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UNIVERSIDAD NACIONAL FEDERICO VILLARREAL

FACULTAD DE INGENIERA GEOGRFICA, AMBIENTAL Y


ECOTURISMO
ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERA AMBIENTAL

INFORME: MTODO DE MICRONUCLEOS EN PECES

ALUMNOS:
ALIAGA NUEZ, YANINA
ARANA LUDEA, DIEGO

BAQUERIZO BALLARTA, KEVIN JUNIOR AUGUSTO

ESTEBAN BALDEON , DANIEL JOS


VERONA ROMERO, MARICELA

CURSO: TOXICOLOGA

DOCENTE: BLGO. FLIX J. ALVAREZ ALVAREZ

AULA Y SECCIN: B4-5 TA

FECHA: 30 DE OCTUBRE DEL 2015


1 INTRODUCCIN
El presente informe trata acerca de los efectos genotxicos de un producto qumico en los
microncleos del Danio Rerio (pez cebra).
Es de suma importancia saber que el Danio Rerio o comnmente llamado Pez Cebra ha sido y
sigue siendo objeto de los ms recientes ensayos y estudios genticos para la investigacin de
enfermedades o patgenos que aquejan a los seres humanos; la vala de este pez y su alta
demanda en el campo de la investigacin reside en la facilidad de su reproduccin y en el corto
tiempo de desarrollo que estos peces necesitan para llegar a su adultez, adems de la simpleza
de su morfologa, sumado con algunas otras condiciones, hacen de ste pez, el modelo perfecto
para la aplicacin de estos estudios y ensayos.
Realizamos en el laboratorio, un ensayo de prueba para ver las alteraciones morfolgicas y
los efectos genotxicos que causa, el alcohol etlico en una muestra de sangre del pez cebra, y
es de inters saber que la genotoxicidad, es la capacidad para causar dao al material gentico
por agentes fsicos, qumicos o biolgicos; el dao en el material gentico incluye no slo
al ADN, sino tambin a todos aquellos componentes celulares que se encuentran relacionados
con la funcionalidad y comportamiento de los cromosomas dentro de la clula. Ejemplos de
esto ltimo son las protenas que intervienen en la reparacin, condensacin y
descondensacin del ADN en los cromosomas, u otras estructuras como el huso mittico,
responsable de la distribucin de los cromosomas durante la divisin celular. Este dao puede
ser de tipo mutgeno o carcingeno.
Los genotxicos son agentes fsicos (temperatura, luz ultravioleta, radiaciones ionizantes,
radiaciones electromagnticas, etc.) o productos qumicos (agentes alquilantes, acridina,
oxidantes, agentes redox, epxidos alifticos, etc.) capaces de alterar la informacin gentica
celular.
Habiendo tenido en cuenta, sta pequea introduccin, pasamos a describir lo realizado en la
experimentacin de laboratorio que tuvimos, pero antes, nos familiarizaremos con algunos
conceptos, trminos y contenidos.

2 OBJETIVOS
Objetivo Principal:

Determinar el nivel de dao gentico en peces cebra a travs del mtodo de


Microncleos.

Aplicar el mtodo de Microncleos en eritrocitos de peces cebra para evaluar posibles


daos al ADN.
3 MARCO TERICO

3.1. MICRONCLEO

Microncleo (microncleo, a que se refiere MCN), tambin conocido como ncleo va satlite,
tipo eucariota de clulas biolgicas en una estructura inusual, aberraciones cromosmicas en
clulas en interfase como una forma de expresin. Los microncleos son a menudo una
variedad de factores fsicos y qumicos, tales como la radiacin, los efectos de productos
qumicos en las clulas en divisin producidos. Test de microncleo de dao por radiacin, la
proteccin radiolgica, mutgenos qumicos, pruebas de drogas, evaluacin de la inocuidad de
los aditivos alimentarios, as como las enfermedades genticas cromosmicas y el diagnstico
precoz del cncer y otros aspectos.

Usos Tradicionales

En las clulas en interfase, microncleos eran redondos u ovalados, separados del ncleo
principal, el tamao debe estar en el ncleo principal de 1/3 menos. ndice de refraccin de
microncleos y reactividad de las clulas y el ncleo principal, como es la capacidad de un ADN
sinttico. Generalmente se considera la prdida de microncleos anafase fragmentos
cromosmicos centrmero producidos. Los experimentos muestran que todo el cromosoma o
cromosomas pueden formar varios microncleos. Estos fragmentos o cromosoma accin
rezagados en el proceso de divisin, al final no se encuentra en la divisin en el ncleo principal,
se formaron fuera del ncleo principal del bloque nuclear. Cuando las clulas hijas en la
siguiente interfase, que se concentran en un pequeo ncleo fuera del ncleo principal, a
saber, la formacin de microncleos. Se ha confirmado que el tamao de microncleos y
actuando factor de efecto acumulativo de la dosis de radiacin o una correlacin positiva, que
es el caso con aberraciones cromosmicas. As que muchas personas creen que el ciclo puede
ser fcil de reemplazar el recuento provisional de microncleos aberraciones nmero de
cromosomas complicado. Dado que la sntesis de un gran nmero de nuevos compuestos, las
aplicaciones nucleares, una variedad de la descarga de los residuos industriales y as existe la
posibilidad de contaminacin del medio ambiente, estos factores por el dao potencial
gentico para el cuerpo, necesita tener una tcnica sencilla muy sensible sistema de prueba
para monitorear los cambios en el medio ambiente. Slo la clase de sistemas de prueba
eucariotas ms directamente mutagnico especul organismos superiores a los seres humanos
u otros daos gentica, y en este sentido, ensayo de microncleos es un enfoque ms deseable.
Muchos departamentos en el pas y en el extranjero tienen prueba de microncleos de dao
por radiacin, la proteccin radiolgica, mutgenos qumicos, pruebas de drogas, evaluacin de
la seguridad de los aditivos alimentarios, as como las enfermedades genticas cromosmicas y
el diagnstico precoz del cncer y otros aspectos.

En los ltimos aos, los estudiosos MICRONCLEOS actividad mutagnica se detect con aguas
residuales, productos qumicos, pesticidas, etc. Pero cuando ests solo mutgeno efectos
mutagnicos. En este experimento, la tcnica de microncleos, que se utiliza en la produccin
de plaguicidas agrcolas metamidofos, metil tiofanato, clorhidrato de guanidina intervalo de
concentracin en el requisito de utilizar, solos y efectos combinados de las clulas punta de la
raz de Vicia genotoxicidad para investigar los efectos toxicolgicos y la existencia de efectos
antagnicos o sinrgicos para la produccin de uso agrcola seguro y racional de los plaguicidas
y el control de la contaminacin para proporcionar una base cientfica.

Usos Emergentes

A principios de 1970, la materia y Schmid primera tasa de uso de microncleos en mdula sea
de roedores para determinar la actividad mutagnica de un compuesto sospechoso de haber
establecido ensayo de microncleos. Desde entonces, el cambio gradual de los animales de
ensayo de microncleos, la gente extendi a los campos de las plantas. Test de microncleo en
los seres humanos y los animales con clulas de mdula sea y sangre perifrica y ms, se
requiere un cierto tiempo y las condiciones de cultivo, las dificultades de sincronizacin de
clulas, la tasa de microncleos, generalmente de aproximadamente 0,2%. El sistema de la
planta es ms directo, ms simple. Tales como el uso de plantas superiores esporas de polen
utilizando su sincrona natural para material de ensayo de microncleos, para lograr mejores
resultados, que a finales de 1970 Te-Hsiu Ma en un nativo de las Amricas Commelina
(Tradescantia paludosa), estableci cuatro de los recuentos de esporas de microncleos (MCN-
in-ttrada) Sistema de prueba es uno de los mejores sistemas. Departamento de Biologa de la
Universidad Normal Central de China, desde el ao 1983, estableci un ensayo de microncleos,
y la primera para el control de la contaminacin del agua, la identificacin ha sido incluido en el
nacional "especificaciones tcnicas de monitoreo biolgico (seccin Water Environment)."
Microncleo es la rotura de cromosomas, las clulas en la siguiente divisin, los fragmentos de
cromosomas pueden no siguen la mitosis en las clulas hijas, mientras que en el citoplasma con
un dimetro menor que el ncleo principal, el color adicto con la consistencia ncleo principal,
completa con principal separado nuclear pequeo ncleo redondo u oval, en el citoplasma
independientemente de los principales ncleos de nucleosomas, la coloracin con el ncleo
principal, pero la luz que el ncleo principal tiene un dimetro menor que el ncleo principal
1/3, principalmente por dao externo (biolgica , Fsica, Qumica) clulas efectoras, la prdida
del cromosoma resultante o rotura, que se forma en el citoplasma de una o varias.

Test de microncleo
Ensayo de microncleos en compuestos extraos (tales como medicamentos, aditivos
alimentarios, plaguicidas, cosmticos, contaminantes ambientales, etc) dao genotxico y
gentica en control de la exposicin ocupacional y la deteccin in situ del medio ambiente, el
diagnstico y la prevencin del cncer de hgado, cncer de esfago, cncer de pulmn y otras
tumores malignos obtuvieron un gran nmero de aplicaciones. Microncleos prueba de mayor
ventaja es econmica, simple, rpido, y una gran parte del trabajo experimental en el
extranjero, visin ms consistente es la sensibilidad del mtodo, la especificidad y la precisin,
con el mtodo de anlisis de aberraciones cromosmicas clsica es bsicamente muy sencillo.
Por lo tanto, especialmente adecuado como una proyeccin un gran nmero de compuestos y
el mtodo experimental en la multitud. Test de microncleo fue fundada a mediados de 1970
(1973 a 1975), muchos pases y organizaciones internacionales, que han sido definidos como
medicamentos, aditivos alimentarios, plaguicidas, cosmticos y otros estudios de seguridad
toxicolgica se debe hacer experimentos.

Nueva prueba de Microncleos

En los ltimos aos, con el rpido desarrollo de las tcnicas de biologa molecular y la
penetracin en el estudio de microncleos, expandir en gran medida el ensayo de microncleos
para la deteccin y gama de aplicaciones, se ha convertido en una deteccin simultnea de la
rotura de cromosomas, perdido, fractura retardada y el desequilibrio de divisin amplificacin
de genes, sin separacin, trastornos de reparacin de dao en el DNA, las mutaciones HPRT, la
apoptosis, la divisin celular de deteccin de desequilibrio de una variedad de parmetro
gentico, que ha sido propuesto en los ltimos aos, el nuevo ensayo de microncleos
internacional (Newmi un cronucleustest) Concepto , ampliando as considerablemente el
mbito de aplicacin de la prueba de microncleos. Por supuesto, para lograr una deteccin
ms experimental de dao gentico en el final, ms con nuevas tcnicas tales como la tcnica
de FISH, anlisis de imgenes, tcnicas de adivinacin, etc., que tambin est en condiciones de
laboratorio de investigacin a nivel de China y hacer ms alta demanda.

INFORMACIN GENERAL

Pez cebra

El pez cebra se ha convertido en el organismo


modelo idneo para la experimentacin en las
principales reas de investigacin cientfica,
compartiendo importancia con el ratn como especie
modelo de vertebrados.

Originario del sureste asitico, las principales


caractersticas del pez cebra (Danio Rerio) son su
tamao, su alto nivel de fertilidad en un tiempo
generacional muy corto (3 meses) y la facilidad de
mantenimiento, a bajo coste, de grandes cantidades de individuos. La fecundacin del pez
cebra es externa lo que permite crear embriones transparentes en los que se puede seguir y
analizar todo el proceso de formacin de rganos, algo fundamental e inalcanzable hasta el
momento en estudios de biologa del desarrollo.

Adems su genoma ha sido secuenciado por completo y muestra una gran similitud con el
genoma humano. Este conocimiento junto con el desarrollo de tcnicas moleculares ha
permitido la bsqueda y generacin de organismos mutantes en los que se puede estudiar con
todo detalle la actividad de multitud de genes in vivo, ya sea de variantes genticas de la propia
especie, como genes de inters de diferentes especies.

El pez cebra se muestra como el modelo ideal para su utilizacin en las aulas como especie
modelo que permita poner en prctica de manera sencilla el mtodo cientfico y transmitir a los
alumnos nuevas tecnologas biolgicas para la experimentacin. Por estos motivos el pez cebra
es el protagonista del proyecto Una Cebra en el Agua.
4 MATERIALES

MICROSCOPIO PTICO:
Un microscopio ptico es un microscopio basado en lentes
pticos. En el laboratorio se utiliz para observar las pruebas de
clulas animales y las clulas vegetales

ALCOHOL DE 99.9%
Es aquella a la que se le han eliminado las impurezas.

LAMINAS PORTAOBJETOS

3 GOTEROS

CAMARA PARA LAMINAS


PORTAOBJETOS
GIEMSA

DANIO RERIO O PEZ CEBRA


Se aplic un corte y as se pudo sacar la muestra de la
sangre

5 MTODOS

Primero tomamos como modelo al pez cebra, esperamos que muera y le cortamos la cabeza
para colocar la sangre en la lmina.
Una vez obtenida la sangre, se realiza un frotis de la misma con las lminas portaobjetos,
ste procedimiento debe ser realizado con delicadeza para no desvirtuar la muestra.

A continuacin se procede a dejar secar la muestra, aproximadamente unos 45, en esta


ocasin se dej secar la muestra por 15.

Luego de este tiempo, se procede a remojar la lmina en alcohol etlico 14, puro 99.9%, e
inmediatamente llevamos a refrigerar la lmina por 8 minutos a una temperatura de 4.

Pasado ste tiempo, se debera dejar secar la muestra a temperatura ambiente durante un
da entero, pero por efectos de tiempo, por sta ocasin, se dej secar la muestra 10.
Es momento de agregar 5 o 10 gotas de Giemsa al 10% a la lmina portaobjetos para
realizar la coloracin de la muestra, se deja teir durante 8 y se enjuaga levemente con un
chorro leve de agua.

Finalmente, llevamos la lmina al microscopio, y podremos observar los efectos que causa
todo el procedimiento descrito, en los microncleos.

Los resultados de la observacin y el anlisis, fueron discutidos en clase, para corroborar la


teora aprendida.
6 RESULTADOS

MICRONUCLEO 1

Se puede observar que la


coloracin del ncleo grande es
igual al del ncleo pequeo.

MICRONUCLEO 2

Apreciamos que ahora hay 2


ncleos pequeos.

MICRONUCLEO 3

Aqu ocurre una deformacin del


ncleo, sin embargo no es muy
notoria.
MICRONUCLEO 4

Ocurre una mayor disgregacin del


ncleo de la clula del pez, y se
pareca que casi est apunto de
desintegrarse.

MICRONUCLEO 5

Notamos que el ncleo ya no tiene


membranas.
7 CONCLUSIONES
Debido a que los humanos tienen un sistema metablico muy parecido a las clulas de
estos peces, estas conclusiones podran ser parcialmente aplicables o deducibles al
sistema humano.

La presencia de microncleos puede ser considerada como un biomarcador de efectos


clastognicos y aneugnicos del material gentico.

La frecuencia de microncleos no present correlacin significativa con factores


geogrficos todos los peces fueron seleccionados de un acuario comn.

8 REFERNCIAS BIBLIOGRAFICAS
Fenech M. The cytokinesis-block micronucleus technique: a detailed description of the
method and its application to genotoxicity studies in human populations. Mutat Res
1993; 285: 35-44

https://prezi.com/jma6smiajynf/ensayo-en-micronucleos/