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diciembre, 2011 Cuevas-Velzquez, C.L. y Covarrubias-Robles, A.A.

: Las protenas desordenadas y su funcin 97

ARTCULO DE REVISIN
D.R. TIP Revista Especializada en Ciencias Qumico-Biolgicas, 14(2):97-105, 2011

LAS PROTENAS DESORDENADAS Y SU FUNCIN:


UNA NUEVA FORMA DE VER LA ESTRUCTURA DE LAS
NUEVA
PROTENAS Y LA RESPUESTA DE LAS PLANT
RESPUESTA AS AL ESTRS
PLANTAS

Csar Luis Cuevas-Velzquez y Alejandra A. Covarrubias-Robles*


Departamento de Biologa Molecular de Plantas, Instituto de Biotecnologa,
Universidad Nacional Autnoma de Mxico, Apdo.Postal 510-3, C.P. 62250
Cuernavaca, Mor., Mxico. E-mail: *crobles@ibt.unam.mx

RESUMEN
El dogma que relaciona la funcin de una protena con una estructura tridimensional definida ha sido desafiado
durante los ltimos aos por el descubrimiento y caracterizacin de las protenas conocidas como protenas no
estructuradas o desordenadas. Estas protenas poseen una elevada flexibilidad estructural la cual les permite
adoptar estructuras diferentes y, por tanto, reconocer ligandos diversos conservando la especificidad en el
reconocimiento de los mismos. A las protenas de este tipo, altamente hidroflicas y que se acumulan ante
condiciones de dficit hdrico (sequa, salinidad, congelamiento) se les ha denominado hidrofilinas. En plantas,
las hidrofilinas mejor caracterizadas son las protenas LEA (del ingls Late Embryogenesis Abundant) que se
acumulan abundantemente en la semilla seca y en tejidos vegetativos cuando las plantas se exponen a
condiciones de limitacin de agua. Evidencia reciente ha demostrado que las protenas LEA se requieren para
que las plantas toleren y se adapten a condiciones de baja disponibilidad de agua. Esta revisin describe los
datos ms relevantes que asocian las caractersticas fisicoqumicas de estas protenas con su flexibilidad
estructural y cmo se afecta sta por las condiciones ambientales; as como, aqullos relacionados con sus
posibles funciones en la clula vegetal ante situaciones de limitacin de agua.
Palabras Clave: Dficit hidrco, estrs ambiental, hidrofilinas, protenas intrnsecamente no estructuradas (PINES),
protenas LEA.

A BSTRACT
The dogma that relates the function of a protein with a defined three-dimensional structure has been challenged
in recent years by the discovery and characterization of a set of proteins known as unstructured or disordered
proteins. These proteins have a high structural flexibility which allows them to adopt different structures and
therefore recognize different ligands while retaining their specificity. Proteins of this type, which are highly
hydrophilic and accumulate under water deficit (drought, salinity, freezing) have been recently characterized
and named hydrophilins. In plants, the best characterized hydrophilins are the LEA proteins (for Late
Embryogenesis Abundant), which accumulate abundantly in the dry seed and in vegetative tissues when plants
are exposed to water-limited environments. Recent evidence has shown that LEA proteins are required for plants
to tolerate and adapt to conditions of low-water availability. This review describes the most relevant data
regarding their structural flexibility and how this is affected by environmental conditions. Also, it addresses
information related to their possible functions in plant cells that are exposed to water deficit.
Key Words: Water deficit, environmental stress, hydrophilins, intrinsically unstructured proteins (IUP), LEA proteins.

Nota: Artculo recibido el 31 de octubre de 2011 y aceptado el 28 de


noviembre de 2011.
98 TIP Rev.Esp.Cienc.Qum.Biol. Vol. 14, No. 2

I NTRODUCCIN
as protenas son las biomolculas ms verstiles y funcionales. A medida que ha aumentado el nmero de estructuras

L diversas de la clula. Estn presentes en todos los


procesos biolgicos, indicativo de la capacidad que
tienen para desarrollar un amplio nmero de funciones.
Qu hay detrs de la versatilidad funcional de estas molculas?,
cristalogrficas descritas, tambin ha aumentado la cantidad de
protenas con regiones con plegamientos azarosos, que varan
en longitud y en nmero en una misma protena. Por otro lado,
el descubrimiento de nuevas protenas y la caracterizacin de
la respuesta es: su estructura tridimensional. La estructura de algunas de las ya descritas ha revelado la existencia de mltiples
una protena es la forma espacial ms estable que adopta en cierto protenas que, en la mayor parte de su extensin, presentan una
ambiente, la cual depende directamente de su secuencia de estructura flexible o un plegamiento azaroso. Esto ha sido un reto
aminocidos. A partir del descubrimiento de las primeras para el concepto clsico de estructura-funcin, ya que de
estructuras cristalogrficas comenz a establecerse la idea de acuerdo a este concepto, estas protenas no tendran funcin
que la funcin de cada protena depende en gran medida de su alguna; sin embargo, ya se haba demostrado que protenas en
estructura tridimensional, a tal grado que se postul que para las que abunda este tipo de plegamiento estn involucradas en
que una protena sea funcional, debe poseer una estructura diferentes vas de sealizacin, algunas otras funcionan como
tridimensional bien definida1, idea que por muchos aos ha factores transcripcionales, o bien son protenas abundantes en
prevalecido en muchas reas de la ciencia. El paradigma de algunos tejidos de diferentes organismos. Este cmulo de
estructura-funcin fue totalmente aceptado por la comunidad evidencias, junto con el hecho de que son protenas comunes en
cientfica durante muchos aos. Los conceptos de estructuras todas las especies, ha llevado a abrir una nueva seccin en el
secundarias como hlices alfa y lminas beta fueron ampliamente captulo de estructura-funcin de las protenas, en el que se
utilizados y se aceptaron como las unidades estructurales incluyen a este nuevo grupo de protenas a las que se les ha
fundamentales de las protenas. Sin embargo, a lo largo del denominado como protenas intrnsecamente desordenadas
tiempo se han encontrado protenas a las cuales no se les ha (PIDs o IDPs, del ingls Intrinsically Disordered Proteins) o
podido asignar, con las metodologas especializadas, alguna protenas no estructuradas (PINEs o IUPs, del ingls
estructura secundaria conocida, lo que gener la nocin de que Intrinsically Unstructured Proteins)2.
existen protenas que carecen de una estructura estable; es decir,
que poseen una estructura o plegamiento azaroso (en ingls S IN ESTRUCTURA NO HAY FUNCIN?
random coil)2. Inicialmente, este tipo de plegamiento flexible, Las PIDs o PINEs son protenas en las que abundan las regiones
azaroso o sin estructura se encontraba solamente en ciertas intrnsecamente desordenadas (RID o IDR, del ingls Intrinsically
regiones de las protenas que slo se consideraban como Disordered Regions) y que, por tanto, carecen total o parcialmente
conectores entre regiones con estructuras definidas o dominios de una estructura tridimensional bien definida (Fig. 1). Como se

Figura 1. Estructuras de dos protenas distintas: (A) la ribulosa 1,5-bifosfato-carboxilasa-oxigenasa (rubisco) de espinaca
(PDB:1RCX) es una protena globular; (B) el factor de inicio de la traduccin (eIF1A) de humano (PDB:1D7Q), en el que
la mayor parte de su estructura es desordenada. Las lneas en (B) representan las posibles conformaciones que adquiere
dicha zona de la protena.
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menciona arriba, la literatura especializada contiene cada vez ms favorecido el desorden estructural en las protenas a lo largo de
evidencia que demuestra que, contrario a lo establecido en el la evolucin? representa alguna ventaja evolutiva para una
paradigma de estructura-funcin, las PINEs son capaces de protena el poseer diferentes niveles de desorden? qu tipo de
llevar a cabo una o ms funciones. De hecho, son protenas que funciones se encuentran asociadas a estas caractersticas
desempean funciones muy importantes en la clula, por ejemplo, fisicoqumicas?
entre las PINEs y/o protenas con RIDs podemos encontrar
receptores membranales, protenas de andamiaje, protenas del En general, las PIDs o PINEs son protenas que presentan una
citoesqueleto, factores transcripcionales y receptores nucleares composicin de aminocidos particular, son protenas de baja
de hormonas, entre otras3. Su importancia resalta an ms ya que complejidad que tienen una baja abundancia o carecen de
mutaciones en algunas de estas protenas, las cuales comprometen aminocidos hirofbicos y/o voluminosos (Val, Ile, Met Phe,
su funcin cambiando su ambiente estructural, estn asociadas Trp, Tyr) que son la base de las protenas globulares, pues
a enfermedades tan serias como el cncer y desrdenes promueven un plegamiento espontneo y, por otro lado, poseen
neurodegenerativos4. El advenimiento de los mtodos masivos una alta proporcin de aminocidos cargados o polares (Gln, Ser,
para obtener informacin genmica y la aplicacin de la informtica Pro, Glu, Lys, Arg) y en algunos casos tienen una alta abundancia
predictiva ha permitido en los ltimos aos obtener informacin de ciertos aminocidos pequeos (Gly, Ala)6. Muchas de las
que indica que las PINEs comprenden una alta proporcin de las regiones ricas en estos aminocidos han sido reconocidas desde
protenas codificadas en un genoma eucarionte, alrededor del hace varios aos como fundamentales para ciertas funciones en
30% se predicen como protenas parcial o totalmente protenas regulatorias, como lo son los factores transcripcionales,
desordenadas5. Esto ha llevado a mltiples preguntas de en los cuales estas regiones son la base para la interaccin con
relevancia biolgica referentes a la relacin estructura-funcin los cidos nucleicos y, por tanto, para su funcin como
en una protena y al significado del desorden o flexibilidad activadores o represores de la expresin gentica7. Estudios
estructural en estas molculas. Preguntas como por qu se ha recientes muestran que frecuentemente las PINEs contienen

Figura 2. Representacin esquemtica del rango de plegamientos azarosos ( random coil ) existente en las protenas LEA.
Los porcentajes de plegamientos azarosos y el nmero de residuos en las protenas se muestra en los ejes de las ordenadas
y de las abscisas, respectivamente. Las protenas LEA estn representadas por crculos y tringulos llenos, en tanto que
los puntos ms pequeos representan protenas diferentes a las protenas LEA descritas para las clulas vegetales. La
mayora de las protenas en las clulas vegetales presenta porcentajes de plegamiento azaroso iguales o menores a 0 y
no se muestran en esta figura (Modificada de Battaglia et al. 8 ).
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regiones repetidas, las cuales se ha propuesto que pudieron ciertas molculas y otras no, lo que favorecera la interaccin con
haber evolucionado por expansin9. Es su composicin de ciertas molculas en un estadio determinado y con otras en uno
aminocidos y caractersticas como stas ltimas las diferente, y, por tanto, en cada caso realizara una funcin
responsables de que la protena sea incapaz de obtener una distinta. Sin duda un escenario como ste sera ventajoso para
estructura estable en solucin acuosa. Tenemos que considerar muchos organismos pues no sera necesario incrementar su
que todo tipo de estructura en las macromolculas se ha capacidad de almacenaje gentico (genomas ms grandes) y
caracterizado primordialmente en solucin acuosa, de tal forma resultara en la adquisicin de respuestas adaptativas ms
que la descripcin del orden o flexibilidad estructural de una rpidas y, quizs, ms exitosas. Hiptesis como stas se ven
protena corresponde generalmente a la estructura ms estable favorecidas por observaciones como las que resultan del anlisis
que llega a adquirir en solucin acuosa. Como se mencion de la secuencia de genomas de organismos complejos. Por
antes, hay que recordar que entre las PINEs las hay con diferentes ejemplo, la secuencia del genoma humano ha mostrado que
grados de desorden, de tal forma que entre ellas existen protenas nuestro material gentico codifica para aproximadamente 25,000
que tienen mltiples dominios los cuales estn conectados por protenas, el mismo nmero aproximado de protenas codificadas
regiones desordenadas o flexibles y que en cierto punto les por el genoma de la pequea hierba Arabidopsis thaliana; esto
permiten obtener una estructura compacta y ms ordenada; ha llevado a una paradoja an no resuelta relacionada con la falta
otras que poseen amplias regiones intrnsicamente desordenadas de correlacin entre la complejidad de un organismo y el nmero
(glbulos fundidos o en ingls molten globules) y otras de genes que codifican para protenas. Una explicacin parcial
ordenadas, y las que son mayoritariamente desplegadas, a esta paradoja pudiera ser que la complejidad funcional de un
heterogneas o desordenadas (Fig. 2). Es probable que esta organismo no necesariamente se resuelve con tener ms genes
flexibilidad estructural que se reconoce en solucin acuosa rara que codifiquen protenas diferentes, sino algunos genes que
vez se d bajo condiciones fisiolgicas en la clula, ya que las codifiquen protenas multifuncionales (tambin llamadas
condiciones del microambiente podran promover la interaccin moonlighting en ingls) como lo seran las PINEs.
entre ciertos aminocidos que en solucin acuosa no ocurre, de
tal forma que las protenas podran tender a adquirir cierto grado Algunas de las ideas que se describen arriba han sido
de estructura secundaria en determinadas regiones. comprobadas experimentalmente de tal manera que ahora
sabemos que las PINEs tienen la capacidad de fluctuar entre
Con esta informacin ahora regresemos a la pregunta de por qu diferentes estados conformacionales en una escala de tiempo
se ha favorecido el desorden estructural en las protenas a lo muy corta (del orden de nano a micro-segundos)10. Esta alta
largo de la evolucin? Reflexiones sobre esta pregunta ha flexibilidad por unidad de tiempo les da la habilidad de
llevado a proponer varias hiptesis; quizs una de las ms interaccionar con un abanico de molculas distintas con las que
favorecidas sea la que considera que las PINEs son protenas se unen con baja afinidad pero conservando una alta
ms flexibles o maleables, de tal forma que pueden adoptar especificidad10, lo cual representa una gran ventaja desde el
diferentes estructuras funcionales que les permitiran reconocer punto de vista biolgico y evolutivo. Ante esta posibilidad, las
ligandos diversos. Es posible incluso pensar que este tipo de PINEs seran capaces incluso de interaccionar especficamente
protenas puede presentar un mayor nmero de interfases con la misma molcula pero de formas distintas (Fig. 3). As pues,
intermoleculares en un momento determinado que, en el caso de algunas PINEs tienen la capacidad de funcionar como
las protenas ordenadas o globulares, implicara que stas fuesen interruptores (switches); es decir, la interaccin de una PINE, en
mucho ms grandes. Esto probablemente represent una un estado conformacional dado, con una molcula blanco
restriccin evolutiva pues el aumentar la capacidad funcional de determinada promueve que una va de sealizacin se encuentre
las protenas ordenadas o globulares por un aumento en su activa; sin embargo, si el estado conformacional de la PINE
tamao llevara a un mayor amontonamiento molecular en la cambia (modificando la dinmica de la interaccin con su blanco),
clula, probablemente desventajoso para algunas funciones la va se inactiva (Fig. 3). ste es el caso de las p21 y p27, las cuales
pues disminuira el agua disponible, entre otros efectos. Por otro pueden tener tanto un efecto inhibidor, de hecho conocidas
lado, cabe considerar que la mayor flexibilidad estructural de las como protenas inhibidoras de las quinasa dependientes de
PINEs no slo abre la posibilidad de presentar ms de una ciclinas (CDKs), como activador sobre las mismas CDKs, lo cual
interfase intermolecular, sino tambin de exhibir ms de una se report posteriormente11. Otros ejemplos similares se han
estructura funcional dependiendo de las condiciones descrito en la literatura con protenas como la DHPR (receptor de
microambientales y de la presencia de posibles ligandos a travs la dihidropiridina, detector de voltaje)12, la CFTR (regulador de
de los cuales se reflejara su funcin. Por ejemplo, de acuerdo a la conductancia transmembranal en la fibrosis cstica)13; o bien,
la situacin metablica de la clula es posible que se modifique el caso de la calpastatina, un inhibidor de la proteasa activada por
el pH intracelular, el contenido de ciertos iones, el estado calcio, calpaina. La calpastatina favorece la activacin de la
oxidante, el agua disponible, etc.; lo cual podra favorecer una u calpaina facilitando su unin a calcio; sin embargo, tambin la
otra estructura y, por tanto, una u otra funcin. Dependiendo del inhibe a travs de unirse por un dominio especfico14 (para mayor
estado de desarrollo de un organismo podran estar presentes informacin ver Dyson y Wright5).
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Figura 3. Las PINEs son capaces de realizar ms de una


funcin, gracias a su flexibilidad. Una PINE puede unir un
ligando con una conformacin dada y realizar una funcin
especfica (A); sin embargo, la misma PINE puede
interaccionar con el mismo ligando (o con otro distinto) a
travs de una conformacin diferente y, por tanto, realizar
una funcin completamente distinta (B). Las PINEs, por lo Figura 4. El plegamiento de las PINEs puede ser inducido
tanto, son capaces de realizar ms de una funcin, por lo por diferentes molculas o condiciones ambientales en la
que se constituyen como un grupo de protenas multi- clula. La interaccin con los aminocidos de un ligando
funcionales (que en ingls se refieren como moonlighting ) . (A) puede inducir en la PINE una conformacin ms
estable. (B) Las modificaciones postraduccionales son otro
La multifuncionalidad que se ha observado en algunas de las factor que influye en el plegamiento de una PINE, el cual
PINEs es el resultado de modificaciones postraduccionales que puede acompaarse adems de la interaccin con su(s)
ligando(s). (C) La disponibilidad de agua tambin puede ser
favorecen ciertos cambios conformacionales, lo que les permite capaz de modificar la estructura de las PINEs; al cambiar
presentar una interfase diferente y con ello modular el la cantidad de agua disponible en el ambiente, la interaccin
reconocimiento a sus molculas blanco (Fig. 4). ste es el caso de las PINEs con el agua se modificara, lo que tiene como
de modificaciones por fosforilacin en diferentes PINEs, como consecuencia un cambio en su conformacin. Los rombos
sucede con CFTR (regulador de la conductancia transmembranal representan alguna modificacin postraduccional
(fosforilacin, glicosilacin, etc); los crculos representan
en la fibrosis cstica), el cual ante una seal es fosforilado, lo que molculas de agua.
induce un cambio en su conformacin y en el modo de unin de
esta protena a sus blancos15. Otro ejemplo bien caracterizado
ocurre en CBP (CREB Binding Protein), cuyo dominio KIX La plasticidad intrnseca de las PINEs no significa necesariamente
interacciona con el dominio KID de CREB. Esta interaccin que sean incapaces de adquirir una estructura ms estable. Como
requiere de la fosforilacin del dominio KID, la cual habilita la se mencionaba antes, es posible que los cambios en su
alta afinidad por el dominio KIX. En este caso, tanto la forma microambiente favorezcan una mayor estabilidad o un mayor
fosforilada como la no fosforilada del dominio KID se encuentran orden estructural. Adems, es posible que la interaccin o unin
no estructuradas en solucin; sin embargo, la KID fosforilada con un ligando no slo facilite un cambio conformacional sino
se pliega al unirse al dominio KIX, de esta manera la flexibilidad que tambin lo estabilice (Fig. 4). Esta posibilidad ha sido
intrnseca del dominio KID de CBP, ante la modificacin por demostrada para algunas PINEs y, en algunos casos, se ha
fosforilacin, facilita la interaccin con el dominio KIX de estudiado con detalle. Algunos reportes recientes indican que
CREB6. los cambios estructurales que llevan a una conformacin
ordenada en una PINE se dan de manera acoplada,
La flexibilidad estructural de las PINEs les permite unirse de forma concomitantemente, con la unin a su ligando6. El costo de la
especfica a ligandos diversos, a la fecha se han descrito como entropa necesaria para plegar a una protena desplegada lo paga
molculas interactoras de las PINEs a otras protenas, ARN, la entalpa generada por la unin a su ligando. Evidencias como
ADN, membranas e incluso molculas pequeas como iones o sta han llevado a considerar que las PINEs adquieren la
azcares16. As pues, la funcin de las PINEs es tambin diversa, estructura necesaria para llevar a cabo su funcin al unirse a sus
sus funciones incluyen regulacin transcripcional y traduccional, molculas blanco. Sin embargo, an queda abierta la pregunta de
transduccin de seales celulares, fosforilacin de protenas, cmo es que las PINEs son capaces de reconocer a sus ligandos,
almacenamiento de molculas pequeas, chaperonas de protenas acaso se da en ausencia de un orden estructural determinado?
y de ARN, regulacin del ensamblaje de grandes complejos o es necesario cierto orden para presentar las interfases
multiprotecos y del ribosoma, entre otras16. adecuadas en el momento apropiado? es el ambiente el
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responsable de proporcionar las condiciones fisicoqumicas abundante, conocido como protenas LEA (por sus siglas en
necesarias para facilitar o inducir tales cambios conformacionales ingls Late Embryogenesis Abundant). Estas protenas se
o todo se reduce al azar? stas son preguntas que an quedan encontraron por primera vez, hace ya casi 30 aos, por ser
por dilucidar. protenas abundantes en la etapa tarda de la embriognesis de
la semilla, etapa en la cual ocurre una desecacin natural muy
LAS PINES Y LA RESPUESTA AL ESTRS alta18. Posteriormente se encontr que, adems de acumularse en
Hasta el momento ha sido demostrado que las PINEs son la semilla, se acumulan abundantemente en tejidos vegetativos
protenas importantes en la clula y que son determinantes para sometidos a dficit hdrico (sequa, salinidad y congelamiento)19.
el adecuado cumplimiento de las funciones celulares basales. La correlacin encontrada entre la acumulacin de las protenas
Ms recientemente, se ha encontrado que las PINEs tambin LEA y condiciones adversas de limitacin de agua sugiri que
participan en la respuesta de los organismos a distintos estmulos estas protenas juegan un papel fundamental en la respuesta y
o condiciones desfavorables para la clula. Un ejemplo clsico en la tolerancia de las plantas a estas condiciones. Esta hiptesis
de las protenas no estructuradas o flexibles que participan en la se ha visto reforzada por el hecho de que la gran mayora de las
respuesta a condiciones adversas son las hidrofilinas. Las protenas LEA se acumulan en respuesta a tratamientos con
hidrofilinas se definen como aquellas protenas que tienen un cido abscsico (ABA)20, conocido como la hormona del estrs,
ndice de hidrofilicidad mayor a 1 y un contenido de glicina y de por ser una de las hormonas responsables de desencadenar una
otros aminocidos pequeos de ms del 6%17. Adems de estar de las cascadas de sealizacin que dan lugar a la expresin de
presentes en todos los dominios taxonmicos, se ha encontrado protenas de respuesta que conllevan a la adaptacin y/o
que su acumulacin est asociada notablemente con la tolerancia al estrs.
exposicin de las clulas o de los organismos a condiciones de
limitacin de agua. Llama la atencin que en los diferentes phyla Desde el descubrimiento de las protenas LEA, numerosos
en donde se han encontrado, estn acumuladas en respuesta a esfuerzos se han enfocado en determinar si son realmente una
una baja disponibilidad de agua en el ambiente, dgase arqueas, estrategia adaptativa utilizada por las plantas. En especial,
bacterias, hongos, plantas, insectos, artrpodos y otros estudios de gentica funcional utilizando la planta modelo
animales17. Tambin se acumulan en aquellas clulas que transitan Arabidopsis thaliana han demostrado que al anular la expresin
por etapas de desarrollo que involucran un dficit hdrico y en de 1, 2 3 diferentes protenas LEA de un mismo grupo, causa
estructuras u rganos que pasan por estados de deshidratacin una deficiencia en la resistencia a sequa o a estrs osmtico, en
severa17. comparacin con las plantas silvestres21. Esto se ha visto
tambin para protenas LEA de otros grupos y, se ha encontrado
El hecho de que las hidrofilinas compartan la gran mayora de sus que al complementar las mutantes con las protenas
caractersticas fisicoqumicas con las descritas para las PINEs y, correspondientes, el fenotipo se restablece. Experimentos como
de que se haya predicho por anlisis in silico un alto porcentaje stos han demostrado que las protenas LEA son fundamentales
de desorden en todas ellas, permite incluirlas, al menos para que las plantas puedan contender con situaciones de dficit
hipotticamente, en el grupo de las PINEs o PIDs; sin embargo, hdrico.
a la fecha slo de muy pocas hidrofilinas conocemos datos
experimentales sobre sus caractersticas estructurales. Las protenas LEA se han clasificado en al menos siete grupos,
con base en la similitud en su secuencia de aminocidos, de tal
La hiptesis de que la presencia de las hidrofilinas confiera una forma que cada grupo se distingue por ciertos motivos consenso
ventaja a los diferentes organismos para contender con la distintivos8. En estudios previos utilizando dicrosmo circular se
limitacin de agua parece evidente; sin embargo, an quedan por ha demostrado que algunas protenas LEA presentan estructuras
responder preguntas como: cul es el mecanismo de accin de con un alto nivel de desorden22. Sin embargo, algunos de estos
las hidrofilinas a nivel molecular? cul es la importancia de estudios tambin demuestran que al someterlas a un tratamiento
poseer una estructura flexible en este tipo de protenas? y por con compuestos que compiten por el agua cercana a las protenas,
qu las caractersticas de alta hidrofilicidad y desorden estructural como lo es el trifluoroetanol (TFE), estas protenas tienden a
se han mantenido en estas protenas a lo largo de la evolucin adquirir cierto nivel de estructura, en su mayora estructuras tipo
en los diferentes organismos y se han relacionado ntimamente alfa hlices u hojas beta. Estos datos indican que las condiciones
con situaciones de dficit hdrico? stas son interrogantes que de disponibilidad de agua son capaces de inducir cambios
han sido abordadas recientemente y que an no se entienden del conformacionales en estas protenas que las lleven a adquirir un
todo. mayor orden estructural. Consistente con estos datos, se
encontr que el amontonamiento molecular inducido por la
LA RESPUESTA DE LAS PLANTAS A UN DFICIT HDRICO combinacin de PEG (poli-etilen-glicol) y glicerol tambin es
REQUIERE DE CIERTO NIVEL DE DESORDEN capaz de promover cambios conformacionales en estas protenas.
Un caso muy interesante que surge del estudio de las hidrofilinas Estos resultados sugieren que las condiciones ambientales son
en las plantas es el de un grupo de protenas muy amplio y capaces de modificar la organizacin estructural de las PINEs y,
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en particular, de las protenas LEA, lo cual adiciona un elemento pierde paulatinamente su actividad; sin embargo, si antes de
ms a las hiptesis propuestas dirigidas a entender el iniciar la deshidratacin se le agrega una protena LEA, en una
funcionamiento de este tipo de protenas. As, nosotros relacin molar 1:1, la actividad de la enzima reportera se mantiene
proponemos que las protenas LEA presentan diferentes en un mayor nivel que cuando no es protegida por la adicin de
organizaciones estructurales dependiendo de la cantidad de la protena LEA23. El hecho de que estas protenas sean capaces
agua disponible y/o del amontonamiento molecular en la clula, de proteger a la enzima reportera en una relacin molar 1:1 es
lo que a su vez podra modular el reconocimiento de diferentes indicativo de que uno de los posibles mecanismos de proteccin
ligandos, en concordancia con las hiptesis previamente sea a travs de una interaccin directa protena LEA-protena
propuestas para las PINEs. Estas protenas son altamente flexibles blanco. Adicionalmente, datos provenientes de este tipo de
en solucin acuosa, condicin poco frecuente en la clula; ante ensayos nos han indicado que la capacidad protectora de las
una disminucin en la disponibilidad de agua y, ante el protenas LEA de los diferentes grupos es distinta, algunas
consecuente incremento en la concentracin intracelular de las presentan una proteccin de casi 100% an bajo condiciones de
macromolculas (amontonamiento molecular), las protenas LEA prdida de agua mayores al 98%, an mejor que la misma
tendern a adquirir una conformacin ms definida que les trehalosa, un disacrido con propiedades protectoras
permitira reconocer algn o algunos ligandos y de esta forma demostradas bajo diferentes condiciones23 (Fig. 5). Sin embargo,
estabilizarse (Fig. 5). otras protenas LEA no muestran proteccin en estos ensayos.
Es probable que las limitaciones de estos ensayos in vitro; entre
Esta hiptesis se ha combinado con el modelo de trabajo al que otros, el uso restringido de enzimas reporteras, susceptibles a
hemos llegado, de acuerdo con los datos obtenidos a lo largo de estos tratamientos, que no son los ligandos naturales, no
varios aos, los cuales muestran que las protenas LEA son permitan detectar su capacidad protectora. Tambin es posible
capaces de prevenir los cambios estructurales que se promueven que su funcin est dirigida a proteger otro tipo de molculas,
por los efectos de la limitacin de agua en protenas/enzimas como cidos nucleicos (ADN y/o ARN); o bien, algunas
reporteras (como la lactato deshidrogenasa, LDH), que pudieran estructuras celulares como podran ser membranas o
llegar a su desnaturalizacin y consecuente agregacin, y que citoesqueleto. Esto nos obligar a buscar alternativas
tienen como consecuencia una desactivacin de stas. Este experimentales que nos permitan explorar otros posibles blancos
efecto protector es evidente en ensayos in vitro en los que al o funciones. Cabe mencionar que tambin hemos observado
deshidratar de manera progresiva a la enzima reportera, sta proteccin de enzimas reporteras por protenas LEA en ensayos

Figura 5. El modelo de accin de algunas de las protenas LEA surge a partir de los ensayos in vitro descritos por Reyes et
al. 23,24 (ver texto). Cuando las clulas sufren prdida de agua, estas condiciones pueden promover cambios conformacionales
en las protenas de mantenimiento, provocando una disminucin en sus actividades catalticas o una menor eficiencia en
sus funciones; condiciones ms severas, pueden llegar a inducir una prdida total de su estructura o desnaturalizacin y,
con ello una prdida tambin total de su actividad. En condiciones en las que existe una cantidad ptima de agua, las
protenas LEA se encontraran mayoritariamente desplegadas. Cuando la cantidad de agua disponible disminuye, se podra
modificar la conformacin de las protenas LEA hacia un estado activo, en el que ahora seran capaces de interaccionar
con las protenas de mantenimiento (u otros ligandos o blancos), previniendo as la prdida de su estructura y, por lo tanto,
de su funcin.
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de congelamiento-descongelamiento24, otra condicin que REFERENCIAS


impone un dficit hdrico. Por otro lado, la aplicacin de 1. Stryer, L. Biochemistry (Freeman and Co, New York, 1995). 1064
diferentes ensayos in vitro nos han mostrado que aunque estas pgs.
protenas pueden prevenir la desactivacin de enzimas reporteras 2. Tompa, P. Intrinsically unstructured proteins. Trends Biochem. Sci.
causada por los efectos de la deshidratacin parcial, las protenas 27, 527-533 (2002).
LEA no son capaces de proveer tal proteccin ante temperaturas 3. Ward, J.J., et al. Prediction and functional analysis of native disorder
elevadas, lo cual indica que su funcin est ms bien dirigida a in proteins from the three kingdoms of life. J. Mol. Biol. 337,
635-645 (2004).
contender con situaciones de baja disponibilidad de agua.
4. Iakoucheva, L.M., Brown, C.J., Lawson, J.D., Obradovic, Z. &
Interesantemente, chaperonas moleculares como los son las Dunker, A.K. Intrinsic disorder in cell-signalling and cancer-
protenas de choque trmico de bajo peso molecular (sHSPs, del associated proteins. J. Mol. Biol. 323, 573-584 (2002).
ingls small Heat Shock Proteins) no son capaces de prevenir la 5. Schad, E., Tompa, P. & Hegyi, H. The relationship between proteome
prdida de actividad de la enzima reportera, ni su posterior size, structural disorder and organism complexity. Genome
desnaturalizacin, ante situaciones de deshidratacin severa, lo Biol. 12 (2011).
cual indica que las sHSPs son incapaces de ejercer su funcin 6. Dyson, H.J. & Wright, P.E. Intrinsically unstructured proteins and
renaturalizadora en estas condiciones de estrs23 y, por otro their functions. Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 6, 197-208 (2005).
lado, refuerza la importancia funcional de las caractersticas 7. Mitchell, P.J. & Tijan, R. Transcriptional regulation in mammalian
fisicoqumicas de las protenas LEA ante condiciones de dficit cells by sequence-specific DNA binding proteins. Science 245,
371-378 (1989).
hdrico.
8. Battaglia, M., et al. The enigmatic LEA proteins and other hydrophilins.
Plant Physiol. 148, 6-24 (2008).
A pesar de las limitaciones que presentan estos ensayos in vitro, 9. Tompa, P. Intrinsically unstructured proteins evolve by repeat
nos han permitido detectar una funcin para algunas de estas expansion. Bioessays 25, 847-855 (2003).
protenas, y se presentan como una herramienta para explorar 10. Tsvetkov, P., Reuven, N. & Shaul, Y. The nanny model for IDPs.
algunas otras preguntas en relacin a las caractersticas Nat. Chem. Biol. 5, 778-781 (2009).
estructurales de las protenas LEA. Entre otras, utilizando 11. Cheng, M., et al. The p21(Cip) and p27(Kip) CDK inhibitors are
protenas mutantes en estos motivos, generadas in vitro, essential activators of cyclin D-dependent kinases in murine
podramos contestar cul es el significado funcional de los fibroblasts. EMBO J. 18, 1571-1583 (1999).
motivos conservados en alguna de las familias o grupos de estas 12. Haarmann, C.S., et al. The random-coil C fragment of the
dihydropyridine receptor II-III loop can activate or inhibit
protenas, cmo contribuyen estos motivos en la funcin
native skeletal ryanodine receptors. Biochem. J. 372, 305-316
protectora de estas protenas, en estos ensayos, y cules son los (2003).
aminocidos relevantes para ello. La informacin que obtengamos 13. Ma, J. Stimulatory and inhibitory functions of the R domain on
ser de utilidad para predecir la relevancia de posibles cambios CFTR chloride channel. News Physiol. Sci. 15, 154-158 (2000).
conformacionales en estas condiciones. An ms importante, 14. Tompa, P., Mucsi, Z., Orosz, G. & Friedrich, P. Calpastanin
ser la posibilidad de probar estas mutantes in vivo, transformando subdomains A and C are activators of calpain. J. Biol. Chem.
plantas con estas variantes y evaluando los fenotipos que se 277, 9022-9026 (2002).
obtengan, lo cual nos permitir extrapolar nuestros resultados in 15. Schwiebert, E.M., et al. CFTR is a conductance regulator as well as
vitro a su funcin en la planta. a chloride channel. Physiol. Rev. 79, S145-S166 (1999).
16. Tompa, P. & Csermely, P. The role of structural disorder in the
function of RNA and protein chaperones. FASEB J. 18, 1169-
La falta de similitud con otras protenas de la clula, junto con su
1175 (2004).
desorden o flexibilidad estructural, han sido obstculos que han
17. Garay-Arroyo, A., Colmenero-Flores, J.M., Garciarrubio, A. &
frenado un mayor avance en el conocimiento de la funcin de Covarrubias, A.A. Highly hydrophilic proteins in prokaryotes
estas protenas. Sin embargo, estas mismas caractersticas hacen and eukaryotes are common during conditions of water deficit.
de estas protenas un modelo no slo enigmtico, sino tambin J. Biol. Chem. 275, 5668-5674 (2000).
atractivo para su estudio. Las protenas LEA se podran considerar 18. Dure, L. & Chlan, C. Developmental biochemistry of cotton seed
como un buen modelo para estudiar la funcin de las PINEs en embryogenesis and germination. XII. Purification and properties
plantas y, sobre todo, para entender el por qu protenas como of principal storage proteins. Plant Physiol. 68, 180-186
stas han sido seleccionadas a lo largo de la evolucin como una (1981).
solucin general a un problema comn en los diferentes 19. Bies-Ethve, N., et al. Inventory, evolution and expression profiling
diversity of the LEA (late embryogenesis abundant) protein
organismos como lo es la limitacin de agua.
gene family in Arabidopsis thaliana. Plant Mol. Bio.l 67, 107-
124 (2008).
AGRADECIMIENTOS 20. Zimmermann, P., Hirsch-Hoffmann, M., Henning, L. & Gruissem,
Este trabajo fue apoyado parcialmente por DGAPA (IN222309). W. GENEVESTIGATOR: Arabidopsis microarray database
Csar Luis Cuevas es apoyado con una beca de doctorado por and analysis toolbox. Plant Physiol. 136, 2621-2632 (2004).
el CONACyT. 21. Olvera-Carrillo, Y., Campos, F., Reyes, J.L., Garciarrubio, A. &
Covarrubias, A.A. Functional analysis of the group 4 late
diciembre, 2011 Cuevas-Velzquez, C.L. y Covarrubias-Robles, A.A.: Las protenas desordenadas y su funcin 105

embryogenesis abundant proteins reveals their relevance in the 23. Reyes, J.L., et al. Hydrophilins from distant organisms can protect
adaptive response during water deficit in Arabidopsis. Plant enzymatic activities from water limitation effects in vitro. Plant
Physiol. 154, 373-390 (2010). Cell Environ. 28, 709-718 (2005).
22. Soulages, J.L., Kim, K., Walters, C. & Cushman, J.C. Temperature- 24. Reyes, J.L., et al. Functional dissection of hydrophilins during in
induced extended helix/random coil transitions in a group 1 late vitro freeze protection. Plant Cell Environ. 31, 1781-1790
embryogenesis-abundant protein from soybean. Plant Physiol. (2007).
128, 822-832 (2002).