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HIDRLISIS ENZIMTICA DE PROTENAS

Determinar el efecto de las condiciones de reaccin (pH del medio de


reaccin, concentracin de sustrato y enzima) sobre la actividad proteoltica
de la pepsina, utilizando como sustrato la albmina de huevo

EXPERIMENTO N 1: Efecto de la concentracin del sustrato sobre la actividad


enzimtica de la pepsina.
REACTIVO 1 2 3 4 5
H2O 3 2 1.5 1 -
Solucin HCl 0.5N(ml) 0.5 0.5 0.5 0.5 -
Solucin albumina (ml) 1 2 2.5 3 -
Solucin de pepsina 1% (ml) - - - - 3.0
Colocar los tubos de ensayo en un bao mara
Solucin de pepsina 1% (ml) 0.5 0.5 0.5 0.5 -
Mezclar bien
Leer rpidamente la absorbancia de los tubos a 450 nm utilizando de blanco
agua destilada. Anotar absorbancia inicial t=0
Incubar a 37 C por 20 min
Detener reaccin colocando los tubos en bao de hielo y leer absorbancia a 450
nm. Anotar absorbancia final t=20

Determinar la actividad enzimtica de cada tubo:


Absorbanciat=20 Absorbanciat=0

Graficar la actividad enzimtica versus ml de


solucin de albmina

EXPERIMENTO N 2: Efecto de la concentracin de la enzima sobre la actividad


enzimtica de la pepsina

REACTIVO 1 2 3 4 5
H2O 2 1.5 1.0 0.5 -
Solucin HCl 0.5N(ml) 0.5 0.5 0.5 0.5 -
Solucin albumina (ml) 2 2 2.0 2 -
Solucin de pepsina 1% (ml) - - - - 6.0
Colocar los tubos de ensayo en un bao mara
Solucin de pepsina 1% (ml) 0.5 1.0 1.5 2.0 -
Mezclar bien
Leer rpidamente la absorbancia de los tubos a 450 nm utilizando de blanco
agua destilada. Anotar absorbancia inicial t=0
Incubar a 37 C por 20 min
Detener reaccin colocando los tubos en bao de hielo y leer absorbancia a 450
nm. Anotar absorbancia final t=20
Determinar la actividad enzimtica de cada tubo:
Absorbanciat=20 Absorbanciat=0

Graficar la actividad enzimtica versus ml de


solucin de albmina

EXPERIMENTO N 3: Efecto del pH la actividad enzimtica de la pepsina

REACTIVO 1 2 3 4
H2O 0.5 1.5 2.0 -
Solucin HCl 0.5N(ml) 2.0 1.0 0.5 -
Solucin albumina (ml) 2.0 2.0 2.0
Solucin de pepsina 1% (ml) - - - 2.0
Colocar los tubos de ensayo en un bao mara
Solucin de pepsina 1% (ml) 0.5 0.5 0.5 -
Mezclar bien
Leer rpidamente la absorbancia de los tubos a 450 nm utilizando de
blanco agua destilada. Anotar absorbancia inicial t=0
Incubar a 37 C por 20 min
Detener reaccin colocando los tubos en bao de hielo y leer
absorbancia a 450 nm. Anotar absorbancia final t=20

Determinar la actividad enzimtica de cada tubo:


Absorbanciat=20 Absorbanciat=0

Graficar la actividad enzimtica versus ml de


solucin de albmina