You are on page 1of 107

GUIA PRTICO DE BIOLOGIA CELULAR

Ana Cristina da Silva Figueiredo, Luis Manuel Gaspar Pedro, Jos Manuel Gonalves Barroso,
Maria Margarida Moutinho Giro de Oliveira
DEPARTAMENTO DE BIOLOGIA VEGETAL

GUIA PRTICO DE BIOLOGIA CELULAR

Por:

Ana Cristina da Silva Figueiredo


Luis Manuel Gaspar Pedro
Jos Manuel Gonalves Barroso
Maria Margarida Moutinho Giro de Oliveira

Figura da capa:

Plasmlise em epiderme da pgina adaxial da ptala de Hibiscus rosa-sinensis L. (Malvaceae)

Os autores agradecem a todos quantos, directa- ou indirectamente, ajudaram na redao final


deste Guia Prtico. Uma palavra particular de agradecimento Prof. Dra. Ana Amorim e ao Prof.
Dr. Ricardo Melo do Departamento de Biologia Vegetal da Faculdade de Cincias da Universidade
de Lisboa pela valiosa contribuio na actualizao do captulo 2. Diversidade Celular.
FICHA TCNICA

Ttulo: Guia Prtico de Biologia Celular

1 Edio, Sebenta de Citologia Prtica, Lisboa, 1989 (edio dos Autores)


2 Edio, Sebenta de Citologia Prtica, Lisboa, 1992 (edio da Associao dos Estudantes
da Faculdade de Cincias de Lisboa, AEFCL)
3 Edio, Sebenta de Citologia Prtica, Lisboa, 1994 (edio da AEFCL)
4 Edio, Citologia (Prtica), Lisboa, 1996 (edio da AEFCL)
5 Edio, Guia Prtico de Biologia Celular, Lisboa, 1997 (edio da AEFCL)
6 Edio, Guia Prtico de Biologia Celular, Lisboa, 1997 (edio da AEFCL)
7 Edio, Guia Prtico de Biologia Celular, Lisboa, 1998 (edio da AEFCL)
8 Edio, Guia Prtico de Biologia Celular, Lisboa, 1999 (edio da AEFCL)
9 Edio, Guia Prtico de Biologia Celular, Lisboa, 2003 (edio da AEFCL)
10 Edio, Guia Prtico de Biologia Celular, Lisboa, 2003 (edio da AEFCL)
11 Edio, Guia Prtico de Biologia Celular, Lisboa, 2004 (edio da AEFCL)

Autores:
Ana Cristina da Silva Figueiredo
Luis Manuel Gaspar Pedro
Jos Manuel Gonalves Barroso
Maria Margarida Moutinho Giro de Oliveira

Os autores declaram que no seguiram o acordo ortogrfico na redaco deste guia prtico.

Edio:
Faculdade de Cincias da Universidade de Lisboa, Centro de Biotecnologia Vegetal.

Composio, Impresso e Acabamentos:


Faculdade de Cincias da Universidade de Lisboa, Centro de Biotecnologia Vegetal.

Tiragem:
1 Edio, Lisboa, Maio de 2013 verso pdf online e verso impressa
2 Edio, Lisboa, Julho de 2014 verso pdf online e verso impressa

ISBN (verso pdf online): 978-989-99127-1-7


ISBN (verso impressa): 978-989-99127-0-0
Guia Prtico de Biologia Celular

NDICE
GUIA PRTICO DE BIOLOGIA CELULAR .................................................................................................................... 1

GUIA PRTICO DE BIOLOGIA CELULAR .................................................................................................................... 3

FICHA TCNICA ................................................................................................................................................ 5

NDICE ................................................................................................................................................................... I

1. MICROSCOPIA PTICA ....................................................................................................................................... 3

1.1. Microscpio ptico .............................................................................................................................. 3


1.1.1. Componentes do Microscpio ptico ............................................................................................ 4
1.2. Tipos de Microscpio ptico .............................................................................................................. 6
1.2.1. Microscpio de fundo escuro ......................................................................................................... 7
1.2.2. Microscpio de contraste de fase .................................................................................................. 7
1.2.3. Microscpio de interferncia ou de Nomarski ................................................................................ 8
1.2.4. Microscpio de fluorescncia ......................................................................................................... 9
1.2.5. Microscopia confocal ................................................................................................................... 10
1.3. Como utilizar o microscpio ............................................................................................................. 11
1.4. Medies em preparaes microscpicas....................................................................................... 11

2. DIVERSIDADE CELULAR .................................................................................................................................... 13

2.1. Procariotas.......................................................................................................................................... 14
2.1.1. Bacteria........................................................................................................................................ 17
2.1.2. Archaea ....................................................................................................................................... 19
2.2. Eucariotas ........................................................................................................................................... 19
2.2.1. Protistas ....................................................................................................................................... 22
2.2.2. Fungos ......................................................................................................................................... 28
2.2.3. Animais ........................................................................................................................................ 29
2.2.4. Plantas ......................................................................................................................................... 29

3. A CLULA ....................................................................................................................................................... 30

3.1. Parede celular vegetal........................................................................................................................ 30


3.1.1. Alteraes qumicas da parede celular ........................................................................................ 33
3.2. Matriz extracelular nas clulas animais ........................................................................................... 38
3.2.1. A diversidade celular nos diferentes tecidos animais ................................................................... 40
3.3. Membrana plasmtica ........................................................................................................................ 43
3.4. Movimentos de ciclose ...................................................................................................................... 46
3.5. Vacolos e Incluses vacuolares ..................................................................................................... 46
3.5.1. Contedo vacuolar ....................................................................................................................... 47
3.6. Plastos ................................................................................................................................................ 52
3.6.1. Cloroplastos ................................................................................................................................. 52
3.6.2. Leucoplastos................................................................................................................................ 54
3.6.3. Amiloplastos ................................................................................................................................ 55
3.6.4. Cromoplastos............................................................................................................................... 55
3.6.5. Proteoplastos ............................................................................................................................... 56
3.6.6. Oleoplastos .................................................................................................................................. 56
3.7. Ncleo ................................................................................................................................................. 56
3.7.1 Ciclo celular .................................................................................................................................. 58
3.7.2. Mitose .......................................................................................................................................... 58
3.7.3. Meiose ......................................................................................................................................... 61

I
Guia Prtico de Biologia Celular

4. MICROSCOPIA ELECTRNICA DE VARRIMENTO E DE TRANSMISSO ...................................................................... 64

4.1. Microscopia electrnica de transmisso ......................................................................................... 64


4.1.1. Fixao ........................................................................................................................................ 66
4.1.2. Lavagens ..................................................................................................................................... 66
4.1.3. Desidratao ............................................................................................................................... 67
4.1.4. Impregnao e Incluso .............................................................................................................. 67
4.1.5. Seccionamento ............................................................................................................................ 67
4.1.6. Contrastao ............................................................................................................................... 67
4.2. Microscopia electrnica de varrimento............................................................................................ 67
4.2.1. Secagem ao ar ............................................................................................................................ 68
4.2.2. Criossecagem ............................................................................................................................. 69
4.2.3. Secagem pelo mtodo do ponto crtico ....................................................................................... 69
4.2.4. Metalizao ................................................................................................................................. 70

5. PROTOCOLOS ................................................................................................................................................. 72

6. APNDICE....................................................................................................................................................... 96

7. BIBLIOGRAFIA ................................................................................................................................................. 99

8. INDICE REMISSIVO ......................................................................................................................................... 100

II
Guia Prtico de Biologia Celular

1. MICROSCOPIA PTICA

1.1. Microscpio ptico


Instrumento de trabalho de numerosos cientistas, desde h mais de trs sculos, o
microscpio tem permitido observar diversos objectos e organismos no perceptveis vista
desarmada. Esta capacidade deve-se a um sistema ptico, composto por lentes, que fornece uma
imagem ampliada do objecto.
Foi no sculo XVII que a construo e o aperfeioamento do microscpio, em particular o
sistema de lentes, conheceu a sua maior expanso. Anton van Leeuwenhoek e Hans e Zacharias
Jansen, fabricantes de culos, desenvolveram os primeiros microscpios simples e compostos.
Leeuwenhoek foi um dos primeiros a registar observaes feitas num microscpio simples, que
constava de uma lente que se segurava com a mo e se dirigia para a fonte luminosa para que a
luz atravessasse a lente e o objecto.
So ainda de destacar os trabalhos de Campani (l662), Hooke (l665) e Divini (l668). No
microscpio de Hooke o objecto era fixo por um grande alfinete e a luz fornecida por uma
lamparina de azeite. O sistema de lentes permitia uma ampliao de 270 x.

Mquina fotogrfica

Oculares

Objectivas
Platina

Parafusos de focagem
Condensador

Base

Fig. 1.1. Representao esquemtica de um microscpio ptico.

At ao sculo XIX, os fabricantes no conseguiam obter lentes que no decompusessem a luz.


Este fenmeno, conhecido como aberrao cromtica, levava a que se obtivesse uma imagem
colorida imprecisa. S em 1830 se construram as primeiras lentes acromticas. O outro defeito
muito comum nas lentes, a aberrao esfrica, s viria a ser corrigido anos mais tarde com Ernst
Abbe e Carl Zeiss (l886), que produziram as primeiras lentes apocromticas, capazes de corrigir
no s as aberraes cromticas como as esfricas.
Nas ltimas dcadas do sculo XIX, os microscpios comearam a assumir o aspecto que tm
hoje. As grandes verses compostas passaram a exigir dos fabricantes melhorias significativas ao
nvel do sistema de iluminao. Assim, em 1893, August Khler introduziu um novo sistema de
iluminao, cujo princpio ainda hoje utilizado.
O desenvolvimento e o aperfeioamento tecnolgicos tm permitido a construo de
instrumentos de elevado poder de resoluo e ampliao. O microscpio hoje um instrumento
de trabalho de aplicaes to diversas como a biologia, electrnica ou a metalurgia.

3
Guia Prtico de Biologia celular

1.1.1. Componentes do Microscpio ptico

P ou base
Brao
Tubo ou canho
Parte Mecnica Platina ou porta-objectos com pinas e nnios
Revlver ou porta-objectivas
Parafuso macromtrico
Parafuso micromtrico

Sistema de Iluminao Fonte luminosa


Condensador

Parte ptica Apocromticas


Objectivas Imerso
Sistema de Ampliao Parafocais

Oculares

A microscopia pode ser definida como the art and science of making fine detail visible. Esta
definio acarreta conceitos importantes para os utilizadores de microscpios: ampliao,
resoluo, contraste e medio.
A ampliao relaciona a dimenso da imagem do objecto com a sua dimenso real. A
resoluo de um microscpio corresponde capacidade de separar dois pontos to prximos
quanto possvel um do outro. O contraste corresponde a acentuar as diferenas entre os
constituintes da preparao de modo a fazer sobressair uns em relao aos outros. Finalmente,
fazendo uso de uma correcta ampliao, resoluo e contraste, possvel ao utilizador fazer
medies precisas, vlidas e reprodutveis do objecto em estudo.
Num microscpio de luz visvel, os raios de luz da fonte de iluminao so concentrados,
sobre o espcime a observar, atravs de uma lente condensadora, Fig. 1.1. Os raios luminosos
que atravessam o espcime so focados, numa imagem ampliada, por duas lentes colocadas nas
extremidades opostas do tubo ou canho, Fig. 1.1. A lente mais perto do espcime designada
objectiva e a da extremidade oposta a ocular. Com o auxlio de parafusos de ajuste grosseiro e/ou
fino possvel mover o espcime de molde a coloc-lo na posio correcta para se poder focar. A
posio do condensador pode ser igualmente ajustada por forma a convergir a luz sobre o
espcime, Fig. 1.1.

Objectiva

leo de imerso

Lamela

a b

Fig. 1.2. Abertura da objectiva. a) Empregue a seco. b) Empregue com imerso num lquido com ndice de
refraco idntico ao do vidro (n = 1,51). Os fotes no sofrem refraco pelo que o ngulo do cone til
superior ao de a).

A resoluo de um microscpio depende de dois factores: 1) do comprimento de onda da

4
Guia Prtico de Biologia Celular

radiao empregue () e 2) da abertura numrica da objectiva (que condiciona o grau de


luminosidade).
O poder de resoluo ou separao do olho humano varia de pessoa para pessoa.
Normalmente, a uma distncia de trabalho de 25 cm, est apto a resolver dois pontos que distem,
entre si 0,25 mm. Quando a distncia entre os dois pontos superior, distingue-se o espao entre
eles; quando inferior, os dois pontos aparecem como um s.
Como o olho humano no detecta luz com comprimento de onda inferior a 400 nm, no
possvel, recorrendo ao microscpio ptico, obter uma resoluo superior a 0,17 m. Isto quer
dizer que, com o microscpio, no se distinguem, separadamente, dois pontos cuja distncia
entre si seja inferior a 0,2 m (na prtica, o limite de resoluo do microscpio ptico de cerca
de 0,5 m). Do ponto de vista experimental, no possvel distinguir dois pontos cuja distncia
entre eles seja inferior a metade do comprimento de onda da radiao utilizada.
O outro factor, que afecta o poder de resoluo do microscpio, a abertura numrica da
objectiva. Quando uma objectiva possui uma lente frontal (lente da objectiva que fica mais
prxima da platina) de pequenas dimenses e elevado poder de ampliao, a quantidade total de
luz que a atravessa muito inferior que atravessaria a lente frontal de uma objectiva de menor
poder de ampliao. Adicionalmente, quando se trabalha com lentes de maior poder de
ampliao, a distncia de trabalho (distncia entre a lente frontal e a lamela que cobre o objecto
em foco) inferior utilizada para objectivas de menor poder de ampliao. Por outro lado, como
a luz refractada pela camada de ar existente entre a lmina e a objectiva, o ngulo do cone de
luz til que atinge a objectiva menor do que seria se esse fenmeno no se verificasse, Fig. 1.2.
Da resulta a perda de luminosidade observada quando, por exemplo, se passa da objectiva de
40 x para a de 100 x. Este problema pode ser obviado se se utilizar, entre a lmina e a objectiva,
uma substncia transparente (normalmente leo de cedro) com ndice de refraco idntico ao do
vidro da lmina. Quando se procede imerso da objectiva num lquido com ndice de refraco
1,51, os raios que atravessam a preparao no so refractados, o que determina um maior
ngulo do cone de luz til, Fig. 1.2. O poder de separao do microscpio , neste caso, superior,
como pode verificar-se pela frmula de Abbe:

Limite de resoluo () = 0,6 . /n .sen em que:

o comprimento de onda, que, para a luz visvel, 0,4 a 0,7m, isto , para o microscpio
ptico o constante e 0,5,
0,6 uma constante que reflecte o grau de sobreposio de dois pontos que ainda podem ser
visualizados separadamente,
n .sen a abertura numrica da objectiva (numa boa objectiva o seu valor de 1,4),
n o ndice de refraco do meio = velocidade no ar / velocidade no material
ex. ndice de refraco do vidro = Velocidade da luz no ar / velocidade da luz no vidro =
300000 km.s / 200000 km.s = 1.5
ar = 1,0; gua = 1,33; vidro = 1,5; leo = 1,51 ou blsamo do Canad = 1,53
o semi-ngulo com vrtice no cone formado pelos raios, que saindo da preparao,
atingem a lente frontal da objectiva e depende da largura da lente e da sua distncia ao
espcime (numa boa objectiva o seu valor de 70, o que d um sen 0,94).

A ptica dos microscpios pode criar artefactos de imagem designados por aberraes, que
podem ser de dois tipos: cromticas e esfricas. A aberrao cromtica deve-se ao diferente grau
de refraco dos diversos componentes da luz, de tal modo que se criam orlas coloridas na
extremidade do material, Fig. 1.3.a. A aberrao esfrica uma consequncia dos diferentes
ngulos dos raios luminosos emergentes da lente, Fig. 1.3.b. Ambos os tipos de aberraes so

5
Guia Prtico de Biologia celular

corrigidos por um conjunto de lentes existentes no interior da objectiva, destinadas a compensar


aberraes especficas (por ordem de complexidade crescente de correco: lentes acromticas,
de fluorite e apocromticas).
Diferentes tipos de microscpios pticos so correntemente utilizados no estudo de vrios
aspectos da estrutura celular, o mais simples dos quais o microscpio de campo claro. O grau
de visibilidade depende, neste caso, da capacidade do material refractar a luz diferentemente do
meio circundante, Fig. 1.8. A visibilidade do material , correntemente, designada por contraste,
isto , o aspecto diferente apresentado por zonas adjacentes do material, ou entre o material e o
meio de montagem.
Uma das maneiras mais eficazes de tornar um material, naturalmente fino e translcido, visvel
em microscopia ptica, cor-lo com reagentes que absorvem s determinados comprimentos de
onda dentro do espectro do visvel. Os comprimentos de onda que no so absorvidos so
transmitidos ao observador, de tal modo que o material aparece corado. Diferentes reagentes
marcam diferentes molculas biolgicas e, como tal, no s aumentam a visibilidade do material,
como podem tambm indicar onde certos constituintes se encontram nas clulas ou nos tecidos,
isto , permitem fazer uma caracterizao histoqumica.

Vermelho Azul Verde Vermelho


Verde
Azul

a) b)

Fig. 1.3. Tipos de aberraes. a) cromtica, b) esfrica.

A utilizao destes reagentes pe, no entanto, um grande problema: na sua maioria no


podem ser utilizados em clulas vivas. Isto deve-se a vrios factores: em muitos casos a sua
utilizao pressupe uma fixao prvia do material, com lcool, cido actico ou formaldedo,
para preservar as estruturas celulares; os reagentes so, normalmente, txicos, mesmo a baixas
concentraes; as condies de reaco no preservam a integridade celular (alguns reagentes
no penetram a membrana celular e requerem aquecimento e/ou um tratamento prvio em cido
para facilitar a penetrao). Um nmero reduzido de reagentes, designados corantes vitais,
preservam a integridade celular, mas so, contudo, de utilizao limitada.
Nas condies experimentais em que no se deve alterar a viabilidade celular, possvel
recorrer a diferentes tipos de microscpios pticos que convertem as variaes de densidade ou
espessura entre zonas adjacentes do material em diferenas de contraste, que aumentam a
qualidade da imagem final.

1.2. Tipos de Microscpio ptico


Embora muitas regies do material biolgico no corado sejam transparentes, elas possuem
diferentes densidades e, consequentemente, ndices de refraco diferentes. Assim, os raios
luminosos atravessam estas regies a velocidades muito diversas, sofrendo refraces em
diferente grau, Fig. 1.4. Existem, deste modo, diferenas ntidas entre as fases dos raios
luminosos que atravessam um objecto e as dos que passam junto aos seus bordos, ou seja, na
interface onde se verifica a alterao do ndice de refraco. Na prtica, os raios luminosos que
passam pelos componentes celulares de maior ndice de refraco, so retardados cerca de 1/4
de comprimento de onda, e so mais refractados que os raios luminosos que atravessam

6
Guia Prtico de Biologia Celular

componentes com menor ndice de refraco.


Existem diferentes tipos de microscpios pticos, de aplicaes vrias, que tiram partido de
fontes luminosas e modos de formao de imagem diversos.

Fig. 1.4. Os raios luminosos so retardados diferentemente ao passarem pelos vrios constituintes celulares.

1.2.1. Microscpio de fundo escuro


No microscpio de fundo escuro existe um condensador especial, com um disco opaco na sua
zona central, que orienta a luz de forma oblqua, Figs. 1.5 e 1.8. Assim, a luz s atinge as lentes
da ocular se for desviada pelo objecto em observao. Daqui se infere que s os objectos com
ndice de refraco diferente do do meio circundante faro chegar a luz ocular, isto , neste
mtodo a periferia do objecto aparece brilhante sobre um campo escuro circundante.
Refira-se, a ttulo de exemplo, que microtbulos com um dimetro de 25 nm podem ser
visualizados por este processo, e que as bactrias aparecem, neste microscpio, como pequenos
pontos brilhantes em fundo escuro. Tambm cristais, grnulos de prata e paredes celulares, entre
outros, podem ser visualizados deste modo, mas porque as poeiras tambm reflectem a luz, as
lminas tm de estar particularmente limpas e isentas de riscos.

Objectiva
Raios reflectidos
Raios oblquos

Espcime

Condensador
Disco opaco
a) b)

Fig. 1.5. a) Representao esquemtica do microscpio de fundo escuro e b) observao de bactrias com o
microscpio de fundo escuro.

1.2.2. Microscpio de contraste de fase


O microscpio de contraste de fase permite uma melhor observao de espcimes sem
qualquer colorao porque converte as diferenas de ndice de refraco dos diversos
constituintes celulares, Fig. 1.4, em diferenas de intensidade luminosa visveis aos microscpio.
Este tipo de microscpio possui um condensador especial provido com uma placa circular com

7
Guia Prtico de Biologia celular

diversos anis, Figs. 1.6 e 1.8. Os anis so de vidro opaco, mas incluem um anel central de vidro
transparente que permite a passagem dos raios luminosos menos refractados. Os anis de vidro
opaco tm um revestimento e uma espessura tal que retardam, adicionalmente, os raios mais
refractados de 1/4 de comprimento de onda. Tais diferenas acentuam o contraste entre o objecto
em observao e o meio circundante.

Raios
difractados

Placa de fase

Objectiva

Anis complementares
Espcime

Anel de fase
Condensador

Fig. 1.6. Representao esquemtica do microscpio de contraste de fase.

Analizador

Prisma

Objectiva

Espcime

Condensador de
contraste de
interferncia
com prisma
Polarizador

Fig. 1.7. Representao esquemtica do microscpio de contraste de Nomarski.

1.2.3. Microscpio de interferncia ou de Nomarski


A microscopia de Nomarski (equivalente a DIC, differential interference contrast), uma
tcnica excelente para observar material biolgico, no s pelo elevado contraste conseguido,
mas tambm pela tridimensionalidade que se obtm. Uma outra vantagem deste tipo de
microscopia a de permitir observar materiais mais espessos, sem pr os mesmos problemas
que a microscopia de contraste de fase, Figs. 1.7 e 1.8.
Este microscpio utiliza luz polarizada e dois filtros separadores de modo que produz efeitos
de sombra que do particular relevo s extremidades das diferentes estruturas do material
(membranas, ncleo, organitos, parede celular, etc.). Outra caracterstica interessante deste
microscpio que os objectos podem aparecer corados, mesmo sem colorao prvia e apesar

8
Guia Prtico de Biologia Celular

de se utilizar luz branca na iluminao.

a) b)

c) d)

Fig. 1.8. Comparao de imagens obtidas a) com um microscpio ptico normal, b) com contraste de fase, c)
com contraste de Nomarski e d) de fundo escuro.

Vermelho

Filtro de emisso
Filtro de excitao
Verde
Espelho dicrico

Fonte luminosa

Objectiva

a) Espcime b)

Fig. 1.9. a) Representao esquemtica do microscpio de fluorescncia. A cheio representa-se o exemplo


de luz seleccionada, o verde. A tracejado representa-se a luz de maior comprimento de onda emitida pelo
espcime, o vermelho. b) Corte transversal de um caule observado com microscpio de fluorescncia.

1.2.4. Microscpio de fluorescncia


Neste microscpio utiliza-se uma lmpada de mercrio de elevada presso que emite radiao
entre 600 nm e 300 nm, Figs. 1.9 e 1.11. Na zona frontal da lmpada est colocado um sistema de
filtros, que permite seleccionar o comprimento de onda desejado (ultra-violeta, azul, ou verde).
Depois de passar pelos filtros, a luz de comprimento de onda seleccionado, atinge um espelho
especial, espelho dicrico, que tem a propriedade de reflectir a luz de determinados comprimentos
de onda e transmitir outros. Este espelho reflecte a luz seleccionada, que incide depois no
espcime. As substncias fluorescentes emitem luz num comprimento de onda mais longo, que
atravessa o espelho, e atinge a objectiva (ex. um espelho dicrico de 420nm reflecte toda a luz
azul e UV, mas atravessado por luz de comprimentos de onda superiores - fluorescncia verde,
amarela e vermelha). Para que a luz ultra-violeta se possa propagar, necessrio que os
condensadores da lmpada e do microscpio sejam de quartzo. Em alguns casos convm,
igualmente, utilizar porta-objectos de quartzo.

9
Guia Prtico de Biologia celular

Com este tipo de microscpio pode detectar-se a presena de substncias que emitam luz
visvel quando irradiadas com luz ultra-violeta. Muitas substncias podem manifestar
fluorescncia natural, designada autofluorescncia. Outras h, porm, que, para se detectar a sua
presena, necessrio faz-las reagir com compostos fluorescentes (ou tornados fluorescentes
aps reaco), os fluorocromos. Neste caso, a fluorescncia induzida.

1.2.5. Microscopia confocal


As clulas so, em muitos casos, suficientemente delgadas para serem consideradas
aproximadamente bidimensionais, requerendo, como tal, uma capacidade de foco reduzida para
observar tudo o que h para ver. Contudo, quando se est interessado nas inter-relaes das
estruturas celulares necessrio obter uma informao tridimensional. H dois mtodos de obter
este tipo de imagem em microscopia. Um corresponde a cortar fisicamente o material em seces
finas, observar cada uma delas, e juntar as imagens obtidas para reconstruir a estrutura no seu
todo. O outro, desenvolvido mais recentemente, corresponde a uma reconstruo de seces
pticas, que utiliza a microscopia confocal. Com este segundo mtodo possvel observar, no
s seces finas, mas tambm clulas vivas.

Detector
Imagem focada
Abertura confocal
Imagem desfocada
impedida de chegar ao
detector
Luz fluorescente emitida pelo espcime
Espcime
Focado
Desfocado

Fig. 1.10. Representao esquemtica do microscpio confocal.

O microscpio confocal permite obter imagens permanentemente em foco, em qualquer plano


focal, dum espcime com uma espessura at cerca de 100 m, Figs. 1.10 e 1.11. Este tipo de
microscopia , regra geral, utilizado com espcimes marcados com fluorocromos.

a) b)

Fig. 1.11. Comparao das imagens obtidas com a) microscpio de fluorescncia convencional e
b) microscopia confocal.

Os microscpios confocais fazem um varrimento do espcime com um feixe de luz pontual


focado, atravs duma objectiva, a uma profundidade seleccionada. A luz, emitida pelas molculas

10
Guia Prtico de Biologia Celular

fluorescentes do espcime, regressa atravs da objectiva e filtrada da luz incidente por um


mecanismo idntico ao do microscpio de fluorescncia. Contudo, antes que a luz atinja o
detector passa por uma abertura regulvel, que est colocada exactamente na vertical em relao
ao plano de foco do feixe de luz pontual. Deste modo impede-se que qualquer outra luz, que no
a emitida pelo espcime no plano de foco, chegue ao detector. Atravs dum controlo motorizado,
podem recolher-se diferentes seces pticas que so armazenadas num computador e
posteriormente processadas para formar uma imagem tridimensional.

1.3. Como utilizar o microscpio


A metodologia que a seguir se descreve o mtodo bsico de manuseamento do microscpio
ptico de luz transmitida, adaptado observao da maioria dos espcimes, desde que tenham
sido corados ou possuam contraste ou cor suficientes. Esta metodologia foi primeiramente
descrita, no incio deste sculo, por August Khler, tendo como objectivo obter um bom campo de
viso com uma iluminao homognea. Por este motivo muitas vezes designada como
iluminao de Khler.

Focagem
1. Coloque a preparao na platina, com a lamela virada para cima, e, com o auxlio dos
parafusos de movimento da sobre-platina, desloque o objecto a observar para o centro da
abertura da platina.
2. Comece por observar a preparao com a objectiva de menor ampliao. Com o auxlio dos
parafusos macromtricos aproxime, o mais possvel, a objectiva da lamela, tendo o cuidado de
evitar o contacto entre ambas. Para focar o objecto, proceda, de forma lenta, ao movimento
inverso, controlando a observao atravs da ocular. Logo que obtenha uma imagem
suficientemente ntida, rectifique a focagem com os parafusos micromtricos.

Alinhamento do Microscpio
1. Foque a preparao.
2. Feche o diafragma da fonte luminosa, de molde a observar um pequeno crculo.
3. Centre o crculo com os parafusos do condensador.
4. Desloque o condensador na vertical de molde a obter os bordos do diafragma, que
delimitam o crculo, perfeitamente focados.
5. No altere a posio do condensador para a objectiva alinhada. No decurso da observao,
ajuste a quantidade de luz abrindo ou fechando o diafragma do condensador.

Nota: Depois de utilizar o microscpio no se esquea de:


1) desligar a luz;
2) levantar o canho do microscpio e colocar a objectiva de menor ampliao alinhada com o orifcio
da platina;
3) limpar a platina e as objectivas (se tiver utilizado leo de imerso, limpe a objectiva com xilol)
4) tapar o microscpio.

1.4. Medies em preparaes microscpicas


As observaes em microscopia envolvem muitas vezes a medio do objecto de estudo. A
medio pode ser realizada aps calibrao, de cada objectiva, com auxlio de uma ocular e uma
escala (objectiva micromtrica), Fig. 1.12.

11
Guia Prtico de Biologia celular

Fig. 1.12. Representao esquemtica da calibrao da ocular com auxlio de uma ocular e objectiva
micromtricas. M1 - escala (da objectiva micromtrica). Mx - escala da ocular micromtrica a calibrar.

Calibrao da ocular
1. Coloque a ocular micromtrica em posio no tubo do microscpio e instale a objectiva
micromtrica na platina do microscpio.
3. Rode a ocular micromtrica de molde a que as escalas da objectiva e da ocular fiquem
paralelas e se sobreponham parcialmente, Fig. 1.12.
4. Desloque a objectiva micromtrica para que o incio da graduao das duas escalas se
sobreponha (0 e 0,0), Fig. 1.12.
5. Tendo os zeros sobrepostos, verifique em que outro ponto do campo as duas escalas se
sobrepoem igualmente. No exemplo da Fig. 1.12, verifica-se que 70 divises da ocular
micromtrica correspondem exactamente a 0,4mm (= 400m) da objectiva micromtrica, i. e.,
1 graduao = 400m / 70 = 5,7m. Este valor s vlido para a objectiva utilizada, sendo pois
necessrio proceder calibrao para cada uma das outras objecticas.
6. Para a medio de um objecto desconhecido, determina-se primeiro o nmero de divises
(por ex. 4) e multiplica-se pelo valor micromtrico previamente determinado (por ex. 5,7), obtendo-
se a dimenso de 22,8m.

Exerccio
Com base na calibrao da ocular da Fig. 1.13a calcule o comprimento do estoma da
Fig. 1.13b.

a) b)

Fig. 1.13. a) Calibrao da ocular micromtrica (em cima) com auxlio de uma objectiva micromtrica (em
baixo). b) Medio do comprimento de um estoma com a ocular micromtrica.

12
Guia Prtico de Biologia Celular

2. DIVERSIDADE CELULAR
As clulas so as unidades estruturais e funcionais de todos os seres vivos.
A sntese proteica, regulada pelos cidos nucleicos, foi, sem sombra de dvida, um
acontecimento crucial, que levou formao da primeira clula. Por outro lado, o aparecimento de
membranas semipermeveis possibilitou a compartimentao celular, tanto do ponto de vista
fsico como funcional. Um outro marco importante no processo evolutivo foi o DNA tomar o lugar
do RNA como material hereditrio.
Cr-se que todos os organismos e todas as clulas que os constituem tenham evoludo de um
ancestral comum. A evoluo poder-se- ter dado por dois processos:
1. Variao ao acaso da informao gentica que passou de um indivduo aos seus
descendentes;
2. Seleco da informao gentica que permitiu aos seus utentes a sobrevivncia e a
propagao.
Durante muitas centenas de anos, os bilogos classificaram os organismos vivos em apenas
dois grupos: animais e vegetais. Com o desenvolvimento dos microscpios, tornou-se evidente
que muitos organismos no se encaixavam bem nem no grupo dos animais, nem no grupo dos
vegetais. Por exemplo, no s as bactrias no podem ser consideradas plantas, como
organismos como as Euglenas apresentam caractersticas tanto de plantas como de animais.
Com efeito, muitos organismos unicelulares tm entre si mais caractersticas em comum, do que
com os animais ou as plantas. Este tipo de observaes levou criao de um sistema de
classificao, proposto por Whittaker em 1969, que contemplava 5 reinos (Procariotas: Reino
Monera; Eucariotas: Reino Protista, Reino Plantae, Reino Animalia, Reino Fungi). Este sistema de
classificao no inclui vrus, virides ou pries, j que no se tratam de formas de vida celulares.
Com a descoberta de tecnologias que permitiram a sequenciao e comparao da informao
gentica das clulas - nas dcadas de 1970-1980 - foi possvel estabelecer as relaes evolutivas
entre os organismos, ou seja, a sua filogenia, na forma de rvores filogenticas. Carl Woese foi
pioneiro no uso de RNA ribossomal (rRNA), existente em todos os tipos celulares, para medir a
divergncia evolutiva entre organismos. O principal resultado foi a descoberta da existncia de
duas categorias de procariotas fundamentalmente distintas, o que levou proposta em 1990 de
um sistema natural de classificao dos organismos em trs linhagens evolutivas / domnios:
Bacteria e Archaea (ambos com clulas procariticas) e Eukarya (eucariotas), Tabela 2.1, Fig.
2.1.

Tabela 2.1. Comparao entre domnios Bacteria, Archaea e Eukarya.


Caracterstica Domnio
Bacteria Archaea Eukarya
Invlucro nuclear Ausente Ausente Presente
Organitos membranados Poucos Ausentes Muitos
Peptidoglicanos na parede celular Presentes Ausentes Ausentes
Lpidos membranares Ligao ster Ligao ter Ligao ster
No ramificado Ramificado No ramificado
Ribossomas 70S 70S) 80S
Iniciador tRNA Formilmetionina Metionina Metionina
Operes Presentes Presentes Raros
Plasmdeos Presentes Presentes Raros
Nmero de RNA polimerases Uma Uma Trs
Ribossomas sensveis ao Sim No No
cloranfenicol e estreptomicina
Ribossomas sensveis toxina da No Sim Sim
difteria

13
Guia Prtico de Biologia celular

Gram-positivas (GC )

Gram-positivas (GC )

Bactrias hipertermfilas

Hadobactrias

Cianobactrias

Origem Espiroquetas
da vida
Clamdeas

Proteobactrias
Origem das
Origem dos
mitocndrias
cloroplastos

Todos os filos de Eucariotas

Crenarchaeota

Euryarchaeota

Fig. 2.1. Sistema natural de classificao dos organismos em trs linhagens evolutivas (adaptado de Sadava
et al. 2012).

2.1. Procariotas
Os procariotas dos domnios Bacteria e Archaea, compreendem as clulas actuais com
caractersticas mais primitivas e, por conseguinte, menos complexas. Estes organismos no
apresentam compartimentao celular. Ao contrrio do que acontece com as clulas eucariotas, o
seu material gentico localiza-se num corpo irregular, nucleide, no rodeado por invlucro
nuclear.
Nos procariotas incluem-se as Archaea (termoacidfilas, metanognicas e halfitas) e Bacteria
(bactrias fotossintticas, saprfitas ou parasitas, cianobactrias e micoplasmas).
Os procariotas encontram-se nos mais diversos ambientes naturais. Apesar da sua
simplicidade, as espcies existentes so capazes de, virtualmente, metabolizar qualquer
composto bio-orgnico (acares simples, polissacridos, aminocidos, protenas, lpidos e
hidrocarbonetos). Muitos conseguem utilizar o CO2 e o N2 atmosfricos como fontes de carbono e
azoto, respectivamente. Estas caractersticas conferem aos procariotas uma enorme aptido para
explorar os diversos nichos ecolgicos. Por essa razo, so o tipo celular mais abundante
superfcie da terra e nos oceanos.
Apesar de serem frequentemente mencionadas como patognicos, s uma minoria das
espcies conhecidas so realmente responsveis por doenas. Muitas mais espcies tm um
papel positivo nas nossas vidas e na biosfera: participam nos processos digestivos dos animais,
no processamento do azoto e enxofre do solo, como decompositores, e tm ainda um papel
importante em muitos processos industriais e agrcolas.
Os procariotas apresentam formas muito diversas, mas a maioria das espcies mais
abundantes incluem-se em uma de trs categorias, Fig. 2.2:

14
Guia Prtico de Biologia Celular

1. Bacillus (em bastonete)


2. Coccus (esfricas)
Diplococcus (aos pares)
Streptococcus (em rosrio)
Staphylococcus (em agregados)
3. Spirillus (em hlice)
Algumas espcies de procariotas possuem flagelos para se locomoverem. Neste caso os
flagelos no so formados por microtbulos envolvidos por membrana plasmtica, como acontece
nos eucariotas. So formados por uma nica fibrilha, flagelina de natureza proteica, Fig. 2.3.

a) b) c)

d) e)

Fig. 2.2. Diferentes formas de procariotas, a) Coccus, b) Bacillus e c) Spirillus em microscopia de varrimento
e d) e e) em microscopia ptica.

Os procariotas reproduzem-se, normalmente, por bipartio (reproduo assexuada), mas, em


determinadas circunstncias, podem reproduzir-se por parassexualidade. Nestes casos existe
apenas cariogamia. O material gentico no passa na sua totalidade de uma bactria para a
outra, pelo que se forma um merozigoto (zigoto parcial).
Algumas formas procariotas tm a capacidade de formar endsporos ou clulas de resistncia.
Os endsporos so extremamente resistentes ao calor, radiaes e desinfectantes qumicos,
sobretudo porque o protoplasma est altamente desidratado.
Os procariotas apresentam uma enorme diversidade metablica, podendo ter vida livre, ser
parasitas ou simbiontes. Podem ainda ser autotrficas ou heterotrficas. Quanto s autotrficas,
estas podem ser fotossintticas ou quimiossintticas.
As bactriass fotossintticas utilizam a luz como fonte de energia, que captam atravs de um
pigmento, a bacterioclorofila. O pigmento est localizado em estruturas membranares que de
alguma forma se assemelham aos tilacides das plantas superiores. Estas bactrias no libertam
oxignio na fotossntese porque, em vez da gua, utilizam, como molcula redutora, um composto
orgnico ou mineral.
Os procariotas quimiossintticos utilizam diversos compostos como fonte de energia. So de

15
Guia Prtico de Biologia celular

destacar os que promovem a mineralizao do azoto orgnico atravs da nitritao


(Nitrosomonas) e da nitratao (Nitrobacter).
Nos procariotas heterotrficos incluem-se os saprfitas, os parasitas e os simbiontes. Neste
ltimo grupo encontram-se algumas Azobactrias, como o Rhizobium, que fixam o azoto
atmosfrico.

Cpsula
Parede celular Lamelas citoplasmticas
Membrana plasmtica
Ribossomas
Nucleide
Mesossoma Citosol

Fmbria

Corpo basal
Gancho Flagelo

Filamento

Fig. 2.3. Representao esquemtica generalizada da estrutura de uma bactria.

As Bacteria possuem uma parede celular que difere quimicamente da dos vegetais superiores
por possuir um peptidoglicano, tambm designado murena, mucopptido ou glicopptido. Esta
macromolcula que se encontra apenas nos procariotas, consiste em dois tipos pouco usuais de
acares (acetilglucosamina e cido acetilmurmico) ligados a pequenos pptidos. Os esqueletos
de polissacridos adjacentes mantm-se ligados por pequenas sequncias de aminocidos, Fig.
2.4. A composio da parede celular bacteriana est na base da classificao histoqumica das
bactrias em Gram-positivas e Gram-negativas.
Hans Christian Gram, bacteriologista Dinamarqus, desenvolveu, por volta de 1800, a
chamada tcnica de Gram que permite classificar as bactrias em um de dois grupos: Gram-
positivas ou Gram-negativas. A base qumica desta reaco permanece mal conhecida. Aps
fixao pelo calor as clulas so coradas com violeta de cristal e iodo, e depois sujeitas aco
de um solvente orgnico. As bactrias Gram-positivas, resistentes descolorao, mantm a
colorao azul-violeta, enquanto as Gram-negativas a perdem rapidamente. Seguidamente
efectua-se uma colorao com safranina para tornar visveis as Gram-negativas. A colorao
acumulada no interior da clula e no a nvel da parede celular. A natureza desta ltima parece de
algum modo impedir a remoo do corante violeta de cristal e iodo. A diferena pode ser
simplesmente devido espessura da parede das Gram-positivas ser muito superior das Gram-
negativas, retardando assim a remoo do corante. Por outro lado, a parede das Gram-positivas
tem uma maior percentagem de peptidoglicanos e apenas 1 - 4 % de lpidos, enquanto a parede
das Gram-negativas tem uma menor percentagem de peptidoglicanos e 11 - 22 % de lpidos. Os
micoplasmas, que no tm parede celular, e as Archaea, que no tm peptidoglicanos no so
corados pela reaco de Gram.
A capacidade de resistir descolorao pelo etanol ou acetona parece ser dependente da
idade das bactrias. Com efeito, verifica-se que enquanto algumas bactrias jovens se
comportam como Gram-positivas, as bactrias mais velhas da mesma espcie podem perder a
capacidade de reter a colorao, e portanto comportam-se como Gram-negativas. Como tal, a
reaco positiva tem mais valor do que a reaco negativa, j que esta ltima pode ser devida

16
Guia Prtico de Biologia Celular

idade da cultura ou excessiva descolorao com o solvente.

Exterior da clula
Porina

Exterior da clula Membrana


Externa

Peptidoglicanos

Membrana
Plasmtica

Citoplasma Gram+ Gram-


a) b)

Fig. 2.4. Representao simplificada da composio da parede celular das bactrias a) Gram-positivas e
b) Gram-negativas.

Em Microscopia Electrnica verifica-se que existem grandes diferenas na ultrastrutura da


parede celular dos dois tipos de bactrias. A das Gram-positivas consiste numa nica camada
relativamente espessa, composta de peptidoglicanos e molculas de cido teicico que se
projectam para o exterior. A parede das Gram-negativas tem duas camadas, a interna de
peptidoglicanos e, a mais externa, uma membrana celular externa (com porinas,
lipopolissacridos e lipoprotenas). O espao entre a membrana plasmtica e a membrana
externa designado espao periplsmico. A existncia da membrana externa funciona como uma
barreira adicional que protege a clula contra o ataque de enzimas, antibiticos e detergentes.
As bactrias Gram-negativas apresentam maior sensibilidade s penicilinas e s sulfamidas
devido, possivelmente, presena da camada adicional de lipopolissacridos e protenas
hidrfobas.

2.1.1. Bacteria
As Bacteria constituem um grupo diverso, com cerca de 80 linhagens / filos / divises, que vai
dos organismos autotrficos quimiossintticos termfilos extremos, que oxidam o hidrognio ou
reduzem compostos com enxofre, a autotrficos fotossintticos, representados pelas
cianobactrias e pelas bactrias verdes e roxas. As cianobactrias sero as nicas referidas pela
sua importncia.

Cianobactrias
As Cianobactrias representam, actualmente, a maior via de entrada de carbono e azoto na
biosfera. Estes organismos so os mais auto-suficientes que existem na actualidade, podendo
viver em apenas ar e gua, fazendo apelo a mecanismos que parecem ter permanecido
constantes desde h cerca de 2700 milhes de anos. So tambm dos mais abundantes
organismos na Terra com uma biomassa estimada em cerca de mil milhes de toneladas (peso
fresco).
A diversidade morfolgica deste grupo muito grande e serve de base taxonomia.
Consideram-se em geral cinco grupos morfolgicos: (1) unicelulares, com diviso por fisso
binria/ bipartio; (2) unicelulares formando colnias, com formas e arranjo das clulas muito

17
Guia Prtico de Biologia celular

variados; (3) filamentos simples (tricomas), que podem diferenciar clulas designadas
heterocistos/ hetercitos; (4) filamentos simples, sem diferenciao de heterocistos; e
(5) filamentos com verdadeiras ramificaes. Estes agrupamentos morfolgicos correspondem em
geral a linhagens evolutivas distintas, com excepo das unicelulares que so muito
diversas / polifilticas. Em muitos casos existe uma bainha gelatinosa a envolver as clulas, ou os
filamentos (tricomas), facilmente visualizvel por montagem em tinta-da-china.
Ao contrrio das bactrias fotossintticas, as cianobactrias efectuam fotossntese aerbia,
isto , com libertao de oxignio, em que o CO2 fixado por formas de RuBisCO (Ribulose-
Bisfosfato Carboxilase Oxigenase) idnticas s presentes nos cloroplastos de clulas
eucariticas. No seu citoplasma, as cianobactrias possuem membranas citoplasmticas
idnticas aos tilacides onde existe sempre clorofila a - ligada aos dois tipos de centros de
reaco (fotossistemas I e II) - e dois tipos de complexos de antena com pigmentos acessrios.
Na maioria das vezes, estes so ficobilinas, principalmente ficocianina (azulada), e por vezes
tambm ficoeritrina (avermelhada), formando estruturas ganulares, os ficobilissomas, que se
encontram acoplados membrana externa dos tilacides, em contacto com as protenas e
citocromos transmembranares do fotossistema II (PS II->libertao de O2). Refira-se, a ttulo de
curiosidade, que o mar vermelho deve esta designao predominncia de cianobactrias com
ficoeritrinas do gnero filamentoso Trichodesmium que forma florescimentos superficiais muito
extensos e visveis. Em algumas cianobactrias no existem ficobilissomas e o pigmento
acessrio a clorofila b. Neste caso inclui-se, por exemplo, Prochlorococcus que uma
importante componente do picoplncton dos oceanos apesar de s ter sido descoberta em 1988.
Estima-se que Prochlorococcus produza cerca de 1/5 do total de oxignio atmosfrico. De realar
ainda a presena de uma substncia de reserva de natureza proteica, a cianoficina, exclusiva
deste grupo, e de amido cianofcio, semelhante ao glicognio dos animais e dos fungos.
Em alguns gneros filamentosos observa-se a presena de heterocistos. Os heterocistos so
clulas diferenciadas a partir de clulas vegetativas normais, de maiores dimenses e de parede
espessa que aparecem intercaladas, ou terminais, nos tricomas (filamentos). Estas clulas so as
responsveis pela fixao do azoto atmosfrico e a sua diferenciao desencadeada em
resposta concentraes baixas de azoto orgnico (no atmosfrico) no ambiente. A diferenciao
dos heterocistos um processo complexo, onde so activados e/ou desactivados milhares de
genes, e tem como principal resultado a sntese e acumulao de complexos enzimticos
designados nitrogenases que so responsveis pela reduo de azoto molecular (N2) em azoto
reactivo (NH3). A actividade das nitrogenases requer um ambiente com baixo teor em oxignio,
pelo que, durante a diferenciao dos heterocistos, os ficobilissomas e o fotossistema II acoplado,
responsveis pela formao de oxignio, so desactivados mas os fotossistemas I mantm-se
activos para formao de ATPs. Em algumas zonas da sia o arroz pode ser cultivado
continuamente sem adio de fertilizantes devido presena de cianobactrias nos arrozais.
Nesses locais, as cianobactrias, particularmente membros do gnero Anabaena, ocorrem em
associao com um feto aqutico a Azolla.
Quando as condies ambientais se tornam adversas formam-se muitas vezes endsporos, ou
acinetos, que permitem ao organismo sobreviver em condies de seca, calor ou frio, extremas.
Nas cianobactrias s se conhece reproduo assexuada por diviso ou por fragmentao,
neste ltimo caso em formas filamentosas. A fragmentao dos tricomas (filamentos) ocorre,
muitas vezes, ao nvel de clulas que realizam um processo de morte celular programada, as
necrdias. Os pequenos segmentos de clulas vivas, separados pelas clulas mortas, so
denominados hormognios, Fig. 2.5, e possuem capacidade de movimentao por deslizamento,
sendo foto- e quimiotrficos.

18
Guia Prtico de Biologia Celular

a) b) c) d)

e) f)

Fig. 2.5. Representao esquemtica de Cianobactrias: a) Oscilatoria, b) Nostoc, c) Anabaena,


d) Gloecocapsa e Lyngbya, e aspecto em microscopia ptica: e) Anabaena e f) Nostoc.

2.1.2. Archaea
O domnio Archaea constitudo por dois filos, os Crenarcheota que incluem espcies
termoflicas e hipertermoflicas (Pyrolobus) e os Euryarcheota que incluem espcies
metanognicas, halfilas extremas e acidfilas extremas (Thermoplasma). Tidas inicialmente
como ocupantes exclusivos de ambientes hostis, sabe-se hoje as rqueas de ambientes no
extremos, apesar de pouco conhecidas, so tambm muito abundantes e provavelmente
constituem uma grande parte do picoplncton (organismos <1). Morfologicamente variveis, as
Archaea diferem das Bacteria na sequncia de bases no RNA ribossmico, na composio
lipdica da membrana plasmtica e na ausncia de peptidoglicanos na parede celular (ver Tabela
2.1).

2.2. Eucariotas
Um dos marcos mais importantes da evoluo, foi a transio das clulas procariotas para as
eucariotas, que se traduziu principalmente em: (i) estrutura celular mais complexa com
compartimentao intracelular, permitindo maior controlo dos processos celulares; (ii) incluso
dos cromossomas num desses compartimentos (ncleo), permitindo a separao entre
transcrio de genes e sntese proteica e maior complexidade e controlo da expresso gentica;
(iii) maior capacidade de recombinao gentica (meiose, cariogamia), potenciando maior aptido
evolutiva.
Muitas protenas e cidos nucleicos podem ser considerados como verdadeiros fsseis vivos,
no sentido em que a sua estrutura se tem mantido dinamicamente conservada ao longo do

19
Guia Prtico de Biologia celular

processo evolutivo de milhes de anos. facto que determinadas sequncias de aminocidos e


de nucletidos aparecem, actualmente, em formas relacionadas de eucariotas. Vrios cientistas
se tm empenhado no sentido de elucidar a histria evolutiva com base no estudo destas
sequncias. Apesar de haver muita incerteza, os mais recentes estudos baseados em sequncias
de genes depois de aferidos por datao atravs do registo fssil, apontam para a existncia do
ancestral comum eucaritico entre 1,87-1,68 mil milhes de anos.

Bactrias endosimbiontes Bactrias endosimbiontes Nmero de Nmero


tornaram-se nas fotossintticas tornaram-se nos espcies estimado de
mitocndrias dos Eucariotas cloroplastos dos Eucariotas conhecidas especies
(descritas) existentes

BACTERIA 10000 Milhes

ARCHAEA 300 1000 - 1milho


Cloroplastos

Vida
Mitocndrias

Plantas 270000 400000 - 500000

Protistas

Protistas

Protistas 80000 5000000 1 milho

Protistas

Protistas

Protistas

EUKARYA Animais
1300000 10 milhes 100 milhes

100000 1 2 milhes
Fungos

Fig. 2.6. Representao esquemtica da teoria da simbiose (adaptado de Sadava et al. 2012).

Tendo em conta as numerosas semelhanas entre os genomas mitocondrial e plastidial e o


genoma de formas actuais de procariotas de vida livre, a origem dos eucariotas actualmente
interpretada como o resultado de simbioses entre procariotas, Fig. 2.6. Existe um consenso
praticamente geral sobre a existncia de um nico ancestral comum a todos os Eukarya (proto-
eucariota ou LECA-Last Eukaryotic Common Ancestor) e sobre a complexidade e longa durao
do processo de transformao celular que lhe veio a dar origem. Existe tambm grande
concordncia sobre duas outras caractersticas do proto-eucariota: (i) continha um
endossimbionte, proto-mitocndria, derivado de uma alfa-proteobactria que veio a originar as
mitocndrias (e organitos equivalentes, como os hidrogenossomas) existentes em todas as
clulas eucariticas; (ii) o seu genoma pode ser considerado como constituindo uma quimera, em
que os genes envolvidos no armazenamento e processamento da informao (processos de
replicao, transcrio e translao) mostram afinidade com o domnio Archaea, enquanto os
genes implicados nos processos metablicos e de manuteno geral ('housekeeping genes')
tendem a ser de origem bacteriana. Contudo, subsistem ainda muitas dvidas e grande polmica
sobre qual precisamente a relao entre Eukarya e Archaea e sobre o momento exacto da
aquisio do endossimbionte mitocondrial. Em relao primeira questo as vrias hipteses
dividem-se em dois campos principais: (i) Eukarya e Archaea so linhagens irms, i.e., constituem
ramos separados mas relacionados, sendo dois dos trs domnios primrios da vida celular; ou

20
Guia Prtico de Biologia Celular

(ii) Eukarya emergem de dentro dos Archaea, i.e., tm um ancestral comum com um sub-grupo
dos Archaea, e constituem um s domnio. Desta ltima hiptese resultam apenas dois domnios
primrios. Quanto ao momento da simbiose com a alfa-proteobactria (proto-mitocndria), os dois
modelos com mais suporte consideram ou que esta se deu muito cedo e directamente com um
rquea, dando posteriormente origem complexidade celular caracterstica eucaritica, ou, em
alternativa, que antes da endossimbiose ter ocorrido desenvolvimento significativo de
membranas intracelulares endgenas, incluindo eventualmente um proto-ncleo, e outras
estruturas celulares, num rquea progenitor que foi o ancestral da linhagem eucaritica. Os
defensores do primeiro modelo argumentam com as vantagens energticas para o proto-eucariota
de possuir uma mitocndria, enquanto os proponentes do segundo modelo do nfase
necessidade de o proto-eucaritica j possuir mecanismos celulares que possibilitassem a
fagocitose do endossimbionte. Na Figura 2.6 apresenta-se uma das hipteses actualmente em
debate, considerando-se o domnio Eukarya um linhagem irm de Archaea (partilham um
ancestral comum com excluso de Bacteria), sendo os 3 domnios monofilticos.
As clulas eucariotas so tambm nicas pelo facto de possurem um citoesqueleto formado
por filamentos de natureza proteica que d estrutura fsica ao citoplasma e desempenha papel
preponderante na gerao de correntes citoplasmticas.
As clulas eucariotas, ao contrrio das procariotas, possuem grande quantidade de DNA.
importante salientar que, por vezes, apenas 1 % do DNA nuclear transporta informao utilizvel
pela clula, o que tem levado alguns autores a considerar a hiptese dos restantes 99 % existirem
apenas para aumentar a massa nuclear. Segundo outra hiptese pode tratar-se de uma existncia
parastica; determinadas sequncias vo-se acumulando na clula ao longo dos anos, explorando
os mecanismos celulares para a sua prpria reproduo, sem lhe trazer qualquer benefcio.
Sabe-se, no entanto, que as pores de DNA nuclear que no codificam protenas
desempenham funes estruturais, condicionando a condensao de parte do material gentico,
e/ou funes reguladoras, ajudando a activar ou desactivar os genes que codificam as
protenas, tendo assim papel crucial no controlo de expresso gnica nas clulas eucariotas.

Tabela 2.2. Comparao entre organismos Procariotas e Eucariotas.


Procariotas Eucariotas
Organismo Micoplasmas, Bactrias e Protistas, fungos, plantas e animais
Cianobactrias
Dimenso celular 1-10 m* 10-100 m**
Metabolismo Aerbico ou anaerbico Aerbico
Organitos Poucos ou nenhuns Ncleo, mitocndrias, plastos, retculo, Golgi, etc.
DNA DNA circular no citoplasma DNA longo, organizado em cromossomas, com
muitas regies no codificantes. Cromossomas
limitados por invlucro nuclear
RNA e Protenas Sintetizados no mesmo RNA sintetizado e processado no ncleo; protenas
compartimento sintetizadas no citoplasma
Citoplasma Sem citoesqueleto, correntes
Citoesqueleto composto por filamentos de protena;
citoplasmticas, endocitose e
correntes citoplasmticas; endocitose e exocitose
exocitose
Diviso celular Bipartio Mitose ou meiose
Organizao celular Unicelulares, podendo formar Unicelulares ou pluricelulares, havendo, neste
colnias caso, diferenciao de tecidos

* Podendo atingir 50 m; ** Podendo atingir valores extremos de 0.8 m e 1 m.

O sucesso da adaptao das bactrias aos diferentes ambientes foi tal que, actualmente,
estes organismos representam mais de metade da biomassa total do globo. Poder-se- ento
perguntar o que motivou o aparecimento dos organismos pluricelulares. Na realidade, estes
organismos utilizam, muitas vezes, recursos de difcil explorao para organismos unicelulares.

21
Guia Prtico de Biologia celular

Por outro lado, o facto em si, do aparecimento de organismos pluricelulares, determinou


alteraes significativas do meio ambiente.
Na concepo moderna, o domnio Eukarya constitudo por vrios super-grupos: Protista,
Plantae e Animalia.

2.2.1. Protistas
Os protistas so um vasto grupo de eucariotas que incluem os ciliados, dinoflagelados,
apicomplexa, foraminferos, euglenfitos, diatomceas, algas castanhas, outras algas, 'fungos'
mucilaginosos e aquticos, etc. etc., Algas e Fungos mucilaginosos e aquticos. Os protistas
variam desde unicelulares microscpicos, coloniais at pluricelulares, os de grandes dimenses
com alguma complexidade (algas castanhas tipo kelp). So organismos heterotrficos ou
autotrficos, maioritariamente aerbicos, mas alguns anaerbicos, que na sua maioria
apresentam vida livre, embora se conheam formas de associao simbionte ou parastica. So
na sua maioria organismos aquticos, constituindo o plncton dos oceanos, lagos e rios.

Protozorios
A designao de Protozorios foi originalmente dada a organismos unicelulares com
caractersticas semelhantes a animais. A unicelularidade no significa, contudo, simplicidade e
muitos protozorios so estruturalmente complexos.

Rizpodes
Neste grupo incluem-se as amibas, organismos que podem atingir 0,6 mm de comprimento. As
amibas so incolores, de forma irregular e em constante mudana. Tudo indica que o seu
movimento resulta da alterao do estado fsico do citoplasma, passando de sol (fluido) a gel
(mais viscoso) e vice-versa. Para se alimentar, a amiba projecta pseudpodes que envolvem
pequenas partculas de alimento e gua. O material em seguida encaminhado para vacolos
digestivos, por um processo de endocitose, onde degradado, Fig. 2.7.
A amiba reage negativamente luz forte, a solues salinas concentradas, a diversos
produtos qumicos ou a objectos, como agulhas. A reproduo d-se por diviso binria.
Alguns membros deste grupo produzem uma cobertura calcificada com poros atravs dos
quais saem os pseudpodes.

a) b)

Fig. 2.7. a) Representao esquemtica e b) microfotografia em microscopia ptica de uma amiba.

Ciliados
Os representantes deste grupo possuem clios que utilizam na locomoo ou na captura de
alimento. Apresentam formas diversas, caractersticas de cada espcie, Fig. 2.8.
Possuem pelo menos dois ncleos: um menor, o microncleo relacionado com o processo

22
Guia Prtico de Biologia Celular

reprodutor, e um macroncleo que controla o metabolismo celular e o crescimento. Certos


ciliados, como, por exemplo, Stentor e Vorticella, possuem fibras contrcteis que lhes permitem
movimentos de contraco.
A paramcia, um ciliado muito comum em infusrios de feno, desloca-se nadando em espiral.
Os vacolos digestivos percorrem rotas definidas no interior da clula, devido a correntes
citoplasmticas.

a)

b)

Fig. 2.8. a) Representao esquemtica de ciliados e b) observao em microscopia ptica.

Esporozorios
So dois grupos cujos representantes so na sua quase totalidade parasitas, pelo que
extremamente difcil encontrar formas de vida livre.

Flagelados
Os zologos incluem nos flagelados organismos como as Euglenas e Dinoflagelados por
possurem flagelos, manifestarem reaco a estmulos luminosos e possurem, ocasionalmente,
nutrio saprfita. A este grupo pertencem tambm organismos parasitas como, por exemplos o
Trypanosoma.

23
Guia Prtico de Biologia celular

Euglenides
Cerca de 1/3 dos 40 gneros de euglenas conhecidas tm cloroplastos com clorofila a, b e
carotenides. A Euglena e o Phacus so organismos desprovidos de parede celular. Subjacente
membrana plasmtica e formando com esta o periplasto, existe uma rede de natureza proteica
com 6 - 17 % de lpidos ou polissacridos. O periplasto pode ser rgido, como no Phacus, ou no,
como na Euglena. Estes gneros apresentam em comum um estigma ou mancha ocular que
recebe os estmulos luminosos, Fig. 2.9.
Os representantes deste grupo podem ser autotrficos ou heterotrficos. Algumas espcies
podem alterar a sua estratgia trfica, dependendo da iluminao e dos nutrientes disponveis. Os
zologos consideram-nos protozorios.

Fig. 2.9. Representao esquemtica de uma Euglena.

Dinoflagelados
Os dinoflagelados so um grupo de organismos unicelulares muito importantes no plncton
dos sistemas aquticos. Tm uma grande diversidade de estratgias trficas mas frequente
considerar que cerca de 50% das espcies so autotrficas. A maioria das espcies so de vida
livre mas h formas simbiontes, como as que ocorrem nas formaes de coral, e parasitas.
Possuem um revestimento celular muito caracterstico, o anfiesma, constitudo por um sistema de
membranas que inclui o plasmalema e um conjunto de vesculas comprimidas localizadas
imediatamente abaixo deste. As vesculas (alvolos) por vezes apresentam deposies de
celulose conferindo clula uma robustez semelhante aquela normalmente associada presena
da parede celular nas plantas. Os cloroplastos, quando presentes, resultam de um processo
endosimbitico complexo, sendo a composio em pigmentos dependente do grupo fotossinttico
que participa no processo. As formas autotrficas mais frequentes apresentam clorofila a e
clorofila c2 e o principal pigmento acessrio a peridinina que mascara o verde da clorofila
conferindo um tom acastanhado. Acumulam amido nos plastos e no hialoplasma. Possuem dois
flagelos desiguais, um longo, que se projecta posteriormente em relao direco do
deslocamento, e outro que, inserindo-se na mesma regio da clula, se dispe transversalmente
em torno do organismo, Fig. 2.10.

24
Guia Prtico de Biologia Celular

Fig. 2.10. Representao esquemtica de dinoflagelados.

Diatomceas
As Diatomceas so organismos de extrema importncia em sistemas aquticos pela sua
abundncia e diversidade. H formas planctnicas que ocorrem na massa de gua, e bentnicas,
vivendo neste caso associadas a diversos tipos de substratos orgnicos e inorgnicos. A parede
celular muito caracterstica, composta predominantemente por uma forma amorfa de slica
hidratada e uma pequena fraco de compostos orgnicos, sobretudo protenas. A parede das
diatomceas designa-se por frstula e comparvel, pela sua natureza e forma, a uma caixa de
Petri em vidro, Fig. 2.11.
Para alm das clorofilas a e c e do -caroteno, as diatomceas possuem tambm fucoxantina
(xantofila) que lhes confere, geralmente, uma colorao tpica castanho-dourado. Como
substncia de reserva possuem a laminarina, um polissacrido diferente do amido. Nos
cloroplastos apresentam ainda pirenides, estruturas de natureza proteica, onde existe RuBisCO
em elevada concentrao e funcionam mecanismos de concentrao de CO2 (semelhantes aos
carbozissomas das cianobactrias).
Os primeiros registos fsseis abundantes de diatomceas so de h 115Ma no Cretcico
Inferior. A acumulao fssil das suas paredes, ricas em silcio, originou os actuais depsitos de
diatomito ou terra de diatomceas. Conhecem-se hoje em dia vrios locais onde se acumulam
estes depsitos. Este material, semelhante a p, poroso e extremamente leve contm cerca de 6
bilies de frstulas de diatomceas por litro. Entre as suas vrias aplicaes, salienta-se a de
agente polidor de prata e outros metais, utilizado em pastas de dentes, para fabrico de tintas
reflectoras para auto-estradas, sinais de trnsito e ainda em matrculas de automveis de alguns
pases.

25
Guia Prtico de Biologia celular

Ndulo Rafe
central Ndulo
polar
Epivalva

Cinturas
conectivas Epivalva

Cinturas conectivas
a) Hipovalva b) Hipovalva

c) d)

Fig. 2.11. Diatomceas a) e c) penales e b) e d) centrales.

Considerando a simetria das diatomceas, comum classific-las em penales, com simetria


bilateral, ou centrales, com simetria radial. Estas ltimas so essencialmente marinhas, Fig. 2.11.
As diatomceas possuem duas valvas, que encaixam uma na outra, Fig. 2.11.
O movimento de vaivm, observado em algumas penales, est associado a uma fenda na
frstula, o rafe [Fig. 2.11 a) e c)].
A reproduo assexuada nas diatomceas processa-se de tal modo que uma das clulas filhas
sempre mais pequena. Quando essa clula atinge dimenses crticas, intervm a reproduo
sexuada. Forma-se ento um zigoto sem parede celular rgida, cujo protoplasto se expande
atingindo a dimenso caracterstica da espcie e sintetiza uma nova parede celular (frstula).

Algas verdes
Na escala evolutiva, as algas surgem como os organismos eucariotas clorofilinos que mais
caractersticas de primitividade evidenciam, Fig. 2.12. Embora o grupo Algae tenha j sido
abandonado como categoria taxonmica e os seus representantes distribudos por vrias
Divises, possvel encontrar algumas caractersticas em comum, nomeadamente do ponto de
vista reprodutor:
1. Alguns indivduos, principalmente as algas unicelulares, podem comportar-se como clulas
sexuais ou gmetas, fundindo-se para formar o zigoto;
2. Os gmetas podem ser produzidos em gametngios unicelulares especializados ou em
gametngios pluricelulares em que todas as clulas so frteis;
3. Os esporos desenvolvem-se em estruturas unicelulares ou multicelulares (esporngios).

Embora nas bactrias se verifique j a associao colonial, nas algas verdes que se
encontram formas com graus de complexidade varivel, ilustrando o tipo de progresso que
provavelmente ocorreu na evoluo das plantas superiores e dos animais.

26
Guia Prtico de Biologia Celular

a) b) c) d) e)

f) g) h) i) j)

l) m) n) o)

Fig. 2.12. Representao esquemtica de algas verdes unicelulares a) Chlamydomonas, b) Micrasterias;


c) Cosmarium, d) Chlorella, e) Closterium, coloniais f) Coelastrum, g) Scenedesmus, h) Pediastrum e
filamentosas i) Spirogyra, j) Zygnema. Observao ao microscpio ptico de l) Spirogyra, m) Pediastrum,
n) Cosmarium e o) Scenedesmus.

As algas verdes podem ser unicelulares, coloniais, pluricelulares filamentosas ou


membranosas, cenocticas ou tubulares, Fig. 2.12. As algas verdes mais simples so unicelulares
e elas s se mantm agrupadas temporariamente, na sequncia da diviso celular. A organizao
colonial surgiu, provavelmente, devido incapacidade das clulas se separarem aps a diviso.
Em algumas colnias j possvel observar diferenciao celular com especializao e diviso de
trabalho.
Quando a diviso celular ocorre apenas numa direco, formam-se cadeias de clulas
denominadas filamentos. Certas clulas do filamento podem dividir-se numa outra direco,
originando ramificaes. Divises celulares em dois ou mais planos podem resultar na formao
de estruturas membranosas ou semelhantes a folhas, com uma ou mais camadas de clulas de

27
Guia Prtico de Biologia celular

espessura, formando um parnquima.


Em algumas algas, a diviso nuclear no acompanhada da correspondente diviso celular, o
que condiciona a formao de uma estrutura vesicular ou tubular multinucleada (estrutura
cenoctica).
Nos cloroplastos das algas verdes existem clorofilas a e b, - e -carotenos e xantofilas. As
clorofilas predominam, regra geral, sobre os restantes pigmentos, conferindo a cor verde tpica
dos representantes deste grupo. Os cloroplastos podem ter dimenses e formas diversas e, tal
como em muitos grupos de algas, a maioria dos representantes, possui pirenides que contm o
enzima RuBisCO.

Algas vermelhas
A maioria das algas vermelhas pluricelular e abundante em guas marinhas. Os seus
cloroplastos possuem clorofila a, carotenides, ficoeritrinas e ficocianinas. As paredes celulares
das algas vermelhas contm polissacridos mucilaginosos de interesse comercial (agar).

Algas castanhas
Todas as algas castanhas so pluricelulares, variando em dimenso de alguns centmetros a
aproximadamente 60m. Os cloroplastos possuem clorofila a e c, e fucoxantina (um pigmento
amarelo-acastanhado que ocorre s nas algas castanhas, nos dinoflagelados e nas diatomceas).
So comercialmente importantes pela produo de algina, um polissacrido que se acumula nas
paredes celulares e que pode representar at 40% do peso seco. A algina extremamente
importante do ponto de vista comercial, pela sua aplicao, entre outras, nas indstrias alimentar,
de papel, txtil, farmacutica e cosmtica, de materiais de limpeza e cervejeira. O iodo tambm
um elemento importante que se retira das algas castanhas, e pela elevada concentrao de azoto
e potssio so tambm utilizadas como fertilizantes. O Mar dos Sargaos deve o seu nome,
invaso das costas do Golfo do Mxico com a alga castanha Sargassum, aquando das
tempestades tropicais.

Fungos Mucilaginosos e Aquticos


Estes organismos possuem caractersticas de protozorios ou animais durante parte do ciclo
de vida e de fungos durante a restante. Os fungos mucilaginosos no possuem paredes celulares
no seu estado activo, sendo o seu corpo constitudo por uma massa protoplasmtica
plurinucleada, o plasmodium. Os plasmodia deslizam sobre material em decomposio, e
convertem-se em estruturas estacionrias, de vrias formas, quando as condies ambientais se
alteram. Os fungos aquticos tm caractersticas em comum com as algas castanhas, das quais
parecem ter derivado. Alguns so responsveis por doenas em peixes e outros organismos
aquticos, e tambm em videiras e batateiras.

2.2.2. Fungos
Os verdadeiros fungos so filamentosos ou unicelulares e no possuem clulas mveis. Todos
produzem hifas e tm paredes celulares cujo constituinte dominante a quitina. So
maioritariamente organismos decompositores, responsveis por enormes percas econmicas por
doenas e /ou estragos em alimentos. Os lquenes resultam de uma associao entre um fungo e
uma alga (alga verde ou cianobactria), em que a alga fornece o alimento para ambos, enquanto
o fungo protege a alga das radiaes luminosas intensas, produz uma substncia que acelera a
fotossntese da alga e absorbe e retm gua e minerais para ambos.

28
Guia Prtico de Biologia Celular

2.2.3. Animais
Todos os animais so eucariotas pluricelulares heterotrficos, sem parede celular, cloroplastos
ou pigmentos fotossintticos. A maioria capaz de se locomover, responde rapidamente a
estimulos e reproduz-se sexuadamente. Excepto nas formas mais simples, as clulas que
constituem os animais mostram uma diviso de funes em rgos especficos.

2.2.4. Plantas
Os membros do Reino Plantae apresentam uma grande diversidade e organizao estrutural.
Quase todos apresentam cticula a cobrir as partes areas e desenvolveram embries e tecidos
especficos para fotossntese, conduo, suporte, ligao e proteco. O ciclo de vida das plantas
alterna entre uma fase haplide gametoftica, e uma diplide, esporoftica. Muitas plantas so de
uma importncia econmica extrema para o Homem.

29
Guia Prtico de Biologia celular

3. A CLULA

3.1. Parede celular vegetal


A diferena entre animais e plantas no se situa ao nvel das caractersticas moleculares
fundamentais, como a replicao do DNA, a sntese proteica, a produo de ATP na mitocndria
ou a constituio das membranas protoplasmticas. A capacidade das plantas fixarem o CO2
atmosfrico, durante a fotossntese, e de produzirem uma parede celular rgida, marca, de facto, a
diferena entre estes dois grupos de seres vivos.
A parede celular uma forma particular de matriz extracelular, intimamente associada face
exoplsmica da membrana plasmtica da clula vegetal. Embora muitas clulas animais possuam
tambm componentes da matriz extracelular superfcie da membrana plasmtica, a parede
celular vegetal , normalmente mais espessa, mais organizada e mais rgida. Com parede celular
rgida, as plantas no tm possibilidade de se mover e, portanto, no desenvolvem sistemas
muscular, sseo e nervoso. Com efeito, a maior parte das diferenas entre animais e plantas
(nutrio, digesto, osmorregulao, crescimento, reproduo, comunicao intercelular,
mecanismos de defesa e morfologia) est relacionada com a presena da parede celular.
Numa planta, as clulas jovens so de tamanho reduzido, se comparadas com clulas adultas.
Para permitir o alongamento celular, a parede das clulas jovens, parede celular primria,
delgada e semi-rgida. Na clula adulta, que mantm a parede primria, embora por vezes
bastante mais espessa, a deposio secundria de material da parede, parede celular
secundria, leva ao aumento inevitvel da rigidez.
A parede celular primria, apesar de apresentar, nos diversos grupos vegetais, variaes
significativas em termos de organizao, possui sempre longas fibras de celulose unidas por uma
matriz constituda por protenas e polissacridos. Os polissacridos da matriz so essencialmente
pectinas e hemiceluloses. A ligao das fibras de celulose aos componentes da matriz faz-se por
covalncia e por ligaes de hidrognio.
Uma molcula de celulose consiste numa cadeia linear de vrios milhares de resduos de
glucose, ligados covalentemente por uma ligao glucosdica (1- 4). Este tipo de ligao confere
macromolcula uma estrutura planar, que estabilizada por ligaes de hidrognio
intramoleculares. As molculas de celulose agrupam-se para formar as micelas. Outras ligaes
de hidrognio, entre molculas adjacentes, levam formao de arranjos paralelos de 60 - 70
molculas de celulose, longos e altamente ordenados, as microfibrilhas. As microfibrilhas esto
rodeadas por um grande nmero de cadeias de celulose livres e por molculas de hemiceluloses,
Fig. 3.1.

Micelas
Pectina
Ca2+ Ca2+

Hemicelulose

Microfibrilha
Microfibrilha Extensina
de celulose
10 m

Fig. 3.1. Representao esquemtica do arranjo dos constituintes da parede celular primria.

Hemiceluloses o nome dado a um grupo heterogneo de polissacridos da matriz que se

30
Guia Prtico de Biologia Celular

ligam entre si e s microfibrilhas de celulose, envolvendo-as e interligando-as numa rede


complexa. Existem diversas classes de hemiceluloses. O tipo de hemiceluloses de uma clula
varia com o seu estdio de desenvolvimento e com a espcie vegetal.
As pectinas so um grupo de polissacridos da parede, altamente hidratados e ramificados,
constitudos por resduos de cido galacturnico, esterificado ou no. As pectinas so
particularmente abundantes na lamela mdia, cujo funo cimentar as paredes celulares das
clulas adjacentes. Com o alongamento celular, a lamela mdia sofre ruptura em diversos locais,
dando origem aos meatos observados em diversos tecidos.
A parede celular primria contm ainda pequenas quantidades de protena. A protena a
existente possui, alm de resduos de serina, grande nmero de resduos de hidroxiprolina, um
aminocido relativamente raro. Os resduos desses aminocidos encontram-se ligados a cadeias
de oligossacridos, formando glicoprotenas.
De molde a permitir o crescimento e a modelao da forma da clula, a parede celular exibe
uma grande plasticidade. Ora, como as microfibrilhas de celulose so estruturas bastante rgidas,
as modificaes da estrutura da parede devem-se ao deslizamento das microfibrilhas, umas em
relao s outras. Esses movimentos dependem da orientao das fibrilhas na parede e das
ligaes entre as diversas componentes da matriz e destes com as microfibrilhas de celulose,
Fig 3.2.

Fig. 3 2. Ilustrao do modo como a orientao das microfibrilhas de celulose da parede celular primria
determina a orientao do alongamento da clula.

Existem relativamente poucos tipos bsicos de clulas nas plantas superiores e todos eles so
facilmente distinguveis pela forma e estrutura da sua parede. Todas as clulas definitivas se
formam a partir de clulas com parede celular primria, por um processo de maturao que
envolve, em muitos casos, a deposio de novo material da parede.
Quando a clula atinge a sua forma definitiva, regista-se uma certa relaxao dos
componentes da parede, devido tenso a que foram sujeitos durante o perodo de crescimento.
A menor coeso dos diversos componentes compensada, quer pela deposio de novos
materiais na parede celular primria, quer, em muitos casos, pela deposio de novas camadas
de composio diversa, dando origem parede celular secundria. A deposio da parede celular
secundria ocorre entre a membrana plasmtica e a parede celular primria. Faz-se,
normalmente, em camadas sucessivas com orientao diversa, Fig. 3.3.
A forma e a composio da parede esto relacionadas com a funo da clula no tecido. No
floema, por exemplo, tecido responsvel pelo transporte dos produtos da fotossntese, sobretudo
a sacarose, das clulas fotossintticas para os restantes rgos da planta, a sua diferenciao
envolve a deposio de grande quantidade de celulose e hemiceluloses na parede. Por seu turno,
no xilema, tecido especializado no transporte de gua e ies da raiz para o resto da planta, as
clulas, de forma tubular, possuem parede celular secundria extremamente espessa e rica em
lenhina. J o colnquima, tecido vivo de suporte, localizado periferia dos rgos vegetais,
possui uma parede celular primria espessa, de natureza pectocelulsica, muito rica em gua,
Fig. 3.4.

31
Guia Prtico de Biologia celular

A parede pectocelulsica pode ser considerada uma estrutura semipermevel porque,


possuindo poros com dimenso de 3,5 - 5,2 nm, no permite que compostos com massa molecular
superior a 15.000 a 20.000 a atravessem livremente. Sendo, no entanto, permevel gua e
generalidade das substncias nela dissolvidas, a troca de materiais entre clulas contguas est
grandemente facilitada. Exceptuam-se os casos em que a parede impregnada com compostos
impermeveis como, por exemplo, a suberina.

Fig. 3.3. Representao esquemtica da deposio da parede celular secundria.

a) b)

Fig. 3.4. Exemplo de modificaes da parede durante a formao de clulas especializadas:


a) colnquima e esclernquima do caule, b) floema, xilema e endoderme da raiz.

Pontuao

a) b)

Fig. 3.5. a) Representao esquemtica de pontuaes e b) observao de pontuaes e cristais de oxalato


de clcio em microscopia ptica.

Quando as clulas possuem parede relativamente espessa, as trocas so consideravelmente


favorecidas pela existncia de pontuaes. Uma pontuao consiste numa zona da parede onde,

32
Guia Prtico de Biologia Celular

no decurso da diferenciao celular, no ocorreu deposio de novo material. As pontuaes


surgem assim como zonas de estrangulamento da parede como se observa no pericarpo do fruto
da roseira ou no caule do craveiro, Fig. 3.5.
Quando existem pontuaes, os plasmodesmos localizam-se preferencialmente a esse nvel.
Se no existem, os plasmodesmos distribuem-se, mais ou menos uniformemente, por toda a
parede, Fig. 3.6.

Pontuao

Plasmodesmos Plasmodesmos

Fig. 3.6. Ilustrao da distribuio dos plasmodesmos numa parede celular sem e com pontuaes.

3.1.1. Alteraes qumicas da parede celular


A celulose , geralmente, o constituinte mais abundante na parede celular. No entanto, em
muitos casos, como consequncia do processo de diferenciao, este componente minoritrio,
existindo outras substncias como, por exemplo, a lenhina, a suberina e a cutina, que conferem
parede caractersticas especiais. As alteraes qumicas da parede, resultantes da deposio de
compostos que no a celulose, podem afectar tanto a rigidez como a permeabilidade.

Lenhificao
A lenhina um heteropolmero de natureza fenlica que no forma microfibrilhas. Este
composto confere maior resistncia parede uma vez que substitui os componentes da matriz. A
lenhina pode impregnar total ou parcialmente as parede celular como, por exemplo, nas clulas
do esclernquima, do tecido esclerenquimatoso, ou nos vasos lenhosos, Fig. 3.7.
As clulas de parede lenhificada esto adaptadas a funes de suporte, graas s
propriedades mecnicas e resistncia das paredes reforadas, e a funes de conduo, que
so favorecidas pelo carcter hidrfobo da lenhina. A capacidade de elaborar paredes celulares
lenhificadas caracteriza as plantas vasculares ou Traquefitas. O reforo adicional fornecido pela
lenhina foi determinante para a aquisio do porte erecto e para a conquista do meio terrestre. Em
consequncia da impermeabilizao da parede celular, todas as clulas de paredes lenhificadas
so clulas mortas desprovidas de protoplasma. possvel distinguir, por mtodos histoqumicos,
clulas com parede celulsica de clulas com parede lenhificada. Fazendo uma colorao com
verde iodo e carmim aluminado, a parede celulsica surge corada de rosa enquanto a parede
lenhificada apresenta colorao verde. As lenhinas podem ser ainda postas em evidncia com
outros reagentes, entre os quais o floroglucinol, que reage com paredes lenhificadas dando uma
cor vermelha em meio cido, Fig. 3.7. As lenhinas absorvem os raios ultravioletas, a um
comprimento de onda entre 250 e 280nm e apresentam uma autofluorescncia amarela, Fig. 1.9b.

Paredes de Reserva
As sementes acumulam substncias que asseguram uma autonomia nutritiva para a
germinao, enquanto a planta ainda no fotossinttica. Essas substncias acumulam-se
preferencialmente no citoplasma ou nos plastos. Menos conhecido o facto de muitas plantas
acumularem, temporariamente, glcidos particulares que so depositados massivamente nas
paredes celulares, conduzindo sua hipertrofia, Fig. 3.8. Aquando da hidratao germinativa,
essas substncias so mobilizadas, e os produtos de hidrlise so exportados para as regies de

33
Guia Prtico de Biologia celular

crescimento. Os tipos moleculares predominantes so a manose (mananos e glucomananos) e a


glucose e xilose (xiloglucanos ou amilides).

v.a. v.e. v.ra. v.re. v.p.

a) b)

c) d)

Fig. 3.7. a) Representao esquemtica da parede celular lenhificada dos vasos xilmicos (v.a. - vasos com
espessamento anelar; v.e. - espiralado; v.ra. - raiado; v.re. - reticulado; v.p. - pontuado). b) Observao, em
microscopia ptica de vasos xilmicos corados com Floroglucinol e de paredes celulares celulsicas,
lenhificadas e suberificadas em cortes transversais de c) raiz e d) caule.

a) b)

Fig. 3.8. a) e b) Paredes celulares de reserva ricas em xiloglucanos.

As paredes celulares das clulas do albmen das palmeiras e de famlias como a das
Liliceas, Iridceas, Rubiceas e Umbelferas so particularmente ricas em manose. Estes
espessamentos tornam as sementes muito duras, como o caso das sementes de Phytelephas
macrocarpa, justamente apelidadas de marfim vegetal. As paredes celulares das clulas do

34
Guia Prtico de Biologia Celular

embrio do ciclamen, do tamarindo ou da balsamina so ricas em xiloglucanos, tambm


denominados amilides, por reagiram positivamente ao lugol, reagente habitualmente utilizado na
deteco do amido.

Cutinizao e Cerificao
As clulas da epiderme possuem paredes celulares laterais e basal de natureza celulsica
mais ou menos delgada. Durante a diferenciao, a parede celular celulsica externa destas
clulas torna-se mais espessa e cobre-se por uma cutcula que constituda, essencialmente, por
cutina, um polmero insolvel, e por ceras, facilmente extradas por solventes orgnicos. A
superfcie da cutcula apresenta muitas vezes estrias orientadas de modo varivel, que
correspondem a pregueamentos da sua superfcie, Fig. 3.9b.

a) b)

c) d)

e) f) g)

Fig. 3.9. a) Representao esquemtica da cutcula e b) observao da cutcula em microscopia electrnica


de varrimento. c) e d) Representao esquemtica de tricomas secretores, alguns com cutcula destacada d).
e) Observao de tricomas lupa, f) em microscopia ptica e g) microscopia electrnica de varrimento.

A cutcula assegura mltiplas funes: regula o grau de hidratao da superfcie e a emisso


de volteis, limita a lixiviao pelas guas da chuva e defende a planta da fora abrasiva do
vento, da aco de poluentes e de infeces, entre outros.
A cutcula uma estrutura composta por substncias lipfilas e, como tal, detectvel por

35
Guia Prtico de Biologia celular

corantes gerais de lpidos (Negro Sudo e Vermelho Sudo III). A sua espessura varivel,
relativamente delgada em rgos jovens (0,5 - 1 m), tornando-se mais espessa com a maturao
celular, podendo atingir 10 - 20 m na folha da oliveira e do loureiro.
A cutina um polmero de cidos gordos, que forma uma extensa rede superfcie do corpo
da planta, e que aparece frequentemente impregnada e coberta por ceras, Fig. 3.9 a, que
aumentam a impermeabilidade da epiderme. A acumulao das ceras muitas vezes to
abundante (5 g de cera por folha) que podem ser extradas e utilizadas comercialmente, como no
caso de Copernica cerifera.
Muitas clulas epidrmicas, designadas tricomas, podem sintetizar e acumular essncias
volteis. Os tricomas, lato sensu, so estruturas uni- ou pluricelulares, que tm nos vegetais
essencialmente dois tipos de funes: protectora (tricomas de cobertura) ou secretora (tricomas
glandulares), Fig. 3.9. Nestes ltimos, a essncia secretada , muitas vezes, acumulada,
temporariamente, entre a parede celular e a cutcula destacada, num espao designado espao
sub-cuticular. Por ruptura da cutcula liberta-se a essncia, que em seguida se evapora, Fig. 3.9 c
e d.

Mineralizao
A parede celular pode ser impregnada por carbonato de clcio [CO3Ca], oxalato de clcio
[(COO)2Ca] (ambos designados por calcificao) ou por slica (silicificao).

a) b)

c) d) e) f)

Fig. 3.10. Representao esquemtica e observao em microscopia ptica de cistlitos em folhas de a) e b)


Ficus elastica e c) Humulus lupulus. d) - f) Representao esquemtica e observao em microscopia ptica
e em microscopia electrnica de varrimento do tricoma silicificado de Urtica dioica.

O fenmeno da calcificao frequente no talo de algumas algas vermelhas, como a Coralline


e Lithothamnio, tornando-as rgidas e quebradias. Os cistlitos so, igualmente, depsitos de

36
Guia Prtico de Biologia Celular

calcrio que aparecem no interior da clula, fixos a uma excrescncia da parede. Observam-se,
com muita facilidade, na epiderme das folhas de Ficus elastica e de Humulus lupulus, Fig. 3.10.
A silicificao consiste na deposio de xido de silcio hidratado amorfo ou opalino [Si(OH)4].
As diatomceas representam um caso de silicificao parietal massiva. Um exemplo caracterstico
da silicificao nos vegetais superiores o dos tricomas de urtiga, Fig. 3.10. Neste caso, o reforo
apical silicioso permite que estes funcionem como minsculas seringas.

Suberificao
A suberificao consiste na deposio de camadas sucessivas de suberina na face interna da
parede celular, Fig. 3.11. Uma vez terminada a suberificao, e antes da morte da clula,
deposita-se uma camada de celulose. A suberina tem uma natureza qumica prxima da da
cutina, um polmero de steres de cidos gordos e de fenis.
A suberificao tem um papel protector e impermeabilizador. Podemos encontrar exemplos de
suberificao nas clulas da camada suberosa da rizoderme, e nas clulas da endoderme, Fig.
3.11. Tambm as clulas do sber, um tecido de crescimento secundrio, tm paredes celulares
suberificadas em maior ou menor grau. Como o sber constitui uma camada impermevel que
impossibilita as trocas gasosas, ela interrompida regularmente por lenticelas, constitudas por
um conjunto de clulas parenquimatosas arredondadas, com numerosos meatos entre si. A
suberificao pode ainda ocorrer em consequncia da destruio acidental da epiderme (feridas
ou picadas).

a) b)

c) d)

Fig. 3.11. Representao esquemtica da endoderme de a) Taxus baccata (espessamento em banda,


Bandas de Caspary) e de c) Iris florentina (espessamento em U) e b) e d) observao em microscopia ptica.

Esporoderme
A parede dos gros de plen e dos esporos , geralmente, constituda por duas camadas: uma

37
Guia Prtico de Biologia celular

externa, a exina e uma interna, a intina. A exina apresenta, normalmente, ornamentaes


caractersticas (papilas, pontuaes, bordos dentados, etc.), Fig. 3.12. Enquanto a exina
constituda por esporopolenina, uma substncia de natureza lipdica, a intina rica em celulose.
Graas ao facto de ser uma substncia dura e resistente aos ataques qumicos e de
microrganismos e bem assim por possuir ornamentaes caractersticas, a esporopolenina
persiste nos sedimentos e permite a reconstituio da paleoflora.

Fig. 3.12. Representao esquemtica de diversos gros de plen.

3.2. Matriz extracelular nas clulas animais


A matriz extracelular uma estrutura constituda por protenas e polissacridos que envolve
todas as clulas animais de tecidos slidos e rgos. Esta matriz fornece no s um suporte fsico
para o desenvolvimento das clulas mas tambm responsvel por um conjunto de sinais
bioqumicos e biomecnicos cruciais para a morfognese, diferenciao e homeostasia
tecidulares.
A matriz extracelular constituda por fibras proteicas embebidas numa rede gelificada de
glicosaminoglicanos (polissacridos) e proteoglicanos (complexos glicoproteicos). Possui ainda
algumas protenas adesivas que ligam os componentes da matriz uns aos outros e estes s
clulas (molculas de adeso celular), Fig. 3.13a. A variao na abundncia relativa de cada um
dos componentes responsvel pela diversidade das matrizes extracelulares e,
consequentemente, pela diversidade dos tecidos animais. A cartilagem, por exemplo, possui uma
percentagem elevada de polissacridos originando uma estrutura gelificada compacta, enquanto
no tecido sseo a matriz endurecida pela deposio de fosfato de clcio. O tecido conjuntivo,
como por exemplo o laxo e o cartilagneo, aquele em que a matriz extracelular mais
abundante, sendo essencialmente constitudo pela prpria matriz extracelular, na qual esto
dispersas as clulas, Fig. 3.13b.

Colagnio Fibronectina Laminina


Proteoglicano

Integrina

a) b)

Fig. 3.13. a) Representao esquemtica dos diversos componentes da matriz extracelular animal e da sua
relao com a membrana plasmtica. b) Observao de tecido conjuntivo laxo em microscopia ptica.

O colagnio a principal protena estrutural da matriz extracelular animal que faz parte de uma
grande famlia de protenas com mais de 20 tipos diferentes (colagnios). Estas protenas

38
Guia Prtico de Biologia Celular

caracterizam-se por formar hlices triplas em que 3 cadeias polipeptdicas, do mesmo tipo, se
enrolam umas nas outras, Fig. 314a. Na sequncia de aminocidos que constitui os colagnios, a
glicina ocorre sempre de 3 em 3 posies, sendo que, nas 2 intermdias, a prolina e a
hidroxiprolina so os aminocidos mais frequentes, Fig. 3.14b.

a) b)

Fig. 3.14. Representao esquemtica a) da hlice tripla de colagnio e b) da sequncia de aminocidos que
constituem a molcula de colagnio.

As fibrilhas de colagnio formam-se apenas no espao extracelular, aps a secreo dos


pr-colagnios (precursores solveis do colagnio). A associao das molculas de colagnio em
fibrilhas fortalecida pela formao de ligaes covalentes cruzadas, Fig. 3.15a. As fibrilhas
associam-se umas com as outras para formar fibras de colagnio, com vrios mcrons de
dimetro, Fig. 3.15b.

Intervalo

Ligao
cruzada

Hlice
tripla de
colagnio

a) b)

Fig. 3.15. a) Representao esquemtica da organizao das fibrilhas de colagnio. b) Observao das fibras
de colagnio em microscopia electrnica de transmisso.

Para alm das fibras de colagnio, a matriz extracelular animal contm, ainda, fibras elsticas,
particularmente abundantes em rgos que se expandem e contraem, como o caso dos
pulmes. Estas fibras so constitudas, principalmente, por uma protena, a elastina, que se
associa atravs de ligaes intercruzadas para formar uma rede. A rede de elastina funciona
como uma faixa elstica permitindo a expanso e a retraco do tecido ou rgo ao seu estado
inicial.
As protenas fibrosas estruturais da matriz extracelular (colagnio, elastina) esto envolvidas
numa rede gelificada constituda por polissacridos, denominados glicosaminoglicanos, e
proteoglicanos (GAGs), Fig. 3.16a. Dado que possuem grupos sulfato, os GAGs tm muitos
grupos aninicos negativamente pelo que, tal como as pectinas da parede celular vegetal, se

39
Guia Prtico de Biologia celular

ligam a caties e retm gua, formando gis. Na sua grande maioria os GAGs esto ligados a
protenas formando os proteoglicanos.
Diversos proteoglicanos ligam-se ao hialuronano para formar complexos supramoleculares.
Exemplo disso o agrecano, o proteoglicano maioritrio da cartilagem, Fig.3.16b. Os complexos
de hialuronano/proteoglicanos, de grandes dimenses, acabam por ficar aprisionados nas fibras
de colagnio. Ao mesmo tempo, interagem com o prprio colagnio e com outras protenas da
matriz constituindo redes gelificadas.
As protenas adesivas constituem o 3 grupo de constituintes da matriz extracelular animal.
So responsveis pela ligao entre os diversos componentes da matriz e entre esta e a
superfcie das clulas. A fribonectina, as lamininas, a entactina, so exemplos de protenas
adesivas que possuem locais de ligao para o colagnio e para os GAGs, estabelecendo
ligaes cruzadas entre aqueles dois componentes da matriz extracelular, Fig. 3.13a. Algumas
dessas protenas adesivas possuem, ainda, locais de ligao a receptores da membrana
plasmtica, responsveis pela ligao das clulas matriz extracelular.

cido glucurnico N-Acetilgalactosamina Galactose N-Acetilglucosamina Sulfato de Protena


condroitina

Agrecano

Hialuronano Agrecano
Sulfato de condroitina Sulfato de queratano

Protena
de ligao
cido Idurnico N-Acetilglucosamina

Sulfato de Heparano
a) b)

Fig. 3.16. a) Estrutura qumica de glicosaminoglicanos. b) Representao esquemtica da estrutura


resultante da ligao de proteoglicanos ao hialuronano.

3.2.1. A diversidade celular nos diferentes tecidos animais


Todas as clulas que constituem um determinado organismo partilham o mesmo cdigo
gentico nos seus ncleos. No entanto, as clulas no so todas idnticas. Muitos organismos
multicelulares so compostos de diversos tecidos, grupos de clulas especializadas numa funo
comum.
Nos animais existem 4 tipos principais de tecidos: epitelial, conjuntivo, nervoso e muscular.

Tecido epitelial
Os epitlios so camadas de clulas que cobrem a superfcie do corpo e delimitam as suas
cavidades internas tais como os pulmes e os intestinos.
As clulas podem ser colunares (mais altas que largas), pavimentosas (achatadas) ou cbicas.
Os tecidos epiteliais podem ser simples, estratificados ou pseudo-estratificados, Fig. 3.17.
Tratando-se de tecidos de revestimento e proteco, as suas clulas no apresentam, regra
geral, matriz extracelular na zona de justaposio.

40
Guia Prtico de Biologia Celular

a) b) c)

d) e) f)

Fig. 3.17. Representao esquemtica de diversos tipos de epitlios. a) Escamoso simples. b) Cuboidal
simples. c) Colunar simples. d) Escamoso estratificado. e) Cuboidal estratificado. f) Colunar pseudo-
estratificado.

Tecido conjuntivo
Constitui um grupo de tecidos, muito diversificado, com funes de armazenamento (tecido
adiposo), de suporte mecnico (tecido sseo, cartilagem) ou de ligao entre outros tecidos
(tecido conjuntivo laxo). Frequentemente, o tecido conjuntivo surge logo abaixo de tecido epitelial,
Fig. 3.18.

Tecido
conjuntivo laxo

Tecido epitelial
colunar simples

Fig. 3.18. Representao esquemtica da frequente localizao do tecido conjuntivo, relativamente ao tecido
epitelial.

O tecido conjuntivo caracterizado, na maioria dos casos, por ser constitudo por poucas
clulas num grande volume de matriz extracelular, a qual constituda por diversos tipos de fibras
embebidas numa substncia fundamental, Fig. 3.19. A mais abundante destas fibras o
colagnio, uma protena que constitui cerca de 1/3 das protenas do corpo humano. A elastina
outra protena abundante na matriz extracelular de clulas de alguns tecidos conjuntivos.
Dependendo do tipo de tecido conjuntivo, os componentes predominantes da matriz
extracelular so diversos. No tecido conjuntivo laxo, a matriz extracelular rica em fibras de
colagnio e de elastina, embebidas numa rede polissacardica. Neste tipo de tecido, as clulas
predominantes so os fibroblastos, que produzem as fibras e os componentes da substncia
fundamental, Fig. 3.19a. O tecido cartilagneo caracterizado por uma matriz extracelular em que
predomina a rede polissacardica gelificada, composta por glicosaminoglicanos e proteoglicanos.
Os condrcitos so clulas facilmente observveis em lacunas dispersas na matriz extracelular,

41
Guia Prtico de Biologia celular

Fig. 3.19b. No caso do tecido sseo, a matriz extracelular rgida devido deposio de fosfato
de clcio. Os ostecitos so as clulas que se destacam, Fig. 3.19c.

a) b)
Matriz
Fibra
gelificada
Fibroblasto
Condrcito
Rede Lacuna
gelificada

Eosinfilos Basfilos
Neutrfilos
Ostecito

Matriz

Linfcitos Plaquetas
c) Moncitos Eritrcitos
d)

Fig. 3.19. Representao esquemtica de diversos tipos de tecido conjuntivo. a) Conjuntivo laxo.
b) Cartilagneo. c) sseo. d) Sanguneo.

Existem casos particulares de tecidos conjuntivos que constituem excepes regra. No


tecido sanguneo, os diversos tipos de clulas que o constituem encontram-se dispersos numa
matriz lquida (o plasma), que no produzida pelas clulas, Fig. 3.19d. No caso do tecido
adiposo, a matriz extracelular quase inexistente, sendo as clulas bastante volumosos devido
grande acumulao de gorduras.

Tecido nervoso
O tecido nervoso apresenta uma matriz extracelular bem desenvolvida, onde se encontram
dispersos dois tipos bsicos de clulas, Fig. 3.20. Os neurnios, envolvidos na conduo do
impulso nervoso, so o principal tipo de clulas deste tecido e apresentam prolongamentos, os
axnios, que podem atingir mais de 1 metro de comprimento. O outro tipo de clulas so clulas
da glia, ou neuroglias, com funo de suporte e proteco dos neurnios.

Extenses
citoplasmticas

Corpo celular
do neurnio

Clula da glia

Fig. 3.20. Representao esquemtica de tecido nervoso.

42
Guia Prtico de Biologia Celular

Tecido muscular
O tecido muscular pode ser de 2 tipos: liso e estriado. As clulas do msculo liso so
alongadas e finas, Fig. 3.21a, e encontram-se geralmente nas paredes de rgos tubulares tais
como os intestino e os vasos sanguneos. As clulas musculares lisas contraem-se lentamente e
so capazes de manter o estado de contraco durante um longo perodo de tempo.

Clula muscular

Ncleos
Ncleo

a) b)

Fibra muscular

Ncleos

c)

Fig. 3.21. Representao esquemtica de tecido muscular. a) Liso. b) Estriado cardaco. c) Estriado
esqueltico.

Existem dois tipos de msculo estriado, o cardaco e o esqueltico, Fig. 3.21b, c. O msculo
cardaco constitui as paredes das cavidades do corao. constitudo por clulas ramificadas,
ligadas entre si, e a sua contraco automtica ritmada leva ao batimento cardaco. Cada
msculo esqueltico um feixe de centenas a milhares de fibras, sendo cada fibra uma clula
gigante, com muitos ncleos (sinccio), resultante da fuso de vrias clulas.

3.3. Membrana plasmtica


Todas as membranas protoplasmticas so constitudas por uma bicamada fosfolipdica, na
qual esto integradas as protenas membranares, Fig. 3.22. Enquanto algumas protenas se ligam
superfcie polar dos lpidos, as protenas extrnsecas, outras, penetram na bicamada, podendo
mesmo atravess-la, as protenas intrnsecas. As protenas extrnsecas e as pores das
protenas intrnsecas que ocorrem superfcie da face exoplsmica possuem, frequentemente,
resduos de acar (i.e., so glicoprotenas). Os acares parecem estar envolvidos num grande
nmero de fenmenos fisiolgicos, designadamente no reconhecimento e adeso celulares.
Embora possam existir lpidos neutros nas membranas, o duplo folheto constitudo,
essencialmente, por fosfolpidos. semelhana do que se passa com as protenas, a distribuio
dos lpidos na membrana assimtrica. Assim, s existem glicolpidos na sua face exoplsmica.
Pese embora a unidade estrutural de todas as membranas protoplasmticas, existem
diferenas significativas entre as diversas membranas de uma mesma clula, no que diz respeito

43
Guia Prtico de Biologia celular

composio fosfolipdica e proteica.


A bicamada fosfolipdica impermevel maioria das molculas polares. De molde a
assegurar o transporte destas molculas atravs da membrana, existem protenas especficas
que promovem, de forma selectiva, a transferncia dos diversos solutos. Muitas dessas protenas
so enzimas com locais especficos de ligao para as molculas a transportar. Outras h que
formam canais atravs dos quais pequenas molculas podem deslocar-se por difuso, segundo
gradientes de concentrao e/ou electroqumicos.

Fig. 3.22. Representao esquemtica tridimensional de uma seco da membrana plasmtica (tambm
designada de plasmalema ou membrana celular).

Para assegurar o seu metabolismo, uma clula viva tem necessidade de trocar substncias
com o meio exterior, incluindo outras clulas. Essas trocas fazem-se atravs da membrana
plasmtica, que separa o meio intracelular do meio extracelular.
O transporte das mais diversas substncias pode ser determinado por fenmenos de difuso.
Neste caso, trata-se de transporte passivo, em que o movimento das molculas de gua e do
soluto determinado pela diferena de concentrao entre os meios intra- e extracelulares, i.e.
pelo gradiente de concentrao, ou devido existncia de potenciais de membrana, i.e. pelo
gradiente electroqumico.
As molculas de gua esto em constante movimento atravs da membrana plasmtica. Esse
movimento no se traduz em alteraes visveis da forma ou do tamanho da clula devido ao
fluxo ser o mesmo em ambas as direces. Quando a concentrao de um qualquer soluto difere,
no interior e no exterior da clula, o fluxo da gua direccionado no sentido da maior
concentrao de soluto podendo, em consequncia disso, a clula contrair-se ou dilatar-se,
consoante os casos. Se da membrana plasmtica permevel s molculas do soluto, ento este
difunde-se, sendo o seu fluxo inverso ao do da gua.
Existem formas de transporte que no podem ser explicados por simples processos de
difuso. Nesses casos intervm transportadores especficos que tanto promovem o transporte a
favor de gradientes de concentrao, difuso facilitada, como contra esses gradientes. Quando o
transporte efectuado contra gradientes de concentrao, transporte activo, a clula tem
necessidade de recorrer a molculas de elevado potencial qumico como, por exemplo, o ATP.
A gua o constituinte essencial da clula, representando 70 - 90 % da massa total da
componente citoplasmtica. O teor em gua da clula vegetal pode variar muito com o estdio
fisiolgico da planta ou com as condies hdricas do meio. No entanto, o grau de hidratao do
hialoplasma varia muito pouco. Com efeito, a perda e a acumulao de gua verifica-se ao nvel
dos vacolos, como pode ser comprovado pelos fenmenos de plasmlise e de turgescncia, Fig.

44
Guia Prtico de Biologia Celular

3.23. Quando uma clula colocada num meio com tonicidade superior do fluido vacuolar (meio
hipertnico) a gua tende a sair do vacolo, conduzindo diminuio do seu volume, e
retraco do citoplasma. Este fenmeno, designado plasmlise, reversvel, por desplasmlise,
se o meio onde se encontram as clulas for substitudo por uma soluo hipotnica. Neste caso, a
tonicidade do meio inferior do fluido vacuolar e, como tal, a gua tende a entrar para os
vacolos, levando a um aumento do seu volume e pressionando o hialoplasma contra a parede
celular. A clula diz-se, nesse caso, trgida.

a)

b) c)

N CH 3

(CH 3 )2 N N+ NH 2
d) H

Fig. 3.23. a) - c) Resposta da clula vegetal (clula trgida, incio de plasmlise convexa e plasmlise
cncava / convexa com trabculas citoplasmticas) s alteraes da tonacidade do meio extracelular. d)
Vermelho neutro.

Os fenmenos de plasmlise e desplasmlise podem ser estudados recorrendo a corantes


selectivos e vitais como o vermelho neutro, Fig. 3.23d. O corante selectivo aquele que cora
fundamentalmente uma estrutura celular para o qual especfico, neste caso, os vacolos. Diz-se
vital porque, apesar de corados, os vacolos no manifestam alteraes das suas propriedades
vitais, pelo menos num curto perodo de tempo.
O vermelho neutro conduzido ao vacolo acabando por se fixar ao colide vacuolar

45
Guia Prtico de Biologia celular

electronegativo. Os corantes vitais so, em regra, electropositivos.

3.4. Movimentos de ciclose


Para que a actividade metablica celular ocorra, necessrio que os substratos, as enzimas,
os cofactores e os produtos do metabolismo intermedirio se encontrem, virtualmente, em todos
os locais do protoplasma. Em clulas de pequenas dimenses, como as das bactrias e a maioria
das clulas animais, a simples difuso permite a rpida deslocao dos diversos solutos ao longo
da clula. Sendo as clulas vegetais de grandes dimenses, algumas com 1 cm de comprimento,
este processo ineficaz. Basta recordar que o tempo despendido por uma molcula para
percorrer, por difuso, um determinado espao varia na razo directa do quadrado da distncia
percorrida. No , portanto, de surpreender, que algumas clulas vegetais apresentem correntes
citoplasmticas intensas, movimentos de ciclose, que arrastam solutos e organitos, Fig. 3.24.
Estas correntes so direccionadas e permitem no s o contacto entre substratos e enzimas
produzidos em locais distantes da clula como o transporte intercelular via plasmodesmos.
As correntes citoplasmticas parecem ser geradas por filamentos de actina e miosina, tendo
os microtbulos a responsabilidade do direccionamento. A velocidade dos movimentos de ciclose
varia com a intensidade luminosa, a temperatura e certos agentes qumicos.

Fig. 3.24. Representao esquemtica de movimentos de ciclose, pondo em evidncia a deslocao de


gotculas lipdicas atravs das trabculas citoplasmticas em clulas epidrmicas da escama de Allium cepa.

3.5. Vacolos e Incluses vacuolares


Nas clulas vegetais observa-se um nmero varivel de vacolos cuja membrana, o
tonoplasto, tem a capacidade de manter constante o pH cido do fluido vacuolar. O volume
ocupado pelo conjunto dos vacolos, vacuoma, varia numa clula de 5 a 95%, dependendo do
tipo de clula, Fig. 3.25. Na clula vegetal tm como funo transportar ou armazenar nutrientes,
metabolitos e produtos finais do metabolismo.
Os vacolos surgem na clula jovem provavelmente por dilatao de cisternas do retculo ou
por fuso de vesculas derivadas quer do retculo quer dos dictiossomas. Nas clulas
meristemticas, o vacuoma reduzido e formado por pequenos vacolos globulares ou
filamentosos, dificilmente observveis ao microscpio ptico. No decurso da diferenciao celular,
os vacolos so, entre os organitos celulares, os que apresentam desenvolvimento mais notvel.
Os minsculos vacolos das clulas meristemticas fundem entre si originando, muitas vezes, no
final da diferenciao, um nico vacolo de grandes dimenses, Fig. 3.25.
A simples funo de ocupao de espao pelos vacolos, extremamente importante nos
vegetais, uma vez que estes tm de crescer para captar energia solar. A estabilidade mecnica
conferida pela combinao da parede celular e da presso hdrica, permite que as clulas
vegetais atinjam dimenses apreciveis. A produo de clulas de grandes dimenses,
preenchidas unicamente por citosol, seria dispendioso quer em termos de sntese inicial quer em
termos de manuteno. Embora algumas clulas sintetizem mais hialoplasma medida que se
diferenciam, a maioria acumula gua em pequenos vacolos, que coalescem formando um nico

46
Guia Prtico de Biologia Celular

vacolo. Esse vacolo pode ser atravessado por trabculas citoplasmticas e, muitas vezes, o
hialoplasma aparece comprimido numa pequena faixa, entre o tonoplasto e a parede celular.
O fluido vacuolar essencialmente constitudo por gua contendo em soluo ou suspenso
diversas substncias. O vacolo pode armazenar muitos tipos de compostos, em particular,
substncias potencialmente nefastas para a clula quando em concentraes elevadas no resto
do citoplasma.

a)

b)

Fig. 3.25. a) Representao esquemtica da evoluo vacuolar numa raiz. b) Representao do aspecto
celular da evoluo vacuolar.

A permeabilidade diferencial da membrana plasmtica e do tonoplasto determina que o


hialoplasma e o vacolo apresentem composio diversa, relativamente a certos solutos.
Como a resistncia mecnica do tonoplasto relativamente baixa, a presso hdrica deve
manter-se aproximadamente igual no hialoplasma e no vacolo; ambos devem actuar
conjuntamente no controlo do balano osmtico, mantendo desse modo a turgidez celular.

3.5.1. Contedo vacuolar


O contedo vacuolar complexo, e a natureza dos compostos a acumulados varivel em
funo da espcie, do tipo celular e do estdio fisiolgico. Algumas substncias acumulam-se
exclusivamente no vacolo (antocianinas, inulina, etc.), enquanto outras podem encontrar-se
igualmente no hialoplasma (sacarose, malato, aminocidos). Entre os produtos armazenados no
vacolo encontram-se alguns de utilidade metablica imediata. Algumas plantas captam CO2
durante a noite e armazenam-no no vacolo sob a forma de malato, at que, em presena de
energia luminosa, o possam utilizar na sntese de acares. O vacolo pode acumular tambm
macromolculas, por perodos mais ou menos longos, como o caso do armazenamento de

47
Guia Prtico de Biologia celular

protenas em muitas sementes.


Alguns dos compostos armazenados no vacolo podem desempenhar papel na interaco
planta / animal. Como exemplo, refira-se a acumulao de antocianinas nas ptalas, como forma
de atrair os polinizadores. Os compostos do vacolo nem sempre tm um papel to inofensivo. As
plantas sintetizam e armazenam no vacolo, grande variedade de compostos txicos que so
libertados quando as clulas so ingeridas ou, de alguma forma, danificadas. Estes compostos
vo desde alcalides extremamente txicos at inibidores da digesto, de sabor desagradvel.
As substncias incorporadas no vacolo podem ser agrupadas segundo a sua natureza em:

Sais minerais
A acumulao de nitratos, em particular nitrato de potssio, fosfatos e iodetos comum em
certas algas como Fucus e Laminaria.

Substncias orgnicas
Entre as substncias orgnicas acumuladas no vacolo encontram-se os cidos orgnicos
(cido mlico na ma, cido ctrico no limo, cido oxlico nas azedas), pigmentos, coumarinas,
protenas, taninos, aminocidos, alcalides (morfina e cafena) e glcidos (glucose e frutose em
diversos frutos, sacarose na cana de acar e na beterraba sacarina, inulina nas razes da
chicria), Fig. 3.26a.
A inulina, extrada pela primeira vez da Inula helenium, um glcido de reserva acumulado
nos rgos subterrneos, em particular das plantas da famlia das Compostas e das
Campanulceas, muitas vezes at 15 % do seu peso seco. A inulina constituda por vrias
unidades de frutofuranose unidas por ligaes (2-1) com um resduo de sacarose terminal, Fig.
3.26a. Enquanto a clula est viva, este glcido existe em soluo coloidal no interior do vacolo.
Por desidratao artificial, numa srie ascendente de lcoois, ocorre a sua cristalizao de
encontro parede celular. Formam-se numerosos cristais que se agregam, dando origem a uma
estrutura em forma de leque, Fig. 3.26b e c.
A acumulao de protenas no vacolo tambm frequente, em particular sob a forma de
corpos proteicos entre os quais se salientam os gros de aleurona. Em algumas sementes
fortemente desidratadas, as clulas do tecido de reserva no apresentam vacolos de contedo
lquido. Nas sementes jovens e ainda no desidratadas, o parnquima de reserva formado por
clulas com grandes vacolos. Durante a maturao, a desidratao dos tecidos est associada
fragmentao dos vacolos noutros mais numerosos e de menores dimenses. Durante esta fase
so a lanadas substncias de reserva, essencialmente protenas. Numa fase final, o contedo
dos vacolos solidifica, constituindo-se os gros de aleurona. No caso da semente de rcino, estes
gros, bastante volumosos, apresentam uma substncia fundamental contendo um ou dois
globides (constitudos essencialmente por um sal derivado do hexafosfato de inositol) e uma
importante incluso proteica, de contorno poligonal, o cristalide, Fig. 3.26d. O cristalide e a
substncia fundamental so essencialmente constitudos por protena.
Durante a germinao, as clulas da semente sofrem uma re-hidratao. Os gros de
aleurona aumentam de volume e dissolvem-se por aco de enzimas. Os vacolos assim
formados aumentam de tamanho, fundem-se e do origem a um nico vacolo de grandes
dimenses. Durante a germinao o vacuoma evolui de forma inversa observada durante a
maturao, Fig. 3.26d.
Por vezes, o fluido vacuolar corado devido presena de pigmentos, genericamente
denominados antocianinas. Numerosas flores e frutos assim como folhas de certas plantas
ornamentais, devem a sua cor presena das antocianinas. As antocianinas possuem dois
ncleos benznicos ligados a um anel heterocclico central, contendo oxignio, Fig. 3.27. A cor

48
Guia Prtico de Biologia Celular

das antocianinas depende quer do grau de hidroxilao ou metilao (a hidroxilao


responsvel pelas tonalidades azuis, enquanto a metilao pelas tonalidades vermelhas), quer do
grau de quelao (os ies metlicos so quelados por alguns hidroxilos e modificam a cor inicial,
em geral na direco da tonalidade azul), quer do pH. Estes pigmentos so, em geral, vermelhos
em meio cido e azuis ou prpura em meio alcalino. No entanto, so instveis em meio de
elevada alcalinidade porque, nessas condies, o anel heterocclico tem tendncia a cindir.

HOH 2C
OH
H H
HO OH H
H OH
O
HOH 2C O
H H HO CH 2
OH H
O
HOH 2C O
H H HO CH
2
OH H
O
HOH 2C O
H H HO CH 2
OH H
a) b) c)

Vacolos
Gro de aleurona
Globide

Cristalide
Substncia
d)
fundamental

e) f)

Fig. 3.26. a) Frmula da inulina. b) e c) Formao dos esferocristais de inulina por desidratao em lcool do
contedo vacuolar. d) Formao de gros de aleurona durante a fase de maturao da semente (da
esquerda para a direita) e sua hidratao durante a fase de germinao (da direita para a esquerda).
e) e f) Observao dos gros de aleurona em microscopia ptica.

49
Guia Prtico de Biologia celular

2' 3'
8 1 Metilao
O 1'
7 B 4' Vermelho
2
A OCH 3
6 3 6' 5'
5 4 B OH B OH
Estrutura base
Pelargonidina Peonidina

Hidroxilao
O OCH 3
B OH
A B OH
B OH
OH OH
O Petunidina
Cianidina
Flavonis
OH OCH 3
O
B B OH B OH
A
OH OCH 3

O Delfinidina Malvidina

a) Flavonas b) Azul Roxo


HO
O
O

O Gluc
OH

-H+

OH
HO O+
HO O
HO -H+ O -H+ HO
O O
OH HO
O
O Gluc OH O Gluc
O OH
OH
OH (Gluc)
Pelargonidina-3-Glucsido
+
-H
+H2O

OH OH
O
HO OH HO
O OH

O Gluc O Gluc
OH OH

c) Esverdeado (Descorado) Incolor

d) e)

Fig. 3.27. a) Estrutura base das antocianinas. b) Relao entre a cor das antocianinas e o grau de
hidroxilao e metilao do anel B. c) Variao estrutural das antocianinas em soluo aquosa a diferentes
valores de pH. d) e e) Observao de vacolos corados em microscopia ptica.

Oxalato de clcio
O cido oxlico um cido dicarboxlico, Fig. 3.28. No vacolo, este cido pode formar

50
Guia Prtico de Biologia Celular

oxalatos solveis de sdio e potssio, ou oxalatos insolveis e cristalinos na presena de caties


divalentes como o clcio, magnsio, brio ou estrncio. A formao de cristais de oxalato de
clcio uma biomineralizao que merece algum detalhe, j que um processo tipicamente
vegetal. A cristalizao ocorre em muitas espcies (folhas de begnia, rcino, cebola, etc.), mas
apenas em certas clulas, de maiores dimenses, ditas cristalferas, dispersas no parnquima e
nos tecidos condutores. As acumulaes de oxalato de clcio aparecem como cristais de formas
muito diversas, que dependem da espcie, do grau de hidratao e das condies de
cristalizao (pH, velocidade): cristais prismticos (nas escamas externas do bolbo da cebola),
cristais em agulha ou rfides (no pericarpo da banana, nas folhas do Alle) maclas de cristais em
pirmide ou drusas (na folha de Nerium oleander, no caule de Humulus lupulus), etc., Fig. 3.28.
Num mesmo rgo podem existir diferentes formas.

a) b) c) d) e)

f) g) h)

Fig. 3.28. a) Converso do cido oxlico em oxalato de clcio. b) h) Cristais de oxalato de clcio: b) e f)
cristal isolado tetradrico, c) e g) drusa, d) e h) feixe de rfides e e) pequenos cristais dispersos.

Os diferentes tipos de substncias que podem ser acumuladas no vacolo, acima descritas,
podem ainda ser agrupadas segundo derivam do metabolismo primrio da planta, i.e. so
intermedirios normais do metabolismo celular resguardados temporria ou permanentemente do
hialoplasma (cido mlico, cido oxlico cido ctrico, cido tartrico, cido ascrbico, sacarose,
inulina, aminocidos e protenas), ou do metabolismo secundrio, i.e. de vias biossintticas mais
especializadas (antocianinas, coumarinas, taninos, alcalides). Este ltimo grupo de substncias,
tido durante muito tempo como desperdcios fisiolgicos, actualmente considerado como um
conjunto de compostos que intervm duma maneira subtil nos equilbrios naturais e nas relaes
planta / animal e planta / patogneos, quer como agentes de atraco, quer como repelentes e
meios de defesa.

51
Guia Prtico de Biologia celular

3.6. Plastos
Como se referiu anteriormente, so basicamente duas as caractersticas que diferenciam as
clulas vegetais das clulas animais: a presena de parede celular e a capacidade de realizar a
fotossntese.
A nutrio vegetal est dependente da produo de compostos orgnicos durante a
fotossntese. Nos vegetais superiores esta funo ocorre nos cloroplastos. Os produtos da
fotossntese podem ser utilizados directamente em diversos processos biossintticos,
armazenados sob a forma de amido, um polissacrido osmoticamente inerte, ou convertidos em
sacarose, um acar de baixo peso molecular, que transportada at outros tecidos da planta,
consoante as suas necessidade metablicas.
Os cloroplastos fazem parte de um grupo mais vasto de organitos, intimamente relacionados,
os plastos. Possuem como caractersticas comuns, dimenso superior das mitocndrias,
invlucro constitudo por duas membranas e genoma prprio. De acordo com a colorao que
manifestam, possvel distinguir cloroplastos (verdes), cromoplastos (amarelos, alaranjados ou
vermelhos) e amiloplastos e leucoplastos (incolores). Os dois primeiros tipos so muitas vezes
referenciados como cromatforos.
Todos os plastos evoluem a partir de proplastos, organitos relativamente pequenos, que se
encontram nas clulas meristemticas. Estes proplastos desenvolvem-se de acordo com as
necessidades e condies ambientais de cada clula em diferenciao. Se a clula se desenvolve
na escurido, os proplastos evoluem para estioplastos, organitos com arranjo membranar interno
semicristalino e com protoclorofilida, um precursor amarelo da clorofila. Se expostos luz, os
estioplastos originam cloroplastos, por converso da protoclorofilida em clorofila bem como pela
sntese de mais componente membranar, pigmentos, enzimas e componentes da cadeia de
transporte electrnico.

3.6.1. Cloroplastos
Os cloroplastos so organitos citoplasmticos existentes nas clulas vegetais fotossintticas,
Fig. 3.29. Nas clulas dos vegetais superiores o seu nmero varivel. Apresentam-se, em geral,
sob a forma de discos lenticulares de 3 - 1 0 m de dimetro e 1 - 2 m de espessura. So
facilmente observados ao microscpio ptico devido presena de clorofila que lhes confere a
colorao verde caracterstica.
As clorofilas a e b e os carotenides (carotenos e xantofilas) so os pigmentos mais
importantes nos cloroplastos dos vegetais superiores. Estes pigmentos apresentam espectros de
absoro caractersticos e so os responsveis pela absoro de energia luminosa, que fazem
graas presena de ligaes duplas conjugadas. Do ponto de vista qumico, as clorofilas so
complexos porfirino-magnesianos. Por seu turno, os carotenides so pigmentos de natureza
terpnica, lipossolveis e de cor amarela, laranja ou vermelha.
Nas algas castanhas, a cor verde, devida s clorofilas a e c, est mascarada por um caroteno
de cor amarelo-acastanhada, a fucoxantina. As algas vermelhas e azuis possuem, alm dos
carotenides, clorofila a e pigmentos de natureza proteica, as ficobilinas (ficoeritrina, ficocianina e
aloficocianina). Outros tipos de clorofila, nomeadamente c, d e e, existem apenas em alguns
grupos vegetais. Por seu turno, a bacterioclorofila encontra-se apenas nas bactrias autotrficas.
Em microscopia electrnica, Fig. 3.30, observa-se o invlucro cloroplastidial constitudo por
duas membranas: a membrana externa e a membrana interna. Em alguns casos, a membrana
interna invagina-se originando uma rede complexa de tbulos, o retculo perifrico.
O invlucro cloroplastidial delimita o estroma onde se encontram diversos sculos achatados
de natureza membranar, os tilacides.

52
Guia Prtico de Biologia Celular

a) b)

Fig. 3.29. a) Distribuio dos cloroplastos numa folha de um vegetal superior. b) Observao de cloroplastos
numa folha de Elodea.

Os tilacides esto, regra geral, orientados segundo o eixo maior do cloroplasto. Em termos
anatmicos, distinguem-se dois tipos de tilacides: os tilacides dos grana (discos achatados e
empilhados uns sobre os outros que correspondem, em microscopia ptica, s zonas de verde
mais intenso) e tilacides do estroma (membranas tilacoidais polimrficas que aparecem no
estroma, unindo entre si tilacides de grana diferentes ou de um mesmo granum, Fig. 3.30.

a) b)

Fig. 3.30. a) Representao esquemtica da estrutura de um cloroplasto e b) da organizao dos tilacides


dos grana e do estroma.

No estroma finamente granular, observam-se diferentes incluses: glbulos osmifilos ou


plastoglbulos, gros de amido, ribossomas e DNA plastidial agrupado em nucleides. Dos
constituintes do estroma, apenas os gros de amido so observveis em microscopia ptica,
surgindo como estruturas refringentes quando no corados.

Diversidade estrutural dos cloroplastos


A estrutura cloroplastidial descrita tpica dos vegetais superiores. Nas algas verdes, por
exemplo, os tilacides formam pilhas de contorno mais ou menos irregular. Nas algas castanhas e
nas diatomceas os tilacides agrupam-se em conjuntos de trs ao longo do eixo maior do
cloroplasto. J nas algas vermelhas, os tilacides esto todos separados uns dos outros. Como
se referiu, nestas algas, a cor verde da clorofila est mascarada por pigmentos vermelhos de
natureza proteica, as ficobilinas. Estes pigmentos associam-se formando partculas,
ficobilissomas, ligadas face estromtica dos tilacides.
Os cloroplastos sem grana ocorrem igualmente nos vegetais superiores, como na cana-de-
acar e no milho. Este tipo de cloroplastos existe apenas nas clulas que envolvem os feixes
libero-lenhosos das folhas. Nas restantes clulas, os cloroplastos apresentam estrutura tpica.
A forma e o nmero dos cloroplastos variam de organismo para organismo. Numerosas algas

53
Guia Prtico de Biologia celular

unicelulares ou filamentosas possuem apenas um ou dois cloroplastos por clula, que so de


dimenses superiores aos observados nos vegetais superiores. o caso da Spirogyra, Zygnema
e Mougeotia, Fig. 3.31.
Para alm da forma e dimenso diferente, os cloroplastos das algas possuem ainda um ndice
de primitividade no detectada nos vegetais superiores, que a presena de pirenide. O
pirenide uma estrutura, de natureza proteica, diferenciada do estroma, que apresenta em
microscopia electrnica uma estrutura finamente granular, e em redor do qual se acumula o
amido. Esta particularidade torna-os facilmente identificveis em microscopia ptica, recorrendo
ao reagente Lugol, que revela o amido depositado em torno do pirenide.

Gro de amido

Pirenide

Cloroplasto
A) B) C) D) E)

Fig. 3.31. Diversidade morfolgica dos cloroplastos das algas: a) Spirogyra sp., b) Pleurosigma angulatum,
c) Odegonium sp., d) Zygnema sp., e) Mougeotia sp., com pormenor de pirenide.

3.6.2. Leucoplastos
Os leucoplastos (plastos incolores) existem em rgos vegetativos expostos luz (epiderme e
tricomas glandulares) e em rgos subterrneos (razes, bolbos e tubrculos), Fig. 3.32.

Fig. 3.32. Observao, em microscopia ptica, de leucoplastos rodeando o ncleo ().

Os leucoplastos totalmente diferenciados no possuem ribossomas 70 S, tpicos dos plastos,


nem sistema tilacoidal autnomo, independente do invlucro plastidial. O estroma , muitas
vezes, menos denso do que o dos cloroplastos. A membrana interna do invlucro pode invaginar-

54
Guia Prtico de Biologia Celular

se, formando um reticulado interno.


Os leucoplastos podem acumular amido ou protenas ou participar na sntese de leos
essenciais e resinas em clulas glandulares (canais secretores do pinheiro, tricomas glandulares
das Labiadas, entre outros).

3.6.3. Amiloplastos
Os amiloplastos existem sobretudo em caules subterrneos, razes tuberculosas e sementes.
Dizem-se polimrficos dadas as diferentes formas que assumem, em funo do nmero e volume
dos gros de amido acumulados: lenticulares, piriformes, cnicos ou poligonais. Tambm a sua
dimenso pode variar de 1-175 m. Este tipo de plastos acumula grande quantidade de amido,
no possui pigmentos e a sua ultrastrutura muito simples. O estroma reduz-se a uma estreita
faixa, comprimida entre os gros de amido e o invlucro plastidial, e as estruturas membranares
so raras.

a) b) c) d) e) f)

g) h)

Fig. 3.33. Representao esquemtica de diversos tipos de gros de amido simples a) do trigo, b) da batata,
c) feijo, d) da aveia (gros simples associados); semi-composto e) da batata (estrias comuns) e composto f)
da batata. g) e h) Observao de gros de amido em microscopia ptica.

A deposio do amido faz-se em camadas sucessivas em torno de um ponto, o hilo, Fig. 3.33.
Em determinadas circunstncias, a deposio do amido to elevada que este acaba por ocupar
todo o plasto.
As estrias mais ou menos concntricas, que se observam em torno do hilo dos gros de amido
de algumas espcies, devem-se deposio de amilose e amilopectina. Ambas so
polissacridos com ligaes (1-4) mas com caractersticas fisco-qumicas diferentes): enquanto
a amilose um polmero linear solvel em gua quente, a amilopectina um polmero ramificado
e insolvel. A proporo entre estes dois constituintes depende do tecido e da espcie em estudo
(por exemplo, a amilose representa 16 % nos gros de amido da banana, 20 % na batata, 25 % no
trigo e 50 % em algumas variedades de pera), e determina a tonalidade apresentada quando
corados com o reagente de Lugol.

3.6.4. Cromoplastos
A colorao dos cromoplastos deve-se presena de xantofilas (amarelo), carotenos (laranja)

55
Guia Prtico de Biologia celular

e/ou licopenos (vermelho). Estes pigmentos existem no estroma sob a forma de gotculas ou de
estruturas cristalinas. O significado biolgico destes plastos mal conhecido.
Os cromoplastos so observados em clulas epidrmicas de ptalas de algumas flores
(gladolos, amores-perfeitos, chagas, tlipas, calndulas, entre outros), no pericarpo de alguns
frutos (tomate, fruto da roseira, entre outros) e em algumas razes como, por exemplo, a da
cenoura, Fig. 3.34.
Do ponto de vista da microscopia ptica, possvel distinguir dois tipos de cromoplastos:
a) fibrilhares, em que os pigmentos (carotenos, licopenos) esto integrados em estruturas
fibrilhares e b) globulares, em que os pigmentos (xantofilas) esto incorporados em gotculas
lipdicas dispersas no estroma.

a) b) c) d) e)

f) g)

Fig. 3.34. Representao esquemtica de diferentes tipos de cromoplastos. a) Rosa canina, b) Calendula
vulgaris, c) Forsythia suspensa, d) Gladiolus sp., e) Viola tricolor. f) e g) observao de cromoplastos em
microscopia ptica.

3.6.5. Proteoplastos
Este tipo de plastos, tambm designados aleuroplastos ou proteinoplastos, pouco frequente.
Observam-se no saco embrionrio de algumas espcies e no parnquima radicular de algumas
orqudeas. As protenas acumulam-se no estroma sob a forma de corpos cristalinos, de feixes ou
fibrilhas.

3.6.6. Oleoplastos
Tambm designados por elaioplastos, este tipo de plastos ocorre com pouca frequncia.
Observam-se sobretudo em clulas epidrmicas. Acumulam lpidos no estroma sob a forma de
plastoglbulos ou gotculas lipdicas.

3.7. Ncleo
O ncleo a unidade estrutural e funcional de importncia vital para a clula, responsvel

56
Guia Prtico de Biologia Celular

pelas caractersticas hereditrias sob a forma de DNA replicvel.


Nos eucariotas, o ncleo existe em todas as clulas, excepto nos eritrcitos dos vertebrados
superiores. A sua forma determinada pelo tipo de clula e presso vacuolar, varivel: esfrica,
oblongo, discide, lobulada ou amebide. De igual modo, tanto a sua dimenso (que est
estritamente relacionada com a massa citoplasmtica: relao ncleo/citoplasma) como a sua
localizao na clula variam com o tipo celular, Fig. 3.35.
De um modo geral, as clulas no possuem mais de um ncleo. No entanto, no raro
observarem-se clulas, como por exemplo no fgado, com dois ncleos. Atendendo ao modo de
formao, as clulas polinucleadas so designadas plasmdios (quando a multiplicao nuclear
no acompanhada pela correspondente citocinese) ou sinccios (quando resultam da fuso de
vrias clulas).
Ao microscpio ptico, os ncleos apresentam-se como zonas mais ou menos refringentes,
raras vezes com movimentos muito lentos de rotao e oscilao. Aps colorao com corantes
bsicos, observam-se, no seio do nucleoplasma pouco corado, o nuclolo e zonas mais
cromfilas, constituindo estas a rede cromatnica.
A presena de invlucro nuclear, separando o nucleoplasma do hialoplasma, a principal
caracterstica que permite distinguir os organismos eucariotas dos procariotas. Ao microscpio
electrnico, o invlucro nuclear aparece como uma diferenciao local do retculo endoplasmtico,
caracterizada pela presena de numerosos poros, poros nucleares, Fig. 3.35, e ribossomas na
face hialoplasmtica da membrana externa. O espao entre a membrana interna e a externa
designado espao perinuclear.

1 2

a) b)

Fig. 3.35. a) Representao esquemtica do ncleo interfsico. b) 1-2 Ncleo interfsico observado em
microscopia electrnica de transmisso.

Nos eucariotas, o nucleoplasma um gel proteico com propriedades comparveis s do


citoplasma.
Os nuclolos, Fig. 3.35, so estruturas densas, esfricas ou ovides, em nmero definido nos
ncleos profsicos e interfsicos de todos os organismos superiores. Os nuclolos so
diferenciaes cromossmicas funcionais, responsveis pela sntese da quase totalidade do RNA
ribossomal.
A cromatina uma zona densa, de estrutura fibrilhar, que cora com corantes bsicos (os
grupos fosfato dos cidos nucleicos, carregados negativamente, fixam corantes com carga
positiva) sendo a este nvel que o DNA cromossmico se associa s histonas (protenas

57
Guia Prtico de Biologia celular

acidfilas).
O tempo que medeia duas divises celulares sucessivas designa-se interfase. Durante este
perodo, o ncleo, ncleo interfsico, aparentemente em repouso, controla a sntese proteica, a
gliclise, a sntese de ATP, e outros processos vitais. Pouco tempo antes da diviso celular, o
ncleo assegura a duplicao da informao hereditria, promovendo a sntese de novo DNA. O
controlo da actividade celular deve-se transmisso, para o citoplasma, da informao contida no
DNA, por intermdio do RNA mensageiro.

3.7.1 Ciclo celular


O perodo de vida de uma clula comea quando esta se forma por diviso da clula me e
acaba quando a clula d origem a uma clula filha, ou quando ocorre morte celular. O ciclo
celular compreende um conjunto de fenmenos que ocorrem numa clula, desde que se forma,
por diviso da clula-me, at ao momento em que d origem a clulas filhas. O ciclo celular pode
ser dividido em duas fases: a fase M, que compreende a mitose e citocinese, e a interfase, Fig.
3.36. A durao do ciclo celular requer perodos variveis de tempo, dependendo do tipo de clula
e de factores externos, como a temperatura e a disponibilidade de nutrientes.

G2
Profase
Metafase
S Mitose
Anafase Fase M
Telofase
G1
Citocinse

Fig. 3.36. Cronologia do ciclo celular.

A maior parte do ciclo preenchida pela interfase, delimitada pelo final de uma diviso e pelo
incio da seguinte. A durao desta fase varia em funo da natureza e condies fisiolgicas da
clula: as clulas intestinais dividem-se duas vezes por dia, enquanto as clulas hepticas uma a
duas vezes por ano. A interfase pode ser dividida nos seguintes perodos: G1, S e G2 (G de "gap"
= intervalo, S de sntese), Fig. 3.36.
O perodo G1 o que sucede a uma mitose, sendo a sua durao varivel de clula para
clula. Neste perodo, enquanto se verifica um aumento significativo do volume do citoplasma, a
quantidade de DNA permanece constante. Ao mesmo tempo os vrios organitos aumentam de
nmero. No final da fase G1 a clula pode entrar em fase G0 (diferenciao celular) ou na fase S
(proliferao celular).
No perodo S, a totalidade do DNA nuclear replicada.
No perodo G2, o ncleo e a clula preparam-se para entrar em diviso: dividem-se as
mitocndrias e outros organitos e forma-se o fuso acromtico.

3.7.2. Mitose
Pela mitose formam-se dois ncleos filhos com o mesmo nmero de cromossomas do ncleo
original e morfolgica e geneticamente equivalentes entre si. Por mitose e citocinese (diviso
celular) os organismos crescem por aumento do nmero de clulas e reparam tecidos

58
Guia Prtico de Biologia Celular

danificados, substituindo clulas feridas ou mortas. No individuo adulto, estima-se que 25 milhes
de clulas por segundo esto em diviso. Estas clulas destinam-se a substituir clulas velhas e
mortas. Os eritrcitos velhos, por exemplo, so renovados a uma velocidade de 100 milhes/min.
Nas plantas, a diviso nuclear e celular ocorre em reas especficas de clulas embrionrias,
meristemas, localizados nas extremidades de caules e razes e no cmbio. Nas clulas animais
possvel observar diferentes estdios de mitose em embries.
Durante a diviso nuclear ou mitose, Fig. 3.37, 3.39, regista-se uma alterao progressiva da
estrutura e morfologia dos cromossomas. Embora a mitose seja um processo contnuo, ela
dividida, por convenincia, em quatro etapas: profase, metafase, anafase e telofase.
A durao da mitose varia com o tecido e organismo. Contudo, normalmente a profase o
processo mais longo e a anafase o mais curto. Numa raz os perodos de tempo so,
normalmente: profase 1-2h, metafase 5-15min, anafase 2-10min, e telofase 10-30min. A interfase
dura normalmente 12-30h.

a) b)

c) d)

e)

Fig. 3.37. Diversos estdios de mitose em clulas vegetais.

Profase
caracterizada pela condensao dos cromossomas, o desaparecimento dos nuclolos e do
invlucro nuclear e formao dos microtbulos do fuso acromtico. Se no perodo que antecede a
profase a clula apresenta centrolos, estes dividem-se e deslocam-se para os plos logo que o

59
Guia Prtico de Biologia celular

fuso se forma. Os cromossomas tornam-se distintos ao microscpio ptico, em consequncia do


seu progressivo encurtamento e engrossamento por espiralao. Por vezes possvel verem-se
os cromatdeos ligados pelo centrmero (sequncia especfica de DNA necessria ligao do
cromossoma ao fuso). O aparecimento dos cromatdeos deve-se replicao do DNA
cromossmico durante a fase S da interfase do ciclo celular.
Na fase final da profase, o fuso acromtico alonga-se entre dois plos diametralmente opostos
e os cromossomas alinham-se ao centro do fuso. As clulas animais possuem centrolos,
estruturas envolvidas na organizao do fuso acromtico, que esto ausentes das clulas
vegetais. Diferenciam-se os cinetocoros, sob a forma de condensaes lineares situadas de cada
lado dos centrmeros. Os cinetocoros funcionam como centros organizadores de microtbulos
(MTOCs).

Metafase
Na metafase, os centrmeros dos cromossomas esto ligados a fibras do fuso e alinhados ao
longo da placa celular. Os centrmeros so duplicados e cada cromatdeo converte-se num
cromossoma individualizado. Cada um dos cromossomas, assim formados, est ligado a uma
fibra do fuso fixa a um dos plos.

Anafase
O incio da anafase caracterizada pela ascenso dos cromossomas para os plos. nesta
fase que substncias como a colchicina, que interferem na formao e funo dos microtbulos,
inibem a mitose. Sem microtbulos para afastar os cromossomas em direces diametralmente
opostas na clula, o ncleo no se pode dividir em dois. Contudo, os centrmeros separam-se,
permitindo a separao dos cromatdeos e, consequentemente a duplicao do nmero de
cromossomas na clula.
Durante a anafase tem incio um processo denominado citocinese, que divide a clula em
duas.

Telofase
Na fase final da mitose, ou seja, na telofase, os cromossomas atingem os plos do fuso
acromtico ao mesmo tempo que se inicia o seu processo de descondensao. Durante a
telofase reaparece o nuclolo bem como o invlucro nuclear.
Embora a citocinese seja um processo distinto do da diviso nuclear ela muitas vezes com
ele sncrono, tornando-se mais evidente no final da telofase. Este processo decorre de modo
diferente em clulas animais e vegetais. Nas clulas animais observa-se a formao de uma
depresso na zona mediana da clula que vai aprofundando cada vez mais, at que as clulas
acabem por se separar. Nas clulas vegetais a formao da nova parede celular comea na zona
mediana da clula e vai crescendo para as extremidades opostas, at encontrar as paredes
laterais da clula me. A formao da nova parede celular comea com a construo do seu
precursor, a placa celular. O primeiro sinal da formao da placa celular comea no final da
anafase incio da telofase, com o aparecimento do fragmoplasto, na zona mediana da clula em
diviso. O fragmoplasto corresponde ao conjunto de microtbulos que se dispem na zona mdia
de cada lado da placa celular, aos quais esto associadas vesculas que contm material denso
aos electres. Depois da formao do fragmoplasto as vesculas golgianas movem-se para a
zona mediana da clula, e fundem-se entre si originando a placa celular. Esta vai crescendo por
adio de mais vesculas at a clula ficar separada em duas. As membranas das vesculas do
origem membrana plasmtica, enquanto os produtos de secreo, contidos nas vesculas,
contribuem para a formao da parede celular. Os plasmodesmos primrios formam-se nesta

60
Guia Prtico de Biologia Celular

altura por aprisionamento de pores de RE entre as vesculas Golgianas que se fundem.

3.7.3. Meiose
A meiose uma forma de diviso nuclear de importncia fundamental entre os organismos
com reproduo sexuada que resulta na formao de clulas reprodutoras designadas gmetas
nos animais e esporos nos vegetais. Em contraste com a mitose, da meiose resulta diversidade
gentica. Os gmetas no s so geneticamente diferentes da clula me, como so diferentes
entre si. A meiose ocorre nos eucariotas cujas clulas contm nmero diplide de cromossomas
(2n). A diploidia, entendida numa perspectiva gentica, implica que a informao contida num
cromossoma esteja tambm armazenada num segundo cromossoma nuclear, cromossoma
homlogo.
Durante a meiose, os cromossomas replicados no ncleo so segregados pelos quatro
ncleos filhos (clulas haplides), recebendo cada um deles metade do nmero de cromossomas
da clula me (clula diplide). Embora estes ncleos possuam apenas metade do nmero de
cromossomas, eles esto dotados da informao gentica completa porquanto recebem um
membro de cada um dos pares de cromossomas homlogos. A segregao dos cromossomas
homlogos faz-se ao acaso, durante a anafase, o que explica a grande variabilidade gentica que
caracteriza os organismos com reproduo sexuada. importante salientar que para essa
variabilidade contribui tambm um processo denominado crossing-over que tem lugar durante a
profase da primeira diviso nuclear.
A meiose, semelhana da mitose, pode ser dividida em fases caractersticas, Figs. 3.28-3.30:

Centrolos

Cromatina Nuclolo
Interfase I Profase I Metafase I Anafase I Telofase I

Interfase II Profase II Metafase II Anafase II Telofase II 4 gmetas

Fig. 3.38 Representao esquemtica dos diversos estdios da meiose.

Meiose I

Profase I
1. Leptteno. Os cromossomas, embora delgados e compridos (Lepto - delgado), tornam-se
visveis medida que vo espiralando. Nesta fase, os cromossomas aparecem formados por dois
cromatdeos.
2. Zigteno. Os cromossomas homlogos emparelham-se (Zigo = conjugao) formando

61
Guia Prtico de Biologia celular

dadas cromossmicas. nesta fase que os cromatdeos dos cromossomas homlogos se


sobrepem ("crossing-over" ou quiasmas) e trocam pequenas pores de DNA, o que determina
novas combinaes genticas nas geraes futuras.
3. Paquteno. Durante esta fase os cromatdeos tornam-se bem evidentes devido ao aumento
de espessura e diminuio de comprimento (Paqui = grosso) resultantes de um elevado grau de
espiralao.
4. Diplteno. Esta fase caracterizada pela separao dos cromossomas homlogos, excepto
ao nvel dos quiasmas. Cada dada cromossmica constituda por quatro cromatdeos, ttrada
cromatdica.
5. Diacinese. Com a diacinese termina a profase I. Os cromossomas afastam-se (Dia =
separar) ao mesmo tempo que se desorganiza o invlucro nuclear.

Metafase I
Nesta fase forma-se o fuso acromtico e as dadas alinham-se na placa celular. Os
centrmeros dos cromossomas homlogos ligam-se a fibras do fuso que emergem de plos
opostos.

Anafase I
Os cromossomas homlogos separam-se uns dos outros e migram para plos opostos do
fuso.

Telofase I
Com a telofase I termina a primeira diviso meitica do ncleo. Os cromossomas homlogos,
cada um formado por dois cromatdeos, encontram-se separados nos respectivos plos, sendo
por isso visveis duas reas nucleares. Em muitos organismos forma-se um novo invlucro
nuclear e observa-se alguma desespiralao dos cromossomas.

Intercinese
A intercinese um perodo muito curto que separa o final da telofase I e o incio da profase II.
Durante este perodo, o DNA dos dois ncleos formados durante a primeira diviso nuclear da
meiose no sofre qualquer replicao.

Meiose II

Profase II
Embora cada ncleo possua apenas metade do nmero de cromossomas, esta fase em tudo
idntica profase de mitose. Cada cromossoma composto pelos dois cromatdeos formados na
profase I.

Metafase II
Esta fase idntica metafase mittica. Os cromossomas, com os dois cromatdeos, migram
para o centro do fuso acromtico.

Anafase II
Na anafase II os cromatdeos de um mesmo cromossoma separam-se e d-se a sua ascenso

62
Guia Prtico de Biologia Celular

para os plos opostos do fuso.

Telofase II
Esta fase tambm idntica telofase mittica. Forma-se o invlucro nuclear em torno de
cada conjunto de cromossomas que migrou para os respectivos plos e tem incio a
desespiralao cromossmica.

Fig. 3.39 Aspecto, em microscopia ptica, de diversos estdios da meiose II.

Mitose Meiose

Fig. 3.30 Representao esquemtica comparativa da mitose e da meiose.

63
Guia Prtico de Biologia celular

4. MICROSCOPIA ELECTRNICA DE VARRIMENTO E DE TRANSMISSO


O estudo morfolgico de organismos vivos bem como das suas clulas pode ser efectuado
tanto por microscopia ptica como por microscopia electrnica de varrimento ou de transmisso.
Existem vrias diferenas entre os trs tipos de microscopia, Tabela 4.1, Fig. 4.1.

Tabela 4.1. Comparao entre microscopia ptica, microscopia electrnica de varrimento e de transmisso.

Mic. Electrnico de Mic. Electrnico de


Mic. ptico
Varrimento Transmisso
Filamento Filamento Filamento
Fonte de Radiao
deTungstnio deTungstnio deTungstnio
Tipo de radiao Fotes Electres Electres
Meio de propagao Atmosfera Vcuo <10-4 Pa Vcuo <10-6 Pa
Lentes Vidro ou Quartzo Electromagnticas Electromagnticas
Resoluo 200 nm 5 nm 0,14 nm
Profundidade de foco Reduzida Muito elevada Elevada
Alterao da corrente
Substituio das Alterao da largura
Modo de ampliao das lentes de
lentes de varrimento
ampliao
Contraste Absoro/ Reflexo Electres secundrios Disperso/Difraco
Converso de Converso de
Directa da imagem electres em fotes e electres em fotes
Observao
luminosa anlise em monitor de por um alvo
televiso fluorescente
Espessura do espcime > 0,5 m < 10 mm < 1 m
Preparao de espcime Fcil Relativamente fcil Difcil

4.1. Microscopia electrnica de transmisso


No microscpio electrnico de transmisso o feixe de electres emitido pelo filamento
atravessa o espcime. Os electres do feixe, emitidos pelo filamento, so acelerados por uma
diferena de potencial gerada entre o nodo e o ctodo e direccionados para o espcime pelas
lentes do condensador (Sistema de iluminao). Depois de atravessarem a amostra e a objectiva,
os electres so encaminhados para o sistema de lentes formadoras da imagem. Este sistema
constitudo por trs lentes: a lente intermediria, a 1 projectora e a 2 projectora (Sistema de
imagem). A imagem observada pela projeco dos electres que atravessam o espcime num
alvo impregnado com sulfureto de zinco. As molculas do alvo so excitadas pelo impacto dos
electres e, quando regressam ao estado fundamental, emitem luz visvel, Fig. 4.2.
No microscpio electrnico, a manipulao das lentes faz-se variando a corrente que por elas
passa, o que determina alterao do respectivo campo magntico. A coluna atravs da qual fluem
os electres encontra-se sob vcuo. Quando a presso no seu interior no adequada, os
electres so deflectidos pelas molculas de ar residual.
Embora seja possvel obter feixes de electres altamente energticos e, por conseguinte,
penetrantes, a microscopia electrnica de transmisso de rotina requer seces ultrafinas ( 60 -
90 nm de espessura) do material a observar. Para se obterem estas seces de material
biolgico, torna-se necessrio recorrer a mtodos que lhe confiram a rigidez necessria, como por
exemplo a congelao. No entanto, o mtodo mais comum consiste na impregnao do tecido
com resinas sintticas do tipo da Araldite. Como estas resinas no so miscveis com a gua, o
tecido deve ser previamente desidratado.
De molde a suportar todos estes tratamentos, o material biolgico tem de ser fixado com o
objectivo de estabilizar quimicamente a ultrastrutura da clula, Fig. 4.3. O melhor fixador para um
tecido particular aquele que preserva maior nmero de estruturas. Muitas variveis podem influir

64
Guia Prtico de Biologia Celular

na qualidade do resultado. Um dos grandes problemas encontrados na preparao de material


para microscopia electrnica a escolha do fixador adequado. Alm disso, o pH, a tonicidade da
soluo fixadora, a temperatura e a durao da fixao so factores a ter em conta.

PODER DE
RESOLUO ESCALA EXEMPLO
1
10

0 1,8 m Altura de um Homem


10 1000

MILMETRO (mm)
200 mm Raio do ovo de avestruz,
-1
10 100 clula gigante

-2
10 10
5 mm Raio duma clula de alga
10
-3 gigante
1 1000

MICRMETRO (m)
Olho -4
nu 10 100
METRO (m)

-5 15 m Raio do ncleo
10 10
10 m Comprimento de um cromossoma
-6
10 1000 1 1 m Dimenso de uma mitocndria
NANMETRO (nm)

430 nm Dimenso do vrus do mosaico do tabaco


-7
MO 10 100 100 nm Dimenso de um gene

-8
MEV 10 10 15 nm Raio do vrus do mosaico do tabaco
ANGSTROM ()

10 nm Raio de pequenos vrus


-9
10 1 10 6 nm Raio das mais pequenas partculas de
ouro
MET
10 -10 1 5 Raio de uma molcula de aminocido

Fig. 4.1. Comparao do poder de resoluo dos diferentes microscpios.

Cabo de Alta Tenso

Canho
Filamento Emissor

Condensador

Porta-objectos
Objectiva
Lente Intermediria

Projectoras

Janela de observao
Alvo fluorescente
Placa fotogrfica

Vcuo

Fig. 4.2. Foto e representao esquemtica do microscpio electrnico de transmisso

65
Guia Prtico de Biologia celular

4.1.1. Fixao
Os fixadores qumicos so de dois tipos: coagulantes e no coagulantes. No primeiro caso
encontram-se o lcool, a acetona e o cido actico e no segundo os aldedos (formaldedo e
glutaraldedo) e o tetrxido de smio.
Na prtica, normal recorrer-se fixao dupla aldedo /smio a fim de estabilizar o maior
nmero de componentes das estruturas celulares. Na fixao aldedica, pr-fixao, utiliza-se
frequentemente o glutaraldedo. O grau de estabilidade das molculas fixadas funo do aldedo
utilizado, dimenso do material, composio do tampo, durao do processo, temperatura,
concentrao e rapidez de penetrao. A fixao deve ocorrer em meio tamponado, pH 7.2 - 7.5, e
a temperatura prxima de 4C, para evitar as alteraes ps-mortem, resultantes da aco de
enzimas hidrolticas libertadas em consequncia da ruptura de algumas clulas. A dimenso do
material tambm um factor determinante. Este no deve possuir mais de 1 mm3 para possibilitar
uma adequada penetrao do fixador. O tempo de fixao deve ser ajustado a cada situao,
devendo resultar do compromisso entre uma boa fixao e uma pequena extraco. pr-fixao
segue-se uma ps-fixao com tetrxido de smio em soluo aquosa, a 4C.

Fixao Qumica Desidratao

Fixao Lavagens Ps-fixao Lavagens Desidratao numa


aldedica no tampo em tetrxido no tampo srie ascendente
de fixao de smio de fixao de acetonas
ou em gua

Orientao Resina Mudana de xido de propileno xido de


pura para mistura de impregnao: Propileno
Resina : xido Propileno

Incluso Impregnao

60
C
Seccionamento
em tronco de
pirmide
Polimerizao Ultramicrotomia Contrastao

Fig. 4.3. Principais passos da preparao de material biolgico para microscopia electrnica de transmisso.

4.1.2. Lavagens
As lavagens so necessrias para remoo do fixador que no reagiu. No devem ser
prolongadas porque podem conduzir extraco e diminuio de volume, e devem decorrer no
mesmo solvente dos fixadores para evitar desintegrao e extraco de material no fixado, por

66
Guia Prtico de Biologia Celular

alterao drstica do ambiente celular e da selectividade membranar.

4.1.3. Desidratao
A desidratao necessria para substituir a gua do material biolgico por outro lquido
miscvel com as resinas de impregnao. normalmente realizada em acetona (parcialmente
miscvel nas resinas de impregnao).

4.1.4. Impregnao e Incluso


A finalidade da impregnao e incluso poder manejar o tecido num meio slido que tenha
suficiente resistncia para que dele se possam obter cortes finos. Consiste em infiltrar o tecido
fixado e desidratado com uma mistura resinas que polimerizam em presena de um catalizador,
em tempo apropriado.

4.1.5. Seccionamento
Do mesmo bloco, podem obter-se seces de diferente espessura, para observao quer em
microscopia electrnica (10-100nm), quer em microscopia ptica (0,5-10).

4.1.6. Contrastao
Os materiais biolgicos so constitudos maioritariamente por molculas contendo C, H, O e N
e poucos elementos de elevado massa atmica, pelo que so transparentes aos electres. O
problema ainda maior em cortes finos porque a composio qumica dos componentes celulares
idntica da resina. O contrastante deve aumentar o poder de disperso dos electres, ser
selectivo e ter densidade superior do meio de incluso, Fig. 4.8.

4.2. Microscopia electrnica de varrimento


No microscpio electrnico de varrimento, ao contrrio do que se verifica no de transmisso, o
feixe de electres emitido pelo filamento no atravessa o espcime. Os princpios por que se rege
o funcionamento dos dois microscpios tambm diferente.
O microscpio electrnico de varrimento permite obter imagens tridimensionais de superfcies.
Neste microscpio, os electres emitidos pelo filamento, electres primrios, ao interagirem com o
espcime promovem a emisso de electres, electres secundrios, da sua superfcie. Os
electres do feixe varrem rapidamente a superfcie da amostra, obtendo-se assim grande nmero
de electres secundrios. O maior nmero destes electres emitido pelas zonas mais
proeminentes. Deste modo, o nmero de electres secundrios produzidos por cada ponto da
superfcie da amostra, bem como a direco em que so emitidos, esto intimamente
relacionados com a sua topografia.
Os electres ejectados so acelerados em direco a um cintilador localizado lateralmente em
relao ao espcime. As cintilaes luminosas, produzidas pelo impacto dos electres
secundrios no cintilador, so conduzidos a um fotomultiplicador. Os impulsos elctricos, gerados
a este nvel, so em seguida conduzidos a um tubo de raios catdicos. Obtm-se assim uma
imagem de televiso a branco e preto. O varrimento da superfcie da amostra, pelo feixe de
electres primrios, est sincronizado com a projeco do feixe no monitor da televiso, de tal
modo que a cada ponto do espcime corresponde uma regio da imagem no monitor, Fig. 4.4.

67
Guia Prtico de Biologia celular

Alta Tenso

Canho

Filamento Emissor

Condensador
Circuito de
varrimento

Objectiva
Bobina de varrimento Amplificador

Detector
Porta-objectos
Placa
fotogrfica

cran
Vcuo

Fig. 4.4. Representao esquemtica do microscpio electrnico de varrimento.

Tal como no caso da microscopia electrnica de transmisso, o material biolgico deve ser,
neste caso, previamente tratado de forma a preservar-se a sua estrutura e eliminar a gua
tecidual. Com este objectivo, o material deve ser sujeito a um dos tratamentos a seguir
esquematizados, Fig. 4.5.
A escolha do processo de secagem depende, normalmente, das condies materiais do
laboratrio. Pese embora este facto, importante ter-se uma ideia precisa sobre as diferenas
qualitativas entre os dois mtodos.

Secagem ao ar Material Criossecagem


Fixao Criossecagem
Lavagens

Ps-fixao Criossecagem
Lavagens
Secagem ao ar Desidratao
Fludo Intermedirio
Fludo de transio
Secagem pelo Mtodo do Ponto crtico

Metalizao
Observao

Fig. 4.5. Esquema do procedimento geral a que deve ser submetido o material biolgico para observao em
microscopia electrnica de varrimento.

4.2.1. Secagem ao ar
excepo de alguns tipos de material (diatomceas, esporos, entre outros) um processo
que conduz a grandes alteraes morfolgicas do material (as foras a que o material sujeito
podem atingir 46.000 Kg /cm 2).

68
Guia Prtico de Biologia Celular

4.2.2. Criossecagem
A criossecagem requer uma congelao prvia do material. Esta congelao deve processar-
se rapidamente de molde a evitar a formao de cristais de gelo de grandes dimenses no interior
das clulas. A temperatura extremamente baixa do azoto lquido (-15OC) adequada a este fim.
No entanto, a imerso do tecido neste lquido criognico leva libertao violenta de azoto
gasoso, devida grande diferena de temperatura, o que danifica o material. O propano lquido,
com ponto de ebulio de -42C e de fuso de -l87C, substitui com vantagem o azoto lquido
porquanto impede a formao de cristais de gelo de grandes dimenses e no liberta bolhas de
gs.
A secagem do material processa-se lentamente, a presso e temperatura muito baixas
(10-1 Pa a - 65C). A sublimao lenta do gelo evita que o tecido seja danificado.
Os tecidos sujeitos criossecagem sofrem, regra geral, uma reduo de volume de cerca de
15%.

4.2.3. Secagem pelo mtodo do ponto crtico


A secagem pelo mtodo do ponto crtico mais rpida do que a criossecagem. No entanto,
como este ltima no requer desidratao do material com solventes orgnicos, torna-se menos
agressiva. Embora se verifique contraco do material em qualquer dos processos, ela mais
acentuada na secagem pelo mtodo do ponto crtico.

Manmetros Sada de gs
Presso Temperatura Entrada de lquido
Sada de gua

Janela
Cmara
de Material pressurizada
vidro

Entrada de Sada Vlvula de Porta


gua quente de presso de
lquido segurana

Fig. 4.6. Aparelho de secagem pelo mtodo do ponto crtico.

Depois de desidratado numa srie ascendente de acetonas, o material transferido para o


interior de uma cmara, onde a acetona substituda por CO2 lquido, sob presso. A cmara
em seguida aquecida, o que leva a que o fluido (CO2 lquido) se expanda e evapore, Fig. 4.6.
Desta forma, a densidade da fase lquida diminui enquanto a da fase gasosa aumenta, mas sem
que a densidade total do fluido, em ambas as fases, se altere.
Quando, pelo aumento de temperatura, a densidade de fase lquida idntica da fase
gasosa, a tenso superficial zero e desaparece o menisco de separao das fases, a
temperatura crtica e o ponto crtico.
O material seco por este processo pode apresentar uma reduo de volume de
aproximadamente 40%. Para esta reduo, contribui significativamente o emprego de solventes
orgnicos durante a desidratao.

69
Guia Prtico de Biologia celular

4.2.4. Metalizao
A composio elementar do material biolgico (C, O, H, N, P, S) no favorece a emisso
electres secundrios. De igual modo, a sua condutividade no tambm a melhor pelo que, para
ser possvel fazer-se uma observao de qualidade, se torna necessrio revestir o espcime com
material condutor e denso como, por exemplo, ouro ou ouro/paldio, Figs 4.7 e 4.8.

0,5 - 2,0 KV

Placa de ouro Ctodo


Parede de vidro
da cmpanula
Material no suporte
nodo

Entrada de Argon Vcuo

- tomos de Argon carregados positivamente


- tomos de ouro

Fig. 4.7. Aparelho de metalizao.

a)

b)

Fig. 4.8. a) Observao de material em microscopia electrnica de varrimento (1) e de transmisso (2) e b)
cortes semi-finos de material preparado para microscopia electrnica de transmisso.

70
Guia Prtico de Biologia Celular

71
Guia Prtico de Biologia celular

5. PROTOCOLOS

1 Protocolo - Microscopia ptica

1. Introduo utilizao do Microscpio ptico (focagem e alinhamento do microscpio,


preparao do material biolgico). Iluminao de de Khler.
a) Destacar a epiderme da pgina abaxial da folha de Kalanchoe blossfeldiana.
b) Montar em gua, cobrir com lamela, e observar.

2. Diferentes tipos de Microscopia ptica.

3. Medies em Microscopia ptica. Utilizao de ocular e objectiva micromtrica.

72
Guia Prtico de Biologia Celular

73
Guia Prtico de Biologia celular

2 Protocolo - Microscopia ptica (Continuao), Observao de Procariotas

1. Observao de bactrias da saliva (Streptococcus, Staphylococcus e Bacillus) ou do Iogurte


(Streptococcus thermophilus e Lactobacillus bulgarus).
a) Colocar, numa lmina de vidro, uma gota de material a observar e espalh-la na superfcie de
1cm2.
b) Secar lentamente chama (cerca de 5 min). No proceder a secagem rpida para evitar fissuras no
esfregao.
c) Colocar uma gota de soluo de Soluo de Lfler* e deixar corar durante 10 min.
d) Escorrer o corante.
e) Lavar suavemente com gua.
f) Secar a lmina de vidro apenas na face sem esfregao.
g) Observar.

* Alternativamente pode ser utilizada a soluo de Newman-Lampert, sendo, nesse caso,


necessrio secar lentamente chama

2. Observao de preparaes definitivas de cocus, bacilos e espirilos coradas com safranina ou


com a colorao de Gram.

3. Utilizao de ocular e objectiva micromtrica.

74
Guia Prtico de Biologia Celular

75
Guia Prtico de Biologia celular

3 Protocolo - Observao de Procariotas (Continuao), Observao de Algas


Unicelulares, Coloniais e Filamentosas e de Protozorios de gua-Doce

1. Observao de cianobactrias: colnias de Nostoc ou Anabaena sp. em associao com o feto


aqutico, Azolla filiculoides.
a) No caso da Anabaena destaque uma pequena poro da folha de Azolla filiculoides, seccione
finamente e monte entre lmina e lamela. Observe, esquematize e legende, as colnias da
cianobactria.

2. Com uma pipeta retire uma gota da amostra de lodo e coloque-a numa lmina de vidro.
Coloque igualmente alguns filamentos das algas que lhe sero fornecidas. Monte entre lmina
e lamela e observe ao microscpio.

3. Utilizao de ocular e objectiva micromtrica.

76
Guia Prtico de Biologia Celular

Vorticella Diatomaceas

Scenedesmus Cosmarium Pediastrum

77
Guia Prtico de Biologia celular

4 Protocolo - Observao da Matriz extracelular (matriz extracelular vegetal ou parede


celular)

1. Caracterizao histoqumica dos constituintes de parede celular.


a) Efectue cortes transversais em caules jovens de Ruscus sp.
b) Efectue a colorao com Azul de Toluidina*.
I. Imerso em hipoclorito de sdio 30min
II. Lavagem em gua actica 1% 2min
III. Lavagem em H2O 1min
IV. Imerso em Azul de Toluidina 0.05% 5min
V. Lavagem em H2O, montagem e observao

Resultado da colorao:
Paredes celulares celulsicas rosa; paredes celulares lenhificadas - azul.

* Alternativamente pode ser utilizada a dupla colorao verde iodo /carmim aluminado
I. Imerso em hipoclorito de sdio 30 min
II. Lavagem em gua actica 1 % 2 min
III. Imerso em verde iodo 10 seg
IV. Lavagem em H2O 1 min
V. Imerso em carmim aluminado 10 min
VI. Lavagem em H2O, montagem e observao

Resultado da colorao:
Paredes celulares celulsicas rosa; paredes celulares lenhificadas - verde.

2. Identificao de paredes celulsicas, paredes lenhificadas e paredes suberificadas.


a) Observe a preparao definitiva que lhe foi distribuda.
b) Faa o esquema de uma seco do corte e legende-o atendendo constituio das paredes
celulares.

3. Caracterizao histoqumica da cutcula da folha de Ficus sp. e observao de cistlitos.


a) Efectue cortes transversais na folha.
b) Coloque os cortes em Vermelho Sudo III, durante 5 min.
c) Lavagem rpida em etanol a 50 % (desdiferenciao).
d) Lavagem rpida em gua e montagem.

78
Guia Prtico de Biologia Celular

79
Guia Prtico de Biologia celular

5 Protocolo - Observao da Matriz extracelular (Matriz extracelular animal)

1. Observao de matriz extracelular em tecido cartilagneo.


a) Efectue cortes numa poro de tecido cartilagneo e coloque-os em gua.
b) Coloque os cortes em Azul de Toluidina 0.05%, durante 10min.
c) Lavagem rpida em gua e montagem.

2. Observao de matriz extracelular em preparaes definitivas de diversos tipos de tecidos


animais.

80
Guia Prtico de Biologia Celular

81
Guia Prtico de Biologia celular

6 Protocolo - Observao da Parede Celular (Continuao)

1. Observao de pontuaes da parede celular.


a) Destaque uma poro de epiderme da pgina da folha ou do caule de Dianthus sp. e monte entre
lmina e lamela.
b) Observe atentamente ao nvel da parede celular e desenhe as pontuaes a existentes.

2. Observao de paredes celulares mineralizadas.


a) Destaque uma pequena poro da epiderme do caule de Urtica dioica. Monte entre lmina e lamela
numa gota de gua.
c) Faa um esquema legendado.

3. Observao de paredes celulares de reserva


a) Faa cortes transversais do fruto da palmeira (Attalea sp.)
b) Efectue a dupla colorao com cido peridico / Reagente de Schiff (P.A.S.)
I. Imerso em tetrahidreto boreto de sdio 1 % (preparar na altura) 30 min
II. cido Peridico 1% 10 min
III. Lavagem rpida em H2O
IV. Imerso em Reagente de Schiff 30 min
c) Lavagem em Metabissulfito de Sdio 0.5 % 5 min
d) Lavagem em H2O
d) Monte entre lmina e lamela numa gota de gua. Observe e faa um esquema legendado.

82
Guia Prtico de Biologia Celular

83
Guia Prtico de Biologia celular

7 Protocolo - Estudo da Plasmlise e Desplasmlise e Determinao da Permeabilidade


Membranar

1. Observao da membrana plasmtica (plasmalema ou membrana celular) por induo de


plasmlise
a) Destaque uma pequena poro da epiderme interna de uma escama do bolbo de Allium cepa e
monte-a, entre lmina e lamela, em Vermelho Neutro. Observe e faa um esquema legendado.
b) Substitua o meio de montagem por uma soluo saturada de sacarose, utilizando o mtodo de
irrigao. Observe e faa um esquema legendado.
c) Substitua a soluo saturada de sacarose do meio de montagem por H2O. Observe e faa um
esquema legendado.

2. Determinao da permeabilidade membranar


a) Faa 5 preparaes diferentes, cada uma contendo cortes transversais finos de raz de beterraba
montados entre lmina e lamela numa gota de gua e observe no menor poder de ampliao (4x).
Faa um esquema legendado.
b) Controlando atravs da ocular de 4x, substitua cada um dos meios de montagem por um dos
lcoois abaixo mencionados, de modo que todo o corte fique submerso, mas sem causar derrame
da soluo para fora da lamela.
22 M Metanol
8.5 M Etanol
3.0 M n-Propanol
1.1 M n-Butanol
c) Conte o tempo que decorre entre a substituio do meio de montagem pelo lcool e a libertao do
pigmento para o meio de montagem.
d) O processo pode ser repetido, com outros cortes, com os mesmos lcoois diludos para metade e
para um quarto.
e) Para cada lcool, calcule o coeficiente de penetrao dividindo o tempo de aparecimento do
pigmento pela concentrao molar do lcool. Faa um grfico em que relaciona o coeficiente de
penetrao com a miscibilidade relativa do lcool (coeficiente de partio).

lcool Frmula Peso Molecular Coeficiente Partio Coeficiente de penetrao


Metanol CH3OH 32.04 0.01
Etanol C2H5OH 46.07 0.03
n-Propanol C3H7OH 60.09 0.13
n-Butanol C4H9OH 74.12 0.58

84
Guia Prtico de Biologia Celular

85
Guia Prtico de Biologia celular

8 Protocolo - Estudo do Vacolo

1. Observao de cristais de oxalato de clcio.


a) Observao de Rfides: Faa um corte longitudinal na folha de Alle sp. (ou, em alternativa, na
espata de Zantedeschia sp.). Monte, entre lmina e lamela numa gota de gua, e observe.
b) Observao de Drusas: Destaque a epiderme da spala de Pelargonium sp.. Monte, entre lmina e
lamela numa gota de gua, e observe.
c) Observao de cristais Prismticos: Destaque uma pequena poro de epiderme da escama
externa do bolbo de Allium cepa. Monte, entre lmina e lamela numa gota de gua (ou glicerina), e
observe.

2. Observao de cristais de inulina.


a) Material: Fragmento de tubrculo de Dahlia sp. conservado em lcool a 70%.
b) Faa seces finas do fragmento de tubrculo de dlia.
c) Monte entre lmina e lamela numa soluo de glicerina e observe.

3. Observao de gros de aleurona.


a) Seccione uma semente de Ricinus communis. Faa cortes muito finos e proceda sua colorao
com Azul Mercrico de Bromofenol.
I. Imerso em Azul de Bromofenol 10 min
II. Lavagem rpida em cido actico 0,5 % 1 min
III. Lavagem rpida em H2O
IV. Montagem e observao.

86
Guia Prtico de Biologia Celular

87
Guia Prtico de Biologia celular

9 Protocolo - Estudo do Vacolo (Continuao), Observao de Movimentos de Ciclose,


Observao de Cloroplastos

1. Observao de vacolos corados (antocianinas).


a) Destaque uma poro da epiderme adaxial de base da ptala de Hibiscus sp.
b) Monte numa gota de gua, entre lmina e lamela, e observe os vacolos corados.
c) Depois de efectuado o esquema, substitua o meio de montagem, pelo mtodo de irrigao, por uma
soluo de nitrato de amnio ou hidrxido de sdio (soluo alcalina) e observe as alteraes que
ocorrem ao nvel do vacolo.

2. Monte, entre lmina e lamela, uma folha de Elodea e observe os movimentos de ciclose.

3. Monte, entre lmina e lamela, um filamento de Spirogyra e observe os cloroplastos com


pirenides. Substitua, por irrigao, o meio de montagem por uma soluo de Lugol e observe.

88
Guia Prtico de Biologia Celular

89
Guia Prtico de Biologia celular

10 Protocolo - Observao de Plastos

1. Observao de cloroplastos
a) Faa cortes transversais da folha que lhe fornecida, monte-a entre lmina e lamela e observe.
Seguidamente, substitua, pelo mtodo de irrigao, a soluo de montagem por uma soluo de
Lugol e observe.

2. Observao de amiloplastos
a) Faa cortes finos do tubrculo de batata, monte entre lmina e lamela e observe. Substitua, pelo
mtodo de irrigao, o meio de montagem por uma soluo de Lugol e observe.
b) Faa cortes finos da polpa de banana. Proceda como em a).

3. Observao de leucoplastos e cloroplastos


a) Destaque uma poro de epiderme de um caule jovem de Tradescantia, monte entre lmina e
lamela e observe. Seguidamente, substitua, pelo mtodo de irrigao, a soluo de montagem por
uma soluo de Lugol e observe.

4. Observao de cromoplastos
a) Destaque uma poro da epiderme do fruto de Piracantha (ou, em alternativa, da epiderme adaxial
da ptala de Alle, Tropaeolum ou de Gerbera), monte entre lmina e lamela e observe.
Seguidamente, substitua, pelo mtodo de irrigao, a soluo de montagem por uma soluo de
Lugol e observe. Faa uma nova preparao e substitua, pelo mtodo de irrigao, a soluo de
montagem por uma soluo de NaOH e observe.
b) Faa cortes transversais na raiz da cenoura, monte entre lmina e lamela e observe.
Seguidamente, substitua, pelo mtodo de irrigao, a soluo de montagem por uma soluo de
Lugol e observe.

90
Guia Prtico de Biologia Celular

91
Guia Prtico de Biologia celular

11 Protocolo - Observao de Figuras de Mitose e Meiose e Determinao da Durao das


Diferentes Fases

1. Observao de figuras de mitose em pices radiculares de Allium cepa


a) Coloque um pice radicular de Allium cepa numa lmina de vidro e, sobre ele, uma gota de HCl 1N,
e 3 gotas de orcena actica. Deixe em repouso durante 5 min.
b) Aquea suavemente at concentrar o corante em torno do pice, sem deixar secar.
c) Repita a operao, mais duas vezes, aps adicionar uma gota de orcena actica.
d) Transfira o material para uma lmina limpa, faa um esfregao e observe.

* Alternativamente:
a) Coloque um pice radicular de Allium cepa num microtubo (Eppendorf) contendo uma gota de HCl
1N, e 2 gotas de orcena actica. Agite moderadamente e deixe em repouso durante 1 h.
b) Transfira o material para uma lmina limpa, faa um esfregao e observe.

2. Observao de figuras de mitose em preparaes definitivas.

3. Determinao da durao das diferentes fases de mitose.


a) O ciclo celular de uma clula de cebola aproximadamente de 20h. possvel estimar a durao
de cada uma das fases mitticas, contando o nmero de clulas em cada um dos estdios em
vrios campos de observao e utilizando a frmula seguinte:

Durao da fase = (n de clulas em cada fase / n total de clulas contadas) x 20h

Fase N de Clulas Durao da Fase


Interfase
Profase
Metafase
Anafase
Telofase
N total de clulas

4. Observao de figuras de meiose em preparaes definitivas.

92
Guia Prtico de Biologia Celular

93
Guia Prtico de Biologia celular

12 Protocolo - Microscopia Electrnica

1. Princpios de funcionamento e observao de material em Microscopia Electrnica de


Transmisso.

2. Princpios de funcionamento e observao de material em Microscopia Electrnica de


Varrimento.

94
Guia Prtico de Biologia Celular

13 Protocolo - Observao de imagens de Microscopia ptica e Electrnica

1. Discusso de imagens de Microscopia ptica e Microscopia Electrnica de Transmisso e de


Varrimento.

2. Biologia Celular e Biotecnologia Vegetal.

95
Guia Prtico de Biologia celular

6. APNDICE
Reagente de Lfler
Azul de metileno 4,2 g/l
lcool 96% 190 g/l
pH 8.4

Juntar o azul de metileno e o lcool e agitar at sua completa dissoluo. Acertar o pH

Resultado da colorao: Colorao geral azul, no especfica.

Corante de Newman-Lampert
Azul de metileno 1g
lcool 96% 54 ml
Clorofrmio 40 ml
cido actico glacial 6 ml

Adicionar o lcool ao clorofrmio e aquecer a mistura a uma temperatura no superior a 70 C.


Para o efeito, mergulhar o balo num recipiente com gua aquecida. Sendo a mistura inflamvel,
evitar a proximidade de chama.
Juntar o azul de metileno e agitar at sua completa dissoluo.
Depois de arrefecida a mistura, temperatura ambiente, adicionar, lentamente, o cido actico
glacial. Filtrar.

Resultado da colorao: Colorao geral azul, no especfica.

Vermelho Sudo III


Soluo saturada (0.3 %) de Vermelho Sudo III em Etanol 70 %.

Resultado da colorao: Os lpidos coram de vermelho.

Reagente de Schiff (P.A.S.)


Dissolver 2 g de Pararosanilina (Fucsina diamante) em 60 ml de HCl 1 N. Juntar 300 ml de gua
destilada qual se adicionaram 2 g de metabissulfito de sdio. Misturar bem e deixar
repousar 24 h, em frasco rolhado. Adicionar 1.2 g de carvo activado e agitar durante 2 min.
Filtrar a soluo e manter o filtrado incolor, no escuro, a 4 C (por um perodo mximo de
dois meses).

Resultado da colorao: Os polissacridos coram de rosa vivo.

96
Guia Prtico de Biologia Celular

Metabissulfito de Sdio 0.5%


Metabissulfito de Na ou K
ou Bissulfito de Na 1g
HCl 1 N 10 ml
H2O 190 ml

Vermelho Neutro
Vermelho Neutro 5g
H2O 500 ml
Adicionar
Tampo Acetato ph 4.8 20 ml
Filtrar antes de usar

Resultado da colorao: Os vacolos coram de vermelho claro.

Tampo Acetato 37mM ph 4.8


Acetato de Sdio anidro 1,53 g
cido Actico glacial 0,6 ml
H2O 500 ml
Verificar o ph

Soluto de Lugol
Iodo 1g
Iodeto de Potssio 2g
H2O 100 ml

Resultado da colorao: Amido cora de castanho, roxo ou azul violceo de acordo com a
proporo relativa de amilose e amilopectina.

Azul Mercrico de Bromofenol


Soluo de Azul de Bromofenol 0,1 % em etanol 95 % adicionado de cloreto de mercrio (10 %
final)

Resultado da colorao: As protenas coram de azul claro.

97
Guia Prtico de Biologia celular

Soluo de Ringer
Cloreto de Sdio 6g
Cloreto de Potssio 0,075 g
Cloreto de Clcio 0,1 g
Bicarbonato de Clcio 0,1 g
H2O 1000 ml

Orcena Actica
Orcena 1g
cido Actico glacial 45 ml
H2O 55 ml

Aquecer a mistura a uma temperatura no superior a 70 C. Para o efeito, mergulhar o balo


num recipiente com gua aquecida. Sendo a mistura inflamvel, evitar a proximidade de
chama. Filtrar depois de arrefecida a mistura

Resultado da colorao: Cromossomas coram de vermelho.

98
Guia Prtico de Biologia Celular

7. BIBLIOGRAFIA

Alberts B., A. Johnson, J. Lewis, M. Raff, K. Roberts, P. Walter (2007) Molecular Biology of the Cell. 5th Ed.
Garland Publishing, Inc. New York London.
Azevedo C., C. E. Sunkel (2012) Biologia Celular e Molecular. 5 Edio. Lidel, Edies Tcnicas, Lisboa.
Camefort H. (1977) Morphologie des Vegtaux Superieurs, Doin Editeurs, Paris.
Cooper G.M., R.E. Hausman (2009) The Cell: A Molecular Approach. 5th Ed. ASM Press and Sinauer
Associates, Inc., Washington.
Cross P. C., K. L. Mercer (1993) Cell and Tissue Ultrastructure. W. F. Freeman, New York.
Davis P. W., E. P. Solomon, L. R. Berg (1995) The World of Biology. Saunders College Publishing, London.
Deysson G. (1978) Organisation et Classification des Plantes Vasculaires, Socit D'dition D'Enseignement
Suprieur, Paris.
Foster B. (1997) Optimizing Light Microscopy for Biological and Clinical Laboratoties, American Society for
Clinical Laboratory Science, Kendall/Hunt Publishing Company, USA.
Fuller G. M., D. Shields (1998) Molecular Basis of Medical Cell Biology. Appleton & Lange, Stamford,
Connecticut.
Gabriel B. L. (1972) Biological Electron Microscopy, Van Nostrand Reinhold Company, New York.
Gabriel B. L. (1982) Biological Scanning Electron Microscopy, Van Nostrand Reinhold Company, New York.
Gunning B. E. S., M. W. Steer (1996) Plant Cell Biology. Jones and Bartlett Publishers, USA.
Karp G (2010) Cell and Molecular Biology. 6th Ed. John Wiley & Sons, Inc, New York.
Lodish H., A. Berk, C.A. Kaiser, M. Krieger, M.P. Scott, A. Bretscher, H. Ploegh, P. Matsudaira (2007)
Molecular Cell Biology, 6th Ed. W. H. Freeman and Company, New York.
Maillet M. (1995) Biologie Cellulaire. 7e Edition. Masson, Paris.
Morgan J.G., M.E.B. Carter (1993) Investigating Biology: A Laboratory Manual for Biology. The
Benjamin/Cummings Publishing Company, Inc., Redwood City.
Norman R. I., D. Lodwick (1999) Medical Cell Biology. Churchill Livingstone, London.
Nultsch W. (1969) Botanique Gnrale, Masson et Cie Editeurs, Paris.
Rawlins D. J. (1993) Light Microscopy, Bios Scientific Publishers.
Robert D., A. M. Catesson (1990) Biologie Vgetale. Tome II. Organisation Vgtative. Doin diteurs, Paris.
Robert D., J.-C. Roland (1989) Biologie Vgetale. Tome I. Organisation Cellulaire. Doin diteurs, Paris.
Robertis E. de, E. M. de Robertis (1996) Biologia Celular e Molecular. Fundao Calouste Gulbenkian,
Lisboa.
Sadava D., D.M. Hillis, H. Craig Heller, M.R. Berenbaum (2012) Life, the science of biology. 10th ed. Sinauer
Associates, Inc.
Sheeler P., D. E. Bianchi (1987) Cell and Molecular Biology. John Wiley & Sons, Inc, New York.
Stern K. R. (1994) Introductory Plant Biology, W. C. Brown Publishers, USA.
Wolfe S. L. (1993) Molecular and Cellular Biology. Wadsworth Publishing Company. Belmont, California.

http://biodidac.bio.uottawa.ca/Thumbnails/histocatquery.htm
http://kentsimmons.uwinnipeg.ca/cm1504/15lab404/15lb4p5.htm
http://www.biosbcc.net/doohan/sample/htm/Blood%20cells.htm
http://www.dentalarticles.com/visual/gray/bone.php
http://www.histology-world.com/factsheets/epithelium.htm

Muitos dos esquemas apresentados so adaptaes dos encontrados na Bibliografia utilizada

99
Guia Prtico de Biologia celular

8. INDICE REMISSIVO
aberrao cromtica, 3, 5 drusas, 51
aberrao esfrica, 3, 5 elastina, 39
abertura numrica da objectiva, 5 electres primrios, 67
alcalides, 48 electres secundrios, 67
algas, 26 endsporos, 15
Algas castanhas, 28 espao perinuclear, 57
Algas verdes, 26 espao periplsmico, 17
Algas vermelhas, 28 Espirilos, 15
Alinhamento do Microscpio, 11 Esporoderme, 37
aloficocianina, 52 Esporozorios, 23
amilopectina, 55 estrias, 55
Amiloplastos, 55 Eucariotas, 14, 19
amilose, 55 Euglenides, 24
aminocidos, 48 exina, 38
ampliao, 4 ficobilinas, 18, 52
anafase, 59 ficobilissomas, 53
Anafase, 60 ficocianina, 18, 52
Anafase I, 62 ficoeritrina, 18, 52
Anafase II, 62 Fixao, 66
Animais, 29 Flagelados, 23
antocianinas, 48 flagelina, 15
Archaea, 19 flagelos, 15
autofluorescncia, 10 fluorocromos, 10
Bacillus, 15 Focagem, 11
Bacteria, 17 frmula de Abbe, 5
bacterioclorofila, 52 fucoxantina, 52
Calibrao da ocular, 12 Fungos, 28
carmim aluminado, 33 Fungos Mucilaginosos e Aquticos, 28
carotenos, 55 fuso acromtico, 60
Cerificao, 35 glicosaminoglicanos, 38
Cianobactrias, 17 globides, 48
cianoficina, 18 glbulos osmifilos, 53
Ciliados, 22 Gram-negativas, 16
Cloroplastos, 52 Gram-positivas, 16
Coccus, 15 gros de aleurona, 48
colagnio, 38 heterocistos, 18
Contrastao, 67 hilo, 55
contraste, 4, 6 histonas, 57
corantes vitais, 6 histoqumica, 6
coumarinas, 48 hormognios, 18
Criossecagem, 69 Impregnao e Incluso, 67
cristais prismticos, 51 ndice de refraco do meio, 5
cristalide, 48 Intercinese, 62
cromatina, 57 interfase, 58
Cromoplastos, 55 intina, 38
crossing-over, 62 inulina, 48
Cutinizao, 35 invlucro cloroplastidial, 52
Desidratao, 67 invlucro nuclear, 57
Diatomceas, 25 lamela mdia, 31
difuso, 44 Lavagens, 66
difuso facilitada, 44 Lenhificao, 33
Dinoflagelados, 24 Leptteno, 61
Diplococcus, 15 Leucoplastos, 54
Diplteno, 62 licopenos, 56
distncia de trabalho, 5 Matriz extracelular, 38
Diversidade Celular, 13 medio, 4

100
Guia Prtico de Biologia Celular

meio hipertnico, 45 pr-fixao, 66


Meiose, 61 Procariotas, 14
Meiose I, 61 profase, 59
Meiose II, 62 Profase, 59
Membrana celular, 44 Profase I, 61
membrana celular externa, 17 Profase II, 62
Membrana plasmtica, 43 protenas adesivas, 38
metabolismo primrio, 51 protenas extrnsecas, 43
metabolismo secundrio, 51 protenas intrnsecas, 43
metafase, 59 proteoglicanos, 38
Metafase, 60 Proteoplastos, 56
Metafase I, 62 Protistas, 22
Metafase II, 62 Protozorios, 22
Metalizao, 70 rfides, 51
micelas, 30 resoluo, 4
Microscopia confocal, 10 retculo perifrico, 52
microscopia electrnica, 64 Rizpodes, 22
Microscopia electrnica de transmisso, 64 Sais Minerais, 48
Microscopia electrnica de varrimento, 67 Secagem ao ar, 68
Microscpio de contraste de fase, 7 Secagem pelo mtodo do ponto crtico, 69
Microscpio de fluorescncia, 9 Seccionamento, 67
Microscpio de fundo escuro, 7 sinccios, 43, 57
Microscpio de interferncia ou de Nomarski, 8 Staphylococcus, 15
Microscpio ptico, 3 Streptococcus, 15
Mineralizao, 36 Suberificao, 37
Mitose, 58 Substncias orgnicas, 48
molculas de adeso celular, 38 taninos, 48
Movimentos de ciclose, 46 Tecido conjuntivo, 41
Negro Sudo, 36 Tecido epitelial, 40
Ncleo, 56 Tecido muscular, 43
ncleo interfsico, 58 Tecido nervoso, 42
nuclolos, 57 tecidos animais, 40
Oleoplastos, 56 telofase, 59
Oxalato de clcio, 50 Telofase, 60
Paquteno, 62 Telofase I, 62
parede celular primria, 30 Telofase II, 63
parede celular secundria, 30 ttrada cromatdica, 62
Parede celular vegetal, 30 tilacides, 52
Paredes de Reserva, 33 tilacides do estroma, 53
peptidoglicanos, 17 tilacides dos grana, 53
Pirenides, 28 tonoplasto, 46
Plantas, 29 transporte activo, 44
plasmalema, 44 transporte passivo, 44
plasmdios, 57 Vacolos, 46
plasmlise, 45 vacuoma, 46
plastoglbulos, 53 verde iodo, 33
Plastos, 52 vermelho neutro, 45
poder de resoluo, 5 Vermelho Sudo III, 36
pontuaes, 33 xantofilas, 55
poros nucleares, 57 Zigteno, 61

101