You are on page 1of 12

OBTENCIN E IDENTIFICACIN DE SUSTANCIAS NATURALES DE ORIGEN VEGETAL

Ruiz-Lpez Mario Alberto, Zamora-Natera Francisco, Rodrguez Macas Ramn y Garca


Lpez Pedro Macedonio. Departamento de Botnica y Zoologa, e-mail:
mruiz@cucba.udg.mx.

INTRODUCCION

En los niveles en los que se considera a la biodiversidad (genes, especies y ecosistemas),


Mxico es considerado entre los pases de mayor biodiversidad en el Mundo (megadiverso)
se estima que la cantidad de plantas existentes es de cerca de 30,000 especies (CONABIO,
1998). Tambin es uno de los centros de origen y domesticacin ms importantes del
mundo, ya que al menos 120 especies de plantas han sido domesticadas (entre ellas algunas
de importancia alimentaria mundial, como el maz, el frijol y el jitomate). Muchas de estas
especies de plantas han servido como alimento, en la medicina tradicional, en la elaboracin
de saborizantes, colorantes y aromatizantes a escala comercial ya que una caracterstica de
las plantas es su capacidad de sintetizar y almacenar metabolitos tanto primarios como
secundarios. Por lo que la utilidad de alguna especie vegetal en particular va a depender
fundamentalmente de sus componentes qumicos.

Los metabolitos secundarios son compuestos de estructuras muy diversas y de bajo peso
molecular, son importantes en la defensa contra herbvoros y organismos fitopatgenos, en
la competencia contra otras plantas, establecimiento de simbiosis, atraccin de
polinizadores y dispersores de semillas, adems son protectores de la luz ultravioleta en
ambientes con alta incidencia de luminosidad (Sepulveda et al., 2003; Harborne, 1993;
Rhoades, 1979).

Los metabolitos secundarios se sintetizan principalmente en tejidos jvenes, sin


embargo su distribucin es variable en diferentes tejidos vegetales como una importante
estrategia de defensa y adaptacin (Johnson et al., 1985; Makkar et al., 1991, Wink y
Hartmann 1982).
El tipo individual de metabolito secundario, generalmente est limitado a un estrecho
nmero de especies dentro de un grupo filogentico, lo que indica que no son esenciales
para el metabolismo primario.

Los metabolitos secundarios han sido utilizados por el hombre como control natural de
plagas, hierbas medicinales, saborizantes, aromatizantes, cosmticos, antioxidantes y
fuentes de frmacos, debido a su actividad biolgica.

A continuacin se presenta el No de estructuras de compuestos conocidos (Fuente: Wink,


2010:

COMPUESTO No. de estructuras

Monoterpenos 2,500

Sesquiterpenos 5,000

Diterpenos 2,500

Triterpenos/esteroides/saponinas 5,000

Tetraterpenos 500

Policetidos 750

Poliacetilenos 1,500

Flavonoides/taninos 5,000

Fenilpropanoides/cumarinas/lignanos 2,000

Aminas 100

Alcaloides 21,000

Aminoacidos no proteicos 700


Glucosidos cianogenicos 60

Glucosinolatos 100

Lectinas 2,000

TERPENOS
Los terpenos son compuestos secundarios ampliamente distribuidos en la naturaleza,
principalmente en plantas y son constituyentes de aceites esenciales. La mayora son
hidrocarbonos, con compuestos oxigenados como alcoholes, aldehdos o cetonas. Sus
unidades formadoras son los isoprenos, CH2=C(CH3)-CH=CH2 (C5H8)n, se clasifican de
acuerdo al nmero de unidades de isoprenos: monoterpenos (2) sesquiterpenos (3)
diterpenos (4) triterpenos (6) tetraterpenos (8)
Existen varios mtodos para la obtencin de terpenos sobre todo para la extraccin de
aceites esenciales, de tipo terpenoides (monoterpenos, sesquiterpenos, diterpenos) que son
compuestos muy voltiles y por lo tanto arrastrables por vapor de agua, con aplicacin en
numerosas industrias:
Industria cosmtica y farmacutica: como perfumes, conservantes, saborizantes, principios
activos, etc.
Industria alimenticia y derivadas: como saborizantes para todo tipo de bebidas, helados,
galletitas, golosinas, productos lcteos, etc.
Industria de productos de limpieza: como fragancias para jabones, detergentes,
desinfectantes, productos de uso hospitalario, etc.
Industria de plaguicidas: como agentes pulverizantes, atrayentes y repelentes de insectos,
etc.

Principales mtodos utilizados para obtener aceites esenciales:


Destilacin en agua
Destilacin con agua y vapor
Destilacin con arrastre por vapor
Destilacin por pirlisis o degradacin trmica
La expresin o presin en frio
Percolacion en frio
Extraccin en caliente (decoccin)
Extraccin con fluidos en estado supercrtico

METODOS ANALITICOS PARA LOS ACEITES ESENCIALES


Mtodos cromatogrficos
Anlisis por cromatografa en capa fina (TLC)
Anlisis por cromatografa de gases (GC)
Determinacin cuantitativa de los componentes por GC-MS
Mtodos espectroscpicos
Perfil espectroscpico o caractersticas especficas
Ultravioleta-Visible (UV-Vis)
Infrarrojo (IR)
Resonancia Magntica Nuclear de 13C-NMR
IRMS, SNIF-NMR

COMPUESTOS FENOLICOS
Qumicamente los fenoles son compuestos que poseen un anillo aromtico con uno o ms
grupos hidroxilo (grupo fenol). Se sintetizan a partir de la fenilalanina (aa aromtico).
No hay un procedimiento satisfactorio de extraccin para todos los fenoles o para una
clase especfica de los fenoles.
La solubilidad de estos compuestos est en funcin del tipo de solvente (polaridad) usado,
el grado de polimerizacin, la interaccin con otros constituyentes y la formacin de
complejos insolubles.
Los solventes ms usados para la extraccin son metanol, etanol, acetona, agua, acetato de
etilo, propanol, dimetilformamida y sus combinaciones.
No hay un mtodo seguro para la cuantificacin de compuestos fenlicos que sea aplicado
a todos los productos.
El anlisis es influenciado por la naturaleza qumica, el mtodo de extraccin empleado, el
tamao de partcula de la muestra y el tiempo y condiciones de almacn, as como el
mtodo ensayado, y la presencia de sustancias de interferias como ceras, grasas, terpenos y
clorofilas

Mtodos de Anlisis y Cuantificacin de Compuestos Fenlicos


Los ensayos pueden ser clasificados en los que determinan el contenido total de fenoles o
los que cuantifican un grupo o clase especifica de fenoles. Los mtodos de Folin-Denis y el
de azul de Prusia son mtodos usados para la determinacin de fenoles totales. El mtodo
de la vanillina es usado para catequinas y proantocianidinas. Asimismo se han desarrollado
tcnicas cromatografas para identificar y cuantificar compuestos fenlicos especficos

Contenido de polifenoles de fuentes vegetales terrestre, acutica y marina con


potencial antioxidante (Ruiz-Lpez et al., 2013).

El contenido de polifenoles totales se puede observar en el cuadro 2, existe mayor


variacin entre la especie terrestre Solanum madrense que mostro el mayor contenido de
estos compuestos de 8.7 0.5 mg de equivalentes de cido glico/g de muestra, seguido del
alga marina Sargassum liebmanni con 6.00 0.35 que fue similar al lirio acutico
(Eichhornia crassipes) de 5.9 0.38 mg de equivalentes de cido glico/g de muestra.

Cuadro 2. Contenido de polifenoles (mg de equivalentes de cido glico/g de muestra en


peso seco) en tres especies de diferentes hbitats.
Especie Solanum madrense Eichhornia crassipes Sargassum liebmanni
(terrestre) (acutica) (marina)
Promedio 8.7 0.5 5.9 0.38 6.00 0.35
Promedios desviacin estndar, n = 5
Esos resultados son menores a los reportados en frutas y moras (arndanos, fresas, baya
de cuervo, aronia y frambuesa) que presentan altos valores de 12.4-50.8 mg EAG /g, pero
similar a frutas como manzanas y a hierbas medicinales como vara de oro (Solidago
virgaurea), sanguinaria (Achillea millefolium) y manzanilla (Matricaria chamomilla) con
valores reportados de 5.3-9 mg EAG /g. Sin embargo nuestras especies analizadas
presentan valores superiores de polifenoles a los reportados en cereales, como avena,
arroz, cebada y trigo (de 0.2-1.3 mg/g GAE) y a vegetales como cebolla, nabo, remolacha,
calabazas, zanahorias, jitomates chicharos y papas (de 0.4-6.6 mg/g GAE) (Khknen et al.,
1999).

ALCALOIDES
Los alcaloides son producidos por una gran cantidad de organismos, bacterias, hongos, y
animales, pero especialmente por plantas superiores entre el 10 y 25% de especies
vegetales tienen alcaloides (Acamovic et al., 2004). Es por esto que en el pasado el trmino
alcaloide fue asociado con plantas, por lo tanto estos compuestos son txicos a los
organismos que no los producen.
Adems de las plantas, los alcaloides se encuentran en hongos, como la psilocibyna en el
gnero Psilocybe, y en animales, como la bufotenina en la piel de algunas especies de sapos y
algunos organismos marinos tambin contienen alcaloides (Hesse 2002).
Dependiendo de la planta, la mxima concentracin de alcaloides se encuentra en las hojas,
frutos, semillas raz o corteza, sin embargo en diferentes tejidos de la misma planta pueden
contener diferentes alcaloides (Acamovic et al., 2004).
Debido a sus efectos farmacolgicos los alcaloides han sido utilizados por cientos de aos
como medicamentos drogas de recreacin o en rituales religiosos. Ejemplos son anestsicos
y estimulantes locales cocana; psicodlicos psilocina; estimulante cafena; analgsico
morfina; antibacterial berberina; anticancer vincristina; agente antihipertensin reserpina;
colinomimerico galatamina; agente espasmolisis atropina; vasodilator vincamina; anti-
arritmia quinidina; teraputico anti-asma efedrina; y droga antimalaria quinina (Bansal
2003, Hesse 2002).
Adems muchas drogas sintticas y semisintticas son modificaciones estructurales de los
alcaloides, los cuales son diseados para mejorar o cambiar el efecto primario de la droga y
reducir los efectos secundarios no deseados (Van Wyk and Wink, 2004). Por
ejemplo, naloxona, un receptor antagonista opioide, es un derivado presente en el opio.
Debido a la similitud a molculas que participan en la transmisin de las seales del
sistema nervioso, el efecto toxico de los alcaloides radica en su capacidad de bloquear
neuroreceptores, intermediarios de la transduccin de la seal neuronal y canales inicos
de los vertebrados (Van Wyk y Wink, 2004).

Extraccin y aislamiento
Debido a la diversidad estructural de los alcaloides, no hay un mtodo simple de
extraccin de sus fuentes naturales. La mayora de los mtodos aprovechan la propiedad de
los alcaloides de ser solubles en solventes orgnicos, pero no en agua, y la tendencia
opuesta de sus sales. Muchos alcaloides pueden ser purificados de extractos crudos por
extraccin acido-base.
Muchas plantas contienen varios alcaloides, primero se extraen todos mezclados y luego
se separan los alcaloides individuales. Las plantas deben ser cuidadosamente muestreadas
antes de la extraccin de los alcaloides. Posteriormente se procesa el material crudo con
solucin alcalina y se extraen los alcaloides basificados con solventes orgnicos, tales como
1,2-dicloroetano, diclorometano, cloroformo, ter dietlico o benceno. Luego, las impurezas
se disuelven por acidificacin; los alcaloides son convertidos a sus sales para ser
purificados.
En la extraccin acidificada el material crudo es procesado en una solucin acidificada
dbil (por ej. cido actico en agua, etanol, o metanol). Luego se adiciona una base para
convertir los alcaloides a su forma bsica para ser extrados con solventes orgnicos.

METODOS ANALITICOS PARA LOS ALCALOIDES


Mtodos cromatogrficos
Anlisis por cromatografa en capa fina (TLC)
Anlisis por cromatografa de gases (GC)
Anlisis por cromatografa de lquidos (HPLC)
Determinacin cuantitativa de los componentes por GC-MS
Mtodos espectroscpicos
Infrarrojo (IR)
Resonancia Magntica Nuclear de 13C-NMR
IRMS, SNIF-NMR
Contenido de alcaloides quinolizidinicos en las especies silvestres de lupinos de
Jalisco.
Se han realizado diversos estudios para conocer el contenido total e individual de
alcaloides del tipo quinolizidinco es las especies de lupinos nativos del estado de Jalisco,
encontrando lo siguiente:
Cuadro 3. Contenido de alcaloides quinolizidnicos en 7 especies silvestres de Lupinus del
occidente de Mxico (mg de alcaloides/g de muestra, en base seca)
Especie Espartena citisina lupanina 3-oh lupanina 13-oh lupanina
L. exaltatus 0.028 0.004 ND 5.83 0.46 1.53 0.19 ND
L. elegans ND ND 0.030.001 3.73 0.175 ND
L. splendens 0.29 0.048 ND 0.89 0.1 1.05 0.249 1.00 0.133
L. reflexus 26.63 1.136 ND 2.91 0.03 0.16 0.051 0.08 0.018
L. rotundiflorus 0.11 0.005 ND 11.5 0.19 4.19 0.427 ND
L. simulans 0.40 0.007 ND 8.87 0.183 2.76 0.163 0.09 0.012
L. spp 0.02 0.001 ND 10.63 0.08 2.08 0.113 0.03 0.003
Los valores son medias desviacin estndar (n = 3)
ND = no detectado
La presencia de lupanina se aprecia en las siete especies de lupinos estudiados. El mayor
contenido de este alcaloide se encontr en Lupinus rotundiflorus, Lupinus spp y L. simulans
de 11.5, 10.6 y 8.87 mg/g de muestra respectivamente, mientras que L. elegans present el
nivel ms bajo (0.03 mg/g de muestra). La espartena se encontr en seis de las especies
analizadas, la mayor concentracin se cuantific en L. reflexus con 26.63 mg/g de muestra,
mientras que en L elegans hubo ausencia de este alcaloide. La 3-hidroxilupanina se present
en todos lo lupinos, en niveles de 0.16 (L. reflexus) a 4.2 mg/g de muestra (L. rotundiflorus).
En L. exaltatus, L. elegans y L. rotundiflorus no se detect 13-hidroxilupanina, el mayor
contenido de este alcaloide se encontr en L. splendens con 1.0 mg/g de muestra, mientras
que el menor fue para L. sp. con 0.03 mg/g de muestra. En ninguna de las especies
estudiadas se encontr citisina (Ruiz y Sotelo, 2001).
H
N

N
H

Lupanina

Figura 1. Espectro de masas y estructura de la lupanina (Fuente: Ruiz y Sotelo, 2001)

Cuadro 4. Variacin del contenido de alcaloides quinolizidinicos en semillas de cuatro


especies mexicanas de lupinos de diferentes localidades (mg/g base seca)
Especie Esparteina Lupanina 13-hidroxilupanina Multiflorina Angustifolina

L. mexicanus1 0.0080 0.0001 5.56 0.060 0.006 0.002 0.140 0.001 ---

L. mexicanus2 0.0070 0.001 4.70 0.930 0.042 0.030 0.200 0.004 ---

L. mexicanus3 0.0030 0.001 4.90 0.007 0.004 0.000 0.030 0.000 ---

L. mexicanus4 0.0120 0.001 5.06 0.520 0.007 0.007 0.016 0.001 ---

Media D.E, 0.0075 0.004 5.05 0.370 0.015 0.018 0.096 0.090

L.exaltatus5 0.0030 0.000 1.75 0.10 0.006 0.000 0.005 0.000 ---

L.exaltatus6 0.0040 0.000 1.47 0.00 0.010 0.003 0.004 0.000 ---

L. exaltatus7 0.0030 0.000 1.20 0.01 0.030 0.010 0.002 0.000 ---

Media D.E, 0.0033 0.000 1.47 0.27 0.015 0.013 0.004 0.000

L. montanus8 3.50 0.21 1.75 0.32 0.110 0.007 0.090 0.002 0.013 0.003

L. montanus9 4.47 0.13 1.60 0.051 0.190 0.024 0.100 0.003 0.050 0.004
L. montanus10 3.93 0.05 1.60 0.400 0.006 0.000 0.027 0.002 0.081 0.006

Media D.E. 3.97 0.49 1.65 0.090 0.102 0.090 0.07 0.004 0.048 0.034

L. stipulatus11 0.04 0.01 0.10 0.002 0.120 0.004 0.2 0 0.004 ---

Los valores son medias D.E. de tres replicas

1= Lagos de Moreno, Jalisco 2006, 2= Manalisco, Jalisco, 2006, 3= Teoloyucan, Edo. de Mxico, 2006,

4= Guanajuato, Guanajuato, 2006, 5= Cd. Guzmn, Jalisco, 2006, 6= Cd. Guzmn, Jalisco, 2007,

7=Zapopan, Jalisco, 2006, 8= Tonila, Jalisco, 2006, 9= Tonila, Jalisco 2007, 10= Bolaos, Jalisco, 2007,

11= Monte Escobedo, Zacatecas, 2007.

La lupanina, espartena, 13-hidroxilupanina, y multiflorina se encuentran en todas la

muestras colectadas. Sin embargo la angustifolina se encontr solo en L. montanus (Ruiz et

al., 2010) lo que indica una posible relacin quimiotaxonmica de esta especie con las

especies Europeas de lupinos L. angustifolius, L.albus y L. polyphyllus que contienen este

alcaloide (Wink et al., 1995; Kinghorn et al., 1980). Y al igual que la mayora de especies

americanas de lupinos, la angustifolina no fue detectada en L. exaltatus, L. stipulatus y L.

mexicanus.

La lupanina fue el alcaloide mayoritario en todas las especies con excepcin de L.

montanus, donde la espartena fue el principal alcaloide (3.97 0.49 mg/g) (Ruiz et al.,

2010). Este nivel de espartena en L. montanus es ms alto reportado para una especie de

Jalisco mayor a L. reflexus (2.66 mg/g) (Ruiz y Sotelo, 2001).

LITERATURA CITADA

Acamovic, T, Stewart, C.S.T., Pennycott T.W. 2004. Poisonous plants and related toxins, 21.
CABI. USA.
Bansal R.K. 2003. A Text Book of Organic Chemistry. 4th Edition, New Age International
Publishers.
CONABIO, 1998. La diversidad biolgica de Mxico: Estudio de Pas. 1 edicin, Mxico.
Harborne, J.B. 1993. Introduction to Ecological Biochemistry. Academic Press. London.
Hesse M. 2002. Alkaloids. Nature's Curse or Blessing? WILEY-VCH. Germany.
Johnson, A.E., R.J. Molyneux and G.B. Merrill. 1985. Chemistry of toxic range plants.
Variation in pyrrolizidine alkaloid content of Senecio, Amsinckia, and Crotalaria species.
J. Agric. Food Chem., 33: 50-55.
Khknen M. P., Hopia A. I., Vuorela H. J. Jussi-Pekka R. Pihlaja K. Kujala T.S., Heinonen M.
1999. Antioxidant Activity of Plant Extracts Containing Phenolic Compounds. J. Agric.
Food Chem. 47: 39543962.
Kinghorn, D.A., A. M. Selim, and S.J. Smolenski, 1980. Alkaloid distribution in some new
world Lupinus species. Phytochem., 19: 1705-1710.
Makkar, H.P.S., R.K. Dawra and B. Singh. 1991. Tannin levels in leaves of some oak species at
different stages of maturity. J. Sci. Food Agric. 54: 513-519.
Rhoades, D.F. 1979. Evolution of plant chemical defense against herbivores. pp: 3-54 In:
Rosenthal G.A. and Janzen D.H. (Ed.) Herbivores: Their Interactions with Secondary Plant
Metabolites. Academic Press, New York.
Ruiz-Lpez M.A., Garca-Lpez P.M., Rodrguez-Macias R., Zamora Natera J.F. Isaac-Virgen
M.L. and Muzquiz M. 2010. Mexican wild lupines as a source of quinolizidine alkaloids of
economic potential. Polibotanica. 29: 159-164.
Ruiz.Lpez M.A., Montes-Lomeli S. J. y Fernndez-Rodrguez V. E. 2013. Contenido de
polifenoles de fuentes vegetales terrestre, acutica y marina con potencial antioxidante.
Congreso Internacional de Investigacin de Academia Journals, Celaya, Gto. Noviembre 6-
8.
Ruiz-Lpez M. A. and Sotelo A. 2001. Chemical Composition, Nutritive Value, and Toxicology
Evaluation of Mexican Wild Lupins. J. Agric. Food Chem. 49, 5336-5339.
Sepulveda J. G., Porta D. H., Rocha S.M., 2003. La participacin de los metabolitos
secundarios en la defensa de las plantas. Revista Mexicana de Fitopatologia. 21: 355-363.
Van Wyk BE, Wink M. 2004. Medicinal Plants of the World: An illustrated Scientific Guide to
Important Medicinal Plants and Their Uses. Timber Press UK.
Wink M., Hartmann T. 1982. Localization of the enzymes of quinolizidine alkaloids
biosynthesis in leaf chloroplast of Lupinus polyphillus. Plant Physiol, 70, 74-77.
Wink, M., C. Meissner, and L. Witte. 1995. Patterns of quinolizidine alkaloids in 56 species of
the genus Lupinus. Phytochem., 38: 139-153.

You might also like