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UNIVERSIDAD NACIONAL PEDRO RUIZ GALLO

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLGICAS

DECANATO

PROYECTO DE INVESTIGACION

TITULO

Accin de la Cefalosporina en Cavia porcellus (Cobayo) y la


presencia de Anemia hemoltica

AUTOR

Mestanza Carrasco Katherine Elizabeth.

ASESOR

Blgo. Espinoza Valera Carlos

____________________________________
FIRMA ASESOR
MSC. CARLOS ESPINOZA VALERA

Lambayeque, Setiembre del 2016


PROYECTO DE INVESTIGACIN
I. GENERALIDADES

1. TTULO:
Accin de la Cefalosporina en Cavia porcellus (Cobayo) y la presencia de
Anemia hemoltica

2. PERSONAL INVESTIGADOR:
Autor: Mestanza Carrasco Katherine Elizabeth.

3. TIPO DE INVESTIGACIN: Aplicada experimental


De acuerdo al fin que se persigue: Aplicada
De acuerdo al diseo de la investigacin: Experimental

3. AREA DE INVESTIGACIN: Hematologa-Inmunologa

4. LINEA DE INVESTIGACIN: Enfermedades autoinmunes producidas por


frmacos

5. LOCALIDAD DE EJECUCIN:
Laboratorios de Microbiologa de la Facultad de Ciencias Biolgicas de la
Universidad Nacional Pedro Ruiz Gallo
INSTITUCIN DE EJECUCIN: Universidad Nacional Pedro Ruiz Gallo

6. DURACIN DEL PROYECTO: 3 meses

7. FECHA DE INICIO: 15 de Setiembre


8. FECHA DE TERMINO: 15 de Diciembre
9. CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES

ACTIVIDAD 2016

2da 3era 4ta 5ta 6ta 7ma 8va 9na 10ma 11va 12va 13va 14va 15va
Semana Semana Semana Semana Semana Semana Semana Semana Semana Semana Semana Semana Semana Semana

PLANEAMIENTO

Revisin
bibliogrfica
Elaboracin
del proyecto
Presentacin
del proyecto
Aprobacin del
proyecto
EJECUCIN

Recoleccin de
la muestra
Evaluacin de la
muestra
Realizacin de
los
experimentos
COMUNICACIN

Anlisis e
Interpretacin
Elaboracin de
Informe
Presentacin de
Informe
10. FINANCIAMIENTO

Autofinanciamiento. El equipo y local sern prestados por la Facultad de


Ciencias Biolgicas de la Universidad Pedro Ruiz Gallo.

Bienes y Servicios Costo


Material Biolgico S/. 20.00
Manutencin del animal S/.50.00
de experimentacin
Material de laboratorio S/. 100.00
Material de escritorio e S/. 20.00
impresiones
Procesamiento de datos S/.40.00
Pasajes y viticos S/. 80.00
TOTAL S/.310
II. ASPECTOS DE LA INVESTIGACIN
2.1. REALIDAD PROBLEMTICA
La anemia hemoltica es un grupo de trastornos hemolticos (sea intravascular como
extravascular), que causan la disminucin de la masa de glbulos rojos sanguneos.
A diferencia de anemias no hemolticas (por dficit de hierro por ejemplo), en las
anemias hemolticas la sobrevida de los glbulos rojos en sangre perifrica (normal
entre 90 y 120 das) est acortada.
La mdula sea eritropoytica, en un intento de mantener la produccin de eritrocitos
prematuramente destruidos, presenta una considerable hiperplasia.
Muchos de estos cuadros son de carcter autoinmune y muchos de los agentes que
desatan esta respuesta son antibiticos.
Las cefalosporinas, son una clase de antibiticos beta-lactmicos junto con las
cefamicinas pertenecen a un subgrupo llamado los cefamos. Las cefalosporinas son
similares a las penicilinas, pero ms estables ante muchas -lactamasas bacterianas
y, por lo tanto, tienen un espectro de actividad ms amplio.
El cobayo es un animal muy comn para la experimentacin en investigacin
biomdica, de ah que la expresin cobayo o conejillo de Indias se utilice
popularmente como sinnimo de objeto de experimentacin.

2.1.1.- Planteamiento del Problema:


La anemia hemoltica producida por medicamentos se debe al uso excesivo de estos,
debido a su creencia de las personas que al consumir ms medicamento
(cefalosporina) se curara ms rpido, pero lo que no saben es que se produce una
sobredosis lo cual crea anticuerpos que detectan a los glbulos rojos como agentes
extraos y los atacan producindose as anemia hemoltica.

2.1.2.- Formulacin del problema:


Para el desarrollo del presente trabajo se ha propuesto el siguiente problema:
Sera posible que por la accin de Cefalosporina se produzca anemia hemoltica?

2.1.3.- Hiptesis
Al inocular Cefalosporina a Cavia porcellus durante dos meses se lograra producir
Anemia hemoltica.
2.1.4.- Justificacin e Importancia del estudio:
El presente trabajo se realiza para evaluar el potencial del antibitico cefalosporina
para producir un cuadro de anemia hemoltica mediante la determinacin del nmero
de dosis necesarias para producir dicho cuadro.
El estudio se realiza para informar pertinente a las personas encargadas de los
tratamientos con este medicamento y a la poblacin en general como medio
informativo acerca de las posibles reacciones adversas al utilizar excesivamente
este medicamento.

2.1.5.- Objetivos:
Determinar el animal de experimentacin.
Determinar el recuento basal de los glbulos rojos normales y lisados
del animal de experimentacin.
Determinar el volumen y dosis.
Determinar el periodo de inoculacin.
Determinar la va de inoculacin.
Determinar el recuento post basal de glbulos rojos sanos y
hemolticos.

2.2. MARCO TEORICO


2.2.1. Antecedentes del problema
La anemia hemoltica producida por cefalosporina no es un cuadro comn, sin
embargo algunos autores han realizado estudios de los casos con que se
encontraron.
El Servicio de Medicina Interna del complejo hospitalario A. Marcide-Novoa Santos
de Corua escribi un artculo sobre la nefritis intersticial y la anemia hemoltica en
un paciente que estuvo medicndose con cefalosporina (Iglesias, 2001).
El Hospital Clnico San Carlos de Madrid inform de un caso de anemia hemoltica
por cefalosporina en una joven de 25 aos quien padeca de una reinfeccin de
tuberculosis. (Daz et al., 2013).

2.2.2.- Bases tericas cientficas


La Anemia Hemoltica:
La anemia hemoltica es un grupo de trastornos hemolticos (sea intravascular como
extravascular), que causan la disminucin de la masa de glbulos rojos sanguneos.
A diferencia de anemias no hemolticas (por dficit de hierro por ejemplo), en las
anemias hemolticas la sobrevida de los glbulos rojos en sangre perifrica (normal
entre 90 y 120 das) est acortada.
La mdula sea eritropoytica, en un intento de mantener la produccin de eritrocitos
prematuramente destruidos, presenta una considerable hiperplasia. En el frotis
sanguneo, se observan policromasia (variacin de color de los glbulos rojos) por
aumento del nmero de reticulocitos. Raramente se ven eritroblastos u otros
precursores eritrocticos en la periferia. En el plasma, el aumento de la fraccin libre
(no conjugada o indirecta) de la bilirrubina y de la LDH de origen eritrocitario es
caractersticos. La haptoglobina (protena de transporte de la fraccin proteica de la
hemoglobina) est disminuida por aclaramiento en el sistema fagoctico-mononuclear.
Extravascular. Si la hemlisis es extravascular, la destruccin de los glbulos
rojos ocurre principalmente en las sinusoides venosas del bazo y otros rganos.
Este tipo de mecanismo no presenta hemoglobinuria y la prueba de Coombs
directa es negativa (ausencia de anticuerpos anti-glbulo rojo).
Intravascular. Si la hemlisis es intravascular, la destruccin de los eritrocitos
ocurre principalmente dentro de los vasos sanguneos. Este tipo de mecanismo
presenta hemoglobinuria (reaccin positiva para sangre en la tira reactiva de
orina) y hemosiderinuria y la prueba de Coombs directa es positiva (presencia
de anticuerpos anti-glbulo rojo).
Son muchas las razones que pueden ocasionar una anemia hemoltica, entre las ms
comunes estn:
Alteraciones hereditarias
Entre las enfermedades hereditarias encontramos:
Esferocitosis hereditaria
Lisis inmunitaria
Infecciones
Hemorragias agudas (por traumatismo)
Lesiones por frmacos u otros agentes qumicos: se diagnostica a las lesiones
por frmacos como anemias inducidas por drogas, que presentaran un cuadro
similar a las anemias hemolticas autoinmunes, pues hay ruptura de la
membrana de los glbulos rojos produciendo la hemlisis.
Anemia Hemoltica Autoinmune (AHA)
En las anemias hemolticas autoinmunes (AHA), alguna alteracin en el sistema
inmunolgico del individuo hace que se produzcan anticuerpos contra antgenos de
sus propios eritrocitos. Como consecuencia, hay un aumento en la tasa de
destruccin de los glbulos rojos del paciente por intervencin del sistema
inmunolgico.
Esta enfermedad fue la primera en que la autoinmunidad pudo ser reconocida
claramente como factor etiolgico de ciertas patologas, y fue as como se introdujo
el trmino autoinmune en el lenguaje mdico. An hoy, permanece como la ms
claramente definida de las enfermedades autoinmunes, en el sentido de que se
puede demostrar la unin del anticuerpo a la superficie de la clula blanco.
La evidencia de autoinmunidad dirigida contra los eritrocitos se demuestra
usualmente por la prueba directa de antiglobulina, o por las que miden
autoanticuerpos en el suero del paciente demostrables por varios mtodos, o por
ambas. Las primeras descripciones de este trastorno aparecieron en la literatura
francesa durante la primera dcada de este siglo. En 1938, Dameshek y Schwartz
demostraron que en ciertos pacientes exista una prueba de fragilidad osmtica
anormal, esferocitosis y hemolisinas sricas anormales. La aparicin posterior de la
tcnica de Coombs, dio base para grandes avances en este campo. Se han venido
caracterizando a los anticuerpos responsables, e introduciendo tcnicas
inmunolgicas y serolgicas cada vez ms refinadas, pero an hay grandes
controversias sobre la manera en que estas inmunoglobulinas se enlazan a los
glbulos rojos del paciente.
Las AHA se clasifican de dos maneras:

En base a la presencia o ausencia de desrdenes significativos


coexistentes:
IDIOPATICAS PRIMARIAS:
Aquellas en que la enfermedad hemoltica domina el cuadro clnico, y no se
acompaa de otra enfermedad aparente.
SINTOMTICAS SECUNDARIAS:
Aquellas en la que el proceso hemoltico est estrechamente relacionado a
alguna enfermedad bien caracterizada.

En base a las caractersticas serolgicas del proceso autoinmune:


Por Autoanticuerpos calientes (Ac-Calientes):
La mxima actividad de los autoanticuerpos se da a la temperatura de 37C, o
sea la corporal.

Por Autoanticuerpos fros (Ac-Fros):


La mxima actividad de los autoanticuerpos ocurre a temperaturas entre los 2 y
los 4C.
El tipo de AHA por Ac-caliente ocurre tanto en los casos idiopticos como en los
secundarios; lo mismo es aplicable al tipo de Ac-fros.

Anemia Hemoltica Inducida por Drogas


La administracin de medicamentos puede provocar la aparicin de una gran
variedad de anormalidades hematolgicas, entre ellas la anemia hemoltica
inmune por drogas (AHIPD). Del 16 al 18 por ciento de las anemias hemolticas
adquiridas corresponden a este tipo. En 1954, Harris demostr que algunos
compuestos qumicos podan causar anemia hemoltica-Coombs positiva, al
observar a un paciente tratado con estibofeno, droga usada para el tratamiento
de la esquistosomiasis. Posteriormente, se fueron encontrando otros
compuestos capaces de ocasionar lo mismo, aunque mediante diferentes
mecanismos Debido a su bajo peso molecular, muchos medicamentos slo
pueden actuar como inmungenos al unirse con macromolculas de los tejidos,
por ejemplo protenas. Este complejo se denomina conjugado hapteno-protena,
y es capaz de inducirla formacin de Ac especficos, pues el producto qumico
sencillo (no conjugado) no es capaz de inducir dicha sntesis.
En la actualidad se han clasificado estas anemias en cuatro grupos, segn el
mecanismo de accin de la droga.

Mecanismo tipo hapteno (modelo estibofeno):


El estibofeno es representativo de esta clase, aunque varias drogas pertenecen
a este grupo, como quininas, quinidina, sulfonamidas, derivados de la
sulfanilurea, de la fenacetina, PAS, y otras. Estas drogas actan unindose a
una protena plasmtica, estimulando as el sistema inmune. Los Ac formados
reaccionan contra el hapteno en el pIasma, y estos complejos antgeno-
anticuerpos (AcAg) se depositan sobre los eritrocitos. Dichos complejos
activan el complemento tanto sobre el eritrocito como en el plasma.
Mecanismo tipo hapteno (modelo penicilina):
La penicilina es capaz de causar hemlisis inmune en pacientes a los que se
les administra altas dosis por va intravenosa. En este mecanismo la droga
tambin acta como hapteno, pero de una manera diferente del estribofeno. Se
une covalentemente a algunas protenas de la membrana del glbulo rojo y
entonces adquiere la antigenicidad necesaria para que se sintetice IgG dirigidas
contra los glbulos rojos recubiertos de penicilina. En algunos casos puede
participar la IgM; sin embargo este Ac contra la penicilina es por lo comn inocuo.
Aun as, Bird et al., en 1975, reportan el caso de un cuadro hemoltico agudo
por Ac-IgM antipenicilina en un nio de tres aos que estaba recibiendo
tratamiento por va oral.

Mecanismo desconocido (modelo aldomet):


La droga antihipertensiva aldomet o alfa-metildopa, es la que con ms
frecuencia induce hemlisis inmune, y el total de casos reportados supera al
total de todas las otras drogas descritas. Fue sealando su papel por primera
vez en 1966 y, paradjicamente, su mecanismo de accin an no ha sido
esclarecido. Se sabe que los anticuerpos formados son lgG y que poseen
especificidad para el antgeno del sistema Rh0. La prueba de Coombs con suero
anti-gamma es positiva. El desarrollo de los Ac es dependiente de la dosis de
droga, y con frecuencia se forman concomitantemente Ac como factor
reumatoide, y antimucosa gstrica.

Mecanismo de adherencia no especfica:


Este mecanismo implica la adherencia inespecfica (no inmunolgica) de una
protena srica normal a la membrana eritroctica luego de que la droga se une

a dicha membrana. Como consecuencia, la prueba de Coombs para lgG y C 3
es positiva. La droga puede modificar la membrana celular de tal manera que la
clula admita protenas de modo no inmunolgico. In vitro, los eritrocitos
sensibilizados por la cefalotina, si se incuban en un plasma normal, se llega a
recubrir de albmina, lgG, lgA, lgM, Alfa-1-anti-tripsina, alfa-2-macroglobulina,
,C4
C3 y fibringeno. Por otro lado, se ha propuesto que la droga se combina
con la membrana celular del eritrocito como lo hace la penicilina, y como son
qumicamente parecidas puede haber una reaccin cruzada de los anticuerpos
anti-penicilina con la cefalotina.

Cuadro clnico en la AHIPD


La hemlisis ocurre en presencia del medicamento. En la mayora de los pacientes
hay un cuadro de hemlisis intravascular agudo con hemoglobinemia y
hemoglobinuria. Alta incidencia de fallo renal es observada, as como coagulacin
intravascular diseminada. Los hallazgos de laboratorio son muy similares a los de
una AHA por anticuerpos calientes. Ocasionalmente puede acompaarse de
leucopenia, trombocitopenia, o ambas. El cuadro hemoltico, como se ha
mencionado, es muy variable en cuanto a su gravedad.
Diagnstico
Un examen fsico puede mostrar una esplenomegalia. Se pueden hacer muchos
exmenes de sangre y orina para ayudar a diagnosticar esta afeccin.
Los exmenes pueden abarcar:
Conteo de reticulocitos absoluto.
Prueba de Coombs directa o indirecta.
Niveles de bilirrubina indirecta.
Conteo de glbulos rojos.
Haptoglobina srica.
Hemoglobina en orina.

III. MARCO METODOLOGICO


a. DISEO DE CONTRASTACIN DE LA HIPOTESIS
Para contrastar la hiptesis se utilizar un diseo cuasi-experimental en sucesin
(Vsquez, 2012) en donde se medir la variable dependiente antes y despus
del estmulo.
b. POBLACION Y MUESTRA
Poblacin: Cuyes (Cavia porcellus) de crianza domstica.
Muestra: Un espcimen sano de Cavia porcellus.
c. MATERIALES Y MTODOS
Materiales
Material Biolgico:
Un espcimen de Cavia porcellus.
Material de Laboratorio:
Jeringas de 10 ml
Jeringas de 5 ml
Agujas hipodrmicas N21 y N26
Tubos de ensayo
Tubos Vacutainer con EDTA
Lminas portaobjeto
Lminas cubreobjeto
Pipeta de Thoma 101
Cmara de Neubauer
Algodn
Alcohol
Soluciones, Colorantes y frmacos:
Solucin Salina Fisiolgica al 0.9 % de NaCl
Agua destilada
Cpsulas de 300 mg de Cefakosporina.
Solucin de Gower
Colorante Wright
Aceite de Inmersin

Equipos:
Agitador mecnico
Microscopio de campo claro
Mesa de diseccin
Guillotina

d. Procedimientos
Verificacin del estado de los eritrocitos del animal de experimentacin:
Recuento de Eritrocitos

a) Obtener por puncin venosa una muestra de sangre del animal de


experimentacin, recibir la sangre en un tubo con anticoagulante.
b) Llenar la pipeta de Thoma 101 con sangre hasta la marca 0.5, completar con
el reactivo de Gower hasta la marca 101 haciendo rotar la pipeta con los
dedos.
c) Obturar los extremos y llevar al agitador mecnico.
d) Dejar caer tres gotas y llenar la cmara de Neubauer, dejar reposar de 1 a
3 minutos.
e) Observar el microscopio a menor y mayor aumento y realizar el conteo de
eritrocitos en los cuadrantes V, W, X, Y, Z de la cmara de Neubauer.
f) Aplicar la siguiente frmula:
Eritrocitos Totales= V+W+X+Y+Z x 10 000
g) Comparar con los valores de referencia:

Eritrocitos Totales en Cuyes: 4.84 0.49 millones/mm3


Comprobacin de la Presencia de Anemia Hemoltica
En caso de comprobarse anemia con la prueba anterior, comprobar que esta sea
del tipo hemoltico
a) Tomar una muestra de sangre superficial y realizar un frotis sobre una
lmina porta objetos.
b) Agregar el colorante Wright cubriendo toda la lmina, pero evitando que
derrame por los costados. Dejar reposando de 5 a 8 minutos.
c) Agregar agua destilada cuidadosamente y esperar la formacin de un brillo
metlico. Dejar reposar por 10 a 15 minutos.
d) Lavar con agua corriente cuidadosamente y secar al ambiente.
e) Observar en el microscopio con objetivo de inmersin.
f) Comprobar si los eritrocitos estn hemolizados o no para determinar el tipo
de anemia.

Preparacin del inculo y su administracin


a) Pesar el animal de experimentacin.
b) Segn el peso preparar una solucin del antibitico de manera que se le
administre diariamente 10 mg de este por kilogramo, tener en cuenta que
cada cpsula comercial de cefalosporina posee 300 mg del compuesto. Por
ejemplo: Si el peso fuese 2 Kg entonces se disolver una cpsula de
antibitico en 100 ml de Solucin Salina Fisiolgica, as para poder
administrarle los 20 mg de antibitico correspondiente a los 2 Kg de peso
tendremos que tomar 6,67 ml de la solucin preparada.
c) Administrar la dosis obtenida por va oral de manera diaria durante dos
meses.

Comprobacin de la Induccin de la Anemia Hemoltica


a) Realizar un recuento de eritrocitos para comprobar la presencia de Anemia.
b) Realizar un frotis de sangre y la correspondiente tincin Wright, observar la
presencia de hemlisis.
c) Repetir el procedimiento semanalmente y registrar los valores obtenidos.
IV. RESULTADOS

El clculo del inculo de antibitico fue calculado segn el peso del animal de
experimentacin:

Tabla 1. Clculo y cantidad de inculo utilizado

Valores
Peso 720g

Cantidad necesaria de 7,2g


antibitico

Cantidad de solucin madre 2.88 mL


usada como inculo

Para evaluar el estado de salud del cuy se realiz un recuento basal de


glbulos rojos normales y lisados

Tabla 2. Recuento basal de eritrocitos en el animal de experimentacin

Cuadrantes Recuento N de eritrocitos/mm3


V 90 4.4 millones
W 85
X 93
Y 87
Z 89
TOTAL 444

Al animal de experimentacin se le administr diariamente la cantidad calculada de


inculo durante 6 semanas aproximadamente. Se realizaron recuentos de eritrocitos
semanalmente en busca de la presencia de anemia. En algunos casos el inculo fue
recalculado por las variaciones en el peso del animal.

Tabla 3. Recuento semanal de los eritrocitos del animal inoculado

Semana Inculo diario(mL) N de Eritrocitos/mm3


(millones /mm3)
1era 2.88 4.41
2da 2.88 4.13
3era 2.88 4.1
4ta 2.76 4.36
5ta 2.76 4.23
6ta 2.76 4.15
4.45
4.4
4.35
4.3
4.25
4.2
4.15
4.1
4.05
4
3.95
3.9
1ra 2da 3ra 4ta 5ta 6ta
semana semana semana semana semana semana

V. DISCUSIN
Estos resultados se deban probablemente al tiempo en que se administr el
antibitico. Los tratamientos para infecciones son cortos, de 1 semana como
mnimo (Abbate, 2007); dentro de este tiempo la cefalosporina es
administrada ininterrumpidamente todos los das. Los sndromes de anemia
hemoltica se han reportado en casos de pacientes con tratamiento en
infecciones, de tuberculosis con reinfeccin secundaria (Daz, 2013) o en
casos de una suspensin en el tratamiento primario con la posterior retoma
de este (Garca, 2003). Parece ser que la administracin de continua de
cefalosporina con un cierto periodo de interrupcin y con la posterior
reanudacin de la ingesta de este antibitico, causan los cuadros
hemolticos (Chvez, 2009).
VI. CONCLUSIONES

El estado de salud del animal de experimentacin es normal para poder


iniciar el proyecto.
Determinamos que la va de inoculacin ms adecuada es la va oral, la
usada normalmente para medicamentos en pastillas.
El volumen del inoculo se determin pesando el animal y preparando una
solucin madre
El volumen del inoculo va variando de acuerdo a el peso del animal durante
el proyecto.
Se logr inducir anemia hemoltica por la presencia de globulos rojos
hemolisados por accin de la Cefalosporina.

VII. RECOMENDACIONES
Examinar el estado de salud del animal de experimentacin.
Incrementar ligeramente el volumen del inoculo para observar los efectos
del medicamento a corto plazo.
Hacer estudios con sujetos control para obtener datos ms fiables.
Realizar estudios de los tipos de antibiticos que puedan desatar cuadros
de anemia hemoltica.
Estudiar los posibles efectos negativos de los Cefalosporina utilizados en
enfermedades crnicas.
Realizar pruebas experimentales similares a las ejecutadas para nuevos
frmacos producidos para comparar con el medicamento utilizado.
VIII. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

AURIOLES E. et al. 2014. Anemia hemoltica autoinmune por

antibiticos. Rev. Actualidad en Farmacologa y Teraputica 12(1): 32-

34. Espaa.

BONILLA J. et al. 2007. Glucosa-6-fosfato deshidrogenasa (G6PD).

Respuesta de los hemates y otras clulas humanas a la disminucin en

su actividad. Rev. Colombia Mdica Vol. 38: 68-75. Colombia.

CHAVES M. et al. 2009. Anemias Hemolticas por Autoinmunidad y por

Mecanismos Inmunes Inducidos por Medicamentos. Rev. Costarricense

de Ciencia Mdica Vol. 2. Costa Rica.

DAZ-POLLAN et al. 2013. Anemia hemoltica secundaria a

rifampicina en paciente diagnosticado de reinfeccin por tuberculosis

pulmonar. Rev Esp Quimioter 2013;26(4):369-370. Madrid, Espaa.


ANEXOS
Verificacin del estado de los eritrocitos del animal de experimentacin

Obtenemos por puncin venosa una muestra de sangre del


animal de experimentacin,

Llenamos la pipeta de Thoma 101 con sangre hasta la marca


0.5, completamos con el reactivo de Gower hasta la marca 101
Llenamos la cmara de Neubauer y dejamos reposar de 1 a 3
minutos.

Observamos el microscopio a menor y mayor aumento y realizamos el


conteo de eritrocitos en los cuadrantes V, W, X, Y, Z de la cmara de
Neubauer.
Verificacin del estado de los eritrocitos del animal de experimentacin

Segn el peso del animal preparamos una solucin madre del


antibitico

Administramos la dosis obtenida por va oral de manera diaria


durante dos meses.
Comprobacin de la Induccin de la Anemia Hemoltica

Realizamos un frotis de sangre y la correspondiente tincin Wright para poder


observar la presencia de hemlisis.

Fuente: internet Fuente: observacin en el microscopio