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UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CENTRO DEL PER

FACULTAD DE INGENIERA EN INDUSTRIAS ALIMENTARIAS

COMPARACIN DE LOS COMPUESTOS


TERPNICOS DEL ACEITE ESENCIAL DE MUA
(Minthostachys mollis) EXTRADOS DE LAS
HOJAS FRESCAS Y SECAS

PRESENTADO POR:

Bach. CASTRO MATTOS MIGUEL ANGEL

ASESORA:

M.Sc. NORMA GAMARRA MENDOZA

PARA OBTENER EL TTULO DE INGENIERO EN INDUSTRIAS ALIMENTARIAS

HUANCAYO

2012
UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CENTRO DEL PER

FACULTAD DE INGENIERA EN INDUSTRIAS


ALIMENTARIAS

JURADO EXAMINADOR

M.Sc. NORA VELIZ SEDANO ING. SERGIO ANCHIRAICO COSQUILLO


PRESIDENTE SECRETARIO

M.Sc. EDGAR ACOSTA LOPEZ M.Sc. MARIA GUTIERREZ GONZALES


JURADO JURADO

ING. JOSE LUIS SOLIS ROJAS


JURADO

2
ASESORA
_______________________________________
M.Sc. NORMA GAMARRA MENDOZA
_______________________________________

3
DEDICATORIA

Al Seor Jesucristo, por su muerte vicaria


y su resurreccin fsica, quien gua y
sostiene mi caminar.

A mis padres, cuyo sacrificio es una


bendicin en mi vida.

A la Comunidad Bblica Universitaria, por


ser una Escuela de Vida.

A mis amigos, el plato fuerte en el


banquete de la vida.

4
NDICE DE CONTENIDOS
TEMA PGINA
RESUMEN 10
I. INTRODUCCIN 11
II. REVISIN BIBLIOGRFICA 13

2.1. MUA 13

2.1.1. Descripcin botnica. 13

2.1.2. Taxonoma de la mua. 14

2.1.3. Distribucin y especies. 14

2.1.4. Composicin de la mua. 16

2.2. ACEITES ESENCIALES 17

2.2.1. Definicin. 17

2.2.2. Isoprenos y terpenos. 18

2.2.3. Composicin qumica y clasificacin. 19

2.2.4. Propiedades. 21

2.2.5. Aceite esencial de mua. 21

2.3. CARACTERIZACIN DE LOS ACEITES ESENCIALES 29

2.4. EXTRACCIN DE ACEITES ESENCIALES 35

III. MATERIALES Y MTODOS 37

3.1. LUGAR DE EJECUCIN. 37

3.2. MATERIA PRIMA. 37

3.3. EQUIPOS Y MATERIALES. 37

3.3.1. Equipos e instrumentos. 37

3.3.2. Materiales varios de laboratorio. 38

3.3.3. Reactivos. 39

3.4. MTODOS DE ANLISIS. 39

5
3.4.1. Materia prima 39

3.4.2. Aceite esencial 40

3.5. METODOLOGA EXPERIMENTAL 40

3.5.1. Acondicionamiento y secado de la materia prima 40

3.5.2. Destilacin por arrastre de vapor de agua. 41

3.5.3. Caracterizacin fisicoqumica del aceite esencial 42

3.5.4. Caracterizacin cromatogrfica. 43

3.5.5. Descripcin del diagrama de flujo. 44

3.5.6. Diseo experimental. 47

3.5.7. Anlisis estadstico. 47

IV. RESULTADOS Y DISCUSIONES 48

4.1. IDENTIFICACIN DE LA PLANTA. 48

4.2. DESTILACIN. 49

4.3. ANLISIS ORGANOLPTICO. 54

4.4. ANLISIS FSICOS. 55

4.5. CARACTERIZACIN CROMATOGRFICA. 57

V. CONCLUSIONES 74

VI. RECOMENDACIONES 76

VII. BIBLIOGRAFA 77

VIII. ANEXOS 86

Anexo I Identificacin de la mua. . 86

Anexo II Resultados cromatogrficos del aceite esencial de mua

(fresco y seco). 88

Anexo III Resultados estadsticos. 90

6
NDICE DE FIGURAS

Figura 1: Distribucin de todas las especies de mua. 15

Figura 2: Estructura del isopreno. 19

Figura 3: Variabilidad de la composicin terpnica. 23

Figura 4: Estructura qumica de la mentona y el mentol. 25

Figura 5: Estructura qumica de la pulegona. 25

Figura 6: Terpenos principales del aceite esencial de mua. 26

Figura 7: Cromatograma de aceite esencial de mua. 27

Figura 8: Partes principales de un cromatgrafo de gases. 32

Figura 9: Tipos de Cromatogramas: (1) Diferencial, (2) Integral. 33

Figura 10: Parmetros que definen un cromatograma. 34

Figura 11: Principio para la deteccin de los picos. 35

Figura 12: Diagrama de flujo experimental de la extraccin de aceite esencial 46

Figura 13: Comportamiento de la extraccin de aceite esencial de mua fresca 50

Figura 14: Comportamiento total de la extraccin de aceite de hojas frescas. 50

Figura 15: Comportamiento de la extraccin de aceite esencial de mua seca. 52

Figura 16: Comportamiento total de la extraccin de aceite de hojas secas. 52

Figura 17: Cromatograma del aceite esencial (Mua fresca). 58

Figura 18: Cromatograma del aceite esencial (Mua seca). 59

Figura 19: Porcentaje de terpenos hallados (Mua fresca). 62

Figura 20: Porcentaje de terpenos hallados (Mua seca). 62

Figura 21: Comparacin % de los principales componentes de ambos aceites. 66

Figura 22: Porcentaje de Pulegona en ambos aceites esenciales. 67

Figura 23: porcentaje de Mentona en ambos aceites esenciales. 68

Figura 24: Variacin de la cantidad de ambos terpenos. 68

Figura 25: Determinacin del color de mua fresca mediante

7
la carta colorimtrica 87

Figura 26: ANVA para los tratamientos de la mentona. 90

Figura 27: Test de Duncan para los tratamientos de la mentona. 90

Figura 28: ANVA para los tratamientos de la pulegona. 91

Figura 29: Test de Duncan para los tratamientos de la pulegona. 91

8
NDICE DE TABLAS

Tabla 1: Composicin de la mua. 16

Tabla 2: Propiedades fsicas del aceite esencial de mua. 22

Tabla 3: IR y densidad relativa del aceite esencial de mua. 22

Tabla 4: Datos cromatogrficos del aceite esencial de mua. 27

Tabla 5: Principales terpenos en el aceite esencial de mua 28

Tabla 6: Tabulacin de datos de la destilacin (hojas frescas). 49

Tabla 7: Tabulacin de datos de la destilacin (hojas secas). 51

Tabla 8: Resultados organolpticos del aceite esencial. 54

Tabla 9: IR y densidad relativa del aceite esencial. 56

Tabla 10: Porcentaje de los terpenos encontrados en el aceite esencial. 60

Tabla 11: Tiempo de retencin de los terpenos encontrados. 61

Tabla 12: Tiempo de retencin y % de rea de terpenos mayoritarios de Mua

fresca. 65

Tabla 13: Tiempo de retencin y % de rea de terpenos mayoritarios de Mua

seca 65

Tabla 14: ANVA para el porcentaje de mentona. 72

Tabla 15: ANVA para el porcentaje de pulegona. 72

Tabla 16: Caractersticas botnicas de la mua. 86

Tabla 17: Resultados de la cromatografa (hojas frescas). 88

Tabla 18: Resultados de la cromatografa (hojas frescas). 89

9
RESUMEN

Se determin el porcentaje de mentona y pulegona en aceite esencial extrado de

hojas frescas y secas de mua. La extraccin se llev a cabo mediante destilacin

por arrastre de vapor a una temperatura de 84 C por 90 minutos. Se utiliz como

materia prima hojas frescas (11,56 % de humedad) y secas (7,81 % de humedad).

ste ltimo valor fue obtenido luego de secar las hojas por 7 horas a una

temperatura constante de 35 C en una secadora de bandejas. Los aceites

esenciales obtenidos fueron separados del agua florentina por decantacin, luego de

20 horas de reposo, posteriormente se determin el ndice de refraccin y la

densidad relativa. Finalmente se realiz la caracterizacin de los compuestos

terpnicos mediante cromatografa de gases. El contenido de mentona y pulegona

para el aceite esencial procedente de hojas frescas fue 30,168 % y 45,036 %,

mientras que para el aceite esencial de hojas secas el contenido fue 24,818 % y

52,321 %, respectivamente. Se nota el descenso de la mentona y el aumento de la

pulegona en el aceite esencial proveniente de hojas secas, debido a los factores que

intervinieron en el proceso, as como a la estructura qumica de los terpenos. El

anlisis estadstico realizado mostr la diferencia significativa entre la cantidad de la

mentona y pulegona encontrados en el aceite esencial extrado de hojas frescas y

secas.

10
I. INTRODUCCIN

Los aditivos sintticos representaron la base fundamental de la industria

alimentaria durante la segunda mitad del siglo XX en las ciudades importantes de

Sudamrica e incluso hasta hoy en el interior del pas. Es sabido que su empleo

puede producir la contaminacin del agro ecosistema, los alimentos pueden

contener residuos, etc. Por tales razones la ciencia ha volcado su atencin hacia

los productos naturales (alimentos funcionales) y sus componentes, los cuales

careceran de los efectos adversos anteriormente mencionados, analizndolos,

comparndolos, extrayendo sus compuestos, etc., demostrando superioridad

sobre compuestos artificiales en su aplicacin en diferentes reas. En esta

perspectiva la industria alimentaria ha incrementado la demanda de esencias y

aromatizantes de procedencia natural, como el limoneno, la pulegona o el mentol

(terpenos de los aceites esenciales), provenientes de los aceites esenciales para

la utilizacin en confitera.

Ahora bien, se requiere investigar la composicin de los aceites esenciales de las

principales hierbas aromticas y, lo que es ms importante, entender cmo vara

la cantidad de los componentes terpnicos mayoritarios cuando las hierbas son

secadas para almacenamiento u otros fines.

La presente investigacin contribuir en resolver el problema de la limitada

cantidad de estudios descriptivos sobre los principales terpenos contenidos en el

aceite esencial de mua. Para tal efecto se compar la cantidad de los dos

principales terpenos del aceite esencial de mua extrado por destilacin por

arrastre de vapor: la mentona y la pulegona de dos tipos de hojas, mediante

anlisis fsicos y cromatogrficos.

11
Los objetivos especficos fueron los siguientes:

Evaluar el comportamiento de la destilacin por arrastre de vapor para la

extraccin de aceite esencial de hojas frescas y secas de mua.

Comparar los resultados organolpticos y fsicos (ndice de refraccin y

densidad relativa) de ambos aceites extrados.

Identificar los componentes terpnicos mayoritarios en el aceite esencial de

hojas secas y frescas mediante cromatografa de gases.

12
II. REVISIN BIBLIOGRFICA

2.1. MUA

2.1.1. Descripcin botnica.

Es una planta arbustiva (Yapuchura, 2010), leosa, que alcanza de 0,80

m y 1,50 m, frondosa en la parte superior, erecta y pubescente. Su tallo

es ramificado desde la base. Sus flores son blancas y se encuentran

reunidas en cortos racimos, situados en la parte superior de las ramas

como pednculos cortos, teniendo 2 en cada axila, los cuales sirven para

su multiplicacin. Seguil (1990) menciona que las hojas son simples,

opuestas, pecioladas y de bordes aserrados. Posee pelos en la cara

inferior de las hojas y en los peciolos (Pezn que sostiene la hoja).

Pertenece a un gnero de inters botnico, farmacutico y econmico

debido a los aceites aromticos encontrados en las glndulas celulares de

las hojas y tallos (Schmidt-Lebuhn, 2009).

13
2.1.2. Taxonoma de la mua.

La clasificacin taxonmica es la siguiente (Aquino, 2007):

Reino : Vegetal

Divisin : Magnoliophyta

Clase : Magnoliopsida

Subclase : Asteridae

Orden : Verbenales

Familia : Lamiaceae

Gnero : Minthostachys (Benth.) Spach

Especie : Minthostachys mollis (Kunth) Grisebach

2.1.3. Distribucin y especies.

Crece entre los 500 a 4000 m.s.n.m., por toda Sud-Amrica, desde

Argentina (Crdoba) hasta Venezuela (Monagas y Sucre) (Schmidt-

Lebuhn, 2009; Aquino, 2007), particularmente en Per, Bolivia, Ecuador y

Argentina, tomando distintos nombres en cada pas. Crece en el campo

silvestre de manera espontnea (Seguil, 1990), en bosques nublados,

ambientes hmedos o en pendientes secas, arenosas y rocosas

(Schmidt-Lebuhn, 2009). En la figura 1 se ven las zonas, marcadas con

puntos, en las cuales crece el gnero Minthostachys.

14
Fuente: Schmidt-Lebuhn (2009)

Figura 1: Distribucin de todas las especies de mua.

Actualmente, y como resultado de las investigaciones morfolgicas y

taxonmicas, se sabe que hay 17 especies, una con tres variedades,

encontradas en Sudamrica, principalmente en los centros de diversidad,

Bolivia y el sur de Per. A continuacin se presentan algunas de ellas

(Schmidt-Lebuhn, 2005 y 2009):

M. mollis (Kunth) Griseb. Tiene un cliz densamente velloso alrededor

de la base, es lobulado, dentado, herbceo, el tubo de la corola es de

2,5 a 4 mm de largo, las hojas son vellosas al envs. Existen tres sub

variedades de esta especie (Schmidt-Lebuhn, 2009), la Minthostachys

mollis hybrida Schmidt-Leb., de Colombia y Venezuela, ms o menos

agudas en sus bases; la Minthostachys mollis mandoniana (Briq)

Schmidt-Leb., del sur de Per y de Bolivia, posee hojas relativamente

15
largas; y la Minthostachys mollis mollis, desde Venezuela hasta el

centro del Per. Posee enorme variabilidad.

M. setosa (Briq.) Epling. De los bosques hmedos de Cochabamba.

M. spicata (Benth.) Epling. De la cordillera occidental del Per.

Presente en condiciones secas.

M. verticillata (Griseb.) Epling. nica nativa de Argentina, pero tambin

la econmicamente ms importante.

2.1.4. Composicin de la mua

En la tabla 1 se presenta la composicin de 100 g de mua.

Tabla 1: Composicin de la mua.

Componente Cantidad (%)


Humedad 16
Protenas 3,2
Grasas 2,8
Carbohidratos 66,3
Fibra 9,4
Ceniza 11,7
Calcio 2237 mg
Fosforo 269 mg
Hierro 22,4 mg
Retinol 306 mg
Tiamina 306 mg
Riboflavina 1,81 mg
Niacina 6,85 mg
Energa 268 kcal
Fuente: Yapuchura (2010)

16
2.2. ACEITES ESENCIALES

2.2.1. Definicin.

Internacionalmente se define a los aceites esenciales como un

producto obtenido por hidrodestilacin, destilacin por arrastre de

vapor, destilacin seca o algn otro proceso mecnico sin calor, de

toda o alguna parte de la planta (Graa, 2010). Por su parte Camacho

et al (2011) dice que un aceite esencial es una mezcla de componentes

terpnicos voltiles producto del metabolismo secundario de las plantas

en cuya composicin interviene una proporcin de hidrocarburos de la

serie polimetilnica del grupo de los terpenos que responden a la

frmula (C5H8)n, junto con otros compuestos casi siempre oxigenados

(sean estos alcoholes, steres, teres, aldehdos y compuestos

fenlicos) que son los que transmiten a los aceites el aroma que los

caracteriza. Los ms olorosos se encuentran en zonas tropicales,

donde la energa solar es grande. Zekaria (2007) dice que tras la

biosntesis stos compuestos se almacenan en distintos rganos de la

planta. El aceite esencial es guardado como microgotas en las

glndulas, aquellos necesitan difundirse hacia el exterior. Para esto el

aceite esencial atraviesa las paredes de las glndulas y las microgotas

llegan a la superficie, se evaporan y llenan el aire con su perfume.

Mayormente son de olor agradable, aunque existen excepciones como

el aceite esencial del ajo y la cebolla, esto debido a los compuestos

azufrados que hay en ellos (Albarracn y Gallo, 2003; Zekaria, 2007).

A nivel biolgico cumplen varias funciones, segn Morales (1973) y

Beltrn (1983) influyen en la atraccin de insectos o su repulsin;

17
tambin acta como cicatrizante de lesiones sufridas en la planta, para

que no se evapore el agua interior por las lesiones. Funcionan

hormonalmente en la polinizacin, pues en la floracin los aceites

esenciales van a las flores. Fsicamente actan como reguladores de la

conductividad de calor del agua y de la presin osmtica.

Metablicamente desciende la concentracin de aceite en las plantas

que crecen a la sombra. Beltrn (1983) menciona que tambin actan

como sustancias de reserva, es decir como dadores de hidrgeno para

los procesos de oxi-reduccin y funcionaran tambin como fuentes de

energa durante interrupciones en la asimilacin normal de anhdrido

carbnico.

2.2.2. Isoprenos y terpenos.

Morrison y Boyd (1990) los comparan con bloques de construccin

desde los cuales se forman muchas sustancias, como ladrillos de una

pared. Una de estas unidades es el isopreno. Casi todos los terpenos

(que se hallan en los aceites esenciales) tienen esqueletos carbonados

construidos con unidades de isopreno unidas entre s de un modo muy

regular, es decir, en palabras simples, de pies a cabeza. La

importancia del isopreno es tal que el colesterol y la vitamina A se

constituyen paso a paso, de unidades isoprnicas. En la figura 2

encontramos la estructura qumica del isopreno, con su caracterstica

forma de silla. Se dice que tanto la molcula como la unidad de

isopreno tienen una cabeza (el extremo ramificado) y una cola (el

extremo etilo no ramificado). La frmula condensada de los terpenos es

C10H16. (Vitoria, 1948).

18
Fuente: Wade (1993)
Figura 2: Estructura del isopreno.

La combinacin de isoprenos forma monoterpenos y sesquiterpenos.

Todos ellos son lquidos (menos el canfeno), muy refringentes,

incoloros, muchos de ellos pticamente activos. Su punto de ebullicin

suele estar entre 160 C y 180 C, por lo cual al extraerlos se obtienen

mezclas de ellos. Entre los terpenos (o monoterpenos) y los

sesquiterpenos (C15H24) podemos ver que los primeros son ms

voltiles, menos polares y su punto de ebullicin es menor; los

segundos son ms estables a temperatura ambiente, ms polares y su

punto de ebullicin es mayor. Fundamentalmente hay dos tipos de

monoterpenos y sesquiterpenos, los oxigenados y los no oxigenados.

2.2.3. Composicin qumica y clasificacin.

Cerruti y Neumayer (2004) dicen que dentro de sus ms de 100

componentes, podemos agruparlos en compuestos alifticos de bajo

peso molecular (alcanos, alcoholes, aldehdos, cetonas, steres y

cidos), monoterpenos, sesquiterpenos, fenilpropanos. Castaeda

(2008) clasifica la composicin de una manera distinta: Esencias

hidrocarbonadas: monoterpenos (limoneno) y sesquiterpenos; Esencias

oxigenadas: steres, por ejemplo ster de metilo; aldehdos terpnicos

y aldehdos aromticos (vainillina); cetonas; alcoholes monoterpnicos

19
y diterpnicos (timol, terpineol, mentol, linalol, geraniol, citronelol);

fenoles (carvacrol); cetonas (d-carvona); xidos; compuestos

azufrados; compuestos nitrogenados; cidos; cumarinas; teres

(eugenol, anetol). Se clasifican a los aceites esenciales de acuerdo a

consistencia, origen y naturaleza qumica de los componentes

mayoritarios (Cerruti y Neumayer, 2004).

Consistencia: Se dividen en fluidas (lquidas a temperatura

ambiente), Blsamos (espesos y poco voltiles como la copaiba) y

Oleorresinas (lquidos muy viscosos o semislidos como el caucho),

segn Albarracn et al (2003) y Castaeda (2008).

Origen: Naturales (extradas de las mismas plantas, sin

modificacin alguna, con bajo rendimiento), artificiales

(enriquecimiento de la esencia o mezcla con otras. Ejemplos son los

aceites de rosa, geranio y jazmn) y sintticas, es decir sintetizados

qumicamente como la esencia de vainilla (Castaeda, 2008).

Por sus componentes mayoritarios: Tenemos tres grupos, los

monoterpenos (como el aceite de hierbabuena) con 10 tomos de

carbono, derivados del Geranilpirofosfato (GPP); sesquiterpenos

(como el aceite de pino o copaiba) con 15 tomos de carbono,

derivados de Farnesilpirofosfato (FPP); los Fenilpropanoides, como

aceite de clavo, canela, ans, contiene un anillo aromtico unido a

una cadena de tres carbonos. (Castaeda, 2008; Martnez, 2003;

Albarracn y Gallo, 2003).

20
2.2.4. Propiedades.

Son lquidos a temperatura ambiente (Beltrn, 1983; Castaeda,

2008); de aspecto oleoso, solubles en ter de petrleo (Castaeda,

2008), en tetracloruro de carbono y otros disolventes orgnicos.

(Albarracn y Gallo, 2003). Se unen con facilidad a las grasas y

aceites fijos.

Poseen olor variable o intenso (Castaeda, 2008), as como su

sabor acre, caustico e irritante y a veces aromtico dulce y delicado

(Albarracn y Gallo, 2003).

Incoloros en estado puro. (Castaeda, 2008).

Punto de ebullicin entre 150 y 300 C (Beltrn, 1983).

Sensibles a la oxidacin, se polimerizan, dando productos

resinosos.

ndice de refraccin elevado (Castaeda, 2008).

La luz los vuelve amarillos y oscuros modificando su perfume.

La mayora es menos densa que el agua; su densidad relativa es a

15 C, de 0,84 a 1,2.

El punto de ebullicin vara entre 150C a 300C. (Albarracn y

Gallo, 2003; Castaeda, 2008).

2.2.5. Aceite esencial de mua.

El olor aromtico de la mua se debe al contenido de aceite esencial

que posee la planta (Kumoro et al, 2010) el cual se encuentra ubicado

principalmente en las hojas y tallos en ms del 98%; Es un lquido

incoloro y de sabor ardiente, obtenido por destilacin con vapor

hmedo o vapor seco. El vapor hincha la pared y por smosis la

21
esencia fluye al exterior, sin embargo puede hidrolizarse en el proceso

generando steres (Seguil, 1990). En la tabla 2 se encuentran las

caractersticas del aceite esencial de mua y en la tabla 3 sus

parmetros fsicos.

Tabla 2: Propiedades fsicas del aceite esencial de mua.

Fuertes y
Cano et al Aquino
Caracterstica Seguil (1990) Mungua
(2008) (2007)
(2001)
Ligeramente Ligeramente
Color Incoloro Amarillento
amarillo. amarillo
Olor Similar al mentol. Mentol Agradable Fuerte
Picante con Ligeramente
Sabor Picante fresco. Picante
frescor picante
Aspecto Lquido fluido. Lquido limpio - Lquido oleoso
Densidad relativa
0,9189 0,9295 (20 C) 0,852 g/mL 0,9189
(25 C), d2020
ndice de
refraccin (20 1,4727 1,5689 1,487 1,4727
C), n2020

Otros investigadores reportan slo los resultados fsicos:

Tabla 3: IR y densidad relativa del aceite esencial de mua.


Referencia IR Densidad relativa

USP Menta piperita1 1,45 0,899

ISO Menta piperita2 1,46 0,9

Lima3 1,469 0,92

Huancayo4 1,4983 0,9868

Fuente: 1-3Morales (1973); 4 Beltrn (1983).

22
Sobre composicin del aceite esencial de mua existe mucha

variabilidad en los resultados de los estudios realizados. Esta

diferencia no solo se da en la presencia o ausencia de tal o cual

terpeno, sino respecto a su porcentaje y a la especie, as como a su

lugar de procedencia. Este concepto se condensa en la figura 3. La

variabilidad se presenta en funcin de varios factores, como el lugar de

procedencia y la sub especie (Morales, 1973). Seguil (1990) detalla

varios estudios con resultados variables, por ejemplo uno presenta

pineno, pineno y limoneno, mientras que otros no. Tambin Fuertes y

Mungua (2001) estudi la composicin de tres extractos de aceite

esencial de la sierra del pas obteniendo los siguientes resultados:

Aceite esencial de mua (Tarma): 1-tetradeceno (23,14 %), 2s-trans-

mentona (23 %) y pulegona (13,21 %); Aceite esencial de mua

(Huaraz): 2s-trans-mentona (41,48 %) y pulegona (16,02 %), -

terpineno (7,55%); Aceite esencial de mua (Pampas): 2s-trans-

mentona (34,51%) y pulegona (28,62 %) y nerodilol (5,08%).

Fuente: Schmidt-Lebuhn (2005)


Figura 3: Variabilidad de la composicin terpnica.

23
No obstante lo anterior puede asegurarse la presencia de dos terpenos

mayoritarios en todos los aceites esenciales de la Minthostachys mollis:

la Pulegona y la Mentona (Schmidt-Lebuhn, 2009). Tomados

individualmente, las caractersticas de cada terpeno mayoritario son las

siguientes:

Mentona; es una cetona, de sabor spero y amargo, ms o menos

soluble en agua. Se origina por oxidacin de alcohol secundario y

reduccin de metionina. Existe una relacin con el mentol. A ms

mentol, menos Mentona y viceversa (Morales, 1973). Junto a la

Pulegona conforman el 75% de componentes terpnicos. Es mejor

conocido como constituyente de la Menta piperita. Posee un aroma

muy caracterstico por el cual es usado en perfumera. Adems posee

propiedades digestivas. En la figura 4a se muestra su estructura cclica

y su radical cetona. Su punto de ebullicin es 206 C; su gravedad

especfica 0,894; la rotacin ptica, -26 y el ndice de refraccin

1,4995 (Morales, 1973).

Mentol; se encuentra en pequeas cantidades. Es usado como

refrescante y contra el dolor de garganta. Posee un radical alcohol que

da al aceite el sabor y olor. Es estado puro se presenta en forma de

cristal hexagonal, incoloro y brillante. Es un alcohol terpnico

monocclico y saturado, posee tres tomos de carbono asimtricos.

Existe en dos formas L-mentol y D-mentol, siendo de mayor inters el

primero pues su olor es 3,3 a 3,5 veces mayor que el segundo, de

acuerdo a Morales (1973). En la figura 4b se muestra su estructura

qumica, unida a un radical hidroxilo. Su punto de fusin es 43-45C;

24
Punto de ebullicin 126 215C; Gravedad especifica 0,881; Rotacin

especifica -50. Se forma por reduccin de la mentona y la pulegona

(Morales, 1973).

a) b)
Fuente: Merck (2012), Merck (2012)2
Figura 4: Estructura qumica de la mentona y el mentol.
Pulegona; uno de los ms importantes terpenos de muchos aceites de

Minthostachys, es altamente txico en grandes cantidades, incluso

induce al aborto. Su toxicidad explica probablemente el efecto del

aceite contra pestes y parsitos. Esta sustancia es usada en

perfumera y como saborizante. Su estructura se muestra en la figura 5.

Carvacrol; esta es la tercera sustancia en importancia del aceite. El

ms importante de los terpenos de baja proporcin. Se lo conoce mejor

en el aceite de organo. Es muy requerido como sazonador, pues se lo

utiliza como ingrediente en la preparacin de las pizzas.

Fuente: Merck (20123).

Figura 5: Estructura qumica de la pulegona.

25
Linalol; empleado como sazonador y como insecticida. Se le encuentra

en pequeas cantidades.

Timol; como su nombre sugiere, este terpeno es mejor conocido en las

especies Thymus. Se usa como un antisptico.

Otros terpenos minoritarios son: limoneno, sabineno y pineno. El

consolidado de las estructuras qumicas se observa en la figura 6.

Fuente: Schmidt-Lebuhn (2005).

Figura 6: Terpenos principales del aceite esencial de mua.

Estos compuestos fueron identificados por mtodos cromatogrficos,

por ejemplo Cano et al (2008) identificaron los metabolitos presentes

en el aceite esencial de mua para estudiar su actividad antimictica in

vitro. Sus resultados se resumen en la tabla 4. Se encontraron 2

terpenos mayoritarios (pulegona y mentona). En la misma tabla

tambin se muestra el tiempo de retencin. En la figura 7 se aprecia el

cromatograma obtenido luego del anlisis realizado.

26
Figura 7: Cromatograma de aceite esencial de mua.

Fuente: Cano (2007).

Tabla 4: Datos cromatogrficos del aceite esencial de mua.

Metabolito Tiempo de retencin (min) Composicin (%)


Pulegona 13,20 36,88
Mentona 11,09 24,24
Limoneno 5,32 0,77
Mirceno Trazas
Mentol 12,8 No detectable
Fuente: Cano et al (2008).

Otras investigaciones muestran la cantidad de cada componente

terpnico mayoritario, como en la tabla 5:

27
Tabla 5: Principales terpenos en el aceite esencial de mua.

Fuente: 1, 2, 3: Fuertes y Mungua (2001); 4,5: Giza y Rincn (2007);

6: Cano (2007); 7: Zegarra (2010); 8: Chaquilla et al (2011); 9: Arauco

et al (2010) y 10: Azaa (2010).

Se nota claramente que la pulegona y la mentona son los primeros

compuestos terpnicos encontrados, seguidos, con mucha variabilidad,

del mentol, el Linalol y el limoneno. Respecto a los usos del aceite

esencial de mua, Schmidt-Lebuhn (2009) menciona que se utilizan

sus componentes terpnicos en perfumera; por su parte Morales

(1973) detalla su utilizacin como farmacutico, para cremas dentales,

jabones, perfumera, en confitera para elaboracin de chicles, cigarros,

licores, jaleas, helados, flan y queques o pueden ser destinados como

esencias aromatizantes. Se utilizan los compuestos terpnicos como

principios activos con fines medicinales en la produccin de antibiticos

que no daen al estmago, en jarabes para la tos y soluciones

antispticas superficiales (Aquino, 2007).

28
Cano (2009) y Cano et al (2008) estudiaron uno de los usos del aceite

esencial de mua en funcin a su actividad antimictica,

probablemente por los monoterpenos encontrados. Los terpenoides del

aceite esencial de mua, segn este estudio, afectan la actividad de las

enzimas catalizadoras a nivel de membrana, es decir interfieren en la

traslocacin de protones sobre la membrana. Ellos concluyen que el

aceite esencial de mua puede ser una alternativa teraputica a la

dermatomicosis; sin embargo se requerira evaluar una formulacin en

crema a diferentes concentraciones de aceite esencial (25 50%) y en

animales de experimentacin, para luego poder validar su posible uso

en humanos.

Debe destacarse que la mua posee diferentes quimiotipos, que

incluso el aceite esencial de una planta varia respecto a otra, an

perteneciendo a plantas cosechadas en el mismo lugar, esto debido a

la heterogeneidad de la mua y a su condicin silvestre. Para remediar

este problema se debera plantear la investigacin de los quimiotipos.

2.3. CARACTERIZACIN DE LOS ACEITES ESENCIALES.

Se realiza mediante la Cromatografa de gases (CG), un proceso mediante el

cual una mezcla es separada en sus componentes por medio de una fase

mvil gaseosa que pasa a travs de un absorbente slido fijo (Kirk et al,

1996). Sirve tanto para identificar como para cuantificar analitos (Calle y

Hernndez, 2006; Acosta et al, 2003; De los ngeles, 2008; Gonzales, 2004).

Su ventaja es la cantidad de muestra necesaria para analizar, que es de 10

g a 500g.

29
a) Descripcin de la tcnica:

Fase mvil: La fase mvil gaseosa proporciona un rpido equilibrio

entre las fases con mayor eficiencia en la obtencin de los anlisis. Los

gases ms utilizados son: nitrgeno, helio, hidrgeno y argn. La fase

mvil no debe interactuar con la fase estacionaria ni con la muestra,

debe tener bajo costo, ser compatible con el detector y tener alta

pureza. Para dar una mayor reproducibilidad al anlisis, la saturacin

del gas debe ser constante y debe ser controlada a travs de vlvulas

de aguja (Rivera, 2008).

Sistemas de inyeccin: La inyeccin se realiza generalmente con

microjeringas que contienen la muestra. El volumen inyectado no debe

superar la capacidad de la columna y entre ms pequeo sea el

volumen usado de la muestra mayor ser la eficiencia y la

reproducibilidad del anlisis. La temperatura aplicada debe ser

suficiente para la volatilizacin de la muestra.

Columnas: La columna consiste en un tubo largo que contiene la fase

estacionaria. Los materiales ms usados son el cobre, el acero, el

aluminio, el vidrio y el tefln. El material de la columna no debe

interaccionar con la fase estacionaria ni con la muestra.

Sistema de detectores: Las sustancias presentes en la muestra pasan

a travs de la columna, en donde son separadas y llegan al sistema de

deteccin. Con relacin a la selectividad, los detectores pueden ser

clasificados en universales y selectivos o especficos. Los detectores

universales miden la variacin de una propiedad del gas de arrastre

que sale de la columna mientras que los detectores especficos miden

30
una propiedad caracterstica de una determinada clase de sustancias.

Con relacin a la sensibilidad, los detectores cuya respuesta vara poco

por cambios en la velocidad de flujo de la fase mvil, son llamados

detectores sensibles de flujo de masa. En estos detectores la

sensibilidad se define como la relacin del rea de pico a la masa

inyectada. En los detectores sensibles a la concentracin, la respuesta

vara en funcin del flujo de la fase mvil y su sensibilidad se define

como el producto del rea del pico por el flujo de la fase mvil dividido

por la masa inyectada. La respuesta del detector debe ser lineal dentro

de un amplio intervalo de concentraciones. Este intervalo de

concentraciones se conoce como intervalo lineal dinmico y

corresponde a la diferencia entre la concentracin mxima del intervalo

lineal dinmico y la mnima concentracin del mismo y que debe

distinguirse de la seal de fondo del detector. El anlisis cuantitativo se

puede llevar a cabo gracias a la relacin directa que existe entre la

respuesta del detector y la concentracin de la muestra, siempre y

cuando la respuesta obtenida para la muestra se encuentre dentro de

ese intervalo (Rivera, 2008).

El detector registra el cambio de presin y esto sirve para comparar los

picos impresos, los cuales se dan en funcin a tiempos de retencin. El

tiempo de retencin es aquel que transcurre despus de la inyeccin

de la muestra para que el pico del analito alcance el detector. Su

smbolo es tR, (De los ngeles, 2008; Zorca et al, 2006). Luego, para

establecer el porcentaje de cada componente se recurre al mtodo de

normalizacin de rea, el cual se calcula dividiendo el rea de cada

31
componente entre el rea total del cromatograma y multiplicndolo por

100%, es decir:


% = 100

Respecto a la instrumentacin, la figura 8 muestra un diagrama

esquemtico de un cromatgrafo de gases. Consiste en 5 partes

principales: un suministro de gas vehculo (la fase mvil) con

reguladores de presin y medidores de flujo; el sistema de inyeccin; la

columna cromatogrfica y la estufa; el detector y sus amplificadores

electrnicos; el graficador y otros aditamentos para la presentacin de

datos (Kirk et al, 1996).

Fuente: Etxebarria y Fernndez (2006).

Figura 8: Partes principales de un cromatgrafo de gases.

b) Cromatogramas

Es la representacin de la respuesta o seal del sistema de deteccin

continuo o discontinuo en funcin del tiempo, volumen del eluyente o

distancia en el lecho cromatogrfico. El cromatograma toma la forma de

un registro en la carta de un registrador o plotter o un nmero

determinado de datos tomados por un microcomputador despus de la

correspondiente transformacin. Segn el tipo de detector continuo, el

32
cromatograma puede ser diferencial, cuando la seal solo se origina al

pasar analito por el mismo, e integral, cuando la seal se acumula, como

se aprecia en la figura 9.

Fuente: Rivera (2008).

Figura 9: Tipos de Cromatogramas: (1) Diferencial, (2) Integral.

El cromatograma contiene la informacin analtica relativa a la muestra

(complejidad: nmero de picos, deteccin cualitativa y/o cuantitativa de

uno o varios componentes). Los parmetros que definen el

comportamiento cromatogrfico de un soluto en un sistema

cromatogrfico de elucin, y que sirve de base para los clculos analticos

se muestran en el esquema de la Figura 10, como el tiempo de retencin

(TR), volumen de retencin (VR), tiempo muerto (TM), volumen muerto

(VM), rea (A), altura del pico (h) y base del pico (w).

33
Fuente: Rivera (2008).

Figura 10: Parmetros que definen un cromatograma.

En el ajuste de datos, el software realiza en primer lugar un ajuste de

datos, con la finalidad de eliminar el ruido y permitir el correcto

funcionamiento del algoritmo de integracin.

En la integracin de los picos, el algoritmo de integracin del

cromatograma es capaz de distinguir diferentes casos de picos

cromatogrficos en los cuales la lnea de base se fija de distinta manera.

Para ello se tiene en cuenta el valor de la seal, su derivada (D1) y su

derivada segunda (D2). Se considera detectado el comienzo del pico

cuando la derivada primera de la seal supera un valor prefijado (D1 > Ls)

punto 2 de la Figura 11. Cuando la derivada pasa por cero siendo la

derivada segunda negativa, se detecta el mximo (D1=0, D2<0) Punto 3

de la Figura 11. El final de pico se detecta cuando la derivada segunda es

positiva y la derivada primera supera el valor prefijado (D1>Li) Punto 4 de

la Figura 11. Los valores de Ls y Li pueden ser variables a lo largo del

cromatograma, lo cual permite compensar el efecto de ensanchamiento

34
de los picos. El tiempo de retencin que identifica al componente es aquel

en el cual ocurre el mximo, punto 3 de la Figura 11. La lnea de base es

una recta que une los puntos 2 y 4. Para calcular el rea se resta el rea

bajo la lnea de base del rea bajo la curva de la seal (Rivera, 2008).

Fuente: Rivera (2008).

Figura 11: Principio para la deteccin de los picos.

Picos superpuestos: En el caso de dos o ms picos fusionados o

superpuestos se traza una lnea de base entre el comienzo del primero y

el fin del ltimo. El criterio usual es trazar rectas verticales desde los

valles hasta la lnea de base comn y en base a esta divisin se asignan

las reas.

2.4. EXTRACCIN DE ACEITES ESENCIALES

Para extraer aceites esenciales de la mua se utiliza la destilacin por

arrastre de vapor (Castaeda, 2008; Cerruti y Neumayer, 2004; Martnez,

2003). La muestra es encerrada en una cmara inerte y sometida a una

corriente de vapor de agua sobrecalentado (Cano et al, 2008). Por efecto de

la temperatura del vapor en un cierto tiempo, el tejido vegetal se rompe

35
liberando el aceite esencial contenido y ste a su vez, debido a su alta

volatilidad es arrastrado por el vapor de agua hacia el condensador para ser

enfriada y separada, debido a su inmiscibilidad y a la diferencia de

densidades y viscosidad con el agua (Castaeda, 2008). El principio bsico

de la destilacin de dos lquidos heterogneos, como el agua y un aceite

esencial, es que cada uno ejerce su propia presin de vapor como si el otro

componente estuviera ausente. Cuando las presiones de vapor combinadas

alcanzan la presin del recinto, la mezcla hierve. Aceites esenciales con

puntos de ebullicin hasta 300C, evaporarn a temperaturas cercanas al

punto de ebullicin ms alto que el agua (100C).

La destilacin por arrastre de vapor se realiza en tres etapas (Camacho, et al

2011): Calentamiento, extraccin y enfriamiento. Cada una de ellas involucra

diferentes fenmenos de transferencia de calor, adicionalmente en la etapa

de extraccin se presenta transferencia de masa. En la Etapa de

calentamiento; se suministra vapor de agua desde la caldera hacia el

reactor, hasta cuando comienza a evaporarse los aceites y son entonces

arrastrados hacia el condensador; es all donde el vapor de agua transfiere

calor latente al material vegetal; La Etapa de extraccin se inicia en el

momento en que comienza la produccin de condensado de agua-aceite;

aqu se determina el tiempo necesario para la extraccin. La transferencia de

masa en esta etapa se refiere a la cantidad de aceite que es arrastrado por

el vapor. En la Etapa de enfriamiento; se condensan los vapores de agua-

aceite que provienen del destilado, despus se enfra para separar las fases

y obtener el aceite por decantacin (Castaeda, 2008).

36
III. MATERIALES Y MTODOS

3.1. LUGAR DE EJECUCIN.

La investigacin se desarroll en las instalaciones del laboratorio de qumica

de alimentos, de la Facultad de Ingeniera en Industrias Alimentarias, en la

Universidad Nacional del Centro del Per Huancayo; y en el laboratorio de

investigacin fisicoqumica de la Facultad de Ciencias, en la Universidad

Nacional de Ingeniera, Lima.

3.2. MATERIA PRIMA.

Mua (Minthostachys mollis) en estado de prefloracin, del anexo de

Tulumayo, distrito de Comas, provincia de Concepcin, departamento Junn.

3.3. EQUIPOS Y MATERIALES.

3.3.1. Equipos e instrumentos.

Balanza analtica, Adventurer OHAUS. Capacidad, 310 g. precisin

0,01 g.

Balanza comercial, Cavory, Capacidad, 15 kg.

Termmetros, 150C

37
Higrmetro Digital. IN: -10C ~ + 50C; OUT: -50C ~ + 70C;

Precisin: 1C; Humedad: 20% ~ 99% 5%.

Secadora de bandejas, 30 100 C

Computadora Samsung.

Cromatgrafo de gases, Varian 450-GC. Columna Supelcowax 10,

30 mm0,53 mm.

Mini carta colorimtrica, flower council Holland, RHS.

Refractmetro. ABBE ptico Grados Brix 0 - 95 / IR-1700

Temporizador. Control Company, 4 tiempos.

Olla a presin Oster, Capacidad, 10 L.

Cocinilla elctrica.

3.3.2. Materiales varios de laboratorio

Probetas, 50 y 100 mL

Matraz erlenmeyer 50 y 100 mL

Matraz kitazato, 250 mL

Vasos de precipitacin 10, 50, 100 y 250 mL

Embudo de vidrio.

Pinzas metlicas.

Cpsulas.

Balones, 250 mL

Baln con vstago, 500 mL.

Baln de 3 picos, 500 mL.

Equipo refrigerante.

Campana desecadora.

Mangueras de goma y silicona.

38
Soportes universales con accesorios.

Peras de decantacin, 500mL.

Rejilla de asbesto.

Picnmetro.

Fiola de 100 mL y 50 mL

Pipetas, 1, 5, 10 mL

Succionadores.

Varillas de vidrio.

Micro jeringa, 1 mL.

Pizetas.

Crisoles.

Papel filtro Whatman.

Tubos capilares de vidrio.

3.3.3. Reactivos

Alcohol etlico.

Hexano, grado CG

Helio, gas transportador, grado CG

Agua destilada p.a. Trifarma.

Cloruro de sodio al 10%. Lab. Sanderson S.A.

3.4. MTODOS DE ANLISIS.

3.4.1. Materia prima.

Identificacin de la planta recolectada, segn el mtodo de Jones

(1988). La determinacin de color de las hojas se realiz

39
comparndolas con las escala de colores de la Mini carta, Flower

Council Holland, RHS (UPOV, 2012).

Determinacin de humedad inicial y final de las hojas de mua,

segn el mtodo gravimtrico de diferencia de peso con el extracto

seco, AOAC.

3.4.2. Aceite esencial.

Anlisis organolptico de los aceites esenciales extrados. Se utiliz

el mtodo adaptado de Dixit (2006).

Determinacin del rendimiento, el ndice de refraccin por el mtodo

refractomtrico y la densidad especfica a 20 C.

Composicin de los principales terpenos de los aceites esenciales

mediante cromatografa de gases, por el mtodo de normalizacin

de rea, segn Fuertes y Mungua (2001).

3.5. METODOLOGA EXPERIMENTAL

3.5.1. Acondicionamiento y secado de la materia prima.

Se recolectaron 12 kg de plantas de mua fresca. Con ayuda de unos

guantes se separaron las hojas medianas y grandes del tallo, para

evitar el contacto directo de las manos con las hierbas. Del total de

hojas, se utiliz 3 kg para la extraccin de aceite esencial de hojas de

mua fresca y se utiliz 9 kg para el secado posterior. En todas estas

operaciones se protegi a la mua de la luz directa del sol.

Se realiz la determinacin de humedad inicial y final de las hojas de

mua, despus del secado, segn el mtodo de la estufa de aire de

Hart y Fisher (1971). El secado se realiz a una temperatura media de

40
35 C para disminuir la humedad (Morales, 1973). Esta operacin se

efectu en un secador de 5 bandejas.

Los parmetros de secado fueron los siguientes:

T de secado : 35C

Tiempo : 7 horas

Bandejas utilizadas : 3 (0,59 1,06) m2

Dimensiones de las hojas : Ancho, 2,1 0,57 cm

: Largo, 3,5 0,67 cm

Densidad de carga : 0,356 kg/m2.

rea (A) : 0,6254 m2

S (cantidad de carga) : 0,2229 kg

3.5.2. Destilacin por arrastre de vapor de agua.

Se realiz la destilacin por arrastre de vapor, de acuerdo al mtodo de

Camacho et al (2011) con modificaciones. Se hicieron ensayos

preliminares de extraccin de aceite esencial de mua molida

utilizando un baln de tres bocas unido a un baln con vstago, ambos

de 500 mL de capacidad, para hacer la primera destilacin. El sistema

se conect a un equipo refrigerante de bolas, conectado a una fuente

de agua potable. Se utiliz una cantidad de mua de 53,673 g. El

tiempo de extraccin fue 90 minutos a una temperatura de 84 C.

(Camacho et al, 2011 y Aquino, 2007). Sin embargo el rendimiento fue

muy bajo por lo que se procedi a montar un sistema de destilacin

mediante una olla a presin de 10 litros, la cual cumpla la funcin de

autoclave, acoplada a un sistema refrigerante. A la salida de ste se

41
coloc una probeta de 100 mL para medir la cantidad de destilado

obtenido en cada extraccin. Obtenidos los datos del volumen

destilado, se realiz otra extraccin en las mismas condiciones. En

este caso al refrigerante se una a una pera de decantacin de 500 mL,

para recibir la destilacin. La pera contena una solucin de NaCl al

10% (Camacho et al, 2011); la cantidad de NaCl a aadir est en una

proporcin 1:30 (solucin salina - agua/aceite). Los parmetros

utilizados en ambas extracciones fueron los siguientes:

Carga total (fresca) : 0,950 kg

Carga total (seca) : 1,010 kg

T de entrada del agua refrigerante : 27 C

T de salida del agua refrigerante : 30 C

Caudal refrigerante : 10 mL H2O/s

3.5.3. Caracterizacin fisicoqumica del aceite esencial.

Para el anlisis organolptico se utiliz el mtodo adaptado de Dixit

(2006), el cual const de una inspeccin visual del aceite comparado

con otros resultados en trminos de color, viscosidad y presencia de

impurezas. Para la fragancia se coloc una tira de papel absorbente a

una profundidad de 1 cm; se realiz la primera impresin llevando al

olfato la tira de papel, se repiti la operacin despus de 4 o 5 minutos,

se realiz una vez ms a los 15 minutos y finalmente en 24 horas.

Estos datos fueron comparados y registrados. El proceso para el sabor

fue similar.

42
El rendimiento (RAE) se determin por el mtodo gravimtrico

volumtrico mediante la siguiente expresin (Jurez et al, 2010):

%Rae = Vol.ae (mL) / Pmuestra (g) x 100

Donde:

Vol.ae : Volumen del aceite esencial obtenido; en mL.

Pmuestra: Peso de la muestra a destilar; en g.

Se determin el ndice de refraccin y la densidad relativa (a 20 C

ambos). Se calibr el refractmetro con agua destilada hasta obtener

valores constantes de 1,333, haciendo uso de las ruletas? del

refractmetro. Seguidamente se realiz la lectura del ndice de

refraccin del aceite esencial. La densidad relativa se determin

utilizando jeringas de 1 mL.

3.5.4. Caracterizacin cromatogrfica.

La caracterizacin cromatogrfica para determinar los componentes

terpnicos (mentona y pulegona) y su proporcin en el aceite esencial,

se llev a cabo en las instalaciones del laboratorio de fisicoqumica de

la Facultad de ciencias de la Universidad Nacional de Ingeniera, en

Lima, Per. Se utiliz aceite esencial solubilizado, 0,1 mL aceite

esencial / 10 mL hexano (Zegarra, 2010; Fuertes y Mungua, 2001). La

caracterizacin se realiz por duplicado para cada tipo de aceite. Los

parmetros del Cromatgrafo Varian 450-GC, fueron los siguientes:

Columna: SupelcowaxTM -10 (Poli etilenglicol); 30 m con dimetro

interior = 0,53 mm ID y espesor de fases estacionaria, 1 micrometro.

43
Temperatura de columna: temperatura inicial 70 C con rampa,

4C/min y temperatura final a 160 C durante 25 minutos. Tiempo

total, 48 minutos.

Temperatura de inyeccin: 220 C.

Temperatura del detector FID: 190 C.

Gas vehculo: Helio

Flujo del gas: 5mL/min

Flujos al detector FID (ionizacin a la llama):

-Make-up (helio) : 25mL/min.

-Combustin (H2) : 30mL/min.

-Combustin (aire) : 300mL/min.

Dilucin del aceite esencial de mua: 150 L de aceite en 5 mL de

hexano, grado CG.

Volumen de inyeccin al cromatgrafo: 2L con split 1:20.

Los cromatogramas se construyeron con el programa GALAXIE

para equipo 450-GC Serie GC0907B060.

3.5.5. Descripcin del diagrama de flujo.

Recepcin. La mua fue recibida en un ambiente libre de humedad

y polvo, se revis que la planta est desarrollada, de color verde y

sin signos de putrefaccin y descomposicin.

Limpieza. Se separ de la mua restos de paja, pasto u otras

especies, dejndola libre de impurezas (tierra) y eliminando toda

planta con principios de descomposicin.

44
Seleccin. Se seleccionaron las hojas medianas y grandes, luego

se desecharon los tallos, as como las hojas marchitas.

Pesado. Se realiz al momento de la recoleccin, seleccin,

secado, molienda y tamizado. Se llev a cabo en una balanza de

precisin y en una balanza analtica, segn fue el caso.

Secado. Se realiz en una secadora de bandejas a 35 C por 7

horas, para retirar el agua libre hasta un 8-10 %.

La extraccin de los aceites esenciales se realiz mediante

destilacin por arrastre de vapor de agua a una temperatura de

84C, por 90 minutos.

Para separar el aceite del agua florentina, se aadi una solucin

de cloruro de sodio al 10%. Se dej reposar por 20 horas y luego se

procedi a decantar la mezcla. La pera de decantacin se cubri

con plsticos negros para evitar la accin fotoltica sobre el aceite

esencial.

Envasado. En frascos mbar hermticamente cerrados y sellados

con silicona.

Almacenamiento. Finalizado el proceso, se almacen el aceite

esencial en frascos de vidrio mbar, a una temperatura de 4C, para

su anlisis posterior.

El diagrama de flujo se muestra en la figura 12.

45
Mua

Recepcin

Limpieza Desperdicios

Hojas de mala
Seleccin
calidad

Agua Agua
Secado 35 C refrigerante Extraccin refrigerante
27 C 30 C

Agua Agua
refrigerante Extraccin refrigerante NaCl Agua
Decantacin
27 C 30 C 10 % salina
=20 h

NaCl Agua
Decantacin
10 % salina
=20 h

Envasado

Almacenado 4 C

Figura 12: Diagrama de flujo experimental de la extraccin de aceite


esencial.

46
3.5.6. Diseo experimental

Para determinar cul de los dos tipos de hojas produjo mayor

contenido de pulegona se us un Diseo Completamente Aleatorio

(DCA) unifactorial. El factor evaluado fue la humedad H1=11,56 %

(hojas frescas) y H2= 7,81 % (hojas secas). Los datos obtenidos

fueron analizados mediante un Anlisis de Varianza (ANVA) con un

nivel de confianza de = 0,05. Seguido de una prueba de

comparaciones mltiples de Duncan. Para la comparacin entre

componentes se us el siguiente modelo aditivo lineal, en el cual la

variable respuesta es la cantidad de mentona y pulegona contenida

en el aceite esencial de mua, mientras que la variable

independiente fue el tipo de hoja (fresca y seca):

= + +

Donde:

: Variable respuesta, rendimiento de mentona y pulegona.

: Media general

: Variable independiente, tipo de hojas de mua (fresca y seca)

: Error experimental

3.5.7. Anlisis estadstico.

El procesamiento de los valores de porcentaje de rea de los

principales compuestos terpnicos del aceite esencial de mua,

fueron analizados mediante un ANVA, se realiz con el programa

estadstico del software Statistical Analysis System (SAS) v. 8.0

47
IV. RESULTADOS Y DISCUSIONES

4.1. IDENTIFICACIN DE LA PLANTA.

Las caractersticas identificadas de la planta, de acuerdo a los

procedimientos de Jones (1988) y la UPOV (2012), se resumen en la tabla

16, anexo I. Estos datos fueron contrastados con los reportes de las

investigaciones de Seguil (1990) y Schmidt-Lebuhn (2009). Aquino (2007)

confirma los resultados presentados al afirmar que la mua es un arbusto

frondoso, con tallos ramificados. Respecto a los bordes de las hojas, todos

los investigadores mencionan que las hojas de mua poseen forma de

sierra. Schmidt-Lebuhn (2009) menciona que la mua tiene hojas pequeas

y grandes de 2 a 5 cm. Los resultados presentados se encuentran dentro del

rango establecido por los botnicos. Las fotos de estos resultados se hallan

en el anexo I.

48
4.2. DESTILACIN.

Las tablas 6 y 7 muestran los datos del comportamiento de la destilacin, en

funcin a la temperatura de extraccin y el volumen destilado, para ambas

extracciones, los cuales fueron graficados. El comportamiento de la

destilacin puede verse en las figuras 13 a la 16. En ellas se aprecia el

incremento de la temperatura hasta alcanzar un valor constante.

Tabla 6: Tabulacin de datos obtenidos en la destilacin (hojas frescas).

Destilado Tiempo
Lectura T (C) Destilado (mL)
acumulado (mL) (min)
1 27 0 0 2
2 29 0 0 4
3 41 0 0 6
4 48 0 0 8
5 60 0 0 10
6 70 0 0 12
7 80 0 0 14
8 83 0 0 16
9 83 1 1 18
10 84 1,2 2,2 20
11 84 1,1 3,3 22
12 84 3,6 6,9 27
13 84 1,2 8,1 32
14 84 3,8 11,9 37
15 84 4 15,9 42
16 84 6,6 22,5 47
17 84 6,8 29,3 52
18 84 8,2 37,5 57
19 84 7,2 44,7 62
20 84 6 50,7 67
21 84 5,5 56,2 72
22 84 7,2 63,4 77
23 84 7,8 71,2 82
Total 71,2 mL

49
Figura 13: Comportamiento de la extraccin de aceite esencial de mua fresca.

Figura 14: Comportamiento total de la extraccin de aceite de hojas frescas.

50
Tabla 7: Tabulacin de datos obtenidos en la destilacin (hojas secas).

Destilado
Temperatura Destilado Tiempo
Lectura acumulado
(C) (mL) (min)
(mL)
1 26 0 0 2
2 30 0 0 4
3 42 0 0 6
4 48 0 0 8
5 59 0 0 10
6 71 0 0 12
7 78 0 0 14
8 83 0 0 16
9 83 0 0 18
10 84 0 0 20
11 84 3 3 22
12 84 5 8 25
13 84 8 16 30
14 84 6 22 35
15 84 10 32 40
16 84 12 44 45
17 84 14 58 50
18 84 18 76 55
19 84 10 86 60
20 84 11 97 65
21 84 17 114 70
22 84 18 132 75
23 84 18 150 80
24 84 18 168 85
Total 168

51
Figura 15: Comportamiento de la extraccin de aceite esencial de mua seca.

Figura 16: Comportamiento total de la extraccin de aceite de hojas secas.

52
En las figuras 13 y 15 se pueden confrontar las velocidades de destilacin

(mL/min) y el incremento de la temperatura, mostrando el comportamiento

de la destilacin para ambas extracciones. Este fenmeno concuerda con

las cuatro etapas de la ebullicin (Geankoplis, 1995). A partir de los 83 C,

empez a generarse las primeras gotas de destilado, luego progresivamente

aument el volumen hasta alcanzar un tope, descender y nuevamente volver

al valor anterior. Estos datos fueron comparados con los datos de extraccin

de Aquino (2007), los cuales confirman los resultados presentados aqu.

Para plantas jvenes hay mayor volumen de agua florentina, por ende mayor

aceite esencial. El caso es inverso para plantas adultas. En ambos casos los

resultados muestran un comportamiento discontinuo respecto al volumen

destilado.

El tiempo de extraccin de 90 minutos (para ambas extracciones, hojas

frescas y secas) fue adecuado para limitar los problemas tcnicos, pues a

menores valores no se extrae todo el aceite esencial de la mua y a valores

mayores, se extraen todos los compuestos y a la vez se descompondran los

ms termolbiles (Aquino, 2007). Tambin otros investigadores evaluaron

los tiempos ptimos de extraccin (Morales, 1973; Arauco et al, 2010;

Beltrn, 1983). Sus resultados revelan que el tiempo ptimo de extraccin

tambin se encuentra condicionado por la parte de la planta de la cual se

extraer el aceite esencial.

Ambas extracciones mostraron un comportamiento ordinario en la

destilacin.

53
4.3. ANLISIS ORGANOLPTICO.

Las principales caractersticas organolpticas de ambos aceites esenciales

se muestran en la tabla 8:

Tabla 8: Resultados organolpticos del aceite esencial.

Aceite esencial de hojas Aceite esencial de hojas


Caracterstica
frescas secas
Translcido, ligeramente
Color Ligeramente translcido
amarillo

A menta, ligeramente
Olor A menta, Muy atractivo
atractivo

Sabor Picante Picante

Aspecto Lquido, fluido, aceitoso Lquido fluido, aceitoso.

Estos resultados fueron comparados con los principales reportes de otras

investigaciones referidas al mismo tema. Las principales diferencias

encontradas en ambos tipos de aceite esencial fueron la tonalidad y el olor.

El aceite esencial proveniente de las hojas secas mostr un color

ligeramente ms claro (esto se ver confirmado al evaluar el ndice de

refraccin de ambos aceites). La diferencia en el olor, se explicar tambin

al analizar la composicin de ambos aceites.

Beltrn (1983) reporta los siguientes resultados organolpticos: el color del

aceite esencial es amarillento, el olor semejante al mentol, el sabor picante y

el aspecto lquido. Estos datos coinciden con los de Aquino (2007) y Fuertes

y Mungua (2001). Morales (1973) difiere en su resultado sobre el olor; El

olor del aceite esencial de las hojas secas es ligeramente menos agradable

que el procedente de hojas frescas lo cual se debe al tiempo de destilacin,

54
pues, segn Aquino (2007), el tiempo para la extraccin de aceite esencial

de hojas secas debe ser menor y en las extracciones se utilizaron tiempos

iguales para ambas extracciones. Esto es explicado por la mayor porosidad

de las hojas secas lo cual incrementa la transferencia de masa y la

extraccin de aceite esencial. De esta manera, un tiempo prolongado de

extraccin produce la descomposicin de algunos compuestos o la aparicin

de componentes indeseables. Esto se ver comprobado al presentar los

cromatogramas de cada tipo de aceite extrado. Otro factor que incide en el

olor ligeramente agradable del aceite esencial proveniente de hojas secas,

es la posible polimerizacin de algunos terpenos, como consecuencia directa

de la deshidratacin (Fellows, 1994).

4.4. ANLISIS FSICOS.

Se reporta el rendimiento, ndice de refraccin y la densidad relativa de

ambos aceites. Los rendimientos son 0,267 0,128 % y 2,505 0,025 %

para el aceite esencial de hojas frescas y secas, respectivamente.

Morales (1973) explica que humedades bajas aumentan la porosidad y

facilitan la transferencia de masa en el proceso de la extraccin. En el caso

de la mua seca se extrajo el agua libre, lo cual genera un cuerpo poroso.

Esto incrementa la difusividad del vapor de agua, arrastrando mayor

cantidad de aceite esencial. Otros investigadores obtuvieron similares

resultados. Para el aceite esencial proveniente de hojas frescas tenemos los

siguientes rendimientos, todos ellos en una relacin v/p: Fuertes y Mungua

(2001): 0,27 % (Tarma), 0,21 % (Huaraz), 0,21 % (Pampas), Aquino (2007):

1,03 %. Para rendimientos de aceites esenciales provenientes de hojas

55
secas tenemos los siguientes datos: Morales (1973): 2,13 %, Aquino (2007):

2 2,5 % (UNCP, FIQ), Arauco et al (2010): 0,6 % (Extraccin soxhlet), para

Camacho et al (2011) el rendimiento del aceite esencial extrado es 0,1 a 1%

del peso seco de la planta. Como se ve, los resultados obtenidos en la

presente investigacin concuerdan con los reportados en la literatura

cientfica.

Se determin el ndice de refraccin y la densidad relativa de ambos tipos de

aceites. Los resultados se incluyen en la tabla 9.

Tabla 9: IR y densidad relativa del aceite esencial.

Hojas frescas Hojas secas

IR Densidad relativa IR Densidad relativa

1,4765 0,0002 0,92 0,01 1,4733 0,0002 0,86 0,01

Respecto al ndice de refraccin, podemos comprobar que los resultados

son muy similares a los reportados por la literatura cientfica. Por ejemplo

Fuertes y Mungua reporta valores desde 1,4725 hasta 1,4746, por otro lado

el resultado de Morales (1973) fue 1,469, finalmente el mayor valor

encontrado en las investigaciones consultadas es de Beltrn (1983) con un

valor de 1,4983. A mayor ndice de refraccin el aceite contendr mayores

terpenos bencnicos, a la inversa, mientras sea menor el aceite poseer

mayores compuestos monoterpnicos (Beltrn, 1983). Segn esto el aceite

esencial de las hojas frescas posee ligeramente ms compuestos

terpnicos. Esto comprobara qumicamente que el secado si altera la

composicin del aceite, incrementando la cantidad de compuestos

terpnicos hidrolizados. Agrelo et al (1994) demostraron que un ndice de

56
refraccin cercano a 1,48 muestra que el aceite esencial presenta

compuestos oxigenados. En efecto, ambos tipos de aceites poseen un valor

cercano a ese, lo cual indica la presencia de compuestos terpnicos

oxigenados, entre ellos compuestos cetnicos y alcohlicos. Estos

resultados tambin se ven refrendados por los datos organolpticos

presentados anteriormente.

El aceite esencial de las hojas frescas posee mayor densidad relativa. La

literatura cientfica menciona que valores mayores a 1,00 indican la

presencia de terpenos aromticos, nitrogenados y azufrados; en cambio,

valores menores, incluso cercanos a 0,840, atestiguan la presencia de

hidrocarburos aromticos (Morales, 1973). Estos datos muestran que el

aceite esencial proveniente de hojas secas posee mayores terpenos

oxigenados. Ambos resultados (IR y densidad relativa) comprueban la

presencia de compuestos terpnicos en mayor cantidad, en el aceite

esencial de hojas secas. A fin de comparar los resultados presentados en la

presente investigacin y compararlos con otros estudios mencionamos el

trabajo de Aquino (2007) con un valor de 0,852, el ms bajo de la literatura;

por otro lado, los ms altos valores corresponden a los estudios de Beltrn

(1983) y Morales (1973) con 0,9868 y 0,92, respectivamente. Los IR de este

estudio no escapan del rango permitido para aceites esenciales (1,4), ni las

densidades relativas.

4.5. CARACTERIZACIN CROMATOGRFICA.

Los cromatogramas del aceite esencial de la mua proveniente de hojas

frescas y secas, se muestran en las figuras 17 y 18, respectivamente.

57
Figura 17: Cromatograma del aceite esencial (Mua fresca).

58
Figura 18: Cromatograma del aceite esencial (Mua seca).

59
Respecto a los terpenos mayoritarios totales, es decir aquellos cuya rea

supera el 1 %. Cano (2007), Zegarra (2010), Azaa (2010) y Chaquilla et al

(2011) encontraron que el principal terpeno del aceite esencial de mua fue la

pulegona, en cambio Giza y Rincn (2007); menciona en un estudio que la

mentona es el principal terpeno del aceite esencial.

La tabla 10 muestra la cantidad de otros terpenos mayoritarios encontrados

en ambos aceites esenciales obtenidos y la tabla 11 el tiempo de retencin

encontrado. Segn los reportes de Fuertes y Mungua (2001), podemos

afirmar que el terpeno 8 es un epxido (3-oxatriciclo [4.1.1.O-2,4] octano, 2, 7,

7-trimetil), por el tiempo de retencin similar. Este grupo es muy inestable,

tiene mucha tensin angular y puede abrirse con facilidad frente a muchos

reactivos, incluso frente a protenas, cidos nucleicos y otros metabolitos del

organismo humano. Todas estas caractersticas le confieren propiedades

mutagnicas.

Tabla 10: Porcentaje de los terpenos encontrados en el aceite esencial.

% rea
N
Fresco Seco
1 1,032 1,164
2 1,285
3 2,373 2,483
4 5,327 5,551
5 2,671 2,653
6 3,785 3,73
7 1,026
8 1,869

60
Tabla 11: Tiempo de retencin de los terpenos encontrados en el aceite

esencial.

Tiempo
N
Fresco Seco

1 5,785 5,75

2 12,96

3 14,27 14,25

4 15,71 15,7

5 18,735 18,72

6 19,395 19,38

7 20,97

8 22,51

En la figura 19 y 20 se puede ver la variacin de los terpenos en ambos

aceites, exceptuando a la mentona y la pulegona. En la figura 21, se distingue

la variacin de los terpenos mayoritarios.

61
Figura 19: Porcentaje de terpenos hallados (Mua fresca).

Figura 20: Porcentaje de terpenos hallados (Mua seca).

62
Los cromatogramas tabulados se hallan en el anexo II. En ambos

cromatogramas presentados se distingue un pico que supera a todos, el cual

pertenece al solvente (hexano grado GC) y no a un componente especfico. El

aceite esencial proveniente de hojas frescas contiene 46 componentes, en un

intervalo de 24 minutos, y de hojas secas contiene 55 componentes, en un

intervalo de 33 minutos, aunque los cromatogramas realizados por duplicado

muestren una ligera variacin. Estos resultados fueron comparados con los

datos reportados por Fuertes y Mungua (2001), Giza y Rincn (2007), Cano

et al (2008), Cano (2007), Azaa (2010), Zegarra (2010), Maquera et al

(2009), Carhuapoma et al (2009), Chaquilla et al (2011) y Calixto (2006) y se

comprueba similitud entre los principales componentes terpnicos

encontrados.

En la literatura cientfica referida al aceite esencial de mua, los principales

componentes encontrados son la pulegona, la mentona, el mentol, el

limoneno y otros. Alkire et al (1994) encontraron 19 componentes, entre los

cuales se hallan la mentona, la pulegona y el limoneno. Fuertes y Mungua

(2001) utilizaron el mismo tipo de columna y similares parmetros de anlisis

a los realizados en la presente investigacin (muestra, 0,1 mL en 10 mL de

etanol; Columna: Supelcowax 10, 30 mm 0,53 mm 0,5 mm; Temperatura del

inyector: 190 C; Temperatura del horno: 70 C 160C (4/min); Gas

transportador: helio; Temperatura del detector: 230C) y obtuvieron los

siguientes compuestos: 1-tetradeceno (24,13 %), 2S-trans-Mentona (23 y 41

%), Pulegona (16 y 28 %). La diferencia entre la cantidad de compuestos

terpnicos hallados y los reportados por Fuertes y Mungua (2001) se explica

63
por el origen distinto de la mua, tambin por la diferencia en la temperatura

del detector FID (40C de diferencia) y en la temperatura del inyector (30 C

de diferencia). An as es posible comparar los tiempos de retencin en

ambos anlisis. La 2S-trans-mentona posee un tiempo de retencin promedio

de 15,95 min., mientras que la pulegona tiene un tiempo de retencin de

21,59 min. En la presente investigacin los tiempos son 12,2 y 17,19 min,

respectivamente, por tanto se aprecia similitud en los tiempos de retencin de

la mentona y la pulegona. Cano (2007) tambin utiliza el mismo tipo de

columna para elucidar el aceite esencial de mua. En su investigacin la

temperatura de inyeccin y del detector FID tambin vara 30C respecto de

nuestros parmetros. Sus resultados muestran valores menores que los

presentados aqu. Para la pulegona y la mentona tenemos: 13 min y 11 min,

respectivamente.

Resultado similar al reportado por Calle et al (1994), segn los cuales la

cantidad de pulegona y mentona es, 30,2 % y 29,2 % respectivamente. Los

compuestos mayoritarios identificados por el cromatgrafo en el presente

estudio son la Pulegona y la 2S-Trans-Mentona o mentona, (Chemicalize,

2012) para ambos tipos de aceite. Los estudios de Rojas y Usubillaga (1995)

reportan 28 componentes en el aceite esencial de Minthostachys mollis, en el

cual la cantidad de pulegona ascenda a 75,2 79,3 %. El ms alto

componente es la pulegona, segn el reporte de Fournet et al (1996). El

mismo resultado dio Marriotta et al (2001). Se encuentra mayor pulegona en

plantas jvenes (Osorio, 2009). Emin et al (2004) informa que en las Labiatae

el componentes mayoritario es la pulegona (66,55 %) y la mentona (9,59%).

Esto se debe al hecho de que la mayora de las labiadas poseen pulegona en

64
mayor proporcin que los dems componentes (Perry, 1921). En general, las

plantas labiadas, poseen ms cantidad de pulegona, respecto a la mentona.

Los resultados de tiempo de retencin y rea de la pulegona y mentona se

muestran en las tablas 12 y 13. Otros investigadores encuentran resultados

similares, como Gonzlez et al (2011) que, utilizando la misma columna, pero

diferentes parmetros cromatogrficos encontraron tiempos de retencin de

25,73 min y 18,68 min, para la pulegona y la mentona, respectivamente. Estos

valores, difieren poco de los presentados, pero muestran el mismo orden de

aparicin en el cromatograma.

Tabla 12: Tiempo de retencin y % de rea de terpenos mayoritarios de Mua

fresca.

Parmetros Pulegona Mentona


Tiempo de retencin (min) 17,19 12,215
% rea 45,036 0,557 30,168 0,732

Tabla 13: Tiempo de retencin y % de rea de terpenos mayoritarios de Mua

seca.

Parmetros Pulegona Mentona


Tiempo de retencin (min) 17,19 0,01 12,2 0,01
% rea 52,321 0,042 24,818 0,181

Otros investigadores utilizando diferentes tipos de columna presentan

resultados similares. Giza y Rincn (2007) tiene para la pulegona y la 2S-

trans-mentona, 21,61 min y 19,20 min, respectivamente. Para Zegarra (2010)

los tiempos son: pulegona, 23,4 min; mentona, 18,2 min. Finalmente, para

65
Chaquilla et al (2011), los tiempos de retencin para estos dos componentes

mayoritarios son mucho menores: pulegona, 8 min y mentona, 6,6 min.

Figura 21: Comparacin porcentual de los principales terpenos de ambos

aceites esenciales.

Se relacionaron y representaron grficamente los resultados de la pulegona y

la mentona. En la figura 22 se aprecia el contenido promedio de la pulegona

en ambos aceites. Es notorio que la cantidad de este componente se

incrementa en la muestra seca en un 16 %.

66
Figura 22: Porcentaje de pulegona en ambos aceites esenciales.

Mientras que la cantidad de mentona es 21 % menor en el aceite extrado de

hojas frescas (figura 23). As mismo podemos ver en la figura 24 la variacin

total de ambos componentes en los dos tipos de aceite esencial de mua. El

aumento global de terpenos es mnimo, un 2% respecto al aceite proveniente

de hojas frescas. Esto se debe a la disminucin de la mentona en las hojas

secas, a la aparicin de nuevos componentes y a la sntesis e interaccin

qumica de todos los terpenos. En general, ambos constituyen ms del 70 %

de los componentes del aceite esencial.

67
Figura 23: Porcentaje de Mentona en ambos aceites esenciales.

Figura 24: Variacin de la cantidad de ambos terpenos.

La diferencia entre la cantidad de estos dos componentes en ambos aceites

tiene una relacin inversa. En el aceite esencial de mua fresca la cantidad de

pulegona es 45,036%, y la de mentona es 30,168%; en cambio el porcentaje

68
de los componentes en el aceite esencial de la mua seca es: pulegona y

mentona, 52,321% y 24,818% respectivamente. Esta diferencia debe

explicarse en funcin al secado de las hojas de mua. En el aceite esencial

extrado de la planta fresca encontramos los componentes naturales del

aceite esencial. El secado, segn Fellows (1994), produce prdida de algunos

componentes, debido a varios factores como la solubilidad en agua de

algunos componentes del aceite esencial. La pulegona es insoluble en agua y

no se perdera al eliminarse el agua libre de las hojas de mua, a diferencia

de otros componentes, como el limoneno (solubilidad en agua, 0,02 g/L;

presin de vapor 2,1 hPa) y el Linalol (solubilidad en agua, 1,45 g/L; 0,10

hPa). El hecho de que el aceite de hojas secas sea de olor poco agradable,

muestra la disminucin de los componentes alcohlicos, como el mentol, pues

estos son los responsables de proveer el olor caracterstico. Esto explica el

aumento de la pulegona, pues los monoterpenos alcohlicos son los

precursores de los compuestos cetnicos, al oxidarse aquellos. Al respecto

Barbosa y Vega (2000) mencionan que uno de los efectos qumicos de la

deshidratacin es la oxidacin de los compuestos del alimento a causa de la

deformacin de la estructura fsica del alimento y de la oxidacin debida a la

porosidad alta del alimento deshidratado. De esta manera los componentes

como el mentol y otros monoterpenos con radicales OH, se oxidan, dando

compuestos como la pulegona. Es debido a esto que el contenido de

pulegona aumenta en el aceite esencial.

La disminucin de la mentona, en comparacin de la pulegona, se debe a sus

puntos de ebullicin diferentes, 208 y 224 C, respectivamente. Esto revela

que se requiere mayor energa para romper los enlaces de la pulegona que

69
de la mentona. Por otra parte, siendo el limoneno el principal precursor del

mentol, y ste de la mentona, su disminucin afectara indirectamente el

contenido de sta. El limoneno es un monoterpeno hidrocarbonado con un

doble enlace en el ciclo hexano en su estructura. Esto confiere al limoneno

baja estabilidad y sensibilidad a la deshidratacin. Adems su bajo punto de

ebullicin, comparado con el de los otros componentes del aceite esencial,

177C, demuestra su sensibilidad a factores externos (UPOV, 2009).

La diferencia en la cantidad de cada componente (ms pulegona en ambos

tipos de aceite y menos mentona en el aceite de hojas secas) se debe

tambin a lo que Banchio et al (2005) denominan como dao mecnico.

Segn esta teora, las hojas al ser cortadas del tallo o al ser cortada la planta,

sta eleva su cantidad de pulegona, como un mecanismo de defensa. La

disminucin del contenido de mentona se debe a su reduccin qumica a

mentol (Primo, 2007). Esta es una respuesta sistmica a diferentes tipos de

dao (Banchio et al, 20052).

La disminucin de la mentona y el 1,8 cineol se debe a la degradacin de la

mentona y el mentol, precursor de sta, a diferentes temperaturas. Para la

mentona, cuyo pico inicial era de 0,89, que almacenado a 4 C descendi a

0,73 y a 25 C, descendi a 0,67, una razn de 25 %. Esta disminucin es

natural. Wainberg (1983) refiere que el mentol se convierte en acetato de

mentilo.

La variacin en el contenido de componentes fue estudiada por Wainberg

(1983), segn el cual dependen de causas medioambientales. Las plantas

jvenes poseen ms pulegona y menos mentona. En las plantas viejas, la

mentona es predominante. Por su parte Burzaco et al (1996) dicen que la

70
composicin cambia a lo largo de la fenologa de la planta; de la misma

opinin es Cludio (2003).

En funcin a su estructura qumica (vase figura 5), Phenomenex (2012) y

R.A.M. (1912) mencionan que la mentona tiene la capacidad de girar

enantiomricamente, debido al enlace simple que posee. Las caractersticas

estructurales de la mentona y la pulegona muestran porque desciende aquella

y esta aumenta (ChemSpider, 2010). El volumen molar, la tensin superficial,

la capacidad de aceptar tomos de Hidrgeno, la refractividad molar y la

polarizabilidad son relativamente similares. Las diferencias se encuentran en

la libre rotacin de la mentona, imposible para la pulegona, el punto de

ebullicin y de inflamacin para la pulegona es mayor (92,548 C y 223,999

C, frente a 72,778 C y 204,999 C para la mentona), lo cual indica mayor

estabilidad qumica para la pulegona. La densidad para la pulegona tambin

es mayor (0,924 frente a 0,881 g/cm3). Finalmente la entalpa de vaporizacin

para la pulegona (46,049 frente a 44,123 kJ/mol), nuevamente es mayor. De

todos estos datos se deduce la estabilidad mayor de la pulegona, frente a la

mentona, en el aceite esencial de la mua proveniente de hojas secas

(Ventos, 2012).

Las caractersticas organolpticas discutidas anteriormente, respecto a la

fragancia del aceite esencial proveniente de hojas frescas, se confirman aqu

pues la mentona provee un olor refrescante y le da un color amarillo plido al

aceite (Lluche, 2011y Food-info, 2012). En este mismo sentido al principio, el

aceite esencial es rico en mentol, luego disminuye su cantidad pues se

71
esterifica generando cidos, modificando su fragancia (Jardn Botnico,

2012).

Se realiz el anlisis estadstico con el software SAS, Versin 8, para evaluar

la significacin de las medias de ambos componentes. As mismo se realiz la

prueba de Duncan para evaluar la eficiencia de ambos tratamientos. Los

datos completos de estos anlisis se encuentran en el anexo III. A

continuacin se muestra el ANVA para evaluar la diferencia significativa entre

la cantidad de mentona de la extraccin de hojas frescas y secas; se realiz el

mismo anlisis para la pulegona. Se compararon estadsticamente los

resultados de mentona y pulegona obtenidos de hojas frescas y secas

obteniendo diferencia significativa en ambos casos. En las tablas 14 y 15 se

muestran los resultados.

Tabla 14: ANVA para el porcentaje de mentona.

Fuente de variacin G.L. S.C. S.M. Fc Ft


Tratamiento 1 28.617 28.617 50.27 0.0193
Error 2 1.139 0.569
Total 3 29.856

Tabla 15: ANVA para el porcentaje de pulegona.

Fuente de variacin G.L. S.C. S.M. Fc Ft


Tratamiento 1 53.071 53.071 170.09 0.0058
Error 2 0.624 0.312
Total 3 53.695

De los resultados presentados se infiere que existe diferencia significativa

entre los rendimientos de cada terpeno encatrado en ambos aceites

En las figuras 26 y 28 del anexo III se muestra el resultado obtenido del

programa; en la primera columna el tratamiento (Model), el error (Error) y el

72
total (Corrected total). En seguida se muestran los valores de grados de

libertad (DF, degree free), suma de cuadrados (Sum of squares), cuadrados

medios (Mean square), F calculado (F value) y F tabulado (F). Estos anlisis

muestran diferencias significativas (P<0,05) entre las medias de ambos

tratamientos, como se observa en los valores F. El coeficiente de variabilidad

indica la variacin que de un experimento, para investigaciones de laboratorio

y agronmicas este valor no debe superar el 20 y 30 %. En esta investigacin

los coeficientes son 2,744 y 1,147 % para ambas componentes

respectivamente, esto significa que la cantidad de mentona y pulegona

expresados en porcentaje de rea son reproducibles. Finalmente obtenemos

la conclusin estadstica que los promedios de contenido de cada

componentes son diferentes.

Se realiz un anlisis posterior por el mtodo del Rango mltiple de Duncan

para determinar cul es el mejor tratamiento. Las figuras 27 y 29 del anexo III

muestran los resultados de la comparacin de promedios con un = 0,05

para la mentona y la pulegona. Observamos que por la aplicacin del Mtodo

de Duncan se forman 2 grupos de tratamientos (A y B) en ambos casos. El

promedio poblacional dentro de un grupo es diferente del promedio

poblacional del tratamiento de cualquier otro grupo. La aplicacin del mtodo

del Rango mltiple de Duncan revela que el mejor tratamiento para la

mentona y la pulegona es el uso de mua fresca y seca, respectivamente. El

rendimiento para la mentona y la pulegona fue 30,1625 y 52,321 %, para

hojas frescas y secas, respectivamente.

73
V. CONCLUSIONES.

La destilacin por arrastre de vapor mostr un comportamiento regular en el

proceso de extraccin de aceite esencial de hojas de mua fresca y seca.

Existi diferencias fisicoqumicas y organolpticas entre los dos aceites

extrados. El aceite proveniente de hojas frescas present un color ms opaco

y un olor ms fragante que el aceite extrado de hojas secas; el ndice de

refraccin y la densidad relativa para el aceite de hojas frescas fue de 1,4765 y

0,92 y para las secas fue 1,4733 y 0,86 respectivamente. Estos resultados

muestran componentes terpnicos diferentes.

El anlisis cromatogrfico del aceite esencial de hojas frescas report un total

de 46 componentes. De los cuales los principales fueron la pulegona (45,036

%) y la mentona (30,168 %). Los componentes mayoritarios totales sumaron

10. Mientras que en hojas secas se encontr 55 componentes, siendo los

principales la pulegona (52,321 %) y la mentona (24,818 %) y los componentes

mayoritarios totales fueron 7.

74
El ANVA de las cantidades de mentona y pulegona de hojas frescas y secas

revelaron diferencias significativas (P<0,05). el anlisis de Duncan revela que el

mejor tratamiento para la obtencin de mentona fue el uso de mua fresca, con

un rendimiento de 30,167% y para la pulegona fue el uso de mua seca, con

un rendimiento de 52,321 %.

75
VI. RECOMENDACIONES

Se sugiere evaluar la influencia de diferentes tiempos de secado sobre los

principales componentes del aceite esencial de la mua.

Se recomienda realizar un estudio que analice la composicin de mentona y

pulegona a diferentes temperaturas de extraccin, para ver cmo afecta la

destilacin a la composicin terpnica del aceite esencial de mua.

Se sugiere realizar modelizacin matemtica para la extraccin del aceite

mediante la destilacin por arrastre de vapor.

Se recomienda comparar los rendimientos y composicin del aceite esencial

extrados por mediante fluidos supercrticos y destilacin por arrastre de

vapor.

Se recomienda realizar estudios qumicos sobre los aceites esenciales que no

slo muestren sus componentes aprovechables, sino tambin su toxicidad,

para evaluar los potenciales riesgos del consumidor.

76
VII. BIBLIOGRAFA

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85
ANEXOS

ANEXO I. Identificacin de la mua

Tabla 16: Caractersticas botnicas identificadas de la mua.

Caractersticas
Color Verde amarronado. Escala RHS-UPOV: Green 42, RHS 137c
Forma de la hoja Posee vellosidad en el haz y el envs, as como ramificaciones
pronunciadas.
Dimensiones Largo, 3,5 0,67 cm; Ancho 2,1 0,57 cm
- Tipo Lanceolada
- pice Acuminado
- Base de la lmina Redondeada
- Bordes Serrado
Tallo Semileoso, erecto. Consistencia blanda, hojas dispersas
regularmente en toda su longitud. Hueco y cilndrico-
rectangular, con vellosidad exterior.
La figura 28 muestra la escala de colores en la cual se encuentran las hojas de

mua. Desde b) hasta f) son colores cercanos a la muestra estudiada. La figura 28a,

es el color ms cercano, Green 42, cdigo internacional RHS 137C.

86
a) d)

c) e)

b) f)

Figura 25: Determinacin del color de mua fresca mediante la carta


colorimtrica RHS.

87
ANEXO II. Resultados cromatogrficos del aceite esencial de mua (fresco

y seco).

Tabla 17: Valores cromatogrficos (hojas frescas).

88
Tabla 18: Valores cromatogrficos (hojas secas).

89
ANEXO III. Resultados estadsticos.

Procesamiento de los valores de porcentaje de rea de los principales

compuestos del aceite esencial de mua. Se utiliz el paquete estadstico del

software SAS v. 8.0

Figura 26: ANVA para los tratamientos de la mentona.

Figura 27: Test de Duncan para los tratamientos de la mentona.

90
Figura 28: ANVA para los tratamientos de la pulegona.

Figura 29: Test de Duncan para los tratamientos de la pulegona.

91