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Universidad Nacional Autnoma de Mxico

Facultad de Estudios Superiores


Zaragoza

Laboratorio de Microbiologa II

Prctica No. 12

Aislamiento de bacterifagos

Equipo: 12

Integrantes:

Ibarra Prez Sebastin


Pineda Franco Penlope Ma. A.
Snchez Snchez Juan Jos

Grupo: 2752 Fecha de entrega: 18-May-2017


Objetivos

1. Conocer e identificar un bacterifago, un virus y el efecto de parasitismo


intracelular que producen en una clula hospedera.
2. Llevar a cabo el manejo y aislamiento de bacterifagos.
3. Conocer las etapas de la replicacin de los bacterifagos.

Resultados

Tabla 1.-

Dilucin Imagen Nmero de UFP


10-1 Incontables

10-2 Incontables
10-3 Incontables

10-4

Tabla 1.-Muestra las placas de agar blando donde fueron vaciadas las soluciones
de caldo de bacterifago enriquecido proveniente de moscas junto con E. coli
despus de una incubacin a 37 por 24 horas. La presencia del bacterifago se
demuestra en las zonas de la placa con aclaramiento (encerradas en un crculo).
No se observaron calvas definidas, sino amplias zonas aclaradas que impidieron
su cuantificacin.
Imagen 1.-

Imagen 1.- Se muestran los tubos con caldo soya tripticasena y diferentes
concentraciones de bacterifagos y 0.1 mL de E. coli, la concentracin disminuye
de izquierda a derecha. Ningn caldo present turbidez.

Discusin

En las placas mostradas en la tabla 1 observamos calvas y zonas amplias


aclaradas del csped de E. coli, que es evidencia de la presencia de bacterifagos
que llevan a cabo el ciclo ltico, ya que ste involucra la lisis de la clula y posterior
aclaramiento de la zona. En el caso de calvas turbias o zonas turbias en el agar,
es indicativo de que hay bacterifagos lisognicos (Pelzek, 2013), debido a que
stos, a pesar de que se integran al material gentico de la clula y no provocan
su lisis, otras proceden a llevar a cabo el ciclo ltico debido a la diferente
proporcin de protenas de control como la CI y la Cro, que puede variar con las
variaciones del ambiente o con las condiciones en que se encuentre la clula al
momento de la infeccin (Michalowsky, 2005).

No fue posible determinar el ttulo de ninguna placa, ya que en todas las placas se
encontraron un amplio desarrollo del bacterifago, creando zonas de lisis muy
amplias que impedan el conteo de la UFP. En las primeras dos placas, las de
concentracin ms alta, las placas lticas fueron muy abundantes y se juntaron
entre s, impidiendo su conteo. En el caso de las ltimas dos placas, que tenan
menos concentracin del fago, este fenmeno pudo deberse a una mala
realizacin de la tcnica, debido a la rpida solidificacin del agar blando al
vaciarse, impidiendo que ste creara una capa homognea de agar y de igual
manera, impidiendo la distribucin del fago sobre sta. En el caso de los tubos
(Imagen 1), el aclaramiento del caldo es indicativo de que existe la presencia de
bacterifago en ellos, y de que se est llevando a cabo un ciclo ltico.
Esta prueba no permite la identificacin del fago, aunque como se us Eschericha
coli, la placa podra contener algn bacterifago de la serie T, junto con el
bacterifago lambda (Flint, 2015). Para su identificacin se puede aislar el
bacterifago de una nica placa bien formada, y su posterior caracterizacin a
travs de microscopa electrnica y secuenciacin del material gentico (Pelzek,
2013).

Los fagos pudieron ser aislados de las moscas ya que estos son unos parsitos
obligados, por lo que su distribucin y abundancia depende de su hospedero
(Clokie, 2011), en este caso la E. coli se puede encontrar en las moscas porque
stas son un vector natural de ella (Rochon, 1998).

Conclusiones

Se logr identificar la presencia de bacterifagos de E. coli mediante la presencia


de placas lticas y zonas aclaradas sobre un cped de esta bacteria, y por la falta
de turbidez en los tubos inoculados con ella, ocasionados por la reproduccin del
bacterifago a travs de ciclos lticos.

Referencias

Clokie MR, Millard AD, Letarov AV, Heaphy S. Phages in nature. Bacteriophage.
2011;1(1):31-45.

Flint J, Racaniello V. Principles of virology. 4th ed. Washington: ASM Press; 2015.

Michalowski, C.B. and Little, J.W. 2005. Positive autoregulation of cI is a


dispensable feature of the phage lambda gene regulatory circuitry. J. Bacteriol.
187:6430-6442

Pelzek, A. J., Schuch, R., Schmitz, J. E. and Fischetti, V. A. 2013. Isolation,


Culture, and Characterization of Bacteriophages. Current Protocols Essential
Laboratory Techniques. 4:4.4:4.4.14.4.33.

Rochon, K. Persistence and significance of E. coli in house flies (Musca


domestica) and stable flies (Stomoxys calcitrans). Sherbrooke: Universit de
Sherbrooke; 1988.