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PROGRAMA DE PS-GRADUAO EM GENTICA E MELHORAMENTO DE PLANTAS

LGN 5799 Seminrios em Gentica e Melhoramento de Plantas

Departamento de Gentica
Avenida Pdua Dias, 11 - Caixa Postal 83, CEP: 13400-970 - Piracicaba - SP
http://www.genetica.esalq.usp.br/semina.php

EXPRESSO GNICA E DIAGNSTICOS. APLICAES DO PCR EM


TEMPO REAL
O PCR consiste em amplificar cpias de DNA in vitro, usando os
elementos bsicos do processo de replicao natural do DNA. o mtodo para
rpida amplificao de seqncias especficas de DNA. A localizao da
seqncia alvo feita pelos iniciadores, que so oligonucleotdeos com 20-24
bases usualmente seletivos o suficiente para localizar um stio nico em um
genoma de alta complexidade. Cada uma das novas fitas de DNA extendidas a
partir dos iniciadores serve como molde para a sntese de uma nova fita, isso
garante o aumento exponencial do nmero de novas fitas.
O PCR convencional no apresenta valores quantitativos, por isso foi
desenvolvido o PCR em tempo real, que uma tcnica descrita como
quantitativa porque consegue realizar a avaliao do nmero de molculas
produzidas a cada ciclo. As caractersticas relevantes do PCR em tempo real
so rapidez, especificidade, sensibilidade e quantificao. A amplificao
dividida em 3 fases: a linha basal na qual no h produtos de PCR suficientes
para detectar fluorescncia, a fase log em que a quantidade de produtos de
PCR dobra a cada ciclo e a fase plat onde no h mais aumento no nmero
de produtos.
No PCR em tempo real existem dois mtodos de quantificao: a
deteco no-especfica e a especfica. O Syber Green o exemplo mais
utilizado de deteco no-especfica, no qual fluorforos fluorescentes se ligam
fita-dupla de DNA, emitindo fluorescncia. O TaqMan e o Molecular Beacon
so sondas altamente especficas a seqncia alvo, liberando fluorescncia
apenas na presena do produto de PCR de interesse. Eles so capazes de
realizar reaes mltiplas, detectando diferentes patgenos de plantas em uma
mesma reao, por exemplo.
O PCR em tempo real pode ser utilizado para diversas aplicaes, tais
como: quantificao do nmero de cpias de transgnicos, resistncia
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fungicida, contaminao de alimentos, identificao de organismos


geneticamente modificados, deteco e quantificao de patgenos, entre
outros.
Diagnsticos baseados no DNA esto em enorme crescimento no
estudo de plantas, e as caractersticas de especificidade e sensibilidade do
PCR em tempo real abriro novas oportunidades para pesquisa sobre
interaes patgeno-hospedeiro, OGM, diagnsticos pr-sintomticos, etc.
Limitaes do PCR em tempo real devido ao seu alto custo podem ser
compensadas pela utilizao rotineira e para diferentes prticas.

Referncias
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relevance to plant studies? J Exp Bot 55: 1445-1454.
Korimbocus J, Coates D, Barker I, Boonham N, 2002. Improved
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