Práctica: Evaluación de la Integridad de la Membrana

Plasmática del Espermatozoide
Objetivos:
a) Evaluar como la membrana plasmática responde a soluciones de diferente Tonicidad.

Teoría:
Las membranas son sistemas bio (físico) químicamente activos, responsables de
fenómenos tales como el transporte selectivo de moléculas. Además membranas diferentes
a menudo presentan diferentes características de permeabilidad, de allí que el proceso de
transporte a través de las membranas puede ocurrir de acuerdo a diferentes mecanismos.
Cuando se expone la parte extracelular de un espermatozoide a soluciones de
diferente tonicidad, el espermatozoide responderá en un intento de llegar al equilibrio
osmótico. La cola del espermatozoide es especialmente susceptible a cambios de
osmolaridad; así por ejemplo en un schock hipo-osmótico, al principio la cola se hinchara,
como respuesta al transporte de agua, lo cual a su vez es un indicador de la integridad
funcional de la membrana.
Se considera una muestra normal de espermatozoide cuando el porcentaje de colas
hinchadas es mayor del 60%.

Material y Reactivos:
1. Microscopio compuesto
2. Contómetro
3. Baño de maría a 37°C
4. Fructosa
5. Citrato de sodio
6. Buffer Isotónico, Fosfato de Dulbecco (DPB), mg/L, 280-285 mOsm/Kg de agua.
Reactivo A
7. Peróxido de hidrógeno al 30% en DPB. Reactivo B
8. Buffer Hipo-Osmótico, 150mOsmol/Kg agua. Reactivo C

Procedimiento:
Montar el siguiente set de trabajo:
Reactivos Tubo N°1 Tubo N°2 Tubo N°3 Tubo N°4
Reactivo A (mL) 0,9 ---- ---- ----
Reactivo B (mL) ---- 0,5 ---- ----
Reactivo C (mL) ---- ---- ---- 0,9
Muestra de Semen (mL) 0,1 0,1 0,1 0,1
Mezclar. Incubar a 37°C/ 30 min.
Retirar los tubos  
Reactivo C (mL) --- 0,9 0,9 ---
Mezclar. Incubar a 37°C/ 30 min
Mg. ANA GUTIÉRREZ ROMÁN 1
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a) De los tubos 1 y 4 se extrae una gota de cada uno de los tubos y se coloca en una
lámina porta-objeto, por separado y se cubre con una laminilla cubre-objeto.
b) Observar en el microscópio, y contar en varios campos los espermatozoides con colas
hinchadas así como aquellos que no se hincharon, hasta completar un número de 100
espermatozoides.
c) Al término del tiempo indicado, se retiran los tubos 2 y 3 y se procede como los pasos
a) y b).

Tabla de Cambios Morfológicos Inducidos

A B C D E F G

Total
Esporas
Esporas por
categoría

% del total
100

Comentarios Adicionales:...................................................................
Fecha: .....................Analista:.............................Código:...................
El resultado de la prueba se expresa como el porcentaje de espermatozoides con cola
hinchada en relación al total de espermatozoides examinados. Se considera normal al
individuo cuando más del 60% de espermatozoides presentan hinchamiento de la cola
después del estímulo hiposmótico.

En la tabla de cambios morfológicos inducidos, se deberá colocar el número de
espermatozoides que se contaron para cada categoría de espermatozoides observados de
acuerdo a la morfología que presenten. En a sección de comentarios, se debe explicar si la
muestra observada tiene una respuesta al estímulo hiposmótico normal o anormal.

Referencias Bibliográficas
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