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DETERMINACION DE EXTRACTO ETEREO (GRASA BRUTA)

I. INTRODUCCION
Los lpidos, junto con las protenas y carbohidratos, constituyen los principales
componentes estructurales de los alimentos. (Nielsen, 1998). Los lpidos se definen como
un grupo heterogneo de compuestos que son insolubles en agua pero solubles en
disolventes orgnicos tales como ter, cloroformo, benceno o acetona. Todos los lpidos
contienen carbn, hidrgeno y oxigeno, y algunos tambin contienen fsforo y nitrgeno
(Aurand et al, 1987). Los lpidos comprenden un grupo de sustancias que tienen
propiedades comunes y similitudes en la composicin, sin embargo algunos, tales como los
triacilgliceroles son muy hidrofbicos. Otros, tales como los di y monoacilgliceroles tienen
movilidad hidrofbica e hidroflica en su molcula por lo que pueden ser solubles en
disolventes relativamente polares (Nielsen, 1998).

II. OBJETIVOS:
Establecer la metodologa de extraccin por solvente en caliente para la
determinacin del extracto etreo.
Adiestrar al estudiante en el cuidado y precauciones en la preparacin de la
muestra y durante la prctica.

III. PARTE EXPERIMENTAL: METODO DE SOXHLET

a. FUNDAMENTO.
Se basa en la extraccin de la grasa de una determinada muestra mediante
un solvente (ter dietilico,ter de petrleo, cloroformo, hexano,etc.), el
extracto etreo obtenido se pesa luego de la evaporacin del solvente.

b. Equipos y materiales.
Aparato de extraccin tipo Soxhlet (condensador, extractor, matraz o
baln).
Balanza analtica con 0.1 mg de precisin.
Plancha o cocinilla elctrica.
Pinza para baln.
Esptula
Estufa con silica-gel
Papel watman, libre de aceite y grasas.
Algodn hidrfilo libre de grasa.

c. Procedimiento.

1. El baln de extracciuon debe lavarse y secarse en la estufa a 105 C


por media hora, enfriado en el desecador por 15 min, y pesado en la
balanza analtica al 0.1 mg precisin.
2. Pesar 2 gr. de muestra seca al 0.1 mg precisin en un dedal del papel
filtro que tenga una base de algodn tanto en la parte inferior como
superior.
3. Colocar el cartucho en la cmara de extraccin, conectar el baln.
4. Aadir una media vuelta de solvente a la cmara de extraccin.
5. Conecte el agua al condensador y encienda la plancha o cocinilla
regulando la temperatura de acuerdo al tipo de solvente.
6. Realizar la extraccin por 3 o 4 horas (dependiendo de la tasa de
condensacin y del tipo de insumo).
7. Sacar el cartucho con una pinza y recuperar el solvente.
8. Secar el baln con la grasa en la estufa a 90-100C hasta no percibir
el olor del solvente.
9. Enfriar en el desecador por 30 min. Y pesar hasta peso constante.

d. Clculos.

% GRASA CRUDA = (B A) X 100

Donde:
A= peso del baln vacio
B= peso del baln con grasa
P= peso de la muestra

% grasa cruda = 108.2 107.8 X 100


2

% grasa cruda= 20%

IV. CUESTIONARIO:

1. Definir:

Contenido del extracto de ter de petrleo: Mezcla de hidrocarburos


compuesta principalmente por: 3-metilpentano. nhexano.

Lpidos no polares: No tienen carga elctrica ni una polaridad


apreciable.
Incluye cidos grasos de ms de 12 C, acilgliceroles, esteroles y sus
steres, carotenoides, ceras, tocoferoles.

2. Explique brevemente los mtodos de extraccin de grasa.

Mtodos de extraccin
El contenido total de lpidos se determina comnmente por mtodos de extraccin con
disolventes orgnicos (por ejemplo Soxhlet, Goldfish,Mojonnier), sin embargo tambin
puede cuantificarse por mtodos deextraccin que no incluyen disolventes (por
ejemplo, Gerber, Babcock) y por mtodos instrumentales que se basan en propiedades
fsicas o qumicas de los lpidos (por ejemplo, infrarrojo, densidad y absorcin de rayos x)
(Aguilar, 2011)
a. Mtodos con solventes:
Soxhlet: Es el ms ampliamente utilizado, usa una extraccin Solida- Liquida en un aparato
llamado de la misma manera, se tiene un flujo constante de un solvente orgnico, por lo
general ter de petrleo, ter etlico o Hexano- Diclorometano. Este solvente es calentado
hasta ebullir, luego condensado y dispuesto en el tubo Soxhlet, en el cual extrae el aceite
contenido en la biomasa hasta que el tubo se llena, cuando el tubo est lleno de solvente,
este es sifonado hasta el baln que contiene el resto de solvente y se repite
el proceso (Gonzlez et Al., 2009).
Es sencillo, no es de un trabajo intensivo y los lpidos pueden ser usados para posteriores
determinaciones. Sin embargo, los resultados son menos eficientes comparados con los
del mtodo Bligh & Dyer, no se pueden determinar los lpidos totales, se necesitan grandes
cantidades de solvente, se requiere de un equipo especial, puede tener efectos adversos
en lpidos lbiles y es difcil controlar muchas de las condiciones (Carvalho et. Al., 2009).
Folch: tambin es ampliamente utilizado, se considera el mtodo ms fiable para la
recuperacin de los lpidos totales, en la extraccin el perfil de los cidos grasos
permanecen estables, el mtodo subestima sistemticamente concentraciones en las
muestras que contienen ms de 2% de lpidos (Axelsson & Gentili, 2014; Segura, J. 2015).
En algunos estudios se reporta mas bajo rendimiento en extraccin comparado con Soxhlet
(Caprioli et Al. 2015).
Bligh and Dyer: es un mtodo estndar bien establecido, determina lpidos totales, se basa
en un sistema bifsico de equilibrio Liquido- Liquido. Las muestras pueden ser analizadas
directamente sin necesidad de pre-secarlas y los lpidos obtenidos pueden ser usados para
futura determinacin, sin embargo la utilizacin de cloroformo es una desventaja, pues te
compuesto es toxico con el ambiente ( Santana et Al, 2009).
El procedimiento consiste en realizar una cuantificacin gravimtrica, en la cual se tienen
en cuenta tres pasos para la extraccin: 1) Methanol+ cloroformo, 2) Cloroformo y 3) Agua.
Despus de la separacin de fases lpidos totales se determinan en la fase de cloroformo
por anlisis gravimtrico seguido de la evaporacin del solvente (Schlechtriem et al, 2009)
Schmid-Bondzynski-Ratzlaff: Es un mtodo muy empleado para determinar los lpidos en
queso y en leche en polvo. Econmico, extrae lpidos totales y las muestras pueden ser
abalizadas sin secado previo, sin embargo los lpidos no pueden ser usados para
determinaciones posteriores. El Procedimiento consiste en ubicar en un vaso de precipitado
de 100 ml la cantidad adecuada de muestra, agregar HCl y calentar. Dejar enfriar, transferir
el contenido a una probeta graduada con tapa esmerilada, lavando el vaso de precipitado
con unos 10 ml de alcohol etlico en dos porciones y luego agregar 50-60 ml de ter. Dejar
en reposo 24 horas y leer el volumen de la fase etrea. Tomar una alcuota exactamente
medida y evaporar el ter en un vaso de precipitado pequeo previamente tarado. Una vez
evaporado el ter pesar nuevamente y determinar el contenido de lpidos por diferencia,
teniendo en cuenta la alcuota tomada para realizar los clculos (UNLP, 2012).
Fluidos supercrticos: Los fluidos supercrticos (FSC) tienen la capacidad de extraer ciertos
compuestos qumicos con el uso de determinados solventes especficos bajo la
combinacin de temperatura y presin. El CO2 es el fluido supercrtico ms utilizado debido
a que no es ni txico, ni inflamable, ni corrosivo, es incoloro, econmico, se elimina
fcilmente, no deja residuos, sus condiciones crticas son relativamente fciles de alcanzar
y se consigue con diferentes grados de pureza, se puede trabajar a baja temperatura y por
tanto, se pueden separar compuestos termolbiles (Velazco et Al., 2007). Despus del paso
del CO2, este es evaporado y los lpidos son medidos. Las ventajas que presenta este
mtodo es que es rpido, utiliza solventes orgnicos y los lpidos pueden ser usados para
futuros anlisis, sin embargo el alto costo de los equipos y su complejidad, limita el uso de
esta tcnica (Vsquez, 2008).
b. Extraccin por instrumentos:
Extraccin asistida por Microondas: consiste en el calentamiento de un solvente en contacto
con la muestra. El proceso implica la perturbacin de los enlaces por puente de hidrgeno,
como resultado de la rotacin de dipolos por la radiacin en las molculas y la migracin de
iones; con la consiguiente penetracin del solvente en la matriz, y transporte al seno del
lquido de los componentes.
La rapidez en el calentamiento es la principal ventaja de las microondas frente a los
mtodos tradicionalmente empleados en la extraccin con disolventes, que causan el
calentamiento a partir de la transmisin de la energa al material de forma indirecta.
El empleo de las microondas permite, por tanto, significativos ahorros de tiempo;
disminucin de los volmenes de disolventes necesarios en los tratamientos y, en
consecuencia, de energa en el proceso; no contamina el medio ambiente, lo cual se
manifiesta en la reduccin de los costos en general, que constituyen aspectos deseables
de alcanzar en todo proceso de extraccin, adems de que permite obtener altos
recobrados de los compuestos de inters ( Salomn et. Al., 2013).
Espectroscopia de infrarrojo cercano (NIR) Algunas clases de lpidos muestran bandas
fuertes de absorcin de grupos carbonilo en la regin infrarroja, lo que quiere decir que cada
uno de ellos, tiene su espectroscopia. Por consiguiente para establecer un complemento a
las tcnicas tradicionales surge el uso de la refractancia en el infrarrojo cercano, que
consiste en irradiar con un haz de luz monocromtica los materialesorgnicos, que
en funcin de la naturaleza de los enlaces y cargas electrostticas existentes entre sus
tomos y molculas, absorben una determinada cantidad de energa (reflectancia). Con
esta tcnica se generan modelos matemticos que relacionen la composicin qumica con
cambios de energa en la regin correspondiente al rango infrarrojo cercano. Este mtodo
no es destructivo, requiere un mnimo o nulo tratamiento de la muestra, minimiza
el dao ambiental y es una tcnica multianaltica de alta precisin que permite predecir
varios factores simultneamente. Una vez calibrado el espectrofotmetro, el uso del NIR es
de bajos costos. El NIR est establecido para medir la composicin lipdica en cereales
como granos de maz (Bravo et al.,2009)
Autoclavado: El principio de extraccin mediante Autoclavado es similar a la extraccin
mediante agua subcrtica. La metodologa de utilizacin de esta tcnica es variable, se
puede utilizar una solucin salina acuosa como fluido de trabajo y se autoclavan a 300C y
100 MPa con tiempos que oscilan entre 5 y 60 minutos, adicionalmente se purga con
nitrgeno el aire residual. una ventaja de esta tcnica para ser utilizada en la extraccin de
lpidos, es que se puede trabajar con la biomasa hmeda, lo cual evade la etapa de secado
de la biomasa, durante la cual se pueden degradar los lpidos presentes y aumenta los
costos globales de proceso. No obstante, todos los experimentos que utilizan Autoclavado
para la extraccin de aceite, incorporan una etapa adicional de extraccin con solvente
qumico, por lo cual podemos decir que el autoclavado es una tcnica de pre-tratamiento
para una posterior extraccin qumica, que una tcnica de extraccin en s misma (Mendes,
et. Al, 2001).