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Practica 4: Bacterias  gram positivas de importancia clínica 

Dra. Rosaura Caron Estrada 

Cocos gram positivos de importancia clínica (algoritmos mínimos de identificación) 

Catalasa positiva                 Micrococcus spp.(Bacitracina sensible) 

                                               Staphylococcus spp.(Bacitracina resistente) 

Catalasa negativa              Streptococcus spp. 

                                             Enterococcus spp. 

∞ Diferenciación de las especies más frecuentes del género Staphylococcus (Características 
en tinción Gram: cocos gram positivos agrupados, diplococos o tétradas) 

Coagulasa                Positiva (S. aureus) 

                                  Negativa                  Novobiocina             Resistente (S. saprophyticus) 

                                                                                                        Sensible (otros SCN) 

 
Prueba de la catalasa: 
La catalasa es una enzima que descompone el peróxido de hidrogeno en oxigeno y agua. La 
prueba se realiza colocando sobre un portaobjetos una gota de peróxido de hidrogeno y se le 
agrega con  ansa una colonia aislada de la bacteria en estudio. 
Positiva (aparición de burbujas por desprendimiento de oxigeno) Negativa (sin cambio) 

 

 
Prueba de la Bacitracina: 
La Bacitracina es un antibiótico capaz de inhibir el desarrollo de ciertos microorganismos (ej. 
Micrococcus, algunos  estreptococos. Sobre agar sangre se siembra el microorganismos en 
estudio y se coloca un disco con Bacitracina y se incuba a 37ªC 24 hs. 
Positiva: halo de inhibición alrededor del disco (Microorganismo sensible) 
 

 En agar  Muller Hinton se siembra el microorganismo en estudio.  Positiva: formación de coagulo. capaz de transformar  fibrinógeno en fibrina. Negativa: sin evidencias de coagulación. con actividad semejante a la protrombina.    . provocando la formación de un coagulo visible. epidermidis.  Sensible: halo de inhibición > 16 mm.   Prueba de la coagulasa:  La coagulasa es una enzima. aureus y S.    Prueba de la Novobiocina:  La novobiocina es un antibiótico que inhibe el desarrollo de S.  se le agrega el disco de antibiótico y  se incuba a 37ºC 24hs. Resistente: halo de inhibición < o = 6 mm. A una muestra de  plasma se le agrega una colonia de la bacteria en estudio y se incuba a 37ºC 2hs.

 pneumoniae                                                      S.5%  CAMP  Aglutinación  S. agalactiae  ‐  R  V  +  Grupo B  Estreptococos beta  ‐  R  ‐  ‐  Grupo C o grupo G  hemolíticos grupo  c y G:  Enterococcus  +  R  +  ‐  Grupo D  faecalis    . faecalis                                    Otras especies  Capacidad de hemolisis    Gamma hemolisis: un microorganismo es gamma hemolítico cuando no produce hemolisis. pyogenes (grupo A)                                                      S. por lo tanto presentan un halo de hemolisis transparente alrededor de su  colonia.∞ Diferenciación de Cocos gram positivos catalasa negativa (Características en tinción Gram:  diplococos y cadenas)  Estreptococos                          S. grupo viridans  Enterococos            E. bovis                                                      S.  Diferenciación los estreptococos beta hemolíticos    Pyr  Bacitracina  Cl Na 6. agalactiae (grupo B)                                                      Estreptococos β hemoliticos C y G                                                      S.  Beta hemolisis: un microorganismo es beta hemolítico cuando produce ruptura total de los  glóbulos rojos.  Alfa hemolisis: un microorganismo es alfa hemolítico cuando produce hemolisis total y por lo  tanto presenta un halo verde alrededor de su colonia. por  lo tanto no presenta halo alrededor de su colonia. pyogenes  +  S  ‐  ‐  Grupo A  S. faecium                                     E.

      . urea: negativa. agactiae  cocos  ‐  v  ‐    Identificación de Arcanobacterium haemolyticum  Bacilo gram positivo. Se incuba 18‐24 horas a 37ºC. grupo viridans  R  ‐    ∞Diferenciación  entre Listeria monocytogenes.  Se realiza estriando un cultivo de  los estreptococos ß‐hemolíticos en forma perpendicular a una estría de un estafilococo ß‐ hemolítico en agar sangre.5%  Bilis esculina  L.  ‐Interpretación de los resultados: La prueba positiva se evidencia por la presencia de una zona  de potenciación de la hemólisis en forma de puntas de flecha en el lugar donde se contactan  las dos estrías. agalactiae  (microorganismos beta hemolíticos agentes de meningitis neonatal)    Gram  Catalasa  ClNa 6.Diferenciación de estreptococos alfa hemolíticos    Optoquina  Solubilidad en bilis  S.  ‐Prueba de CAMP invertida: Arcanobacterium haemolyticum produce una proteína que inhibe  la hemolisis producida por el estafilococo ß‐hemolítico. catalasa: negativa. agalactiae) producen una proteína difusible (factor CAMP)  que aumenta la beta‐hemólisis de Staphylococcus aureus. pneumoniae  S  +  S. prueba de CAMP invertida  Prueba de CAMP  Los estreptococos del grupo B (S. faecalis  Cocos  ‐  +  +  S. monocytogenes  Bacilos  +  +  +  E. Enterococcus faecalis y S.

 entonces se  siembra el microorganismo a estudiar en agar sangre. Negativo: medio sin cambio      Desarrollo en caldo hipersalado:  Algunos microorganismos tienen la capacidad de desarrollar en altas concentraciones de ClNa.5%.  Positivo: turbidez del caldo con ClNa 6. A las 24‐48hs. se agrega el disco de optoquina y se  incuba a 37ºC 24hs. La  hidrolisis de la esculina da un producto que reacciona con hierro para dar un complejo negro.  Positiva: ennegrecimiento del medio.  Positiva: halo de inhibición del desarrollo > 14 mm. Negativo: caldo límpido    Prueba de sensibilidad a Optoquina:  La optoquina a la concentración utilizada inhibe el desarrollo de S. Negativo: sin halo o halo < o = 14 mm. luego de 24‐48%.      .   Prueba de Bilis Esculina:  Se basa en la capacidad de ciertas bacterias de hidrolizar la esculina en presencia de bilis. pneumoniae.

 síndrome de shock toxico.  infecciones asociadas a cuerpos extraños. síndrome de piel escaldada.  Negativa: ambos tubos sin cambio    Prueba de hidrólisis de Pyr.  Staphylococcus saprophyticus: IU en mujeres sexualmente activas. Negativa: no se observa aglutinación        Cocos y bacilos gram positivos mas frecuentes en muestras clínicas (cuadros clínicos mas  frecuentes)  Staphylococcus aureus: infecciones de piel y partes blandas ( ej.    Identificación serológica (pruebas de aglutinación:  Las pruebas de aglutinación de partículas de látex son las más utilizadas.  Positiva: color rojo o rosa intenso. en uno de los tubos se agrega deoxicolato de sodio y en el otro solución fisiológica.  Positiva (solubilidad en bilis): tubo con deoxicolato límpido luego de 5‐10 minutos de  incubación y tubo con solución fisiológica Turbio. otitis. Miositis). Identifica las  bacterias según sus antígenos de superficie. cada uno con una suspensión del microorganismo a estudiar en  caldo. sinusitis. endocarditis.  . Celulitis.  Positiva: aglutinación visible.  Se basa en la actividad de una enzima. neumonía. infecciones oculares. Negativo: amarillo. infección en pacientes dializados.  artritis. infección de  heridas quirúrgicas y traumáticas. naranja o rosado pálido.  diarrea. infección de herida quirúrgica. sobre un sustrato cromogénico.Prueba de solubilidad en bilis:  Se utilizan 2 tubos de ensayo. meningitis. osteomielitis.  infección de herida quirúrgica. Consiste en enfrentar  una suspensión del microorganismo a  partículas de látex conjugadas con anticuerpos grupo  específicos y cuando la reacción es positiva se obtiene aglutinación visible.  Staphylococcus epidermidis: bacteriemia asociada a catéter y prótesis articulares. uretritis no gonococcica y  prostatitis en hombres.

 abscesos de órganos profundos (cerebrales. infección de herida de cesárea). abscesos amigdalinos y  periamigdalinos. otras infecciones  menos frecuentes: osteomielitis. sepsis. ulceras por decúbito. infecciones relacionadas al  parto (ej. endocarditis. pie diabético).  2) ¿Cómo pueden clasificarse los cocos gram positivos según su hemolisis en agar sangre?  Mencione ejemplos de cada uno. con catéter periférico.  pulmonares. neumonía. PBE. caries. comienza con fiebre. meningitis.: IU.  Streptococcus grupo viridans: endocarditis. En el gram de los hemocultivos se observan cocos gram positivos  agrupados y desarrollo de colonias no hemolíticas similares en el agar sangre del  cultivo de punta de catéter y en el agar sangre del repique del hemocultivo.  endocarditis. glomerulonefritis  postestreptococcica. traumáticas. meningitis. sepsis y meningitis  neonatal. bacteriemia en pacientes neutropénicos.  Enterococcus spp. endocarditis. Se le toman hemocultivo.  . meningoencefalitis y sepsis en  ancianos y pacientes IC. sinusitis. conjuntivitis. Ante  la sospecha de infección asociada a catéter. IU. rechazo del alimento. glomerulonefritis postestreptococcica. otitis. bacteriemia. abscesos retrofaríngeos. urocultivo y cultivo de LCR. bacteriemia. sepsis y abortos a repetición en embarazadas. fiebre reumática.  Arcanobacterium haemolyticum: faringitis en adultos jóvenes. Tiene como antecedentes ruptura prematura de  membrana. Endometritis. comienza con fiebre. vómitos. sepsis puerperal y neonatal. bacteriemia. infecciones mixtas de heridas por traumatismos. infecciones intrabdominales. endocarditis. fascitis necrotizante.  hipotensión y presenta signos de inflamación en el sitio de inserción del catéter. otitis. ulcera por decúbito)  Estreptococos beta hemolíticos grupo C y G: faringitis.   a‐¿Cuál es su sospecha diagnostica y qué microorganismos pueden estar involucrados?  b‐¿Cómo podría diferenciarlos mediante pruebas bioquímicas?  5) Un paciente hospitalizado. abdominales).  Infección de tejidos blandos.  Cuestionario:  1) ¿Qué prueba bioquímica permite dividir al genero Staphylococcus en 2 grandes  grupos? Explique brevemente. mientras que en los hemocultivos se observaron diplococos gram positivos y  el cultivo de LCR. se toman hemocultivos y se remueve el  catéter para cultivo. desarrollaron colonias beta hemolíticas en agar sangre.  Listeria monocytogenes: meningoencefalitis y sepsis neonatal.  Streptococcus pneumoniae: neumonía. infecciones  cutáneas. neumonía.  irritabilidad y trastornos del sueño.  Streptococcus agalactiae (grupo B): sepsis y meningitis neonatal.  3) ¿En que consiste la identificación serológica?  4) Una niña de 5 días de vida. sinusitis. infección de  heridas (quirúrgicas.Streptococcus pyogenes (grupo A): faringitis. El urocultivo resulto  negativo. escalofríos. infecciones no relacionadas  al parto en pacientes añosos o IC (bacteriemia.

 dolor de garganta y rash. a las 24hs presento desarrollo de colonias alfa  hemolíticas en AS. mientras que el primer hemocultivo resulto negativo. dificultad  respiratoria. El cultivo de esputo. dolor lumbar y ardor al orinar. en el agar sangre se  observa desarrollo de colonias beta hemolítica.  a‐¿En que microorganismos sospecha?  b‐¿Cómo podría diferenciarlos e identificarlos?  8) Un paciente de 4 años presenta fiebre alta. 24hs después  empieza con fiebre y celulitis en la zona. se le solicita urocultivo. fatiga y pérdida del apetito. cultivo de esputo y hemocultivo. el cultivo presenta desarrollo de cocos  gram positivos en recuento significativo. Luego de  24hs positivisa el 2ºhemocultivo y en el gram se observa diplococos gram positivos. a‐¿Qué gérmenes podrían estar implicados?  b‐¿Cómo podría diferenciarlos por pruebas bioquímicas?  6) Una mujer de 30 años consulta por disuria. fiebre elevada.  a‐¿Cuáles son los diagnósticos posibles del cuadro respiratorio?  b‐¿Qué gérmenes pueden estar involucrados?  c‐¿Cómo podría diferenciarlos e identificarlos?  d‐¿Por qué el paciente empeora su cuadro general?   . escalofríos. poliuria.  El examen de orina presenta  abundante reacción inflamatoria y a las 24hs. Entonces se le  solicita radiografía de tórax.  a‐¿Qué microorganismos podrían estar involucrados?  b‐¿Cómo podría diferenciarlos y confirmar su identificación?  7) Un paciente de 18 años que se realiza un tatuaje en su brazo derecho. En el cultivo de la punción desarrollan colonias beta hemolíticas  en agar sangre. A las 24hs. entonces se le  toma una muestra de hisopado de fauces para cultivo. dolor de pecho.  a‐¿Cuál es su diagnostico y que microorganismos pueden estar implicados?  b‐¿Cómo los identificaría?  9) Un paciente de 80 años presenta tos productiva.  Ante la sospecha de IU. que rápidamente evoluciona a fascitis  necrotizante. A las 24hs. el paciente  presenta gran deterioro general y se decide hospitalizarlo y tomarle un nuevo  hemocultivo. Se le toma una muestra por punción aspiración y en el gram se observan  cocos gram positivos.