema con anisaldehdo
Normas de seguridad
Al preparar la mezcla acetonitrilo agua y acetonitrilo tolueno debe hacerlo
en la campana de extraccin.
Revise su bitcora para recordar que el acetonitrilo es venenoso y fla-
mable, que debe evitar respirar sus vapores y que puede causar irritacin
en la piel.
64
Cuantificacin de una muestra problema de anisaldehdo
Procedimiento
1. Las condiciones de funcionamiento del cromatgrafo deben ser las si-

guientes:
Columna Spherisorb 10ODS10jim

Dimensiones 250 x 4.6 mm
Presin mxima 3 500 psi
Fase mvil acetonitrilo/agua (50:50)
Flujo 0.8 ml/min
2. Prenda y acondicione el cromatgrafo dejando que el sistema se estabilice.

3. Prepare las siguientes mezclas de anisaldehdo y tolueno:
Compuesto Corrida 1 Corrida 2 Corrida 3

Anisaldehdo 0.07 M 0.05 M 0.03 M
Tolueno 0.05 M 0.05 M 0.05 M
4. Filtre por membranas de 0.4 jom: a) La mezcla de acetonitrilo agua, b)

cada una de las mezclas patrn y c) la muestra problema.
5. Solicite al profesor la muestra problema que contiene 0.05 M de tolueno
como estndar interno, mida 2 |il e inyctelos.
6. Repita por triplicado la determinacin.

Con las concentraciones y las alturas de los picos del patrn externo,
elabore una curva patrn como la que se muestra en la figura 2.10.
65
ALTURA S
ALTURA P
[SOLUTO S]
[SOLUTO P]
Figura 2.10 Curva patrn.
La concentracin de la muestra problema se calcula a partir de sustituir

el valor de la altura del anisaldehdo (altura S) en la mezcla problema en
la relacin:
ALTURAS
ALTURA P
La altura "P" es la altura del tolueno, el valor de esta relacin se interpola

en la curva patrn y el valor de la grfica es sustituido en la siguiente
relacin, para obtener la concentracin del soluto de la muestra problema:
SOLUTO S
SOLUTO P
Cuestionario
1. Mencione tres diferencias, en cuanto a su aplicacin, entre la cromatografa

degasesyelHPLC.
2. Describa los cuidados experimentales que se deben tener para: a) los

disolventes a utilizar como fase mvil, b) la muestra problema a separar
o cuantificar.
66
Cuantifcacin de una muestra problema de anisaldehdo
Indique usted qu fase estacionaria, qu fase mvil y qu detector seran

los indicados para efectuar una buena separacin de las siguientes mezclas:
a) de carbohidratos, b) de aminocidos y c) de protenas.
Para conocer el contenido de anfetamina en un preparado farmacutico

comercial, se utiliza como estndar interno la metanfetamina y se efectan
tres corridas cromato grficas. Con base en estos datos construya una
curva patrn y calcule la concentracin de una muestra problema de
anfetamina que dio una altura de 123 mm.
Corrida 1 2 3
Frmaco Conc. Altura Conc. Altura Conc. Altura
Anfetamina 0.6 30 1.2 60 1.8 98

Metanfetamina 0.6 38 0.6 38 0.6 38
Conc.= concentracin en mM.
67
Prctica 4
Separacin y cuantificacin de una muestra de

antocianinas (mtodo del patrn externo)
Introduccin
La cromatografa de lquidos de alta resolucin ha tenido un gran auge en los

ltimos 20 aos, se ha utilizado como tcnica para separar, identificar y preparar
sustancias en muchas reas. Actualmente estos equipos se combinan con el
banco de memoria de una computadora, lo que ofrece una mayor facilidad en
la identificacin de compuestos.
Una aplicacin actualizada es la separacin e identificacin de antocianinas,
tanto en uvas como en vinos tintos. A pesar de tener el vino tantos aos de
historia, an no se conoce qu ocurre con sus compuestos durante el
aejamiento. El color es uno de los atributos ms importantes del vino y es
determinante en la evaluacin sensorial. En las uvas tintas est dado por el
contenido de antocianinas y en las uvas blancas por los flavonoles. Existen
en las uvas tintas 14 antocianinas, de las cuales cinco se encuentran en ma-
yor proporcin: malvidina, petunidina, cianidina, peonidinay delfidina (Reyes
etal., 1992).
Las antocianinas son pigmentos de color rojo, azul y violeta. En condiciones
acidas, el color rojo predomina; en presencia del ion bisulfito (HSO~3 )
reaccionan y se decoloran, esta reaccin es reversible. El color de los vinos
tintos se debe principalmente a las antocianinas libres (estos compuestos tienden
a polimerizarse casi de manera inmediata desde que son estrujadas), y a
pigmentos polmeros formados durante el tiempo de afiejamiento del vino, por
condensacin de antocianinas con otros compuestos flavonoides y proba-
69
blemente aldehidos. El color de los vinos tintos depende del pH, el contenido
de SO2? de los pigmentos polimricos y los taninos.
El uso de equipos como el HPLC permite la separacin de las antocianinas
en vinos tintos y stas aparecen como picos discretos.
Objetivo
El alumno utilizar el cromatgrafo de lquidos de alta resolucin para separar

y cuantificar una muestra de antocianinas, utilizando el mtodo del patrn extemo.
Cromatgrafo de lquidos de alta resolucin

Columna Spherisorb ODS Clg 10 mm
Filtros de tefln de 0.4 mm
Papel filtro WhatmanNo. 1
Jeringa de 50 mi, con aguja para HPLC
4 tubos de ensayo con tapa de rosca
Mortero con pistilo
Pipeta graduada de 10 mi
Clorhidrato de malvidinamonoglucsido
cido frmico
Acetonitrilo
Metanol
HC1 (concentrado)
Normas de seguridad
Cuide que al preparar las mezclas acetonitrilo agua y acetonitrilo tolueno
se haga en la campana de extraccin.
70
Separacin y cuantifcacin de una muestra de antocianinas
Recuerde que el acetonitrilo es venenoso,flamabley que causa irritacin

en la piel. Se debe evitar respirar sus vapores.
Maneje con cuidado el cido frmico y evite el contacto con la piel, ya
que es corrosivo.
Procedimiento
1. Extracto a partir del hollejo de la uva: lavar y quitar el hollej o a 10 uvas

tintas, colocando ste en un mortero limpio. Adicionar 10 mi de metanol
y presionar suavemente con el pistilo contra el hollejo para obtener una
disolucin muy colorida. El extracto es prefiltrado con papel Whatman
No. 1, antes de filtrar con membranas Millipore de 0.45 |Ltm. El extracto
se guarda en un tubo de ensayo limpio y con tapn de rosca. Se protege
de la luz y debe utilizarse a la brevedad.
2. Las condiciones de funcionamiento del cromatgrafo deben ser:
Columna Spherisorb 10 ODS 10 |jm

Dimensiones 250 x 4.6 mm
Presin mxima 3 500 psi
Fase mvil. Se utiliza un gradiente de elucin con dos disolventes:
Disolvente A, cido frmico al 40%
Disolvente B, acetonitrilo
Gradiente inicial: 25 % solvente A
6 minutos despus incremente el disolvente B a 23 %.
Flujo 0.7 ml/min
NOTA: verifique que tanto las muestras como los disolventes de la fase
mvil se filtren en membranas Millipore de 0.45 |jm.
3. Prenda y acondicione el cromatgrafo, permitiendo que se estabilice el

flujo y la columna.
4. Se inyectan 2 (il del extracto colorido. Reptalo por triplicado.
71
5. Para elaborar la curva patrn con el clorhidrato de malvidin 3-

monoglucsido, se preparan cuatro diferentes concentraciones 25,50,
100 y 150 mg/1 en metanol con 1 ml/1 de HC1 concentrado. Se inyectan
en la columna por separado, los volmenes de inyeccin deben ser de
214,1. Ajuste la atenuacin para que los picos no rebasen la escala del
integrador.
Con las concentraciones y las alturas de los picos del patrn externo,
elabore una curva patrn como la de la figura 1.6. Calcule el coeficiente
de correlacin.
Con la altura de los picos del extracto de uva en el cromatograma interpole
los datos en la curva patrn.
Con el valor verdadero (dato proporcionado por el profesor) calcule la
precisin y exactitud y discuta sus resultados.
Cuestionario
1. Qu influencia pueden tener los siguientes cambios sobre el croma-

tograma obtenido en esta prctica?
a) Utilizar una columna C-8 en lugar de una C-18.

b) Disminuir el flujo de la fase mvil.
c) Hacer una elucin isocrtica (en lugar de una por gradiente) en condi-
ciones de disminucin del flujo de la fase mvil.
2. Qu puede suceder si, por descuido, no se filtra el extracto de materia

colorante y se inyecta en el cromatgrafo?
72
Separacin y cuantificacin de una muestra de antocianinas
3. Se puede confiar en un cromatograma que fue obtenido durante una

corrida que present fuertes variaciones en la presin de las bombas?
Qu puede ocasionar este comportamiento?
4. Qu otros sistemas de deteccin son de uso frecuente en los croma-

tgrafos de alta resolucin?
5. Mencione brevemente tres aplicaciones directas de la cromatografa

lquida de alta resolucin, mencionando adems tipo de columna, fase
mvil que se podra utilizar y el detector adecuado.
73
Bibliografa

Mxico.
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Meites, L. (editor). 1963. HandbookofChemistry. Me Graw Hill, USA.
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Metropolitana Iztapalapa, Mxico.
Watty, M. 1989. Qumica analtica. Ed. Alhambra Mexicana, Mxico.
74
Captulo 3
ESPECTROFOTOMETRIA
I. VISIBLE ULTRAVIOLETA
Introduccin
Los usos analticos de la espectrofotometra en la zona del visible ultravioleta

son muchos y muy variados. El objeto de este captulo es hacer mencin de
algunas de estas aplicaciones, y que el alumno ponga en prctica los co-
nocimientos adquiridos en la teora sobre la ley de Lambert y Beer.
Cuando un compuesto o ion capaz de absorber luz es colocado en una cel-
da en un espectrofotmetro, cierta cantidad de luz monocromtica ser
absorbida por dicho compuesto y el resto saldr de la celda para ir a incidir so-
bre el fototubo que la detectar. Este comportamiento es aprovechado para
conocer la concentracin de los compuestos.
La transmitancia, T, de una disolucin se define como la fraccin de la in-
tensidad o de la fuerza de la luz incidente, Po, que se transmite verdaderamente
a travs de la disolucin. En donde P es la intensidad de la luz que sale de la
muestra.
T = o T = 100
Po \Po)
La absorbancia, A, de una disolucin es la luz que absorbe, no la que se

transmite, y se define como:
A = - logT = log
La ley de Beer (tambin conocida como la ley de Bouguer-Beer o de Lam-

bert y Beer) establece que: a una longitud de onda dada, la absorbencia es
proporcional a la concentracin de la especie absorbente en una disolucin,
como lo indica la siguiente ecuacin.
A = zbc
En donde b es el recorrido del haz de luz en la celda, c es la concentracin

(moles/1) y la constante de proporcionalidad es la absortividad molar, e. Su
valor numrico depende de las unidades que se usen para expresar b y c. Si b
est dada en cm y c en moles por litro, se le denomina coeficiente de extincin
molar o absortividad molar y recibe el smbolo de e. Si la concentracin se da
en g/1, solamente se llama coeficiente de extincin o absortividad y su smbolo
es "a" (para obtener mayor informacin sobre esta ley se pueden leer los trabajos
de Hughes, 1952,Liebhafsky, 1953,yLykos, 1992).
Desviaciones de la ley de Beer
Una gran cantidad de compuestos absorbentes siguen bastante bien la ley de

Beer en soluciones diluidas, pero en algunas sustancias las absorbancias varan
en forma no lineal respecto de la concentracin. Este comportamiento se conoce
como "desviacin de la ley de Beer". Para trabajar estos sistemas se requiere
una curva de calibracin, trazada con valores de muestras de concentracin
conocida, de este modo se puede conocer el intervalo de concentraciones en
el cual la relacin es lineal. Se debe tomar en cuenta que las desviaciones con
respecto a esta ley pueden tener causas diversas: por muestras muy concentradas
o muy diluidas, por variacin del equilibrio qumico de la sustancia que absorbe
y por limitaciones del instrumento utilizado.
Para tener el mnimo de problemas con las desviaciones, se recomienda
trabajar en el intervalo de concentraciones de 10'2 M a 10'6 M. Si se utiliza una
tcnica poco reconocida, hay que cuidar el equilibrio qumico poniendo espe-
cial atencin en la fuerza inica y en el pH del sistema, ya que hay muchos
compuestos cromforos o quelatos que presentan equilibrios parciales, en estos
casos hay que agregar un exceso de ligando para desplazar el equilibrio hasta
la formacin del complejo con mayor nmero de coordinacin.
Tambin existen problemas causados por los equipos, como las radiaciones
reflejadas dentro del aparato que llegan al detector, los cambios de sensibilidad
del detector y lasfluctuacionesen la corriente elctrica que provocan cambios
en la intensidad de la radiacin y por ende modificaciones en la lectura registrada.
Un dato muy importante es que las mediciones espectrofotomtricas slo
son confiables con valores intermedios de absorbancia, aproximadamente entre
0.187 y 0.824; o en % de T, entre 15 y 65; si se requiere, se puede ampliar
78
Espectrofotometra
esta escala hasta 80% de 7, pero entonces se aumenta el error fotomtrico

(valores de absorbancia para un espectro de un solo haz, utilizando la grfica
de Ringbom. Servicios Centrales de Instrumentacin, 1983).
Celdas
La celda es un depsito transparente especialmente diseado para contener la

disolucin de prueba o el disolvente de referencia (blanco) durante los estudios
espectrofotomtricos. Existen celdas o cubetas de diversos tamaos y formas
apropiadas para los diferentes tipos de espectros comerciales (figura 3.1). Las
celdas ms comunes para medir espectros en la regin del visible-ultravioleta
estn fabricadas con cuarzo y tienen un paso de luz de 1.0 cm. Las celdas de
vidrio ptico son apropiadas slo para mediciones en la regin del visible, ya
que absorben la radiacin ultravioleta.
Generalmente las celdas son cuadradas con dos lados esmerilados, pero las
hay cilindricas en forma de tubo de ensayo para ser utilizadas en el Spectronic
20. Tambin existen las celdas de flujo que permiten la circulacin continua
de una disolucin a travs de la cubeta. Son tiles para medir la absorbancia de
disoluciones que fluyen de una columna cromatogrfica. Tambin existen las
celdas trmicas con recirculacin de agua o algn lquido que fluye en una ca-
misa para mantener el contenido de la celda a la temperatura deseada.
Las caractersticas de transmisin de las celdas en varias longitudes de onda
son funcin de los materiales de fabricacin. Por ejemplo, el vidrio pyrex transmite
en el intervalo de los 320 a los 2 500 nm. La figura 3.2 muestra las zonas de
absorcin de los materiales ms comnmente empleados en la fabricacin de
celdas. Se pueden utilizar vidrios o plsticos especiales en la regin del visible.
79
Celda cilindrica para

flujo constante
Celda normal
con tapa
Microcelda tpica con

tapa
Celda
cuadrada
para flujo
constante
s
Figura 3.1 Diferentes tipos de celdas para espectrofotometria.
80
Espectro fotometra
200 250 300 350 400 nm
1. Spectrosil 4. Vitreosil grado IR

2. Slice fundido 5. Vidrio ptico especial
3. Cuarzo fundido 6. Vidrio
Figura 3.2 Espectro de transmisin para materiales utilizados en la

fabricacin de celdas.
Resulta conveniente contar con una marca en el lado donde incida la luz, de
manera que la celda pueda siempre ser orientada en la misma posicin para
permitir la reproducibilidad de los resultados.
81
1
7. Control de longitud de onda 3. Control de cero y de encendido
2. Control de ajuste de 0% de 4. Portaceldas
transmitancia o de absorbancia
Figura 3.3 Espectrofotmetro Spectronic 20.
Operacin del espectrofotmetro Spectronic 20
Descripcin
El Spectronic 20 (figura 3.3) se enciende girando el control del cero, de la

perilla izquierda, en el sentido de las manecillas del reloj. El aparato se calienta
82
1
7. Control de longitud de onda 3. Control de cero y de encendido
2. Control de ajuste de 0% de 4. Portaceldas
transmitancia o de absorbancia
Figura 3.3 Espectrofotmetro Spectronic 20.
Operacin del espectrofotmetro Spectronic 20
Descripcin
El Spectronic 20 (figura 3.3) se enciende girando el control del cero, de la

perilla izquierda, en el sentido de las manecillas del reloj. El aparato se calienta
82
2. Evite el uso de agentes limpiadores que sean abrasivos, corrosivos o

que produzcan coloracin de las superficies. Por ningn motivo las limpie
con un escobilln.
3. Enjuague las celdas cuando menos tres veces con pequeas porciones
de la disolucin de prueba antes de tomar la lectura. Evite usar solamente
agua destilada, ya que esto produce un efecto de dilucin sobre la muestra
a medir.
4. Cuando introduzca la celda en el compartimento de muestras, limpie el
tercio inferior de la celda con papel especial para lente (nunca use ser-
villetas, pauelos o la bata), y asegrese que las paredes no muestren
fibrillas adheridas o manchas.
5. Evite producir rayaduras en las superficies de las celdas, colquelas
dentro del portaceldas con la lnea indicadora alineada con su respectiva
gua
6. Mantenga cerrada la tapa del compartimento de muestras mientras realiza
las mediciones, ya que esto restringe la entrada de luz parsita.
7. Al finalizar todas las mediciones, enjuague con el disolvente puro. Si las
celdas estn muy sucias o si presentan depsitos difciles de remover,
use una mezcla de cido clorhdrico 3 N y alcohol etlico absoluto 1:1.
Aplique un ltimo enjuague con etanol o metanol grado espectroscpico
y deje secar al aire.
84
Prctica 5
Desarrollo de un mtodo espectrofotomtrico
Introduccin
Para la cuantificacin de sustancias que pueden absorber la luz que las atraviesa,
las tcnicas espectrofotomtricas son confiables y de fcil manejo. Adems,
no slo sirven para calcular la cantidad de soluto presente en una disolucin,
sino tambin se pueden utilizar para identificar sustancias de manera cualitativa.
Cuando se realiza un proyecto de investigacin, se puede requerir el
desarrollo de un mtodo espectrofotomtrico para cuantificar algn soluto o
quizs el producto de una reaccin, que tengan la cualidad de absorber la luz.
Para conseguir esto se necesita:
a) Conocer la longitud de mxima absorbancia del compuesto, que se

obtiene haciendo un barrido en la regin del espectro de absorcin de
inters.
b) La preparacin de una curva de calibracin con disoluciones de
concentracin conocida. Conocer la curva permite verificar si la ley
de Lambert y Beer se cumple en el intervalo de trabajo.
c) Conocer si hay interferencias entre los reactivos, si las reacciones
involucradas son estables en las condiciones de trabajo y si hay
reproducibilidad en los resultados experimentales.
Tome en cuenta que la absorcin de la energa radiante en las regiones

espectrales del visible y del ultravioleta, depende principalmente del nmero de
85
arreglos de los electrones de las molculas o iones absorbentes. En sustancias

inorgnicas se presenta una absorcin selectiva, cuando un nivel energtico
electrnico incompleto se halla cubierto o sobrepuesto por un nivel de energa
completo, normalmente formado por valencias de coordinacin con otros
tomos. En las molculas orgnicas la absorcin selectiva est relacionada con
la localizacin de los electrones en la molcula. Los compuestos completamente
saturados no muestran una absorcin selectiva en las regiones del visible y en
las accesibles del ultravioleta lejano. Las dobles ligaduras conjugadas producen
absorcin con mayores longitudes de onda. Si la molcula es muy grande, la
absorcin entrar en la regin del visible y presentar color, tal como sucede
con la molcula del (3 caroteno (Ewing, 1979).
Objetivo
El alumno aprender a utilizar un espectrofotmetro (Spectronic 20) y a
implementar una metodologa para la cuantificacin de compuestos que absorben
la luz en la regin del visible.
Espectrofotmetro Spectronic 20
2 celdas para el espectro
3 matraces aforados 100 mi
5 matraces volumtricos de 25 mi
3 pipetas graduadas de 5 mi
Vidrio de reloj
Agitador de vidrio
Balanza analtica
Esptula
Piseta con agua destilada
NH4Fe(SO4)2*12H2O
H2SO4 concentrado
1,10-fenantrolina
CH3COONa
86
Normas de seguridad
Tome en cuenta los puntos 2, 3 y 4 del apartado "Prevencin de
accidentes en el trabajo con sustancias qumicas", que se encuentra en
el captulo 1.
Para preparar soluciones diluidas de cido sulfrico es recomendable:
a) Enfriar el recipiente que contenga agua en un bao de hielo.

b) Agregar el cido al agua en porciones pequeas, dejando que ste
resbale por la pared del recipiente.
c) Agitar despus de cada adicin de cido regresando el recipiente al
bao de hielo.
Procedimiento
1. Metodologa para encontrar la longitud de mxima absorbancia del

complejo hierro-fenantrolina: se obtiene haciendo un barrido en la regin
del espectro de 400 a 620 nm.
Preparacin de disoluciones:
Disolucin estndar del hierro (III). Preparar 100 mi de disolucin

1.8 x 10-3MdeNH4Fe(SO4)2 12H2O en disolucin de H2SO4 0.1 N.
Disolucin de 1,10-fenantrolina alO.l % (p/p) en agua. Preparar 100 ml
Acetato de sodio 2 M. Preparar 100 ml.
Coloque 5 ml de disolucin estndar de Fe (III) en un matraz volumtrico
de 100 ml. Adicione 10 ml de disolucin de acetato de sodio para man-
tener el pH entre 3 y 5. Verifique con papel pH. Adicione 10 ml de 1,
10-fenantrolina y diluya hasta la marca de aforo con agua destila-
da. Deje transcurrir 10 minutos para que se desarrolle el color rojo
anaranjado.
Mida la absorbancia a intervalos de 10 nm, de 400 a 620 nm. En cada
longitud de onda ajuste la transmitancia a cero y cien porciento, use un
blanco que contenga acetato de sodio y 1,10-fenantrolina.
87
2. La preparacin de una curva de calibracin con disoluciones de

concentracin conocida permite verificar si la ley de Lambert y Beer se
cumple en el intervalo de trabajo.
Curva estndar. Prepare en matraces volumtricos de 25 mi una serie

de disoluciones que contengan 1,2,3,4 y 5 mi de la disolucin estndar
de Fe (III). Agregue 10 mi de disolucin de acetato de sodio, 10 mi de
1,10-fenantrolina y diluya hasta la marca con agua destilada. Mdase la
absorbancia de estas disoluciones en la longitud de onda seleccionada.
3. Adems se requiere conocer si hay interferencias entre los reactivos, si

las reacciones involucradas son estables en las condiciones de trabajo y
si hay reproducibilidad en los resultados experimentales.
Solicite al profesor una muestra problema de Fe (III) y mida la ab-

sorbancia. Realice por triplicado la determinacin.
Con los resultados del punto 1, construya una grfica de longitud de

onda en funcin de la absorbancia. Determine la longitud de onda de
mxima absorbancia para el complejo 1,10-fenantrolina de hierro (III)
que ha de emplearse. Muestre al profesor de laboratorio la longitud de
onda seleccionada, antes de proceder al anlisis cuantitativo.
Construya una grfica de la absorbancia en funcin de la concentracin
(moles/1). Compruebe en qu intervalo la ley de Lambert y Beer se
cumple.
Determine la concentracin de la muestra problema y exprsela en mo-
laridadyenppm.
Calcule el coeficiente de extincin molar del complejo colorido.
Calcule la cantidad de mM por mi necesarios para dar una absorbancia
de 1.0.
88
Cuestionario
i. Explique cules son las desviaciones que pueden presentarse en la

aplicacin de la ley de Beer.
2. Cules son los cuidados que se deben tener con las celdas del es-
pectrofotmetro?
3. Cules son los factores que se deben tomar en cuenta para la deter-
minacin espectrofotomtrica de iones inorgnicos por formacin de
complejos?
Una disolucin de permanganato de potasio 1.28x10"4 M tiene una

transmitancia de 0.5 a 525 nm, en una celda de 1.0 cm.
a) Qu absorbancia tiene esta disolucin?

b) Si la concentracin fuese el doble, cul sera la absorbancia y la
transmitancia?
c) Qu concentracin correspondera a una transmitancia de 0.75 en
esta celda?
El cobalto (II) forma fcilmente un complejo de color azul cuando

reacciona con el tiocianato. El procedimiento es el siguiente: se prepara
una disolucin de tres partes de acetona por una de disolucin acuosa al
50% de NH4SCN. Esta disolucin se agrega a un matraz que contiene
Co (II), el complejo resultante es de color azul intenso.
Se prepararon las siguientes disoluciones y se efectu la lectura a
620 nm:
Co, ppm A
3.0 0.10
6.0 0.21
9.0 0.32
12.0 0.42
89
Se tomaron 4.0 mi del lquido que sala de una columna de separacin y

se diluyeron hasta 100 mi con acetona y NH4SCN.
La absorbancia medida a 620 nm fue de 0.25. Cul fue la con-
centracin del cobalto, en ppm, en el matraz de 100 mi que contena la
muestra?
6. Se tienen 20 mi de disolucin con 3.0 mg de hierro (II) formando un

complejo con la 1,10-fenantrolina. La absorbancia de la disolucin es
de 0.45 en una celda de 1 cm a 515 nm. Calcule el % de Ty el coeficiente
de extincin molar del complejo.
90
Prctica 6
Determinacin por espectrofotometra de la

concentracin de cobalto y nquel en una mezcla
Introduccin
Frecuentemente es preciso analizar mezclas de dos o ms sustancias. A veces

es posible hacerlo a travs de determinaciones espectrofotomtricas simultneas,
en lugar de efectuar las separaciones fsicas o qumicas necesarias para analizar
los componentes puros por separado.
Se conocen varios mtodos para determinar las concentraciones de sistemas
con dos o ms compuestos, el ms conocido requiere de establecer los picos
de absorcin de cada componente y que cada uno de ellos se encuentre
prcticamente libre de absorciones de los otros compuestos, adems, se debe
considerar que las absorbancias de cada uno son aditivas. Existe otro mtodo
para sistemas en los cuales las curvas de absorcin se traslapan, de manera
que requieren un barrido de las dos longitudes de onda. En este caso de debe
utilizar la metodologa propuesta por Blanco et al. (1989), en la cual se establece
una correlacin lineal que permite con base en la pendiente y la ordenada al
origen conocer las concentraciones de mezclas binarias.
En esta prctica se utilizar el primer mtodo para casos en que las longi-
tudes de onda de mxima absorbancia no se traslapan. En la determinacin de
la concentracin de dos (o ms) sustancias hay que tener cuidado, ya que los
pequeos errores experimentales se suman rpidamente. Un error en la lectura
de absorbancia en una longitud de onda puede disminuir la precisin en el re-
sultado final.
91
Objetivo
El alumno aplicar sus conocimientos sobre espectrofotometra para la

cuantificacin de una mezcla de dos compuestos.
2 matraces aforados 100 mi
2 matraces volumtricos de 25 mi
Vidrio de reloj
Agitador de vidrio
Balanza analtica
Esptula
Co(NO3)2 6 H2O
Ni(NO3)2 6H 2 O
Normas de seguridad
Tome en cuenta el apartado "Prevencin de accidentes en el trabajo con sus-

tancias qumicas", que se encuentra en el captulo 1.
Procedimiento
1. Preparar las siguientes disoluciones:
a) 100 mi de Co(NO3)2 6 H2O 0.09 M.

b) 100 mi deNi(NO3)2 6 H2O 0.09 M.
92
Determinacin de la concentracin de cobalto y nquel en una mezcla
2. Verificar que las longitudes de onda de mxima absorbancia no se

sobrepongan, haciendo un barrido de 50 nm, de 10 en 10 nm, para
cada valor. El Co(NO3)2 tiene un mximo de absorcin en 510 nm y el
Ni(NO3 )2 lo tiene en 395 nm.
3. Medir la transmitancia del nitrato de cobalto y del nitrato de nquel en
510y395nm.
4. Medir la absorbancia de una mezcla problema en 510 y 395 nm.
A partir de los porcientos de transmitancia calcule los valores de ab-

sorbancia para cada longitud de onda. Si se hacen varias determinaciones,
tome el promedio.
Con estos datos calcule los coeficientes de extincin molar de los dos
iones en las dos diferentes longitudes de onda.
Calcule la concentracin molar de cada componente. Para obtener
mejores resultados efecte los clculos conservando tres cifras des-
pus del punto decimal. Reporte los resultados en molaridad y en mg de
Ni/ml y mg de Co/ml.
Cuestionario
1. Qu diferencia existe entre la fuente de radiacin de los espectrofo-

tmetros de la regin ultravioleta y los de la regin visible?
2. Calcule la concentracin de cada uno de los colorantes en la siguiente

mezcla analizada por espectrofotometra.
Una disolucin 0.02 M de un colorante rojo produce una absorbancia
de 0.8 a 515 nm y de 0.15 a 635 nm. Una disolucin 0.03 M de un
segundo colorante azul tiene una absorbancia de 0.2 a 515 nm y de 1.0
a 635 nm. Una mezcla de ambos colorantes dio una absorbancia de
0.55 y 0.825 a 515 y 635 nm, respectivamente.
93
Calcule la concentracin de una disolucin que contiene Fe (III), a partir

de la siguiente tcnica: A un mi de disolucin con hierro se le adicionan
acetona, disolucin de tiocianato de amonio y agua hasta 100 mi. La
determinacin se lleva a cabo con una celda de 2 cm. La absorbancia en
480 nm fue de 0.75. El coeficiente de extincin molar fue de 14 000.
Una disolucin que contiene una mezcla de AMP y GMP da una

absorbancia de 0.621 en 260 nm y de 0.214 en 280 nm. Calcule la
concentracin de AMP y GMP, si los coeficientes de absorcin molar
(en litros mol"1 cm"1) en estas longitudes de onda son:
AMP 260 nm 0.0154

280 nm 0.0025
GMP 260 nm 0.0117
280 nm 0.077
AMP = Adenosin mono fosfato

GMP= Glucosa mono fosfato
Las medidas fueron hechas con una celda de 1 cm de longitud de

paso ptico.
94
Espectrofotometra
II. TURBIDIMETRIA
El mtodo turbidimtrico se fundamenta en el fenmeno de que la luz, al pasar

a travs de un medio con partculas dispersas, con un ndice de refraccin
diferente al del medio, disminuye su intensidad debido a la dispersin.
Instrumentalmente se detecta la intensidad de la luz transmitida por el medio, o
sea, la luz no dispersada. La turbidimetra es muy similar a la colorimetra, en
cuanto que ambas se basan en la medicin de la luz transmitida por un medio y
emplean aparatos similares.
La intensidad de la luz que se dispersa en cualquier ngulo es funcin de la
concentracin de las partculas dispersantes, de su tamao y forma, de la longitud
de onda y de la diferencia entre los ndices de refraccin de las partculas y el
medio. La dispersin total de un determinado nmero de partculas (suponiendo
que no haya interacciones de dispersin mltiple), est dada por la suma de las
dispersiones individuales, mientras que la absorbancia del sistema es
directamente proporcional a la concentracin de partculas (Willard, 1974).
Es importante tomar en cuenta que la relacin entre la intensidad de la luz
dispersa y la concentracin no es simple, por lo que este tipo de determinaciones
deben tener un carcter emprico. La luz no es realmente absorbida por la
disolucin, sino que se dispersa en todas direcciones y no llega al detector. La
absorcin aparente o turbidancia obedece a una ecuacin anloga a la ley de
Beer en un intervalo limitado de concentraciones.
= kbc
"A " es la absorbancia aparente o turbidancia (Ewing, 1978, utiliza la letra S

como smbolo de turbidancia)
Po es la potencia radiante del haz de luz incidente
P es la potencia del haz de luz emergente
k es una constante
b es el recorrido del haz de luz en la celda
c es la concentracin de la disolucin
95
El valor de k se determina empricamente con una serie de patrones (Harris,

1992). Esta ecuacin es vlida slo para suspensiones muy diluidas, porque a
medida que la concentracin aumenta, una mayor proporcin de la luz dispersa
encuentra su camino hacia la fotocelda de medida a travs de una dispersin
mltiple (Ewing, 1978).
La ecuacin de la absorbancia aparente se puede transformar en:
UT _ P _ - rb
"T" es la transmitancia de la disolucin turbia

T es el coeficiente de turbidez y es igual a 2.303 k.
Prcticamente cualquier espectrofotmetro puede utilizarse en turbidimetra:

se mide la fraccin de la luz dispersada (la transmitancia), la cual es in-
dependiente de la intensidad de la fuente luminosa. La turbidimetra aplicada a
titulaciones no es muy precisa, debido a que la deteccin del punto final depende
del tamao de las partculas. Sin embargo, la sensibilidad es muy buena, por
ejemplo, los sulfates pueden determinarse hasta el orden de partes por milln.
En cuanto a la seleccin de la longitud de onda, sta no es crtica; sin em-
bargo, si la disolucin a trabajar contiene un soluto colorido, adems del
componente turbio, es preferible escoger una regin de longitudes de onda de
mnima absorcin. En cambio, si el componente turbio es el que absorbe, deber
trabajarse en la regin donde se presente la longitud de onda de mxima
absorbancia.
96
Prctica 7
Cuantificacin turbidimtrica de sulfatos
Introduccin
La aplicacin de tcnicas turbidimtricas es amplia, aunque en los ltimos aos

ha sido desplazada por la aplicacin de otros mtodos instrumentales ms
sensibles. Actualmente an existen procedimientos en el rea de farmacia y ali-
mentos que la siguen utilizando.
Por ejemplo, en la industria de vinos y tambin en la de aguardientes la
transparencia y brillantez son caractersticas importantes de la calidad de estos
productos. La presencia de materiales suspendidos, aun en cantidades tan
pequeas que resultan invisibles al embotellar, producirn un sedimento visible
y desagradable despus de cierto tiempo. La calidad de las aguas para procesos
industriales y la transparencia del agua para la alimentacin de calderas, son
otros ejemplos tpicos de aplicaciones comunes.
Hay tcnicas donde la turbidez en la muestra se desarrolla en condiciones
controladas. La reaccin de precipitacin debe efectuarse con rapidez y las
partculas formadas deben ser de baja solubilidad y de tamao pequeo. La
adicin de agentes tensoactivos o de coloides protectores es til, ya que favorece
el tamao de las partculas, promueve la nucleacin a expensas del crecimiento
de los cristales y aumenta lareproducibilidad de la tcnica.
Se pueden presentar problemas con la exactitud del mtodo, pues se
encuentra limitado por la falta de reproducibilidad de la forma fsica del
precipitado o, una vez formado, por la inestabilidad del mismo.
97
Objetivo
El alumno utilizar una tcnica turbidimtricapara la cuantificacin de una muestra

problema de sulfates.
Matraz aforado de 500 mi
Matraz aforado de 200 mi
4 matraces aforados de 250 mi
4 matraces Erlenmeyer de 500 mi
Vidrio de reloj
Agitador de vidrio
Balanza analtica
Esptula
Na2SO4
NaCl
HC12M
BaCL
Normas de seguridad

el captulo 1.
Para preparar soluciones diluidas de cido clorhdrico es recomendable
hacerlo en la campana de extraccin.
98
Cuantifcacin turbidimtrica de sulfatos
Procedimiento
1. Disolucin estndar de sulfatos. Prepare 500 mi de sulfato de sodio

anhidro con 200 ppm.
2. Disolucin de NaCl al 20 % (p/p) en HCl 2 M. Prepare 200 mi.
3. Prepare 4 disoluciones de 250 mi, con las siguientes concentraciones,
para elaborar la curva patrn: 25, 50, lOOy 150ppm. Agregue 25 mi
de la disolucin de NaCl en HCl 2 M a cada dilucin, antes de llevar a
la marca de aforo.
4. Trasvase cada una de las diluciones a un matraz Erlenmeyer de 5 00 mi
y adicione 1.0 g de BaCl2 a cada sistema. Agite muy bien y mida la
transmitancia, utilizando como blanco la disolucin patrn a 3 5 5 nm.
5. Solicite al profesor del laboratorio una muestra problema y mida su
transmitancia.
Trace la grfica de transmitancia en funcin de la concentracin (mg/1).

Interpole el dato de transmitancia en la grfica y determine la con-
centracin de la muestra problema.
Cuestionario
1. Cul es la diferencia entre una determinacin turbidimtrica y una efec-

tuada por nefelometra?
2. Investigue dos aplicaciones directas de la turbidimetra dentro de algn

proceso de elaboracin o de control de calidad de inters para usted.
3. Para medir la cantidad defluoruroen una muestra de agua de una ciudad,

se utilizaron dos litros de agua a la cual se le adicionaron 0.5 g de nitrato
99
de calcio. Se agit y la disolucin se evapor hasta 150 mi. Se midi la

transmitancia resultando de 55 %.
La tabla muestra las concentraciones utilizadas en la curva patrn y
los datos de transmitancia obtenidos. Calcule usted la concentracin del
fluoruro del agua citadina.
Concentracin ppm "A"

12 0.04
25 0.10
50 0.30
110 0.52
100
Bibliografa
Bibliografa
Blanco, M. et al 1989. "A Simple Method for Spectrophotometric Determi-

nation of Two-Components with Overlapped Spectra". J. Chem. Educ.
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Bosh-Reig, F. etal 1991. "Development of the H-point Standar-Aditions

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Components System". Anal Chem. 63:2424-2429.

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Cope, V. W. 1978. "Determination of the Performance Parameters of Spec-

trophotometer, and Advanced Analytical Experiment". J. Chem. Educ.
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Garca, V. Y. M. 1988. Equilibrio qumico aplicado a la qumica analtica.

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Koltoff, I. M. y E. B. Sandel. 1969. Quantitative Chemical Analysis. The

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101
Liebhafsky, H. A. y H. G. Pfeiffer. 1953.J. Chem. Educ. 30:450.
Lykos, P. 1992. "The Beer-Lambert Law Revisited a Development Without

Calculus"../ Chem. Educ. 69: 730-732.

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Pecsok, R. L. 1973. Mtodos modernos de anlisis qumico. Experimentos.

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Pecsok, R. L. y L. D. Shields. 1987. Mtodos modernos de anlisis qumico.

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Watty, M. B. 1989. Qumica analtica. Ed. Alhambra, Mxico.
Willard, H. H. et al. 1981. Mtodos instrumentales de anlisis. Ed. Cecsa,

Mxico.
102
Captulo 4
MTODOS ELECTROQUMICOS
Introduccin
Los mtodos electroqumicos abarcan una amplia variedad de tcnicas, basadas

en los diferentes fenmenos que se llevan a cabo dentro de una celda
electroqumica. Todas las mediciones elctricas bsicas, como la corriente, las
resistencias y el voltaje, se han empleado solas o en combinacin para propsitos
analticos. Los mtodos electroqumicos se clasifican en:
1. Potenciometra. Utiliza de manera directa la ecuacin de Nernst,

midiendo el potencial de los electrodos no polarizados bajo condiciones
de corriente igual a cero (sin aplicacin de corriente).
2. Voltametra y polarografia. Estos mtodos se usan para estudiar la
composicin de disoluciones electrolticas diluidas utilizando curvas de
corriente-voltaje. La polarografia se refiere a las aplicaciones del elec-
trodo de goteo de mercurio.
3. Conductimetra. Se emplean dos electrodos inertes idnticos, y se mide
el recproco de la resistencia que es la conductancia.
4. Cronopotenciometra. En esta tcnica se hace pasar una corriente
conocida a travs de la disolucin y se registra el potencial de los
electrodos en funcin del tiempo.
5. Coulombimetra. Involucra dos tcnicas: a) La coulombimetra de
corriente constante, que mantiene una corriente de este tipo durante
todo el perodo de la reaccin. En este caso se debe agregar un exceso
de un regulador de oxidorreduccin para que el potencial no aumente a
un valor que permita la realizacin de otra reaccin no deseada, b) Las
separaciones de potencial controlado o electrogravimetra. Se pueden
lograr separaciones cuantitativas por medio de una oxidacin o reduc-
cin electroltica y medir la sustancia separada por coulombimetra
o gravimetra: se mantiene un potencial de electrodo constante y se
detecta en forma continua el potencial del electrodo de trabajo en
comparacin con un electrodo de referencia.
Los mtodos de cronopotenciometra, coulombimetray las separaciones

de potencial controlado no se estudian en el curso de Qumica analtica II,
pero si existe inters acerca de estos mtodos, en la bibliografa de este captulo
se pueden encontrar referencias sobre el tema.
Todos los mtodos electroqumicos se caracterizan por su alto grado de
selectividad y precisin.
Celdas electroqumicas
Existen dos tipos de celdas: la galvnica y la electroltica. La primera es aquella

en que una reaccin de oxidorreduccin espontnea genera una corriente
elctrica (Harris, 1992). Si se suministra energa elctrica a una celda, con una
fuente de poder, entonces recibe el nombre de celda electroltica.
Electrodos de referencia
Un electrodo de referencia tiene un potencial conocido y constante, estn

constituidos por una hemicelda interna de referencia, que puede ser de plata,
cloruro de plata o de calomel (cada uno de ellos con su respectivo valor de
potencial estndar); tienen un electrlito de puente salino y un pequeo canal
en la punta del electrodo, a travs del cual fluye muy lentamente el electrlito,
permitiendo el contacto con los otros componentes de la celda.
Electrodos de calomel
Tienen un elemento no atacable, como el platino, el cual est en contacto con

mercurio, cloruro mercuroso (calomel) y con una disolucin neutra de cloruro
de potasio (de concentracin conocida) que se encuentra saturada con calomel.
106
Mtodos electroqumicos
HgCUs) 2Hg(\) + 2CI-
Existen tres versiones de este electrodo: el electrodo de calomel

saturado (ECS), en donde la disolucin de KCl es 4.2 N (figura 4.1), y
los electrodos que tienen 1.0 N o 0.1 N de la disolucin de KCl. Estos
ltimos se prefieren porque alcanzan sus potenciales de equilibrio ms
rpidamente y porque dependen menos de la temperatura que el de tipo
saturado. Los valores para estos tres electrodos a 30 C son:
Electrodo de calomel saturado (ECS) = 0.241 V

Electrodo de calomel normal (ECN) = 0.280 V
Electrodo de calomel dcimo normal = 0.335 V
Si requiere mayor informacin sobre los valores de potencial de los

electrodos de referencia, consulte el Lange s Handbook ofChemistry
o el Handbook Analytical Chemistry
Figura 4.1 Electrodo de referencia de calomel saturado.
107
Electrodos de plata-cloruro de plata
El electrodo contiene un alambre de plata recubierto con una capa de cloruro

de plata y sumergido en una disolucin de cloruro de potasio (de concentracin
conocida), la cual tambin est saturada con cloruro de plata.
AgCl (s) + e~ 4 Ag (s) + Cl-
E = 0.222 V
E (saturado con KC1) = 0.197 V
Electrodo de vidrio combinado de pH
Es el ms utilizado en el anlisis qumico cuantitativo, y est clasificado entre los

electrodos selectivos de iones.
En la parte interna del electrodo de vidrio hay un alambre de plata con un
extremo sumergido en una disolucin de HC10.1 M (figura 4.2). El bulbo de la
parte inferior del electrodo est fabricado con un vidrio de composicin espe-
cial. La superficie interior de esta membrana de vidrio est en contacto con la
disolucin de HC10.1 M, y la superficie externa, con la disolucin cuyo pH se
va a determinar. En las dos superficies la membrana de vidrio absorbe agua,
formando una capa de gel.
La zona del electrodo que responde a las variaciones de pH es la membrana
delgada de constitucin y construccin especial, ya que presenta una red de
silicato con tomos de oxgeno cargados negativamente, los cuales se encuentran
disponibles para coordinarse con cationes monovalentes, en particular el Na+.
Esta membrana tiene un espesor aproximado de 0.1 mm.
En estudios realizados con tritio (3H) como trazador radioactivo, se ha
demostrado que los iones hidrgeno no atraviesan la membrana de vidrio del
electrodo de pH. Las dos caras de la membrana estn en equilibrio con H+, y
los iones Na+ transportan las cargas a travs de la membrana. La diferencia de
potencial entre los electrodos de plata, cloruro de plata interno y externo depende
de la concentracin del ion cloruro en el compartimento de cada electrodo, as
como de la diferencia de potencial que existe entre las caras de la membrana.
108
Como la concentracin del cloruro es constante en cada compartimento, y la

concentracin de H+ es fija en la parte interna de la membrana de vidrio, el
nico factor que provoca un cambio en la diferencia de potencial es la variacin
del pH de la disolucin del analito en la parte externa de la membrana del
electrodo (Harris, 1992).
Un electrodo combinado de vidrio llega a responder en forma muy cercana
a lo indicado por la ecuacin de Nernst. Es por esto que cada cambio de una
unidad de pH en un analito da como resultado un cambio de potencial de
59.16mV.
Unin Electrodo de Ag
reemplazable
Proteccin de \ Membrana
la membrana d e vidrio
de vidrio
Figura 4.2 Vista parcial de un electrodo de vidrio combinado.
Calibracin del electrodo de vidrio
Un electrodo de pH debe calibrarse antes de ser utilizado. Para ello existen en

el mercado muchas disoluciones patrn de pH. Se recomienda calibrar el
electrodo y el potencimetro con una disolucin reguladora o de preferencia
con dos, seleccionadas de manera que el pH del problema se site dentro del
intervalo de las disoluciones patrn. El procedimiento de calibracin de cada
potencimetro puede variar con la marca y el modelo, por lo que es
recomendable la lectura de los instructivos de cada aparato en particular.
109
A continuacin se describe el uso y manejo del potencimetro, se explica

como calibrar en dos puntos el medidor de pH Conductronic modelo 20 y el
potencimetro de campo, Conductronic 10, modelo muy abundante en los
laboratorios de docencia de la Divisin de Ciencias Biolgicas y de la Salud.
Operacin del potencimetro

Conductronic modelo 20 o modelo 10
Descripcin
1. El o los electrodos se enjuagan con agua destilada y se secan suavemente

con papel absorbente. Cuide de no frotar el electrodo (sobre todo si el
cuerpo es de vidrio) porque esto produce electricidad esttica en la su-
perficie del vidrio.
2. Medir la temperatura de la disolucin cuyo pH se desea conocer y ajustar
el dato en el potencimetro con el botn correspondiente.
3. Sumergir el electrodo en una disolucin reguladora de pH 7 y dejar que
alcance su equilibrio (entre 30 y 60 segundos). Se ajusta el aparato al
valor de pH de la disolucin amortiguadora. Para realizar una lectura
correcta, el electrodo de vidrio se debe sumergir en una disolucin de
pH desconocido hasta una profundidad tal que la unin reemplazable
(figura 4.2), situada en la parte inferior, se encuentre por debajo del
nivel del lquido. Esto permite que los dos electrodos de plata midan la
diferencia del potencial entre las caras interna y externa de la membrana
de vidrio.
4. Colocar el selector de funciones del potencimetro en standby y sacar
el electrodo de la disolucin, enjuagndolo con agua destilada; secarlo y
sumergirlo en una segunda disolucin amortiguadora de pH diferente (si
se trabaja en intervalos cidos, la segunda disolucin puede ser de pH
4, si es en la zona bsica, el amortiguador puede ser de pH 10). Se
vuelve a mover el selector de funciones del potencimetro de standby a
pH y se hace la lectura. Si el electrodo responde siguiendo la ecuacin
110
de Nernst, el potencial debe variar en 0.05916 V por cada unidad de

pH a 25 C. Si el valor de pH de esta segunda solucin no coincide con
la lectura, sta se ajusta con el botn de temperatura. Los modelos
Conductronic 20 digitales tienen un tercer botn de "pendiente", ajuste
con l.
Cuidados
Cuando el electrodo no se usa se debe guardar en una disolucin acuosa, de

manera que la capa del gel hidratado no se seque. Si el electrodo ya est seco,
se reactiva sumergindolo en agua durante varias horas.
Los electrodos de vidrio se desgastan poco a poco, adems de ensuciarse
fcilmente con el mal uso, esto hace que la composicin del vidrio cambie,
provocando que la respuesta del electrodo se vuelva lenta o errnea; cuando
el problema ya es muy grave, ni siquiera se puede estandarizar. Si esto sucede
se recomienda un lavado con HC16 M y luego enjuagar con agua destilada.
Si el lavado no funciona, reporte el electrodo con su profesor o a la
Coordinacin de Laboratorios para que procedan a un lavado ms riguroso
con bifluoruro de amonio, NH4HF2, al 20 % p/p. Precaucin: este compuesto
provoca quemaduras en la piel y disuelve el vidrio, por lo que se debe preparar
en vaso de precipitados de plstico (Nalgen). El electrodo se sumerge en la
disolucin durante un minuto, disolviendo un poco de la membrana de vidrio y
exponiendo una superficie nueva. Enseguida se enjuaga el electrodo con
abundante agua destilada y se calibra nuevamente (Harris, 1992).
111
Prctica 8
Determinacin potenciomtrica de
constantes de ionizacin
Introduccin
El mtodo potenciomtrico consiste en la medicin de la diferencia de potencial

entre el electrodo indicador y el electrodo de referencia, en diferentes intervalos,
durante el transcurso de una valoracin.
Un potencial de electrodo corresponde aun proceso de equilibrio y durante
su medicin no debe alterarse, porque de otro modo el potencial obtenido ser
incorrecto. Los dos tipos principales de electrodos usados en el trabajo
potenciomtrico son:
a) De referencia: Su potencial no se afecta al cambiar la composicin de la

disolucin que se estudia.
b) Indicador o de medicin: Su potencial depende de la concentracin de
uno de los iones en la disolucin.
Aunque se dispone de innumerables sistemas de electrodos, se recomiendan

los descritos en la tabla 4.1, porque proporcionan el mayor intervalo de utilidad
(Meloan,1973).
Objetivo
El alumno aprender la instalacin y el uso de una celda para la determinacin

potenciomtrica de las constantes de ionizacin.
113
Tabla 4.1 Electrodos de referencia y medicin.
Sistema Referencia Indicador
cido base acuoso Calomel Vidrio

cido base no acuoso Ag-AgCI Vidrio
Red-ox orgnico Ni Pt
Red-ox inorgnico W Pt
Precipitacin, ion Ag Hg 2 so 4 Ag
Precipitacin metales pesados Calomel Metal pesado
Potencimetro
Electrodo combinado de vidrio para medir pH
Pipeta volumtrica de 20 mi
Vidrio de reloj
Esptula
Balanza analtica
Agitador de vidrio
Bureta de 50 mi
Soporte universal
Pinzas para bureta
Parrilla con agitacin magntica
Agitador magntico
cido tartrico
NaOH
Disolucin amortiguadora de pH 4 y 7
114
Determinacin potenciomtrica de constantes de ionizacin
Normas de seguridad

el captulo 1.
Para el manejo del NaOH es necesario el uso de lentes de seguridad y
guantes de neopreno, nitrilo o vinilo. Siempre debe manejarse en la
campana y no deben utilizarse lentes de contacto al trabajar con este
compuesto. Recuerde que es irritante y corrosivo y que puede causar
dao al tracto respiratorio, piel y ojos.
Procedimiento
1. Prepare las siguientes disoluciones:
100 mi de cido tartrico 0.1 M.

100 mi de hidrxido de sodio 0.1 M, estandarizado.
2. Calibre el medidor de pH, provisto del electrodo combinado de vidrio,

con las dos disoluciones amortiguadoras. Retire y lave muy bien los
electrodos con agua destilada.
3. Vierta 20 mi del cido tartrico en un vaso de 100 mi y aada 3 0 mi de
agua destilada. Sumerja el electrodo en la disolucin y ajuste la agitacin
con una barra magnticay una parrilla con agitacin magntica, de manera
que no golpee los electrodos. Con una bureta agregue disolucin de
NaOH en proporciones de 1 mi, salvo cerca del punto de equivalencia,
donde se han de agregar porciones de 0.1 mi.
4. Mida el pH despus de cada adicin de sosa y realice la determinacin
por triplicado.
115
Trace la grfica de los valores de pH en funcin de los mi de NaOH.

Con base en el pH de cada punto de equivalencia, obtenido grficamente,
calcule Kax y Ka2 para el cido tartrico y compare con los valores
reportados en la literatura. Explique cualquier diferencia que pueda
encontrarse.
Cuestionario
1. Qu caractersticas debe tener un electrodo para que pueda utilizarse

como electrodo indicador en un potencimetro?
2. Qu son los electrodos de referencia?
3. Qu es una celda galvnica y cmo se representa?
4. Una celda preparada de la siguiente manera:
Pt, H2(l atm), HA (0.15 M) // KC1 sat, Hg2Cl2, Hg,
dio un potencial de 0.575 v. Calcular la constante de ionizacin del cido.
116
Prctica 9
Titulacin potenciomtrica del ferrocianuro con cerio
Introduccin
El curso de la reaccin de titulacin potenciomtrica se sigue, midiendo con un

potencimetro la concentracin de una o de varias especies. En esta prctica
se estudia la titulacin del Fe (II) con el Ce (IV), en donde la variacin de las
concentraciones durante la titulacin es la siguiente:
Fe2+ + Ce4+ Fe3+ + Ce3+
Inicio Co
Agregado XCo
A.P.E. Co(l-X) eCo XCo XCo
P.Eq. sCo eCo Co Co
D.P.E. sCo Co(X-l) Co Co
A.P.E. antes del punto de equivalencia

P. Eq. punto de equivalencia
D.P.E. despus del punto de equivalencia
s valor pequeo de concentracin debido al equilibrio reversible
Co concentracin inicial de [Fe2+]
X relacin de la concentracin del [Fe2+]/[Ce3+]
117
En el inicio slo se tiene Fe2+, de manera que el valor de potencial no se

puede calcular tericamente.
Antes del punto de equivalencia (A.P.E.) se encuentran las cuatro especies
(Fe2+? Ce4+, Fe3+, Ce3+), y aunque la cantidad de Ce4+ es muy pequea,
el valor de potencial se puede medir en estos puntos utilizando la ecuacin
de Nernst y el par: Fe 37Fe2+.
En el punto de equivalencia (P. Eq.) los reactivos se terminan y el valor
del potencial est dado por la ecuacin:
E=
Despus del punto de equivalencia (D.P.E.), la especie que impone el

valor del potencial es el reactivo titulante Ce 47Ce3+.
Mtodos para determinar el punto de equivalencia
Existen varios mtodos para la determinacin del punto de equivalencia, se

describen los tres ms utilizados:
1. El mtodo ms simple se aplica principalmente a las valoraciones de

cidos y bases fuertes, donde hay cambios muy grandes de pH en el
punto final. Se traza la grfica de pH en funcin de los mililitros de
disolucin valorante, como se muestra en la figura 4.3, se escoge el pun-
to medio en el pH como punto de equivalencia y finalmente se baja una
lnea perpendicular a la lnea base. El punto de interseccin con sta es
el volumen gastado.
2. Mtodo de la primera derivada: Este segundo mtodo es ms preciso y
es aplicable en todos los casos de neutralizacin. Se traza la grfica de
los valores de ApH/Aml, en funcin de los mi de disolucin valorante.
Se obtiene una curva como la que se muestra en la figura 4.4.
118
pH
H
1
/!
11
/i
/ |
'j
mi de disolucin valorante
Figura 4.3 Mtodo grfico para obtener el volumen en el punto de
equivalencia.
ApH
Aml
Figura 4.4 Mtodo de la primera derivada.
119
Mtodo de la segunda derivada: Consiste en trazar la grfica de los

valores de A2pH/A2ml en funcin de los mi de valorante, como se observa
en la figura 4.5. El punto de equivalencia en la segunda derivada es
numricamente igual a cero, pues el valor de la ordenada pasa con gran
rapidez de un nmero positivo a uno negativo (Willard, 1981).
A 2 pH
A 2 ml
Figura 4.5 Mtodo de la segunda derivada.
Objetivo
El alumno efectuar una titulacin potenciomtrica redox, para el estudio ex-

perimental de la curva de valoracin del ferrocianuro de potasio con nitrato
crico amoniacal.
120
Potencimetro
Electrodo de vidrio para medir pH
Electrodo de referencia de calomel normal
Pipeta volumtrica de 20 mi
Vidrio de reloj
Esptula
Balanza analtica
Agitador de vidrio
Bureta de 50 mi
Soporte universal
Pinzas para bureta
Parrilla con agitacin magntica
Agitador magntico
Ferrocianuro de potasio trihidratado
Nitrato crico amoniacal
HCl concentrado
Disolucin reguladora pH 4
Disolucin reguladora pH 7
Normas de seguridad

el captulo 1.
Para el manejo del HCl es necesario el uso de lentes de seguridad y de
guantes de neopreno. Siempre debe manej arse en la campana y no deben
utilizarse lentes de contacto al trabajar con este compuesto. Recuerde
que es irritante, corrosivo y que puede causar dao al tracto respiratorio,
piel y ojos.
121
Procedimiento
1. Prepare las siguientes disoluciones:
100 mi de ferrocianuro de potasio trihidratado 0.1 M.

100 mi de nitrato crico amoniacal 0.1 M en HCl 1 M.
lOOmldeHCllM.
2. Empleando el aparato de la figura 4.6, instale su sistema de titulacin.

3. Calibre el potencimetro.
4. Vierta 20 mi de disolucin de ferrocianuro de potasio en un vaso de
precipitados de 100 mi. Agregue 20 mi de HCl 1 M, para cubrir los
electrodos. Titule con la disolucin de cerio con adiciones de 1 mi hasta
cerca del punto final, alrededor del cual debern hacerse adiciones de
0.1 mi. Efecte la titulacin por triplicado.
Potencimetrro
Electrodo
indicador
Electrodo de
calomel saturado
Figura 4.6 Titulacin potenciomtrica.
122
Trace las grficas de:
a) Potencial (E, V) en funcin de los mi de disolucin de cerio.

b) La primera derivada en funcin de los mi de disolucin de cerio.
c) La segunda derivada en funcin de los mi de disolucin de cerio.
Con base en los resultados calcule la concentracin del hierro (II).

Utilizando las grficas, encuentre el punto de equivalencia empleando el
mtodo de la segunda derivada.
Cuestionario
1. Enumere las condiciones experimentales que se requieren para la titulacin

potenciomtrica del vanadio (II) con permanganato de potasio.
2. Investigue cmo se representa una celda galvnica para la siguiente

reaccin, segn la IUPAC:
Sn4+ + Fe2+ Sn2++ Fe3+
en concentraciones Sn4+ 0.2 M y Fe2+ 0.2 M.
3. Se titulan 50 mi deFe 2+ 0.12 M con una disolucin de Ce 4+ 0.12 M. La

titulacin se efecta potenciomtricamente con electrodos de platino y
calomel saturado. Con base en los siguientes datos, encuentre el volumen
en el punto de equivalencia, empleando una grfica de equivalencia contra
el volumen del titulante, una grfica de la primera derivada y una grfica
de la segunda derivada.
123
V mi de Ce adicionado E(v)
12.5 0.496
25.0 0.524
37.5 0.552
45.0 0.58
47.5 0.559
48.5 0.613
49.5 0.641
49.55 0.644
49.7 0.655
49.8 0.665
49.9 0.683
50 0.944
50.1 1.205
50.2 1.22
50.3 1.233
50.4 1.24
50.4 1.24
51 1.263
55 1.305
62.5 1.328
75 1.346
124
Bibliografa
Bibliografa
Bates, R. G. 1973. Determination ofpH. Theory andPractice. Ed. Wiley

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Harris, D. C. 1992. Anlisis qumico cuantitativo. Ed. Iberoamrica, Mxico.
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Koltoff, Y. M. y E. B. Sandel. 1969. Quantitative Chemical Analysis. The

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Meites, L. (editor). 1963. HandbookofChemistry. Me Graw Hill, USA.

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Willard, H. H., L. L. Merrit Jr, y J, A. Dea. 1981. Mtodos instrumentales

de anlisis, Cecsa, Mxico.
126

se termin de imprimir en febrero de 1999
en Grupo Grfico.
La edicin consta de 1 000 ejemplares.
Alberto Reyes Dorantes estudi en

la Facultad de Qumica de la
UNAM la licenciatura de qumico
farmacutico bilogo, orientacin
en Tecnologa de Alimentos. Poste-
riormente realiz estudios en
viticultura y enologa en la Univer-
sidad Politcnica de Madrid, y
estudi la maestra en Biologa en la Facultad de
Ciencias de la UNAM. Ingres a la UAM-Iztapalapa
en 1980 como profesor investigador de tiempo
completo, y ha impartido cursos de Qumica de Ali-
mentos, Anlisis de Alimentos y Alimentos Fermen-
tados. Actualmente imparte el curso de Enologa en la
licenciatura de Ingeniera de los Alimentos. Ha cola-
borado como asesor y director en proyectos de investi-
gacin para la obtencin de vinos de mesa, vinos espe-
ciales y fabricacin de licores. Actualmente, en cola-
boracin con estudiantes de la licenciatura en Ingeniera
de los Alimentos, se dedica a aislar, seleccionar y ca-
racterizar cepas naturales de la familia Streptococcaceae
para inducir la fermentacin malolctica en vinos tintos
de la zona vincola del estado de Zacatecas, Mxico.
Frida P. Malpica Snchez realiz

sus estudios de licenciatura en la
Universidad Autnoma Metropo-
litana, Unidad Iztapalapa, Divisin
de Ciencias Bsicas y de la Salud,
obteniendo el ttulo de Ingeniera
en Alimentos. Comenz como pro-
fesora-investigadora en este mismo
plantel en 1993, colaborando en diferentes proyectos
de investigacin para la obtencin de vinos de mesa y
especiales y la fabricacin de licores, as como en la
elaboracin de notas de curso de temas relacionados
con la qumica analtica, por ejemplo: espectroscopia
infrarroja, potenciometra y cromatografa lquida de
alta resolucin. As mismo, ha impartido los cursos
de Microbiologa General y de Alimentos y Labora-
torios de Qumica Analtica I y II, as como la materia
de Enologa. Ha sido responsable de convenios esta-
blecidos entre la industria privada y la UAM-I para el
desarrollo de diferentes investigaciones, que adems
de su importancia intrnseca permiten a estudiantes o
pasantes de la licenciatura realizar su servicio social, a
la vez que establecen un mayor vnculo con la industria
alimentaria. La licenciada Malpica imparte actualmente
el laboratorio de la materia de Enologa.
Este manual va dirigido a todas las personas interesadas en conocer los principios y fundamentos
del anlisis instrumental.
Las tcnicas actuales de control de calidad se basan en gran parte en la cromatografa de gases.
La industria en general requiere de personal capacitado en el manejo de cromatgrafos no slo de
gases sino tambin de lquidos de alta resolucin.
En este manual se encontrarn los fundamentos de ambas tcnicas, as como prcticas para el uso del
anlisis cualitativo y cuantitativo en las cuales se manejan las tcnicas de uso comn en patrones in-
ternos y externos.
En cuanto al anlisis espectral, se lleva de la mano al lector para que pueda hacer un anlisis
completo, desde la seleccin de la longitud de onda de mxima absorcin hasta la cuantificacin de
una muestra problema.
En resumen, este libro puede ser utilizado por alumnos de cualquier licenciatura cuyos programas de
estudio manejen la cromatografa de gases y de lquidos, la potenciometra y la espectrofotometra.
Por su parte, los profesionales de la educacin encontrarn en l un apoyo para manejar estos temas
no slo en la parte prctica sino tambin en su parte terica, adems de contar con buenas y actua-
lizadas referencias bibliogrficas.
N.E. 0726
$65.00
9 789706 543639
Manl. prct. qumica anal. II Libros
da Texto
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Manual de prcticas

Jos Ramn Verde Calvo Ma. de Lourdes Escamilla Hurtado

Casa abierta al tiempo

Ramn Verde Calvo es egresado

Mara de Lourdes Escamilla Hur-

Casa abierta al tiempo UNIVERSIDAD AUTNOMA METROPOLITANA

Dr. Jos Luis Gzquez Mateos

Lic. Edmundo Jacobo Molina

Dr. Eduardo Carrillo Hoyo

Dr. Jos Luis Arredondo Figueroa

Dr. Gerardo Saucedo

Ma. del Rosario Hoyos Alea

Jos Ramn Verde Calvo

Ma. de Lourdes Escamilla Hurtado

Alberto Reyes Dorantes

Frida Malpica Snchez

Cuidado de la edicin y correccin de estilo:

Primera impresin: 1999

UNIVERSIDAD AUTNOMA METROPOLITANA

Captulo 1. CROMATOGRAFA DE GASES 11

Prctica 1. Anlisis cualitativo de cromatografa

de gases (dos columnas) 33

Prctica 2. Factor de respuesta en cromatografa de gases 37

Captulo 2. CROMATOGRAFA LQUIDA DE

Prctica 4. Separacin y cuantificacin de una muestra de antocianinas

Prctica 5. Desarrollo de un mtodo espectrofotomtrico 85

Prctica 6. Determinacin por espectrofotometra de la

Prctica 7. Cuantificacinturbidimtrica de sulfates 97

Captulo 4-MTODOS ELECTROQUMICOS 103

Prctica 8. Determinacin potenciomtnca de constantes

Prctica 9, Titulacin potenciomtnca del ferrocianuro con ceno 117

El presente manual tiene como meta apoyar de la manera ms amplia el curso

Por sus caractersticas analticas la cromatografa puede ser:

a) Cromatografa cualitativa, que consiste solamente en la separacin

De acuerdo con la naturaleza de la fase estacionaria, la cromatografa de

a) Cromatografa gas slido (CGS), tambin conocida como croma-

Manual de prcticas de qumica analtica II

no correr por la columna ya que es retenida fuertemente por sta. Si las

Figura 1.1 Cromatografa de adsorcin.

La tabla siguiente muestra algunos ejemplos de columnas capilares comer-

Tabla 1.1 Columnas capilares comerciales.

HPSoM 200 C Hidrocarburos, gas natural

Poraplot Q 250 C Alcoholes voltiles en

Poraplot U 190C Compuestos voltiles polares,

b) Cromatografa gas lquido (CGL) o cromatografa de reparto, en

Soluto disuelto en la fase

Figura 1.2 Cromatografa de reparto.

El soporte slido ideal no debe tener efecto en el proceso

Manual de prcticas de qumica analtica II

Componentes importantes de un cromatgrafo de gases

Uno de los puntos ms importantes a considerar en la cromatografa de gases,

de retencin de estos ltimos en la columna. Rowan (1961), al igual que Desty

Manual de prcticas de qumica analtica II

Tabla 1.2 Fases estacionarias lquidas de uso comn en

Escualeno Escualeno I 20/100

Apienzon L Apienzon L I 50/300

SE-30 100% goma de silicona I 50/300

OV-1 100% goma de silicona I 50/300

UCW-982 goma del 99% metil, 1% vinil II 0/300

DC-200 100% de metil silicona lquida II 0/250

OV-101 100% de metil silicona lquida II 0/350

SP-2100 100% de metil silicona lquida II 0/350

SE-52 0 SE-54 fenilo al 5% II 50/300