ESTUDIO FITOQUÍMICO DE Ruta graveolens (ruda

)

PHYTOCHEMICAL STUDY OF Ruta graveolens (ruda)

Alvia Saldarriaga C., Camones Vargas F., López Moreno M., Silva Zevallos N.

Facultad de Ciencias Farmacéuticas y Bioquímica, Universidad Inca Garcilaso de
la Vega, Lima, Perú

Resumen.

Se utilizaron las hojas secas de Ruta graveolens (ruda) que luego de ser secadas
a 45ºC, se realizó la extracción por el método de maceración por una semana, de
ahí se obtuvo el extracto seco, el cual nos sirvió para realizar el tamizaje fitoquímico
en el cual dio positivo en la prueba para flavonoides, taninos, cumarinas y también
se realizaron pruebas específicas para la identificación de saponinas y compuestos
fenólicos usando las fracciones obtenidas en la prueba de fraccionamiento.

Como resultado se obtuvo la presencia de flavonoides, alcaloides, cumarinas y
fenoles en el tamizaje fitoquímico, y la comparación positiva durante la
cromatografía con un estándar de rutina y de quinona, lo que demuestra que Ruta
graveolens posee como principal metabolito secundario a los flavonoides.

Abstract.

The dried leaves of Ruta graveolens (ruda) were used, which after being dried at
45ºC, extraction by the maceration method was carried out for a week, from which
the dried extract was obtained, which served to perform the phytochemical
screening in Which tested positive for flavonoids, tannins, coumarins and also
specific tests were performed for the identification of saponins and phenolic
compounds using the fractions obtained in the fractionation test.

As a result, the presence of flavonoids, alkaloids, coumarins and phenols in
phytochemical screening was obtained, and a positive comparison was made during
routine and quinone chromatography, demonstrating that Ruta graveolens is the
main metabolite secondary to flavonoids.

Con la planta se realizó una desinfección solo de las hojas. con el objetivo de cubrirlo completamente. estos poseen propiedades terapéuticas de gran beneficio al ser humano. Se utilizó la técnica de maceración utilizando un frasco color ámbar de aproximadamente 1 litro. al terminar este proceso se tomó el peso en una placa Petri que fue llevada a la estufa a una temperatura de 100ºC grados para su posterior secado. extracción. Las plantas superiores sintetizan una gran variedad de sustancias químicas durante su crecimiento y desarrollo. En uno de estos compuestos están los flavonoides. Luego se llevó a secado a la estufa a una temperatura de 45ºC durante una semana. Se colocó el material triturado y se le agrego aproximadamente 500mL de etanol de 96º. Material vegetal: Se adquirió un aproximado de 400 g. como lo es en la ruda (Ruta graveolens). de ruda (Ruta graveolens) en el mercado Unicachi. sumergiéndolas en hipoclorito de sodio 10 ppm por 10 minutos. Métodos y Desarrollo Experimental. tamizaje. 1) Método de extracción. Al pasar el tiempo de extracción se llevó a filtración y luego se llevó al Rotavapor para su concentración. fraccionamiento y elucidación. los cuales representan uno de los más importantes a su abundante presencia en algunas plantas.Introducción. entre ellos se encuentran los alcaloides. en el distrito de Comas. En el siguiente artículo se llevará a cabo el estudio fitoquímico así como los procesos que intervienen en la obtención de la rutina como principio activo de Ruta graveolens tales como la preparación de la muestra. . Una vez deshidratada la muestra se tomó el peso y se trituro tomándole nuevamente el peso. se macero por una semana a temperatura ambiente. el cual recibe el nombre de rutina. terpenos y compuestos fenólicos. dichas sustancias son denominadas metabolitos secundarios.

de Shinoda . Para este procedimiento se utilizó 1 gramo del extracto seco disuelto con etanol de 96º se colocó en diferentes tubos ensayos y se agregó de 3 a 5 gotas del respectivo reactivo para la identificación del metabolito.Flavonoides Rojo pálido – Amarillo R. de Dragendorff .Violeta Hidróxido de sodio (NaOH) . de Benedict Tubo 03 Proteínas Ninhidrina Tubo 04 Lípidos Sudan III Tubo 05 Fenoles FeCl3 Tubo 06 Cumarinas NaOH Tubo 07 Taninos FeCl3 Tubo 08 Flavonoides R.Taninos Azul . Reactivo . de Borntrager Tubo 10 Alcaloides R.Metabolito Forma de Reconocimiento Cloruro Férrico (FeCl3) .Cumarinas Amarillo Cloruro Férrico (FeCl3) . de Shinoda Tubo 09 Quinonas R.Verde R. TABLA 01: Marcha Fitoquímica del extracto seco de Ruta graveolens (No cuantitativo) Reconocimiento de Reactivo Tubo 01 Carbohidratos R. de Dragendorff Tubo 11 Saponinas Prueba de espuma TABLA 02: Reconocimiento de la Marcha Fitoquímica.Saponinas Espuma estable .Fenoles Azul – Verde . de Molish Tubo 02 Carbohidratos R.Quinonas Rojo oscuro R. de Borntrager .Alcaloides pp rojo naranja Prueba de espuma .2) Marcha Fitoquímica.

Se utilizaron 6 placas y en cada una se sembró unas 5 gotas de las muestras del procedimiento anterior. Para realizar la marcha de solubilidad al igual que el procedimiento anterior se utilizó 1 gramo del extracto seco junto con 1mL de etanol de 96º y se colocó en 6 tubos de ensayo diferentes. y como fase móvil se utilizó diclorometano y metanol en proporción de 7 a 3. Para la CCF se utilizaron placas de silicagel que fue la fase estacionaria. Al obtener la fase clorofórmica esta se lleva a evaporación y se le agrega 10mL de metanol (hasta completar los 20mL). se vierte a la pera de decantación agregándole 20mL de hexano. se mezcla y se deja reposar. se sacó 1g de muestra a la cual agregamos 5 mL de cloroformo (hasta completar los 20mL). . a cada tubo se le agrego 1mL del solvente respectivamente. las placas ya sembradas se colocaron en un recipiente junto con la fase móvil y se esperó su corrida. De la fase acuosa perteneciente a la primera pera de decantación. luego esto se vierte en una pera de decantación agregándole 20mL de agua. TABLA 03: Marcha de Solubilidad del extracto seco de Ruta graveolens (No cuantitativo) Solvente Tubo 01 Metanol Tubo 02 Etanol Tubo 03 Cloroformo Tubo 04 Éter de Petróleo Tubo 05 Hexano Tubo 06 Acetato de etilo 4) Técnica de Cromatografía en Placa Fina. se le agrega 20mL de acetato de etilo. se mezcla y se deja reposar.3) Marcha de Solubilidad. 5) Fraccionamiento. Del extracto seco.

. esto se realizó en dos tubos de ensayo diferentes y a cada uno se le agrego los siguientes reactivos. b) Tubo 02: Solución de FeCl3 Luego de la primera parte de la prueba.6) Saponinas. agua y ácido acético en proporción de 25:25:2 mL b) Diclorometano y metanol en proporción de 3:1 mL 8) Prueba de Cromatografía para la Comparación con Quinonas En esta prueba se realizó la técnica de cromatografía en placa fina. luego se le agrega 1 gota de ácido sulfúrico. sembrado el extracto seco diluido en 1mL de etanol y la muestra estándar de rutina.  Prueba de Lieberman-Burchard En esta prueba se utilizó una pequeña porción del extracto agregándole 1mL de Anhídrido Acético y 1mL de cloroformo (agitar). Se utilizó 1g de muestra del extracto seco y se diluyo en 1mL de etanol. utilizando para el sembrado el extracto seco diluido en 1mL de etanol y una muestra estándar de cochinilla. Para este procedimiento se utilizó una pequeña porción del extracto y se le agrego 3mL de agua destilada.  Prueba de espuma. luego se realiza una agitación dinámica durante 1 minuto. a) Tubo 01: Una pequeña porción de magnesio metálico junto con 3 gotas de HCl concentrado. como fase estacionaria se utilizó silicagel y como fase móvil Butanol. se realizó la cromatografía en placa fina. 7) Prueba de Reconocimiento para Flavonoides y Comparación con estándar de rutina. como fase estacionaria se utilizó silicagel y como fase móvil se utilizaron los siguientes reactivos. agua y ácido acético en proporción de 25:25:2 mL. a) Butanol.

de Molish (-) R. Metabolitos Reactivo Resultado Carbohidratos R.  Peso inicial de la muestra en general: 366 gramos  Peso de la droga vegetal después del secado: 70 gramos  Peso del extracto seco: 5.28 gramos 2) Marcha Fitoquímico: Se observó de acuerdo a la marcha fitoquímica que la planta contiene metabolitos secundarios los cuales fueron los siguientes: TABLA 04: Tamizaje fitoquímico del extracto de hojas de Ruta graveolens. de Benedict (-) Aminoácidos/Proteínas Ninhidrina (-) Lípidos Sudan III (-) Compuestos Fenólicos FeCl3 (+++) Cumarinas NaOH (+++) Flavonoides R. de Shinoda (+++) Quinonas R.Resultados: Los resultados obtenidos fueron los siguientes 1) Peso de la muestra. de Dragendorff (++) Saponinas Prueba de espuma (-) (+++) = Cantidad abundante (++) = Cantidad moderada (-) = No hay presencia 3) Marcha de Solubilidad: Se observó de acuerdo a la marcha solubilidad que la muestra o extracto seco es más soluble en: . de Borntrager (-) Alcaloides R.

que son el extracto etanólico de Ruta graveolens junto con metanol. Etanol (++) Cloroformo (+++) Éter de Petróleo (+) Hexano (+++) Acetato de etilo (+) (+++) = Muy soluble (+) = Poco soluble (++) = Soluble 4) Prueba de Cromatografía en Capa Fina (CCF).3  Rf del extracto de ruda con metanol: Distancia total: 5cm Distancia recorrida: 1.8 / 5 = 0.76  Rf del extracto de ruda con hexano: .TABLA 05: Solvente Resultado Marcha de solubilidad del (++) extracto de las Metanol hojas de Ruta graveolens. cloroformo y hexano:  Rf del extracto de ruda con etanol: Distancia total: 5cm Distancia recorrida: 1.7 / 5 = 0.5cm Rf: 1.34  Rf del extracto de ruda con cloroformo: Distancia total: 5cm Distancias recorrida: 3. etanol.7cm Rf: 1. En esta prueba se obtuvieron los Rf de 4 placas cromatográficas.5 / 5 = 0.8cm Rf: 3.

7) Prueba de Reconocimiento para Flavonoides y Comparación con estándar de rutina.  En la prueba de cromatografía en placa fina dio positivo al compararse con el estándar de rutina. las cuales son las siguientes: TABLA 06: Fracciones obtenidas en la prueba. En la prueba de fraccionamiento.  En la de Lieberman – Burchard dio positivo observando una coloración verde. se obtuvieron 5 fracciones. Distancia total: 5cm Distancia recorrida: 4. Fracciones Fracción etanolica Fracción clorofórmica Fracción acuosa Fracción de hexano 6) Prueba de saponinas. Los resultados obtenidos fueron los siguientes:  La reacción con magnesio metálico (Mg) y HCl dio positivo al cambiar a color amarillo  La reacción con FeCl3 dio positivo al cambiar a color azul oscuro.84 5) Prueba de Fraccionamiento.2 / 5 = 0.  En la prueba de espuma durante la agitación no hubo formación de espuma.2cm Rf: 4. .

esto podría deberse a un mal procedimiento realizado por el manipulador o alguna contaminación o mala preparación del reactivo. mientras que en la prueba de Lieberman – Burchard dio positivo. taninos. fenoles y cumarinas. esteroides y saponinas. 2010) presenta alcaloides. La detección de saponinas dio negativo en la prueba de espuma. flavonoides. cumarinas. flavonoides. FOTO 02: Placa de comparación con cochinilla Discusión: Se determinó que el extracto etanólico de las hojas de Ruta graveolens (ruda) según (Naveda González. saponinas. Como se aprecia en la tabla 1 de los resultados. FOTO 01: Placa de comparación de rutina 8) Prueba de Cromatografía para la Comparación con Quinonas Los resultados obtenidos. . triterpenos. aceites esenciales. fueron positivos al compararse las corridas del extracto seco con las del estándar de cochinilla. dio positivo en identificación alcaloides.

. Los metabolitos secundarios de Ruta graveolens son solubles en solventes polares y medianamente polares.L.p. taninos y alcaloides. a comparación del acetato de etilo y éter de petróleo. esto quiere decir que extracto seco de Ruta graveolens. 50(1):7-9. esto debido a la preparación del reactivo para su identificación. a pesar que con este último dio negativo en el tamizaje fitoquímico. 1) C. como se ve en la tabla 02. Quito. 3. Manrique. Rojas Luis B. 2010. seguidos por el etanol y metanol. ya que ambos son no polares. Referencias.. Conclusiones: 1.31-42. dio positiva la prueba con el estándar de rutina y con el estándar de quinona. Escuela Politécnica Nacional. Anexo 01. con alto contenido de Polifenoles.R. Castañeda. M. Ibañez. Estudio fitoquímico y farmacológico de plantas con efecto hipoglucemiante. 3) Gabriela Fernanda Naveda Gonzales. En la prueba final de comparación a través del método de cromatografía en placa fina. Esta misma explicación es la razón por la cual el hexano y el cloroformo tienen el mayor Rf en la prueba de cromatografía. dio como los reactivos más solubles al cloroformo y hexano.En la prueba de solubilidad. Establecimiento de un Proceso de Obtención de extracto de ruda (Ruta graveolens). posee metabolitos secundarios que son solubles en solventes polares y medianamente polares. El extracto seco de Ruta graveolens posee como metabolitos secundarios flavonoides.B. Estudio del aceite esencial de la Ruta graveolens que crece en el Estado Mérida en Venezuela. fenoles. 2) Meccia Gina.2002.2088. Como principal flavonoide tiene a la rutina. Usubillaga Alfredo. 2. V.

Espectro UV/VIS. De un estándar de rutina (353 y 254 nm). .