LAPORAN AKHIR

PENELITIAN UNGGULAN PERGURUAN TINGGI

OPTIMASI PROSES KONVERSI BIOETANOL DARI JERAMI PADI

(Oryza sativa) SEBAGAI BAHAN BAKAR YANG RAMAH LINGKUNGAN
Tahun ke 2 dari rencana 2 tahun

Ketua Tim:
Dr. Ir. Bambang Dwi Argo, DEA (NIDN. 0010076108)

Anggota:
Dewi Maya Maharani, STP., M.Sc (NIDN. 0025108701)
Yusuf Hendrawan, STP., M.App.Life.Sc., Ph.D (NIDN. 0016058102)

Dibiayai oleh :
Direktorat Jenderal Pendidikan Tinggi,
Kementerian Pendidikan dan Kebudayaan, Melalui DIPA Universitas Brawijaya
Nomor : 023.04.2.414989/2014, Tanggal 5 Desember 2013, dan berdasarkan
SK Rektor Universitas Brawijaya Nomor 157 Tahun 2014 tanggal 10 April 2014

HALAMAN PENGESAHAN
UNIVERSITAS BRAWIJAYA
NOVEMBER 2014
 RINGKASAN

Bambang Dwi Argo, Dewi Maya Maharani, Yusuf Hendrawan. Laporan Kemajuan
Penelitian Unggulan (M) Perguruan Tinggi. Optimasi Proses Konversi Bioetanol dari
Jerami Padi (Oryza sativa) sebagai Bahan Bakar yang Ramah Lingkungan

Penelitian dengan judul Optimasi Proses Konversi Bioetanol Dari Jerami Padi
(Oryza Sativa) Sebagai Bahan Bakar yang Ramah Lingkungan ini merupakan
penelitian yang akan dilaksanakan selama dua tahun. Jerami padi mengandung selulosa
dan hemiselulosa yang dapat dikonversi menjadi bioetanol, sebagai salah satu energi
alternatif. Proses konversi bioetanol dari jerami padi dilakukan melalui beberapa
tahapan, yaitu proses pretrearment jerami padi, proses produksi enzim selulase,
hidrolisis enzimatis, fermentasi glukosa dan purifikasi etanol. Pada tahun pertama, akan
dilakukan proses pretreatment jerami padi dan proses produksi enzim, sedangkan pada
tahun kedua dialkukan hidrolisis enzimatis. Proses pretreatment pada jerami padi
dilakukan dengan tujuan menghilangkan lignin (delignifikasi) yang menghalangi proses
pemecahan selulosa menjadi glukosa. Pretreatment dilakukan dengan metode wet
milling dan treatment secara kimia dengan penambahan NaOH (0,5; 1; 2; 3; 4%) yang
dikombinasikan dengan penggunaan energi microwave selama 10, 20, 30, dan 40 menit.
Jerami hasil pretreatment dianalisis kandungan selulosa dan hemiselulosanya dengan
metode Chesson.
Selanjutnya selulosa dan hemiselulosa dapat dihidrolisis menjadi glukosa.
Hidrolisis dilakukan secara enzimatis dengan bantuan enzim selulase dari mikrofungi
Trichoderma reesei dan Aspergillus niger. Namun sebelum itu terlebih dahulu
dilakukan uji aktivitas enzim dari perbandingan Trichoderma reesei dan Aspergillus
niger yang dikembangbiakkan pada media PDA miring. Proses inokulasi spora
Trichoderma reesei dan Aspergillus niger pada larutan nutrisi dan substrat jerami padi
difermentasi selama 6 dan 8 hari pada kondisi suhu 27C, 30oC dan 37C dengan pH
larutan nutrisi sebesar 4,5, dan 6. Kemudian dilakukan pengujian aktivitas pada cairan
enzim (supernatan) yang dihasilkan.
Aktivitas enzimatis dengan perbandingan 1:0; 1:1; 1:2; 1:3; 0:1; 2:1; dan 3:1.
Glukosa yang diperoleh kemudian difermentasi dengan bantuan yeast Saccharomyces
cerevisae dengan pengaturan pH 4, 5, 6 selama 2, 4, 6, 8, 10 hari. Hasil yang diperoleh
dianalisis dengan Gas Chromatography (GC) untuk mengetahui kadar etanolnya.
Proses hidrolisis dilakukan dengan perlakuan adalah Perbandingan volume enzim
selulase A. niger dan T. reesei yaitu (1:0), (0:1), (1:1), (1:2), (1:3), (2:1), (3:1) dan
waktu pengambilan sempel yakni pada jam ke-8, 16, 24, 32, 40, 48, 56, 64 dan jam ke-
72. Parameter yang akan dilakukan adalah mengukur kadar dari glukosa.
Hasil penelitian sebelumnya dengan metode pretreatment yang berbeda
menggunakan autoclave dan microwave menunjukkan persentase perubahan komponen
penyusun lignosellulosa jerami padi yang berbeda. Perlakuan pretreatment terbaik
terdapat pada penambahan NaOH 2M dan waktu microwave 40 menit, kemudian
dihasilkan peningkatan selulosa 7,5% dan penurunan lignin sebesar 0,9%.
Hasil terbaik untuk menghasilkan Aktivitas enzim selulase dari mikrofungi
Aspergillus niger dan Trichoderma reesei yaitu suhu 370C dan PH 6 dengan nilai
aktivitas enzim berurutan yaitu 0.187347 IU/ml 0.157994 IU/ml (endoglukanase atau
CMCase), 0.026886 IU/ml 0.087481 IU/ml ( Fpase), 0.039666 IU/ml 0.021010 IU/ml
(-glukosidase). Perlakuan PH dan suhu sangat berpengaruh terhadap terhadap aktivitas
enzim selulase dari mikrofungi Trichoderma reesei dan Aspergillus niger dengan
substrat jerami padi. Sedangkan hasil terbaik proses hidrolisis terdapat pada
perbandingan Aspergillus niger : Trichoderma reseei (1:3) dengan waktu hidrolisis 64
jam yang menghasilkan glukosa sebesar 17,35 g/L.

Kata kunci: Bioetanol, Jerami Padi, T. reesei, A. niger, wet milling, hidrolisis.
 DAFTAR PUSTAKA

Ahamed, A. P. Vermette (2008), Culture-based Strategies to Enhance Cellulase

Enzyme Production from Trichoderma reesei RUT-C30 inBioreactor Culture
Conditions, Biochemical Engineering Journal 40, 399407.
Alexander, M., D.A. Hopwood, B.H. Iglewski, and A.I. Laskin. 1992. Enciclopedia of
Microbiology, vol 1, Academic Press Inc. : New York.
Allen, S. G., Schulman, D., Lichwa, J, 2001. A comparison between hot liquid water
and steam fractionation of corn fiber. Ind. Eng. Chem. Res., 40, 2934-2941.
Ambriyanto, Sarju, Kurniawan. 2010. Isolasi Dan Karakterisasi Bakteri Aerob
Pendegradasi Selulosa Dari Serasah Daun Rumput Gajah (Pennisetum
Purpureum Schaum). Jurnal Jurusan Biologi Fakultas Matematika dan Ilmu
Pengetahuan Alam. ITS.Surabaya.
Anindyawati, T. 2009. Prospek enzim dan limbah lignoselulosa untuk produksi
bioetanol. BS. Vol. 44(1). pp: 49-56
Badan Pusat Statistik (BPS). 2010. Tabel Luas Lahan dan Produktivitas Tanaman Padi
di Indonesia. BPS, Jakarta
Balat, M. 2007. Global bio-fuel processing and production trends. Energy Exploration
Exploitation. Vol. 25. pp: 195-218
Banerjee, S., Mudliar, S., Sen, R., Gir, B., Satpute, D., Chakrabati, T., et al., 2010.
Commercializating lignocellulosic bioethanol: technology bottlenecks and
possible remedies. Biofuels Biop. Biorefinering Vol. 4. Pp: 77-93
Beauchemin, K.A., D. Colombatto, D.P. Morgavi and W.Z. Yang. 2003. Use of
Exogenous Fibrolytic Enzymes To Improve Feed Utilization By Ruminants. J.
Anim. Sci. 81 (E. Suppl. 2): E37-E47.
Berlin, A., Gilkes, N., Kurabi, A., Bura, R., Tu, M., Kilburn, D., et al., 2005. Weak
lignin-binding enzymes. Applied Biochemical Biotechnology. pp: 121-124
Binod P, Sindhu, R., Singhania, R., Vikram, S., Devi, L., Nagalakshmi, S., Kurien, N.,
Sukumaran, R., Pandey, A., 2010, Bioethanol production from rice straw: An
overview, Bioresource Technology. Vol. 101. pp: 47674774.
BPPT, 2005, Kajian Lengkap Prospek Pemanfaatan Biodiesel Dan Bioethanol Pada
SektorTransportasi Di Indonesia. Balai Besar Teknologi Pati-BPPT, Jakarta.
Cai, Y.J., S.J. Chapman, J.A. Buswell And S.T. Chang.1999. Production And
Distribution Of Endoglucanase, Cellobiohydrolase, And -Glucosidase
Components Of The Cellulolytic System Of Volvariella Volvacea, The Edible
Straw Mushroom. App. Env. Microb. 65: 553-559
Carlile, M.J., S.C. Watkinson and G.W. Gooday. 2001. The Fungi. 2nd ed. Academy
Press. London California.
Chen, P.J., T.C. Wei, Y. T. Chang and L.P. Lin. 2004. Purification and
characterization of carboxymethyl cellulase. Bot. Bull. Acad. Sin. 45: 111-118.
Departemen ESDM, 2005, Blue Print Pengelolaan Energi Nasional 2005-2025, Pola
Pikir Pengelolaan Energi Nasional.
Ding T.Y., Hii S.L., Ong L.G.A, 2012, Comparison of Pretreatment Strategies for
Conversion of Coconut Husk Fiber to Fermentable Sugars, J. Bioresources,
7(2), 1540-1547.
Ding, S.J., W. Ge. and J.A. Buswell. 2001. Endoglucanase I from the edible straw
mushroom, volvariella volvacea. Eur. J. Biochem. 268: 5687-5695.
El-Zaher Abd, Fatma.,M.Fadel 2010. Production of Bioethanol Via Enzymatic
Saccharification of Rice Straw by Cellulase Produced by Trichoderma reseei
Under Solid State Fermentation. New York Science Journal.
Endo, T., Tanaka, N., Yamasaki, R., Teramoto, Y., Lee, S.H. 2008. Wet
mechanochemical treatment for enzymatic saccharification of wood. In 15th
Annual Meeting of the Cellulose Society of Japan. Kyoto 10-11 July. Pp:117-
118
Faaij, A.P.C. 2006. Modern biomass conversion technologies. Mitigation Adaptation
Strategies Global Changes. Vol. 11. pp: 343-375
Fox, P.F. 1991. Food Enzymology, Vol. 1, Elsevier Applied Science Ltd., New York.
Gandjar, I., 2006, Mikrobiologi Dasar dan Terapan, Yayasan Obor Indonesia,
Gozan , Misri, Samsuri,M.2007. Sakarifikasi dan Fermantasi Bagas Menjadi Ethanol
Menggunakan Enzim Selulase dan Enzim Sellobiase. Jurnal Teknologi, Edisi
No.3 Tahun XXI, 209-215.
Hamada, Hoshikawa, dan Tone, 1998. Pervporation Charasteristics of Water and 2-
propanol in Sulfonated Polyethersulfone Membranes. Journal of Chemical
Engineering of Japan, Vol. 31(4), pp 652-656.
Hendriks, A.T.W.M. and Zeeman, G. 2009. Pretreatments to enhance the digestability
of lignocellulosic biomass. Bioresource Technology. Vol. 100. pp: 10-18
Hideno, A., H. Inoue, T. Yanagida, K. Tsukahara, T. Endo and S. Sawayama. 2012.
Combination of hot compressed water treatment and wet disk milling for high
sugar recovery yield in enzymatic hydrolysis of rice straw. Bioresource
Technology, Vol. 104
Howard RL., Abotsi E., Jansen van Rensburg EL., dan Howard S, 2003, Lignocellulose
biotechnology : issues of bioconversion and enzyme production, African Journal
of Biotechnology, 2(12), 602-619, http://www.academicjournals.org/AJB.
Hu, Z. and Wen, Z. 2008. Enhancing enzymatic digestability of switchgrass by
microwave-assisted alkali pretreatment. Biochemical Engineering Journal. Vol.
38. pp: 369-378
Huang, H.J., Ramaswamy, S., Tschirner, U.W. and ramarao, B.V. 2008. A review of
separation technologies in current and future biorefineries. Sep. Purif, Tech. Vol.
62. p: 1-21
Hui, L., Wan, C., , Hai-tao, D., Xue-jiao, C.,, Qi-fa, Z., Yu-hua, Z., 2010, Direct
microbial conversion of wheat straw into lipid by a cellulolytic fungus of
Aspergillus oryzae A-4 in solid-state fermentation, J. Bioresource Technology,
101, 75567562.
Ikram-ul-haq, Muhammad Mohsin Javed, Tehmina Saleem Khan and Zafar Siddiq.
2005. Cotton Saccharifying Activity of Cellulases Produced by Co-culture of
Aspergillus niger and Trichoderma viride. Res. J. Agric & Biol. Sci. 1(3):241-
245.
Jakarta.
Juhasz, T., K. Kozma, Z. Szengyel, K. Reczey 2003, Production of -Glucosidase in
Mixed Culture of Aspergillus niger BKMF 1305 and Trichoderma reesei RUT
C30, Food Technol. Biotechnol. 41 (1) 4953.
Kang S.W., Park Y.S., Lee J.S., Hong S.I., Kim, S.W., 2004, Production of cellulases
and hemicellulases by Aspergillus niger KK2 from lignocellulosic biomass,
Bioresource Technology, Vol. 91, 153156
Karimi, K., Emtiazi, G., Taherzadeh, M.J., 2006. Ethanol production from dilute-acid
pretreated rice straw by simultaneous saccharification and fermentation with
 Mucor indicus, Rhizopus oryzae, and Saccharomyces cerevisiae. Enzyme
Microbiol. Technol. Vol. 40. pp:138144.
Keshwani, D.R. and Cheng, J.J., 2010. Microwave-based alkali pretreatment of
switchgrass and coastal bermudagrass for bioethanol production. Biotechnology
Program. Vol. 26. pp: 644-652
Klibanov, A. M. 1986. Enzymes that work in organic solvents. Chemtech. 16: 354-144.
Kodri, 2013. Pemanfaatan Enzim Selulase Dari Trichoderma Ressei Dan Aspergillus
niger Sebagai Katalisator Hidrolisis Enzimatik Jerami Padi Dengan
Pretreatment Microwave. Skripsi Jurusan Keteknikan Pertanian, Universitas
Brawijaya : Malang
Kootstra, A.M.J., Beeftink, H.H, Scott, E.L., Sanders J.P.M., 2009, Optimization of
dilute maleic acid pretreatment of wheat straw, Biotechnology for Biofuels,
2(31).
Kurniawati, Indah. 2011. Pengaruh pH dan Waktu Terhadap Kadar Gula Reduksi Pada
Proses Hidrolisis asam Jerami Padi dengan Diameter Bubuk Jerami 100 Mesh .
Skripsi Keteknikan Pertanian. Universitas Brawijaya. Malang
Lakitan B. 2004. Dasar-dasar Fisiologi Tumbuhan. PT Raja Grafindo Persada: Jakarta.
Lida, T. 1993. Fuel Ethanol Production by Immobilized Yeast and Teast
Immobilization. Bioprocess Technology: In: Industrial Application of
Immobilized Biocatalysts. New York : Ed. Marcel Dekker. pp. 163-183.
Lima, L.R. and Marcondes, A.A. 2002. Alcool Carburante: uma estrategia brasileira.
Ed. UFPR, Curitiba. pp:248
Lu, J. and Zhou, P., 2011. Optimal conditions for maximizing production of reducing
sugars from microwave-assisted FeCl3 pretreated rice straw degraded by
Trichoderma viride and Bacillus pumilus, African Journal of Microbiology
Research. Vol. 5(31). pp:5757-5764.
Mappiratu dan Nurhaeni. 2009. Penuntun Praktikum Enzim Pangan. Jurusan Kimia
Fmipa Universitas Tadulako, Palu.
Martins, L.F., D. Kolling, M. Camassola, A.J.P. Dillon, L.P. Ramos
(2008),Comparison of Penicillium echinulatum and Trichoderma reesei
Cellulases in Relation to Their Activity Against Various Cellulosic Substrates,
Bioresource Technology, 99, 14171424.
Meyes, P.A., D.M. Martin, V.W. Rodwell. 1992. Harpers Review of Biochemistry.
Lange Medical Publication Meruzen Asia : Singapore. pp: 234-235
Miettinen-Oinonen, A., J. Londesborough, V. Joutsjoki, R. Lantto and J. Vehmaanpera.
2004. Three Cellulases from Melanocarpus albomyces for Texyile Treatment at
Neutral pH. Enzyme Microb Tech, 34: 332-341.
Nurdyastuti, I. 2009. Teknologi Proses Produksi Bio-etanol, http://d.yimg. com/ kq/
groups/ 3468476/ 658705552/ name/ Bio_Ethanol. pdf. Diakses pada tanggal
12 November 2009.
Okamotoa K., Nittaa Y., Maekawab N., Yanasea H. 2011. Direct ethanol production
from starch, wheat bran and rice straw by the white rot fungus Trametes hirsuta,
Enzyme and Microbial Technology, 48, 273277.
Okunowo, Oluwanisula, 2007, Quantitation of Alcohol in WineAfrican Journal of
Biochemistry.
Oliveria, M.E.D., Vaughan, B.E. Rykiel, E.J. 2005. Ethanol as fuel: energy, carbon
1239 dioxide balances, and ecological footprint. Biosicience. Vol. 55. pp: 593-
602.
Orth A.B., D.J. Royse, M. Tien. 1993. Ubiquity of lignindegrading peroxidases among
various wood-degrading fungi. J. Appl. Environ Microbiology. Vol. 59. pp:
4017-4023.
Prasetyaningsih, E., 2007, Industri Alkohol E-Kuliah. Knowledge Collaborative
Purwiyatno Hariyadi. 1996. Katalisis Enzimatis Dalam Pelarut Organik. J. Ilmu dan
Tek. Pangan, Vol 1 No. 1, hal 52-60
Quintero, J.A., Rincon, L.E., Cardona, C.A. 2011. Production of bioethanol from
agroindustrial residues as feedstock, In A. Pandey, C. Larroche, S.C. Ricke,
C.G. Dussap, E. Gnansounou (Eds). Biofuels Alternatives Feedstocks and
Conversions Processes. Academic Press, London. pp: 251-285.
Rachmania, F. dan Lazuardi.2009. Pengaruh Liquid Hot Water terhadap Perubahan
Struktur Sel Bagas. Jurusan Teknik Kimia Fakultas Teknolohi Industri, Institut
Teknologi Sepuluh November.
Rahima, Dwira.2010. Makalah Optimasi Produksi Enzim Selulase untuk Hidrolisis
Jerami Padi. Kementrian Kesehatan RI.
Rikana, H dan Risky. 2010. Pembuatan Bioethanol Dari Singkong Secara Fermentasi
Menggunakan Ragi Tape. Skripsi. Jurusan Teknik Kimia, Fakultas Teknik,
Universitas Diponegoro : Semarang.
Rokhmah, I. 2011. Pengaruh Pretreatment (Delignifikasi) Bertekanan terhadap
Kandungan Bubuk Jerami Padi Giling pada Produksi Bioetanol. Skripsi.
Jurusan Keteknikan Pertanian, Universitas Brawijaya : Malang.
Sagar, A.D. and Kartha, S. 2007. Bioenergy and sustainable development. Annual Rev.
Environmental Resources. Vol. 32. pp: 131-167.
Sharing.
Sun, R.C. and Tomkinson, T. Esensial guides for isolation/purification of
polysaccharides, In I.D. Wilson, T.R. Adlard, C.F. Poole, M. Cook (Eds).
Encyclopedia of Separation Science. Academic Press, London. pp: 4568-4574.
Taherzadeh M.J. 1999. Ethanol from Lignocellulose: Physiological Effects of Inhibitors
and Fermentation Strategies. [thesis]. Gteborg: Department of Chemical
Reaction Engineering, Chalmers University of Technology
Taherzadeh, M.J. dan Karimi, K. 2007. Acid-based hydrolysis processes for ethanol
fromlignocellulosic materials: a review. Bioresources 2(3), pp. 472-499.
Taherzadeh, M.J. dan Karimi, K. 2007. Enzyme-based hydrolysis processes for ethanol
from lignocellulosic materials: a review, 2007, BioResources, Vol. 2, pp. 707-
738
Ul-Haq, I.; M. M. Javed; T. S. Khan; and Z. Siddiq, 2005, Cotton Saccharifying Activity
of Cellulases Produced by Co-culture of Aspergillus niger and Trichoderma
Viride. Research Journal of Agriculture and Biological Sciences, 1(3): 241-245.
Wahyuningtyas, Puspita. 2012. Studi Pembuatan Enzim Selulase dari mikrofungi
Trichoderma ressei dengan Substrat Jerami Padi sebagai katalis Hidrolisis
Enzimatik Pada Produksi Bioetanol. Skripsi. Jurusan Keteknikan Pertanian
Universitas Brawijaya. Malang.
Wang, Y., Gong, C., Sun, J., Gao, H., Zheng, S. and Xu, S. 2010. Separation of
ethanol/water azeotrope using compound starch-based absorbents. Bioresour.
Tech. Vol. 101. pp: 6170-6176
Watanabe, dan Kyo, 1992, Pervaopration Performance of Hollow Fiber Chitosan
Polyacrylonitrile Composite Membrane in Dehydration of Ethanol. Journal of
Chemical Engineering of Japan, Vol. 25(1). pp 17-21
Widyastuti, H., Siswanto dan Suharyanto. 2007. Optimasi pertumbuhan dan aktivitas
enzim lignolitik Omphalina sp and Pleurotus ostreatus pada fermentasi padat.
Menara Perkebunan, 75(2), 93-105.
Winarno, F.G., 1984. Hemiselulosa.PT.GramediaPustakaUtama,Jakarta.
Yang, B. and Wyman, C.E. 2008. Pretreatment: the key to unlocking lo-cost cellulosic
ethanol. Biofuels Biop. Biorefinering Vol. 2. Pp: 26-40
Zhang, Q., He, G., Wang, J., Cai, W., dan Xu, Y., 2009, Two-stage co-hydrolysis of
rice straw by Trichoderma reesei ZM4-F3 and Pseudomonas aeruginosa BSZ-
07, Biomass and Bioenergy, Vol. 33. pp: 1464-1468
Zhu, S., Wu, Y., Zhao, Y., Tu, S., Xue, Y., 2006. Fed-batch simultaneous
saccharification and fermentation of microwave/acid/alkali/H2O2 pretreated rice
straw for production of ethanol. Chem. Eng. Commun. Vol. 193. pp: 639648.