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Tierra Tropical (2007) 3 (1): 119-126

EVALUACIN DEL EFECTO DE EXTRACTOS VEGETALES SOBRE EL


CRECIMIENTO IN VITRO DE Phytophthora palmivora Butl. Y
Colletotrichum gloeosporioides (Penz.) Penz. & Sacc.
C.B. Mendoza, M.N. Moreno, M. Weil1, F. Elango
Universidad EARTH
Las Mercedes de Gucimo, Limn, Costa Rica
Recibido 18 de enero 2007. Aceptado 20 de junio 2007.

RESUMEN
Un total de 13 especies de plantas pertenecientes a 8 diferentes familias se recolectaron de la
Reserva Forestal de la Universidad EARTH. A partir de races, hojas, tallos, flores y frutos se
produjeron 28 extractos etanlicos, que fueron secados bajo presin reducida y posteriormente
disueltos a 2500 mg/L en dimetilsulfxido. Se evalu el efecto antifngico de los extractos sobre
el crecimiento in vitro de Phytophthora palmivora Butl. y Colletotrichum gloeosporioides
(Penz.) Penz. & Sacc., hongos fitopatgenos aislados de la mazorca de cacao (Theobroma cacao
L.) y de frutos de mango (Mangifera indica L.), respectivamente y adicionalmente, se evaluaron
64 extractos ms. Como control positivo, se utiliz metalaxyl-M + mancozeb (2 %) para P.
palmivora y mancozeb (2 %) para C. gloeosporioides. Ninguno de los extractos vegetales mostr
inhibicin del crecimiento micelial de los patgenos estudiados.
Palabras clave: antracnosis, extractos vegetales, Colletotrichum gloeosporioides, mazorca
negra, Phytophthora palmivora.

ABSTRACT
Conservation of plant biodiversity is important for several reasons, one of which is the potential
use of plant extracts as alternative pesticides for the control of phytopathogenic fungi. In the
present study, 28 ethanolic extracts obtained from 13 plant species were screened at a
concentration of 2500 mg/L for their antifungal properties against Phytophthora palmivora
(Butl.) and Colletotrichum gloeosporioides (Penz.) Penz. & Sacc., the causal agents of the cocoa
black pod disease and mango anthracnose, respectively. Additionally, 64 ethanolic extracts were
tested against these phytopathogenic fungi. Metalaxyl-M + mancozeb (2 %) and mancozeb (2 %)
were used as the control substances for P. palmivora and C. gloeosporioides, respectively. None
of the plant extracts evaluated inhibited mycelial growth of either of the plant pathogens.
Key words: Mango anthracnose, plant extracts, Colletotrichum gloeosporioides, black pod
disease of cocoa, Phytophthora palmivora.

INTRODUCCIN
De acuerdo con Pitman y Jorgensen (2002), se estima que en el mundo existen entre 310 000 y
422 000 especies de plantas, encontrndose en los bosques tropicales cerca de 125 000 especies
(Mendelsohn y Balick, 1995). Dentro de esta vasta diversidad, existen especies vegetales con
propiedades de inters para la investigacin y el descubrimiento de nuevos productos. Sin

1
Contacto: Marvin Weil (mweil@earth.ac.cr)

ISSN: 1659-2751
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embargo, se calcula que menos del 10 % de las plantas han sido evaluadas en la bsqueda de
actividad biolgica (Harvey, 2000).
Como parte de su metabolismo, las plantas producen una diversidad de compuestos orgnicos, de
los cuales la mayora no parece tener participacin directa en su crecimiento y desarrollo. A estos
componentes se les conoce como metabolitos secundarios y sus propiedades qumicas se han
investigado ampliamente desde mediados del siglo XIX (Croteau et al., 2000). Esta diversidad
bioqumica es el resultado de la coevolucin entre plantas y otros organismos, incluyendo virus,
bacterias, nemtodos, insectos y mamferos (Ehrlich y Raven, 1964; Duke, 1990; Rausher, 2001;
Theis y Lerdau, 2003).
El reconocimiento de las propiedades de los metabolitos secundarios ha conducido a la bsqueda
de nuevos frmacos, antibiticos, insecticidas y herbicidas (Croteau et al., 2000). Ejemplos de
agroqumicos derivados de productos naturales son los piretroides sintticos (Kurihara et al.,
1997; Reigart y Roberts, 1999), la azadiractina, la nicotina, la rotenona, la sabadilla y la ryania
(Reigart y Roberts, 1999; Buss y Park-Brown, 2002). Por su lado, la industria farmacutica
muestra un xito notable en el descubrimiento de medicamentos originados a partir de productos
naturales, entre otros la aspirina, la digoxina, la morfina, la quinina y el taxol (Heinrich et al.,
2004).
Las plantas, tanto en su ambiente natural como en ambientes de cultivo, necesitan defenderse de
condiciones adversas y enemigos naturales. Sin embargo, los cultivos agrcolas se han
especializado en la produccin de sustancias energticas, reduciendo su capacidad para
defenderse. De esta manera se genera una dependencia de recursos externos para su proteccin
contra animales, malezas y microorganismos fitopatgenos (FAO, 2004).
Los cultivos en zonas tropicales son afectados por enfermedades que causan prdidas
econmicas significativas. En el cultivo de cacao, una de las enfermedades de mayor importancia
econmica, la mazorca negra, es causada por Phytophthora palmivora Butl., que produce
prdidas de hasta un 30 % a nivel mundial (McMahon y Purwantara, 2004). El principal mtodo
de control de P. palmivora se ha basado en el uso de agroqumicos, aunque este mtodo parece
haber perdido su eficacia para controlar la enfermedad (Pereira, 2000), debido principalmente a
la generacin de resistencia por parte del hongo (Vos et al., 2003).
Para reducir la incidencia y severidad de esta enfermedad, se han utilizado otras estrategias de
control, como el uso de germoplasma resistente, el control biolgico y prcticas culturales
(Drenth y Guest, 2004). Una alternativa de control biolgico es el uso de extractos vegetales, que
en algunas investigaciones revelan un efecto positivo sobre el control de hongos fitopatgenos
(Ribeiro y Bendendo, 1999; Amorim et al., 2004; McMahon y Purwantara, 2004).
Por otro lado, Colletotrichum gloeosporioides (Penz.) Penz. & Sacc. es un patgeno capaz de
infectar un gran nmero de cultivos, incluyendo mango, papaya, ctricos, guanbana, aguacate,
caf y otros cultivos de importancia econmica. Generalmente produce pudricin en hojas, flores
y frutos, causando la enfermedad conocida como antracnosis. C. gloeosporioides es responsable
de prdidas econmicas importantes, principalmente en la etapa poscosecha de frutos (Silva et
al., 2006).
Considerando la importancia de la biodiversidad y de los extractos vegetales como alternativa
para el control de hongos fitopatgenos, esta investigacin tuvo como objetivo evaluar el efecto
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de extractos etanlicos obtenidos de plantas del Trpico Hmedo, sobre el crecimiento in vitro
de P. palmivora y C. gloeosporioides.

MATERIALES Y MTODOS
Se colectaron plantas de 37 especies vegetales correspondientes a 21 familias de plantas en el
campus y en la Reserva Forestal de la Universidad EARTH y se realiz una identificacin
taxonmica con el apoyo del Instituto Nacional de Biodiversidad (INBio) (Cuadro 1). Utilizando
el motor de bsqueda Google Schoolar y la coleccin de revistas TEEAL, se busc informacin
utilizando trminos relevantes a esta investigacin. Se seleccionaron para extraccin las plantas
cuyo efecto inhibitorio sobre el crecimiento de P. palmivora y C. gloeosporoides no se conoce.
Cuadro 1. Las especies y partes de plantas utilizadas para determinar la actividad fungitxica de
extractos vegetales sobre P. palmivora y C. gloeosporioides.

Familia Nombre cientfico Parte extrada

Acanthaceae Odontonema tubaeforme Tallo, Raz


Agavaceae Yucca elephantipes Tallo, Hoja, Raz
Amaryllidaceae Hymenocallis littoralis Tallo, Hoja, Raz
Anonnaceae Morinda citrifolia Semilla, Jugo liofilizado
Apiaceae Coriandrum sativum Raz
Apiaceae Eryngium foetidum Hoja, Raz
Arecaceae Caryota mitis Hoja, Fruto, Corteza
Araceae Anthurium upalaense Tallo, Hoja, Raz, Fruto
Araceae Dieffenbachia conccina Tallo, Hoja, Raz
Araceae Dieffenbachia longispatha Tallo, Hoja, Raz
Araceae Monstera deliciosa Hoja
Araceae Monstera tuberculata Tallo, Hoja
Araceae Philodendron hederaceum Tallo, Hoja, Raz, Flor
Araceae Philodendron radiatum Hoja, Fruto
Araceae Spathiphyllum friedrichsthalii Tallo, Hoja, Flor
Araceae Syngonium peliocladum Tallo, Inflorescencia, Peciolo
Cactaceae Epiphyllum phyllanthus Tallo, Hoja, Raz
Commelinaceae Dichorisandra hexandra Tallo, Hoja, Raz
Costaceae Costus bracteatus Tallo, Hoja, Raz
Costaceae Costus pulverulentus Hoja, Tallo, Raz, Inflorescencia
Cyclanthaceae Cyclanthus bipartitus Hoja
Gesneriaceae Columnea magnifica Hoja
Haemodoraceae Xiphidium coeruleum Tallo, Hoja, Raz
Heliconiaceae Heliconia latispatha Hoja, Tallo, Raz, Inflorescencia
Heliconiaceae Heliconia wagneriana Hoja, Inflorescencia
Polypodiaceae Adiantum wilsoni Hoja
Polypodiaceae Polybotrya caudata Tallo, Hoja, Raz
Pteridaceae Pteridium spp. Hoja
Rubiaceae Palicourea guianensis Flor
Rubiaceae Psychotria elata Tallo, Hoja, Raz, Flor
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Familia Nombre cientfico Parte extrada


Rubiaceae Psychotria marginata Hoja, Fruto
Rubiaceae Psychotria suerrensis Tallo, Hoja, Raz
Selaginellaceae Selaginella arthritica Tallo, Hoja, Raz
Selaginellaceae Selaginella eurynota Hoja
Tectariaceae Tectaria incisa Hoja
Urticaceae Urera baccifera Tallo, Hoja, Raz
Zingiberaceae Renealmia cernua Tallo, Hoja, Raz

Los extractos se obtuvieron de races, tallos, hojas, flores, frutos frescos, inflorescencias o
peciolos de las especies seleccionadas (Cuadro 1). Entre 100 g y 200 g de materia fresca y 500
mL a 600 mL de etanol (95 %), fueron homogenizados durante 2 minutos en un homogenizador
Waring Commercial CB15. Con la ayuda de un kitasato y utilizando papel filtro Whatman N 2,
la mezcla obtenida se filtr para eliminar los slidos remanentes. Se agregaron entre 300 mL y
400 mL de etanol al residuo slido hasta extraer por completo el material. Ambas soluciones
fueron combinadas y se procedi a la evaporacin (Figura 1).

Figura 1. Preparacin de los extractos secos.


La solucin obtenida se evapor bajo presin reducida en un Rotavapor Bchi R-200. Los
extractos que no fueron secados completamente por evaporacin, se liofilizaron en un
liofilizador. Los extractos secos fueron almacenados a -20 C hasta ser utilizados. Se prepararon
soluciones de extractos a una concentracin de 2500 mg/L disueltos en dimetilsulfxido
(DMSO), para ser utilizados en los bioensayos. En este estudio se incluyeron los extractos
etanlicos generados por otros proyectos (Gutirrez, 2006; Rivas y Ramrez, 2006; Rueda 2006).
Se prepar agar de papa dextrosa (APD), utilizado como medio para el aislamiento del cultivo
puro de P. palmivora. A partir de tejidos del fruto de cacao (Theobroma cacao L.) infectados con
la mazorca negra, se aisl el hongo colocndolo en APD y se dej en incubacin a una
temperatura de 25 C durante siete das. Se prepar Agar V-8, utilizado como medio de cultivo
para la activacin de P. palmivora. Pequeos discos (3 mm) del cultivo puro se extrajeron con un
sacabocados y se trasladaron a los nuevos platos Petri que contenan Agar V-8. Los cultivos se
dejaron en incubacin a 25 C durante dos das, para permitir la activacin del hongo y luego ser
utilizados en los bioensayos. Tanto el APD como el Agar V-8 se prepararon siguiendo mtodos
estndares de laboratorio (Brathwaite y Sosa-Moss, 1995).
En los platos Petri con el cultivo activado de P. palmivora, se delimitaron cuatro secciones. En
cada seccin se coloc un disco de papel filtro estril, previamente sumergido en la solucin de
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extracto o metalaxyl-M + mancozeb (Ridomil Gold MZ 68 WP) a una concentracin de 2 %.


Este fungicida comercial se coloc en una seccin de cada plato como control positivo. Se
realizaron cinco repeticiones para cada extracto evaluado. Los cultivos se dejaron en incubacin
durante siete das a una temperatura de 25 C. Pasado este perodo, se realiz una evaluacin
visual de la actividad biolgica de los extractos sobre el hongo. La evaluacin consisti en
determinar la presencia o ausencia de una zona de inhibicin del crecimiento micelial de P.
palmivora.
Se prepar APD utilizado como medio para el aislamiento del cultivo puro de
C. gloeosporioides. Se tomaron tejidos de frutos de mango (Mangifera indica L.) infectados con
antracnosis y se trasladaron al medio de cultivo APD, dejndolos en incubacin a 25 C durante
siete das. Con un sacabocados, se extrajeron discos de 3 mm del cultivo puro de
C. gloeosporioides y se trasladaron a nuevos platos Petri con agar neopeptona glucosa (ANP).
Los cultivos se dejaron en incubacin a 25 C durante tres das para permitir su activacin.
Despus de este periodo de incubacin, se realizaron los bioensayos. El ANP se prepar
siguiendo el mtodo estndar de laboratorio propuesto por Tuite (1969).

Figura 2. Preparacin de los bioensayos para antracnosis.


En los platos Petri con el cultivo de C. gloeosporioides activado, se delimitaron cuatro secciones.
En cada seccin se coloc un disco de papel filtro estril, previamente sumergido en la solucin
de extracto o mancozeb (Dithane NT 80 WP) a una concentracin de 2 %. Este fungicida
comercial se coloc en una seccin de cada plato como control positivo. Se hicieron cinco
repeticiones para cada uno de los tratamientos utilizados en los bioensayos. Los cultivos se
dejaron en incubacin durante siete das a 25 C. Pasado este periodo se realiz una evaluacin
visual de la actividad biolgica de los extractos sobre el hongo. La evaluacin consisti en
determinar la presencia o ausencia de una zona de inhibicin del crecimiento micelial de C.
gloeosporioides.

RESULTADOS Y DISCUSIN
Un total de 93 extractos etanlicos obtenidos a partir de las 37 especies vegetales (Cuadro 1) se
evaluaron a una concentracin de 2500 mg/L sobre el crecimiento in vitro de Phytophthora
palmivora y Colletotrichum gloeosporioides. Ninguno de los extractos mostr inhibicin del
crecimiento micelial de los hongos evaluados.
Muchos estudios se han realizado para evaluar la actividad biolgica de metabolitos secundarios.
El resultado de los programas de tamizaje ha demostrado que la probabilidad de encontrar
compuestos altamente activos muestra una baja frecuencia. Normalmente se estima una
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probabilidad de 0.01 %. De acuerdo con estimaciones de Dupont, aproximadamente 0.005 % de


compuestos evaluados para determinar actividad insecticida resultan en un producto comercial
(Jones y Firn, 1991).
Aunque las plantas tienen la capacidad de producir y almacenar diferentes cantidades de
metabolitos secundarios, las propiedades de estos compuestos pueden variar de acuerdo al
entorno del organismo productor (Firn y Jones, 2003). Dado que las evaluaciones se realizaron
con un pequeo nmero de especies de plantas, sobre un nmero an ms pequeo de
organismos con los cuales pudieran interactuar, la probabilidad de encontrar compuestos
biolgicamente activos es baja.
Esto se debe a que una actividad biolgica potente y especfica es una propiedad poco comn en
compuestos secundarios (Jones y Firn, 1991). Por lo tanto, la nica manera de incrementar la
posibilidad de xito en la bsqueda de compuestos con actividad biolgica potente, es evaluar la
mayor cantidad de compuestos posibles en una amplia gama de organismos (Firn y Jones, 2003).
Aunque en este estudio, los extractos etanlicos de especies vegetales no mostraron actividad
biolgica sobre el crecimiento de P. palmivora y C. gloeosporioides, es posible que muestren
inhibicin micelial en hongos fitopatgenos diferentes. Futuras investigaciones pudieran ser
dirigidas hacia otros organismos patgenos de importancia econmica en la agricultura, por
ejemplo: Mycosphaerella fijiensis Morelet (Sigatoka negra) y Hemileia vastatrix Berk & Broome
(Roya del caf).

CONCLUSIONES
Ninguno de los 92 extractos, evaluados a una concentracin de 2500 mg/L, mostr inhibicin del
crecimiento micelial de Phytophthora palmivora y Colletotrichum gloeosporioides. Las especies
de plantas estudiadas podran contener metabolitos secundarios con actividad biolgica
especfica en organismos fitopatgenos diferentes a los evaluados.

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