You are on page 1of 24

Liquid Chromatography Mass Spectrofotometry (LC-MS

)

I. Pendahuluan
Kekuatan pemisahan kromatografi modern yang dikombinasikan
dengan selektifitas dan batas deteksi yang sangat rendah dari spektrometer
massa modern memungkinkan untuk menganalisis sampel yang sangat
kompleks dengan tingkat kepercayaan yang tinggi (Linscheid 1994)
Kromatografi cair adalah teknik pemisahan mendasar di bidang ilmu
pengetahuan dan bidang terkait kimia. Tidak seperti kromatografi gas, yang
tidak cocok untuk nonvolatil dan molekul termal rapuh, kromatografi cair
dengan aman dapat memisahkan rentang yang sangat luas dari senyawa
organik juga metabolit obat molekul kecil untuk peptida dan protein (Agilent
2001).
Detektor tradisional untuk kromatografi cair meliputi indeks bias,
elektrokimia, fluoresensi, dan detektor ultraviolet-tampak (UV-Vis).
Beberapa diantaranya menghasilkan data dua dimensi, yaitu data yang
mewakili kekuatan sinyal sebagai fungsi waktu. Lainnya, termasuk
fluoresensi dan detektor UV-Vis diodearray, menghasilkan data tiga-dimensi.
Data tiga dimensi tidak hanya mencakup kekuatan sinyal namun data spektral
untuk setiap titik waktu (Agilent 2001).
Spektrometer massa juga menghasilkan data tiga dimensi. Selain
kekuatan sinyal, juga menghasilkan data spektral massa yang dapat
memberikan informasi mengenai berat molekul, struktur, identitas, kuantitas,
dan kemurnian sampel. Data spektral massa menambahkan kekhususan yang
meningkatkan kepercayaan terhadap hasil kedua analisis kualitatif dan
kuantitatif (Agilent 2001).
Liquid chromatography mass spectrometry (LC-MS, atau alternatif
HPLC-MS) adalah teknik kimia analitik yang menggabungkan kemampuan
pemisahan fisik dari kromatografi cair (atau HPLC) dengan kemampuan
analisis massa spektrometer massa. LC-MS adalah teknik yang banyak
digunakan untuk berbagai aplikasi yang memiliki sensitifitas dan spesifisitas
sangat tinggi. Pada umumnya aplikasinya berorientasi pada deteksi dan

1

identifikasi potensi spesifik bahan kimia terhadap kehadiran bahan kimia
lainnya (dalam campuran yang kompleks) (Sumbono 2010).
Kombinasi kromatografi cair kinerja tinggi dan spektrometri massa
(LC/MS) memiliki dampak yang signifikan terhadap pengembangan obat
selama dekade terakhir. Perbaikan secara terus menerus dalam teknologi
antarmuka LC/MS dikombinasikan dengan fitur canggih untuk analisis
struktur, kualitatif dan kuantitatif, telah menghasilkan lingkup aplikasi yang
lebih luas (Lee 1999).

II. Pembahasan
Liquid Chromatography Mass Spectrometry (LC-MS) adalah teknik
analisis yang menggabungkan kemampuan pemisahan fisik dari kromatografi
cair dengan spesifisitas deteksi spektrometri massa. Kromatografi cair
memisahkan komponen-komponen sampel dan kemudian ion bermuatan
dideteksi oleh spektrometer massa. Data LC-MS dapat digunakan untuk
memberikan informasi tentang berat molekul, struktur, identitas dan kuantitas
komponen sampel tertentu (Agilent 1998).
Keuntungan dari LC-MS yaitu dapat menganalisis lebih luas berbagai
komponen, seperti senyawa termal labil, polaritas tinggi atau bermassa
molekul tinggi, bahkan juga protein. Senyawa dipisahkan atas dasar interaksi
relatif dengan lapisan kimia partikel-partikel (fase diam) dan elusi pelarut
melalui kolom (fase gerak). Komponen elusi dari kolom kromatografi
kemudian diteruskan ke spektrometer massa melalui antarmuka khusus
(Gates 2005).

2

larutan yang kuat berinteraksi dengan fasa diam maka larutan tersebut akan keluar kolom. Gambar 1 Antarmuka LC-MS dengan ionisasi elektrospray spektrometer massa (Scripp 2014) A. karena perbedaan kekuatan interaksi antara larutan terhadap fasa diam. 3 . alatnya terdiri atas kolom (sebagai fasa diam) dan larutan tertentu sebagai fasa geraknya. Sebaliknya. Cuplikan dimasukkan ke dalam aliran fasa gerak dengan cara penyuntikan. Dengan bantuan pompa fasa gerak cair dialirkan melalui kolom ke detektor. HPLC Kerja HPLC pada prinsipnya adalah pemisahan analit-analit berdasarkan kepolarannya. Larutan yang kurang kuat interaksinya dengan fasa diam akan keluar dari kolom lebih dulu. Yang paling membedakan HPLC dengan kromatografi lainnya adalah pada HPLC digunakan tekanan tinggi untuk mendorong fasa gerak. Di dalam kolom terjadi pemisahan komponen-komponen campuran. Campuran analit akan terpisah berdasarkan kepolarannya dan kecepatannya untuk sampai ke detektor (waktu retensinya) akan berbeda. hal ini akan teramati pada spektrum yang puncak-puncaknya terpisah (Himawan 2010). kemudian dideteksi oleh detektor dan direkam dalam bentuk kromatogram (Isnawati 2013). Instrumen LC-MS 1.

Pelarut yang digunakan dalam ESI dipilih berdasarkan kelarutan senyawa. acetonitrile/H2O). ion-ion yang muncul diarahkan ke dalam lubang melalui lensa elektrostatik yang mengarah ke vakum dari analisis massa. metanol/air) atau asetonitril (50/50. protein. Dalam kedua kasus tersebut. Kemungkinan lain yaitu droplet meledak dan kemudian melepaskan ion. karbohidrat. Pelarut utama protik yang biasa digunakan yaitu metanol (50/50. oligonukleotida kecil. Sampel larutan disemprotkan dari daerah medan listrik yang kuat di ujung jarum logam yang dipertahankan pada potensial 700 V sampai 5000 V. atau keduanya diterapkan pada droplet pada tekanan atmosfer sehingga menyebabkan pelarut menguap dari setiap droplet. hal ini karena spektrometer massa mengukur rasio massa terhadap muatan (m/z) sehingga memungkinkan untuk mengamati molekul yang sangat besar dengan rentang massa yang relatif kecil. Ionisasi elektrospray kondusif untuk pembentukan molekul kecil bermuatan tunggal. Jarum berfungsi untuk membuat larutan menjadi droplet saat disemprotkan. Tolakan kolom timbal balik antara muatan dipermukaan menjadi lebih besar sehingga melebihi kekuatan tegangan permukaan. dan lipid. sedangkan untuk 4 . polimer sintetis. dan ion dikeluarkan dari droplet melalui Taylor cone (Gambar 2). Sumber ion Beberapa sumber ion yang digunakan dalam LC-MS dalam Scripp 2014 yaitu :  Ionisasi elektrospray (ESI) Ionisasi elektrospray (ESI) adalah metode yang digunakan untuk analisis peptida. sehingga cocok untuk menggunakan ESI sebagai antarmuka dengan HPLC atau elektroforesis kapiler . tetapi dapat juga untuk molekul bermuatan banyak dari molekul yang lebih besar. ESI menghasilkan molekul gas terionisasi langsung dari larutan cair yang menghasilkan semprotan tetesan (droplet) dalam medan listrik.2. Karena ESI melibatkan pergerakan terus menerus dari larutan. Gas kering dan panas. Sebagai ukuran menurunnya tetesan droplet dilihat dari densitas muatan pada permukaannya yang meningkat. volatilitas pelarut dan kemampuan pelarut untuk menyumbangkan proton.

Beberapa senyawa memerlukan penggunaan kloroform dengan 0.000 Da pasangan ion seperti TFA dapat mengurangi snsitifitas  Sensifitas yang baik dengan  Campuran kompleks dapat femtomol untuk sensitifitas mengurangi sensitifitas pikomol tipikal rendah  Metode ionisasi paling lembut. Buffer seperti Na+. tekanan uap air yang relatif rendah memiliki efek yang merugikan pada sensitifitas. Tabel 1 Keuntungan dan Kerugian dari ESI Keuntungan Kekurangan  Rentang massa praktis hingga  Adanya garam-garam dan agen 70. Buffer yang mudah menguap seperti amonium asetat dapat digunakan secara lebih efektif. K+. Bila 100% air digunakan di ESI. dan garam dapat menurunkan tekanan uap droplet sehingga mengurangi sinyal melalui peningkatan tetesan tegangan permukaan yang mengakibatkan penurunan volatilitas.pelarut pendukung aprotik digunakan 10% DMSO dalam air.  Analisis campuran simultan bisa mampu menghasilkan kompleks menjadi rendah nonkovalen dalam fase gas  Mudah beradaptasi dengan  Beberapa pengisian dapat kromatografi cair membingungkan terutama dalam analisis campuran  Mudah beradaptasi dengan  Kemurnian sampel sangat tandem analisis massa seperti penting perangkap ion dan instrument quadrupole tiga  Beberapa pengisian  Carryover dari sampel ke sampel memungkinkan untuk analisis ion massa yang tinggi dengan kisaran instrument m/z relatif rendah  Tidak ada gangguan matrik 5 . fosfat.1% asam format untuk memudahkan ionisasi. sensitifitas yang baik diperoleh ketika menggunakan pelarut organik yang mudah menguap. serta isopropil alkohol untuk meningkatkan kelarutan beberapa senyawa.

nanoESI menggunakan penghasil emisi dan dalam beberapa kasus menggunakan metalisasi kaca atau leburan silika yang memiliki lubang kecil (~5μ). Selain itu. dimana jarum semprot dibuat sangat kecil dan diposisikan dekat dengan pintu masuk ke analisis massa sehingga jumlah sampel yang dibutuhkan menjadi sedikit. Gambar 2 Ionisasi elektrospray spektrometer massa  Ionisasi nanoelektrospray (nanoESI) Elektrospray aliran rendah disebut juga nanoelektrospray (nanoESI) adalah variasi pada ESI. Laju alir untuk sumber nanoESI berkisar puluhan hingga ratusan nanoliter per menit. jumlah penguapan yang diperlukan untuk memperoleh pembentukan ion jauh lebih sedikit. Sampel terlarut ditambahkan ke emitor dan tekanan ~30 PSI diterapkan ke belakang emitor. karena itu transmisi ion ke analisis massa jauh lebih efisien. karena droplet biasanya lebih kecil dengan nanoESI daripada ESI normal. sehingga nanoESI lebih toleran terhadap garam dan kotoran lainnya. 6 . Untuk mendapatkan aliran rendah. Curahan sampel pada laju aliran yang sangat rendah memungkinkan untuk sensitifitas tinggi. Emiter diposisikan sangat dekat dengan pintu masuk analisis massa. Kurangnya penguapan pada nanoESI menyebabkan kotoran tidak terkonsentrasi turun sebanyak pada ESI .

Pada molekul analit tekanan atmosfer sering bertabrakan dengan ion pereaksi. tetapi droplet tidak bermuatan dan sumber APCI berisi pemanas uap dapat mempercepat desolvasi/penguapan dari tetesan. Molekul sampel menguap dalam wilayah reaksi molekul ion pada tekanan atmosfer. Gambar 4 Ionisasi kimia tekanan atmosfer (APCI) spektrometer massa Ionisasi APCI berasal dari pelarut yang terionisasi dari korona tidak bermuatan. dan transfer elektron 7 . maka ionisasi kimia molekul analit sangat efisien. efluen cair dari APCI dimasukkan langsung ke sumber ionisasi. Sama seperti elektrospray. Ion pelarut berada pada kondisi tekanan atmosfer. Gambar 3 Pembentukan ion dari sumber ionisasi elektrospray  Ionisasi kimia tekanan atmosfer (APCI) APCI menjadi sumber ionisasi penting karena menghasilkan ion langsung dari larutan dan mampu menganalisis senyawa yang relatif nonpolar. sehingga transfer proton (untuk protonasi reaksi MH+) terjadi dalam muatan positif.

Yang pertama adalah fotoeksitasi langsung. Perbedaan utama antara APCI dan APPI yaitu pada APPI sampel menguap melewati sinar ultra-violet (sumber cahaya kripton dipancarkan pada 10. ESI sangat rentan terhadap efek supresi ion.atau kehilangan proton ([M-H]-) terjadi dalam muatan negatif. Ionisasi induksi APPI melalui dua mekanisme yang berbeda. efluen cair dari APPI dimasukkan langsung ke sumber ionisasi.  Fotoionisasi tekanan atmosfer (APPI) Fotoionisasi tekanan atmosfer (APPI) menjadi sumber ionisasi penting karena menghasilkan ion langsung dari larutan dengan latar belakang relatif rendah dan mampu menganalisis senyawa yang relatif nonpolar.85 dan 12.62 eV) yang tidak terionisasi oleh lampu kripton. dan APCI membutuhkan suhu penguapan berkisar 350-500 °C.0 eV dan 10.6 eV). APPI lebih sensitif dibandingkan dengan ESI atau APCI. Sama dengan APCI. dapat mengurangi fragmentasi selama ionisasi dan menghasilkan ion molekul yang utuh. Sinyal latar belakang yang lebih rendah disebabkan tingginya potensial ionisasi pelarut standar seperti metanol dan air (masing-masing. memungkinkan untuk ejeksi elektron 8 . IP 10. yang dapat menyebabkan degradasi termal. Gambar 5 Fotoionisasi tekanan atmosfer (APCI) spektrometer massa Kelemahan dari ESI dan APCI yaitu dapat menghasilkan ion latar belakang dari pelarut. sebab memiliki rasio sinyal kebisingan yang lebih rendah karena ionisasi latar belakang. Selain itu. Pengaruh kelompok pelarut pada ion pereaksi dan tekanan gas yang tinggi.

protein. Mekanisme kedua yaitu fotoinduksi ionisasi kimia tekanan atmosfer yang mirip dengan APCI melibatkan transfer muatan untuk menghasilkan protonasi (MH+) atau kehilangan proton ([M-H]-) untuk menghasilkan ion negatif. Sumber APPI menggunakan energi cahaya yang lebih tinggi dari potensi ionisasi (IP) dari sebagian besar molekul target. dan lipid). dan jenis dopan yang digunakan.  Matrik dibantu laser desorpsi/ionisasi (MALDI) Matrix dibantu laser desorpsi/ionisasi spektrometer massa (MALDI- MS) merupakan alat analisis untuk peptida. tetapi aseton juga dapat berfungsi sebagai dopan untuk muatan negatif. Dalam analisis MALDI. pereaksi fotoionisasi (dopan) ditambahkan ke eluan. transfer muatan terjadi pada analit. tetapi lebih rendah dari sebagian besar IP udara dan molekul pelarut. Dopan untuk muatan positif meliputi aseton dan toluena. produk alami. dapat juga untuk analisis sampel heterogen biologis kompleks seperti mencerna proteolitik. Matriks juga berfungsi untuk meminimalkan kerusakan sampel dari radiasi laser dengan menyerap sebagian besar energi biasa. Transfer energi yang efisien dan diarahkan selama desorpsi matrik dibantu induksi laser memberikan hasil ion yang tinggi untuk analit utuh dan memungkinkan untuk pengukuran senyawa dengan sensitifitas sampai sub pikomol. Matriks MALDI berupa bahan padat nonvolatil yang memfasilitasi proses desorpsi dan ionisasi dengan menyerap radiasi laser. Selain itu. pelarut. karena sedikit kelebihan energi disimpan dalam molekul sehingga terjadi fragmentasi minimal. matriks memainkan peran kunci dalam teknik ini. sehingga menghilangkan pengganggu.dan ion kation radikal positif (M+). Mekanisme ionisasi (M+ vs [M+H]+) molekul tergantung pada afinitas proton dari analit. Setelah fotoionisasi dari dopan.. 9 . dan sebagian besar biomolekul lainnya (oligonukleotida. Untuk memulai ionisasi kimia. sehingga matriks dan sampel tertanam dalam matriks menguap. karbohidrat.

Molekul-molekul sampel terkristalisasi juga menguap. tetapi tidak langsung menyerap energi dari laser. molekul bermuatan yang terdesorbsi kemudian diarahkan elektrostatis dari sumber ionisasi MALDI ke analisis massa. Gambar 7 Matriks MALDI 10 .rasio muatan (m/z) masing- masing. Analit pertama terkristalisasi dari kelebihan molar senyawa matriks yang biasanya berupa asam organik lemah yang menyerap UV. Gambar 6 Transfer energi pada MALDI Mekanisme desorpsi/ionisasi yang tepat untuk MALDI belum diketahui. tetapi dipercaya bahwa MALDI menyebabkan ionisasi dan transfer sampel dari fase terkondensasi ke fase gas melalui eksitasi laser sampel matriks (Gambar 6). Time-of-flight (TOF) analisis massa sering digunakan untuk memisahkan ion yang sesuai berdasarkan massa. Setelah dalam fase gas.

dan absorptifitas UV memberi mekanisme untuk transfer energi laser untuk analit.  Toleransi garam dalam konsentrasi milimolar  Cocok untuk analisis senyawa kompleks Pemanfaatan MALDI dalam analisis biomolekul terletak pada kemampuannya untuk memberikan informasi mengenai berat molekul pada molekul utuh. senyawa dengan rentang massa di bawah 700 Da (tergantung bahan matrik).Tabel 2 Keuntungan dan kerugian MALDI Keuntungan Kerugian  Rentang massa hingga 300. 11 .000  Tidak dapat digunakan pada Da. dan senyawa organik kecil dari berbagai jenis. Permukaan silikon berupa silikon berpori atau kawat nano silikon semikonduktor yang menyerap UV dengan area permukaan besar (ratusan m2/cm3).  Sensitifitas khas pada femtomol  Kemungkinan foto-degradasi oleh rendah untuk picomol rendah. Untuk aplikasi laser desorpsi/ionisasi spektrometer massa. karbohidrat. Kemampuan untuk menghasilkan informasi yang akurat sangat berguna untuk identifikasi dan karakterisasi protein. Kombinasi ini memungkinkan karakteristik DIOS digunakan untuk berbagai macam analisis biomolekul termasuk peptida. struktur silikon terstruktur menggunakan perancah untuk mempertahankan molekul pelarut dan analit. desorpsi/ionisasi laser Juga memungkinkan untuk sensitifitas attomol  Ionisasi lembut dengan sedikit  Matriks asam yang digunakan atau tidak ada fragmentasi dalam MALDI dapat menyebabkan degradasi pada beberapa senyawa.  Desorpsi/ionisasi pada silikon (DIOS) DIOS adalah metode matriks bebas yang menggunakan getaran laser desorpsi/ionisasi pada silikon (Gambar 8).

format berbasis chip dapat disesuaikan dengan penanganan sampel otomatis. Selain itu. deposisi sampel air seragam dan penanganan sampel disederhanakan. dimana laser dapat memindai dari bagian ke bagian lain dalam DIOS sehingga bisa mempercepat dan mempermudah analisis senyawa dengan berat molekul rendah. Instrumentasi dan akuisisi dengan menggunakan DIOS-MS hanya membutuhkan sedikit penyesuaian dengan pengaturan MALDI. Panjang gelombang sinar laser yang sama (337 nm) yang digunakan dalam MALDI efektif juga untuk DIOS. sedangkan FAB menggunakan sinar ion kontinyu.  Atom cepat/ion pemboman (FAB) Pemboman ion atom cepat (atau FAB). Dalam hal sensitifitas DIOS sebanding dengan MALDI yaitu memiliki beberapa keuntungan : latar belakang rendah dalam kisaran massa rendah. 12 . Perbedaan antara MALDI dan FAB yaitu pada MALDI. merupakan sumber ionisasi yang mirip dengan MALDI karena menggunakan matriks dan sinar yang sangat aktif dari partikel untuk desorpsi ion dari permukaan. Gambar 8 DIOS menggunakan getaran laser UV dari permukaan silikon terstruktur untuk menghasilkan ion fase gas utuh DIOS memiliki banyak kesamaan dengan MALDI. sinar yang digunakan berupa getaran sinar laser. FAB 1000 kali lebih sensitif dibandingkan MALDI. Matriks MALDI biasanya berupa kristal padat. chip hanya ditempelkan pada piring mesin MALDI dan dimasukkan ke dalam spektrometer. sedangkan FAB biasanya memiliki matriks cair.

Setelah dalam fase gas. matriks juga meminimalkan degradasi sampel dari sinar partikel energi tinggi. Atom-atom cepat atau bertabrakan dengan matriks akan menyebabkan matriks dan analit akan teradsorpsi ke fase gas. Matriks FAB memfasilitasi proses desorpsi dan ionisasi. Dua matriks yang paling umum digunakan dalam FAB adalah gliserol dan m-nitrobenzil alkohol. hidrofobik. karena EI biasanya menghasilkan banyak ion fragmen.  Ionisasi elektron (EI) Elektron ionisasi adalah salah satu sumber ionisasi yang paling penting untuk analisis rutin kecil. Dengan menyerap sebagian besar energi. molekul bermuatan dapat mendorong elektrostatis ke analisis massa. Gambar 9 FAB spektometri massa Pemboman atom cepat (FAB) adalah sumber ionisasi lunak yang memerlukan penggunaan probe penyisipan langsung untuk pengenalan sampel dan atom netral Xe atau ion Cs+ untuk menempelkan sampel dan matriks dari probe penyisipan permukaan langsung. molekul termal stabil dan masih banyak lagi. hal ini untuk mendeteksi ion matriks dalam spektrum FAB serta ion molekul terprotonasi atau kationik (yaitu M + Na+) dari analit. matriks FAB adalah bahan cair mudah menguap yang berfungsi untuk terus-menerus mengisi permukaan dengan sampel baru seperti dibombardir oleh sinar ion. 13 .

Kegunaan ionisasi elektron berkurang secara signifikan untuk senyawa dengan berat molekul diatas 400 Da karena desorpsi termal yang diperlukan sampel sering menyebabkan dekomposisi termal sebelum penguapan dapat terjadi. atau melalui kapiler. sehingga menyebabkan ejeksi ionisasi elektron dan fragmentasi. yang berisi 70 V dari energi kinetik (70 elektron volt atau 70 eV). dimana elektron merangsang molekul.  Sampel molekul melewati berkas elektron.(70 eV) → M+ (~5 eV) + 2e.(~65 eV)  Kelebihan energi (6 eV) dalam molekul menyebabkan perubahan fragmentasi beberapa drajat.  Elektron. 14 . dekomposisi termal dan fragmentasi yang berlebihan.  Elektron dikeluarkan dari filamen. Setelah dalam fase gas senyawa masuk ke dalam sumber ionisasi elektron. Gambar 11 Ionisasi elektron Sampel dikirimkan sebagai gas dari probe melalui desorpsi termal. dipanaskan dan dipercepat melalui medan listrik pada 70 V untuk membentuk berkas elektron terus menerus. Masalah utama yang terkait dengan desorpsi termal dalam ionisasi elektron yaitu ketidakstabilan molekul besar. M + e. Hasil transfer dalam ionisasi (ejeksi elektron) dengan ion internal biasanya memiliki kelebihan energi yang tidak lebih dari 6 eV. Metode atau mekanisme ejeksi elektron untuk hasil pembentukan ion positif sebagai berikut:  Sampel termal menguap. mentransfer sebagian energi kinetiknya untuk molekul.

Proses ionisasi kimia dimulai dengan pereaksi gas seperti metana.→ R+ + 2 e– R+ + RH → RH+ + R RH+ + analit (A) → AH+ + R Berbeda dengan EI. Analisis Massa Ada empat jenis umum dari analisis massa yang dapat digunakan untuk pemisahan ion dalam spektrometri massa (Chemwiki 2014). analit lebih mungkin untuk memberikan ion molekul dengan mengurangi fragmentasi menggunakan CI. sampel harus termal stabil karena penguapan dalam sumber CI terjadi melalui pemanasan. Quadrupole terdiri atas 4 batang/tiang yang paralel. isobutana atau amonia. Mekanisme yang mungkin untuk ionisasi CI yaitu : Reagen (R) + e. Tekanan gas tinggi pada sumber ionisasi adalah hasil dari reaksi ion-molekul antara pereaksi gas ion dan pereaksi gas netral. 15 . yang terionisasi oleh dampak elektron . 3. di mana batang yang berdekatan memiliki polaritas tegangan yang berlawanan. Tegangan yang diterapkan pada setiap batang adalah penjumlahan dari tegangan konstan DC (U) dan frekuensi radio yang bervariasi (Vrfcos (wt)). Gaya listrik pada ion menyebabkan ion berosilasi/orbit di daerah antara 4 batang. di mana jari-jari orbit tetap konstan. Namun. Beberapa produk dari reaksi ion-molekul dapat bereaksi dengan molekul analit untuk menghasilkan ion . Ionisasi kimia menggunakan fase gas reaksi ion-molekul dalam vakum dari spektrometer massa untuk menghasilkan ion dari molekul sampel. M+ → ion molekul + ion fragmen + fragmen netral  Ionisasi kimia (CI) Ionisasi kimia (CI) diterapkan pada sampel yang sama dengan yang dianalisis oleh EI dan digunakan untuk meningkatkan kelimpahan ion molekuler.  Quadrupole Analisis Massa Quadrupole adalah analisis massa yang menggunakan medan listrik untuk memisahkan ion. dimana w adalah frekuensi sudut dari bidang frekuensi radio.

Ion kemudian melayang atau terbang dimana kecepatan ion tergantung pada massa (m) dan muatan (z). Ion-ion akan tetap mengorbit di daerah antara kutub tanpa terjemahan sepanjang kutub kecuali ion memiliki kecepatan konstan yang dibuat sebagai ion yang memasuki quadrupole tersebut. Gambar 12 Quadrupole Analisis Massa Pergerakan ion dalam gerakan yang sangat kompleks berbanding lurus dengan massa ion. Sebelum memasuki analisis. Analisis massa ini berguna karena semua ion yang dideteksi (hampir) bersamaan dapat memindai rentang massa semua ion dengan sangat cepat. Ion massa tertentu memiliki frekuensi tertentu dimana semakin besar massa. ion melewati potensi tegangan tertentu (biasanya dibuat oleh elektroda cincin) untuk memberikan ion kecepatan konstan sehingga dapat melintang di sepanjang pusat quadrupole tersebut. Sementara di quadrupole. tegangan pada quadrupole.  TOF (Time of Flight) Analisis Massa Prinsip-prinsip dasar analisis massal menggunakan TOF analisis massa relatif mudah jika dibandingkan dengan banyak perangkat analisis massa lainnya dimana ion diambil (atau diproduksi) dalam ledakan singkat atau paket dalam sumber ion dan dikenakan tegangan percepatan. 16 . dan frekuensi radio. semakin besar frekuensinya. lintasan ion berubah sedikit berdasarkan massanya. menyebabkan sensitifitas pada instrumen juga meningkat.

Dalam orbit energi tinggi. Jika medan magnet tetap konstan. Spektrum yang diperoleh dengan analisis massa perangkap ion mungkin berbeda secara signifikan karena diperoleh dari sistem quadrupole tiga dimana terjadi tabrakan energi atau gas dalam sistem.  Ion Cyclotron Resonance (ICR) ICR adalah perangkap ion yang menggunakan medan magnet untuk menangkap ion ke dalam orbit di dalamnya. Spektrometer massa perangkap ion bekerja berdasarkan kekuatan ion dalam perangkap. seperti ion yang berosilasi antara dua piring. berbanding lurus dengan jumlah ion dalam sel pada frekuensi tertentu. Quadrupole Ion Perangkap Analisis Massa Analisis ini menggunakan prinsip yang sama seperti analisis quadrupole dengan menggunakan medan listrik untuk pemisahan ion. Muatan dari ion-ion yang berlawanan memiliki kecepatan sudut yang sama. yang membedakan hanyalah mengorbit dalam arah yang berlawanan. muatan untuk rasio massa dari masing-masing ion dapat ditentukan dengan mengukur kecepatan sudut. dimana ion yang tidak terseleksi diberikan lintasan oleh medan elektrostatik yang menyebabkan mereka untuk keluar dari perangkap dengan mengisi perangkap dengan fragmentasi gas inert dari ion yang dipilih sehingga ini berguna ketika informasi struktural diperlukan. 17 . bukan dari kecepatan. Frekuensi orbit tergantung pada muatan dan massa ion. Sistem memiliki kemampuan yang unik yaitu memindai beberapa produk ion yang sensitif dengan sangat baik. elektron menumpuk di salah satu piring atas yang lain dan mendorong arus untuk berosilasi. dan memanipulasi ion dengan menggunakan tegangan konstan dan bidang retensi. Amplitudo tegangan yang diterapkan memungkinkan analisis massa perangkap ion membuat ion terperangkap pada perangkat analisis. Dalam analisis ini tidak ada pemisahan yang terjadi karena tidak semua ion dapat terjebak di dalam sehingga medan listrik eksternal diterapkan untuk membantu menghasilkan sinyal .

Detektor Setelah ion keluar dari analisis massa. Detektor titik: ion tidak spasial diselesaikan dan berurutan menimpa detektor yang terletak pada satu titik dalam geometri spektrometer. digunakan untuk diferensial sinyal yang dijumlahkan untuk menghasilkan hasil yang diinginkan. yang selanjutnya diperkuat dengan menginduksi arus (dihasilkan dengan memindahkan beban). Gambar 13 Detektor titik 2. Detektor merupakan elemen penting dari spektrometer massa yang menghasilkan sinyal dari ion dengan menghasilkan elektron sekunder. ion tersebut harus dideteksi dan diubah menjadi sinyal yang dapat digunakan. Fourier Transform ICR (FT-ICR). Sistem detektor ion terbagi dalam dua kelas utama : 1. 4. Gambar 14 Detektor array 18 . Detektor array: ion secara spasial diselesaikan dan semua ion tiba secara bersamaan (simultan atau dekat) dan dicatat di sepanjang pesawat menggunakan bank detektor.

B. 19 . Kutup ini berfungsi agar muatan yang berkumpul pada Taylor cone adalah muatan positif sehingga nantinya saat terjadi penyemprotan dan terbentuk droplet (tetes– tetes) tidak bergabung menjadi droplet yang lebih besar lagi. Sedangkan cara kerja spektrometer massa menggunakan metode ESI (Wibowo 2011) adalah sebagai berikut : Gambar 15 Proses pemisahan analit pada kromatografi cair sampai dengan penyemprotan (penyemprotan oleh spray needle tip) 1. Analit dan solven (eluen) disemprotkan (spray) melalui Taylor cone. 2. Cara Kerja LC-MS Cara kerja kromatografi cair adalah sama dengan HPLC atau kromatografi cair lainnya. Analit bersama dengan eluen dari syringe pump atau LC masuk ke dalam kapilari. Di dalam kapilari terdapat anoda (kutup negatif) pada Taylor cone dan katoda (kutup negatif) didekat masukkan analit dan eluen. Akan terbentuk droplet–droplet yang akan mengalami tahap evaporasi solven untuk mengurangi solven yang menempel di analit.

3. Tetes-tetes tersebut masuk ke dalam counterelectrode (biru). Droplet mengalami evaporasi solven. Pada jarum kapiler terdapat Taylor cone dimana daerah tersebut bermuatan negatif sehingga analit dalam solven yang memiliki muatan positif akan berkumpul di daerah Taylor cone. Tetesan masuk melalui kapiler transfer kemudian menuju spektrometer massa. Gambar 16 Proses setelah analit dipisahkan oleh Liquid Chromatography Analit yang terikut dalam eluen masuk ke dalam jarum penyemprot/kapiler. Gas ini berfungsi agar analit yang terjadi stabil dalam bentuknya dan tidak terganggu oleh pengaruh gas oksigen. Satu analit bersama solven yang diliputi oleh muatan positif 20 . Droplet tersebut ditransfer melalui lubang kapiler untuk dianalisis menggunakan spectrometer massa. kemudian eluen bersama analit disemprotkan menjadi bentuk tetes-tetes (droplet). pada saat terjadi penyemprotan. dimana bagian- bagian tersebut antara lain : a. tetesan-tetesan (droplet) permukaannya memiliki muatan positif. akibatnya droplet menyusut sampai titik dimana tegangan permukaan pada droplet tidak dapat menopang muatan dipermukaannya sehingga terjadi perpecahan dalam droplet tersebut yang disebut “coulombic” ledakan menjadi bagian-bagian. Droplet yang mengalami ledakan kolom tersebut akan masuk ke dalam cone dimana di sisi kiri dan kanannya sudah mengalir gas Nitrogen (N2). Analit dengan satu muatan dan beberapa muatan (analit ion) b.

Li+. Bidang biokimia  Identifikasi protein c. Ion harus dibuat bermuatan positif agar masing-masing tetesan (droplet) tidak saling menempel lagi (membentuk tetesan yang lebih besar). Bidang farmasi  Identifikasi benzodiazepin  Identifikasi metabolisme asam empedu b. Tetesan (droplet) dapat bermuatan positif atau negatif tergantung dari daya yang ditempelkan pada kapilari. C. Bidang klinik  Deteksi sensitifitas trimipramin dan thioridazine dalam sampel urin 21 . Untuk ion negatif digunakan Cl-. K+. NH4+ dan kationik lainnya. Akibatnya pada spektra sering terjadi penambahan berat molekul ion-ion tersebut disamping penambahan berat molekul solven. Aplikasi LC-MS a. Beberapa analit bersama beberapa molekul solven dan diliputi oleh beberapa muatan positif. Gambar 17 Proses droplet berubah menjadi analit Muatan positif pada solven biasanya ditambahkan dari ion-ion Na+.c.

struktur. 22 . Bidang lingkungan  Deteksi herbisida fenil urea  Deteksi rendahnya tingkat karbaril dalam makanan III. Bidang makanan  Identifikasi aflatoksin dalam makanan  Determinasi vitamin D3 dalam suplemen pakan ternak e. LC-MS dapat digunakan untuk memberikan informasi tentang berat molekul. Kesimpulan Liquid Chromatography Mass Spectrometry (LC-MS) merupakan teknik analisis yang menggabungkan kemampuan pemisahan fisik dari kromatografi cair dengan spesifisitas deteksi spektrometri massa. Senyawa dipisahkan atas dasar interaksi relatif dengan lapisan kimia partikel-partikel (fase diam) dan elusi pelarut melalui kolom (fase gerak).d. identitas dan kuantitas komponen sampel tertentu. polaritas tinggi atau bermassa molekul tinggi. seperti senyawa termal labil. bahkan juga protein. Komponen elusi dari kolom kromatografi kemudian diteruskan ke spektrometer massa melalui antarmuka khusus untuk kemudian diidentifikasi oleh spektrometer massa. LC-MS yaitu dapat menganalisis lebih luas berbagai komponen.

Applications of Liquid Chromatography-Mass Spectrometry. http://www.chem.edu/Analytical_Chemistry/Instrumental_Anal ysis/Mass_Spectrometry/Mass_Spectrometers_%28Instrumentation% 29/Mass_Analyzers_%28Mass_Spectrometry%29 diakses pada tanggal 10 Maret 2014 Gates P. 9 pp.pitt.com/2013/02/kromatografi-cair-kinerja- tinggi-hplc.. Isnawati R.agilent. http://chemwiki.php diakses pada tanggal 03 Maret 2014 23 . http://yi2ncokiyute.html diakses pada tanggal 03 Maret 2013. LC/MS applications in drugs development. Pure & Appl. Mass Spectrometry.chem. Agilent.bris. S. F. Mass Spectrometry Reviews 18 (3-4): 187-279. Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT).. Chemwiki. www. Kerns E.blogspot. http://rafaeljosephhimawan. Scrip. Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (HPLC).com/2010/04/kromatografi-cair- kinerja-tinggi-kckt. 2010. 2014. 2005. Lee M. http://www. H. High Performance Liquid Chromatography Mass Spectrometry (HPLC/MS). Basic of LC/MS. 2013.html diakses pada tanggal 01 Maret 2014 Himawan R. 2014. Basic of LC/MS.pdf diakses pada tanggal 01 Maret 2014. 2001.comlibrary.html diakses pada tanggal 03 Maret 2014.eduwipfAgilent%20LC-MS%20primer.. Mass Analyzer (Mass Spectrometry).scripps..blogspot..ucdavis. diakses pada tanggal 01 Maret 2014. 1994.. Linscheid M. 1998. 1999. Daftar Pustaka Agilent.uk/nerclsmsf/techniques/hplcms. http://masspec. & Westmoreland D. Vol 66 No. G. Chem.pdf... 1913-1930.a05296.edu/mshistory/whatisms_details.ac.

html.id/2010/12/04/liquid-cromathograpy- mass-spectroscopy-with-electrospray-ionization-methode-lc-ms-esi-2/ diakses pada tanggal 08 Maret 2014 24 . LC-MS (Liquid Chromatograpy-Mass Spectroscopy). diakses pada tanggal 01 Maret 2014 Wibowo A. 2010. http://ithengcemani.blogspot.com/2010/05/normal-0-false-false-false- en-us-x-none..blog. http://ecimansorong.E. 2011.ac. Kromatografi Cair Spektrometri Massa.Sumbono A.ugm..