REPRODUCCION Y CRECIMIENTO MICROBIANO

UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS

(Universidad del Per, DECANA DE AMERICA)

FACULTAD DE CIENCIAS
BIOLOGICAS

TRABAJO DE INVESTIGACIN

TEMA: REPRODUCCION Y CRECIMIENTO MICROBIANO

PROFESOR: GALO SISNIEGAS

CURSO: FISICA I

ALUMNO: GUTIERREZ LOPEZ, JULIO ALFREDO

CODIGO: 14100028

GRUPO: VIERNES 2-4

2014
 REPRODUCCION Y CRECIMIENTO MICROBIANO

INDICE

INTRODUCCION3

OBJETIVOS4

CONTENIDO DEL TEMA

FISION BINARIA.5
CRECIMIENTO...6
CURVA DE CRECIMIENTO BACTERIANO..8
MEDICION DEL CRECIMIENTO MICROBIANO10
CICLO DE MULTIPLICACION VIRAL...15
METODOS PARA HALLAR LA INFECTIVIDAD VIRAL18

CONCLUSIONES20

BIBLIOGRAFIA21
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INTRODUCCION

En un sistema biolgico se define al crecimiento como el aumento ordenado de

las estructuras y los constituyentes celulares de un organismo. Segn ello, el
aumento de la masa celular producido por acumulacin de productos de
reserva (glucgeno, poli-hidroxibutirato) no constituyen crecimiento.

Se puede considerar como crecimiento al incremento de clulas individuales

por un lado, y por otro lado se puede considerar al crecimiento del nmero de
clulas (proliferacin de la poblacin).

En lo que se refiere al crecimiento de clulas individuales, este consiste en el

aumento del tamao y peso de las clulas que precede a la divisin celular.
Esta divisin trae aparejada un aumento en el nmero de clulas (proliferacin
de la poblacin).

Las bacterias se dividen por fisin binaria, a travs de la una cual clula madre
al alcanzar un determinado volumen se divide dando dos clulas hijas. El
proceso de fisin binaria consiste en la auto duplicacin del material hereditario
seguido de la reparticin en las dos clulas hijas, las que se separan por
estrangulamiento de la membrana celular y formacin de la pared celular.
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OBJETIVOS

1. Conocer los conceptos de fisin binaria y crecimiento microbiano.

2. Determinar la curva de crecimiento bacteriano.

3. Comprender los mtodos de crecimiento bacteriano.

4. Identificar las fases del ciclo de multiplicacin viral.

5. Conocer los mtodos de la infectividad de los virus.

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FISIN BINARIA

Es un proceso en el cual de la divisin de una clula resultan dos 2 clulas,

usualmente ambas clulas hijas tienen el mismo tamao y forma. Este es el
proceso ms comn y sin duda el ms importante en el ciclo de crecimiento de
las poblaciones bacterianas. En un cultivo en crecimiento la clula bacteriana
aumenta de tamao, replica su ADN y la pared celular y la membrana cito
plasmtica comienzan a crecer hacia adentro a partir de direcciones opuestas
formando una particin conocida como septo. A cada lado del septo se ubica
una copia del cromosoma bacteriano y los otros constituyentes celulares que le
permitan a cada clula hija vivir como clula independiente. Luego se separan
como dos clulas hijas resultantes de la divisin de la clula madre original.
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CRECIMIENTO

Se define crecimiento como un aumento en la cantidad de constituyentes y

estructuras celulares, cuando hay crecimiento en ausencia de divisin celular
hay aumento en el tamao y peso de la clula. Mientras que cuando el
crecimiento es seguido de divisin celular hay un aumento en el nmero de
clulas.
Es importante distinguir entre el crecimiento de clulas individuales y el
crecimiento de poblaciones, ya que en los microorganismos debido a su
pequeo tamao no se hacen estudios de crecimiento individual sino estudios
de crecimiento de poblaciones.

El crecimiento de una poblacin es el aumento del nmero de clulas como

consecuencia de un crecimiento individual y posterior divisin. El crecimiento
de una poblacin ocurre de una manera exponencial. El crecimiento
exponencial es una consecuencia del hecho de que cada clula se divide
dando dos 2 clulas hijas, las cuales al dividirse darn cada una dos clulas
hijas, as es que en cada perodo de divisin la poblacin se duplica.

La velocidad de crecimiento exponencial se expresa como tiempo de

generacin (G) y este se define como el tiempo que tarda una poblacin en
duplicarse. Los tiempos de generacin varan ampliamente entre los
microorganismos, algunos crecen rpidamente y presentan tiempos de
generacin de unos 30 minutos y otros tienen tiempos de generacin de varias
horas o incluso das.

Tiempo en Numero de Log. del n

horas clulas clulas
0 1 0
0.5 2 0.301
1 4 0.602
1.5 8 0.903
2 16 1.204
2.5 32 1.505
3 64 1.806
3.5 128 2.107
4 256 2.408
4.5 512 2.709
5 1024 3.010
..
10 1048576 6.021

En un grfico de los resultados del nmero de clulas tanto en escala

aritmtica como en escala logartmica en funcin del tiempo transcurrido,
podemos observar que en el grfico aritmtico se obtiene una curva con una
pendiente que crece constantemente, mientras que si transformamos el
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nmero de clulas en logaritmo y se grafican estos valores en escala

logartmica y el tiempo en escala aritmtica se obtiene una lnea recta.

Este tipo de grfica semilogartmica es la forma ms simple para determinar el

tiempo de generacin por el mtodo grfico, como podemos observar en la
grfica siguiente.
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CURVA DEL CRECIMIENTO BACTERIANO

En la figura se ilustra una curva de crecimiento de una poblacin bacteriana.

Esta curva se divide en cuatro fases denominadas fase de latencia, fase
exponencial o fase logartmica, fase estacionaria y fase de muerte.

Fase de latencia

Cuando una poblacin bacteriana es inoculada en medio fresco, el crecimiento

usualmente no comienza de inmediato sino despus de un tiempo llamado de
latencia, que puede ser corto o largo dependiendo de las condiciones.

La fase de latencia representa un periodo de transicin para los

microorganismos cuando son transferidos a una nueva condicin. En esta fase
se producen las enzimas necesarias para que ellos puedan crecer en un nuevo
medio ambiente.

En esta fase no hay incremento en el nmero de clulas, pero hay gran

actividad metablica, aumento en el tamao individual de las clulas, en el
contenido proteico, ADN y peso seco de las clulas.

Si un cultivo que est creciendo en fase exponencial es inoculado al mismo

medio de cultivo bajo las mismas condiciones de crecimiento, no se observa
fase de latencia y el crecimiento exponencial sigue a la misma velocidad. Si el
inoculo se toma de un cultivo viejo (fase estacionaria) y se inocula en el mismo
medio, generalmente se presenta la fase de latencia esto se debe a que las
clulas generalmente agotan una serie de coenzimas esenciales u otros
constituyentes celulares y se requiere cierto tiempo para su resntesis.
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Tambin se observa latencia cuando el inculo est formado por clulas que
han sido daadas pero no muertas, bien sea por tratamiento con calor,
radiaciones o sustancias qumicas, puesto que requieren reparar dicho dao.
En el caso de que una poblacin se transfiera de un medio de cultivo rico a un
medio pobre, se observa latencia puesto que es necesario que las clulas para
poder seguir creciendo tengan una serie de enzimas para poder sintetizar
algunos metabolitos esenciales que no estn presentes en el medio.

Fase exponencial o fase logartmica

Es el perodo de la curva de crecimiento en el cual el microorganismo crece

exponencialmente, es decir que cada vez que pasa un tiempo de generacin la
poblacin se duplica. Bajo condiciones apropiadas la velocidad de crecimiento
es mxima. Las condiciones ambientales (temperatura, composicin del medio
de cultivo, etc.) afectan a la velocidad de crecimiento exponencial.

Fase estacionaria

En cultivos en recipientes cerrados una poblacin no puede crecer

indefinidamente en forma exponencial. Las limitaciones del crecimiento ocurren
ya sea por agotamiento de algn nutriente esencial, por acumulacin de
productos txicos, porque se alcance un nmero de clulas elevado para el
espacio disponible o por una combinacin de las causas anteriores. Este
periodo durante el cual cesa el crecimiento se conoce como fase estacionaria.

Fase de muerte

Si la incubacin contina despus de que una poblacin microbiana alcanza la

fase estacionaria, las clulas pueden seguir vivas y continuar metabolizando,
pero va a comenzar una disminucin progresiva en el nmero de clulas
viables y cuando esto ocurre se dice que la poblacin ha entrado en fase de
muerte.
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MEDICIN DEL CRECIMIENTO MICROBIANO

El crecimiento microbiano se mide por cambios sucesivos en el nmero de

clulas o por el aumento de peso de la masa de las clulas. Hay varios
mtodos para enumerar las clulas o estimar la masa de stas.

1. - Determinacin del nmero de clulas totales

1.1 Recuento directo mediante contadores electrnicos

Los contadores electrnicos diseados para contar glbulos rojos se puede

usar para este fin. Esencialmente un contador electrnico consta de dos
cmaras que estn separadas por un material que no conduce la corriente, en
este material no conductor hay un orificio de un tamao similar al de las clulas
a ser contadas.

Cada cmara contiene un electrodo, la suspensin de clulas a ser contadas

se coloca en una de las cmaras y se aplica presin para que las clulas pasen
a la otra cmara a travs del orificio, cada vez que una clula pasa a travs del
orificio ocasiona un cambio en la conductividad elctrica que es registrado por
un dispositivo electrnico y de esta manera el contador indica el nmero de
clulas en esa suspensin.

Las limitaciones de este mtodo son las siguientes:

Se cuentan clulas vivas y muertas.

Las suspensiones deben estar libres de partculas diferentes a los

microorganismos que estamos contando por que el aparato no puede
distinguir entre una u otra.

1.2 Recuento directo al microscopio

Se determina directamente el nmero de clulas contndolas al microscopio

con la ayuda de cmaras especiales que albergan un volumen conocido de
lquido.

El recuento directo al microscopio es tedioso, pero es una forma rpida de

estimar el nmero de clulas microbianas. Sin embargo, presenta algunas
limitaciones:

No se pueden distinguir las clulas vivas de las clulas muertas.

Las clulas muy pequeas son difciles de contar.

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La precisin es difcil de lograr

El mtodo no es adecuado para suspensiones celulares de baja

densidad, es decir las soluciones deben contener aproximadamente 107
clulas/mL o ms.

2. - Determinacin de clulas viables

En los mtodos anteriores se determina el nmero de clulas totales, pero en

muchos casos nicamente interesa contar clulas viables.

Se define como clula viable, aquella clula que es capaz de dividirse y forma
una progenie y la manera usual para realizar un recuento de clulas viables es
determinando el nmero de clulas en la muestra, capaces de formar colonias
sobre un medio de cultivo slido y esto se conoce como recuento en placa.

En este procedimiento se realizan diluciones seriadas de la muestra y se

inoculan pequeos volmenes conocidos, de cada una de las diluciones, en
placas de Petri conteniendo un medio slido adecuado estril y se extiende con
una varilla de vidrio (mtodo de siembra en placa por extensin o diseminacin)
o en placas de Petri estriles a las cuales se les adiciona un medio slido
fundido y enfriado a 45C y se mezclan bien (mtodo de siembra por
incorporacin o de vertido en placa), luego se incuban en las condiciones
optimas hasta que aparezcan las colonias correspondientes. Se asume que
cada colonia proviene de la divisin sucesiva de una sola clula, conociendo el
volumen sembrado y la dilucin de la cual proviene y contando el nmero de
colonias en la placa correspondiente se puede calcular el nmero de clulas
viables en la muestra. Debido a que es difcil saber si una sola bacteria dio
origen a una colonia, se expresa usualmente el nmero de clulas viables
como unidades formadoras de colonias.

Para realizar el recuento se seleccionan las placas de la que contengan entre

25 y 250 colonias.
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A pesar de las deficiencias que pueda presentar la tcnica del recuento en

placas, se usa frecuentemente, y con resultados satisfactorios, para la
estimacin de las poblaciones bacterianas en la leche, agua, y otros productos.
Es fcil de realizar y se adapta a la medicin de poblaciones de cualquier
densidad.

En el siguiente esquema se presenta un ejemplo de un recuento en placa

haciendo diluciones seriadas con un factor de dilucin de 100, para ello se
toma 1 mL de la muestra, la cual puede ser un cultivo de bacterias o cualquier
otra muestra que contenga bacterias en suspensin, se aade a un frasco de
dilucin que contiene 99 mL del diluente adecuado, se agita y se toma de esta
primera dilucin (1:100 10-2) 1 mL y se transfiere a un segundo frasco de
dilucin que contiene 99 mL del diluente adecuado, se agita y se toma de esta
segunda dilucin (1:10.000 10-4) 1 mL y se transfiere a un tercer frasco de
dilucin que contiene 99 mL del diluente adecuado (esa corresponde a la
dilucin 1:1.000.000 10-6).

De cada se siembran por triplicado muestras de 1 mL y se incuban en posicin

invertida por24 horas o ms y se cuentan las colonias.
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Por ejemplo si el promedio de las 3 placas de la dilucin 1/1000, es de 32

colonias entonces el recuento es de 32.000 UFC/mL de muestra.

Otro procedimiento de recuento de clulas viables es el de la tcnica de la

membrana filtrante y consiste en hacer pasar la muestra que contiene los
microorganismos a travs de una membrana de acetato de celulosa (0.45m)
colocada en un dispositivo de filtracin. Los microorganismos quedan retenidos
en la membrana filtrante, la cual se retira despus de terminado el proceso de
filtracin y se coloca en una placa de Petri que contiene una almohadilla
humedecida con un medio de cultivo adecuado.

Esta tcnica permite el anlisis de grandes cantidades de la muestra,

tratndose por ejemplo de agua o de aire, pueden filtrarse a travs de la
membrana grandes volmenes, concentrando as la poblacin microbiana.

3. Determinacin de la masa microbiana

Para muchos estudios especialmente aquellos relacionados con la bioqumica

de los procesos de crecimiento, se prefiere determinar la masa de la poblacin
ms que el nmero de clulas presentes. La masa se puede determinar
directamente determinando el peso seco o hmedo de la muestra. Tambin se
puede determinar el contenido de nitrgeno o el contenido de protenas o de
ADN.

Otra forma de estimar la masa celular de una manera indirecta es

determinando la actividad metablica de la clula por ejemplo determinando el
consumo de oxgeno o produccin de dixido de carbono. Asumiendo que la
cantidad del producto metablico est en proporcin directa al nmero de
bacterias presentes en la poblacin.

Un mtodo ms sencillo y til para obtener la estimacin relativa de la masa

bacteriana es utilizar mtodos pticos que consisten en medir la turbidez, ya
que, dentro de ciertos lmites, las suspensiones bacterianas dispersan la luz
proporcionalmente a su concentracin.
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EFECTO DE LA CONCENTRACION DE NUTRIENTES SOBRE EL

CRECIMIENTO

Como podemos observar en la figura siguiente, a medida que aumenta la

concentracin de nutrientes aumenta la velocidad de crecimiento hasta llegar a
una concentracin que ya no es limitante y se sigue aumentando no aumentar
la velocidad de crecimiento.

Tambin la concentracin de nutrientes tiene efecto sobre la "cosecha mxima"

o crecimiento total ya que una gran parte del nutriente es convertido en masa
celular, si se limita la cantidad de nutriente se limitar tambin la cantidad de
material celular.
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CICLO DE MULTIPLICACIN VIRAL

En general el ciclo de multiplicacin viral puede dividirse en una serie de fases,

como son:

1. Adsorcin de la partcula viral a la clula husped.

2. Penetracin del virus.

3. Liberacin del cido nucleico.

4. Replicacin del cido nucleico y sntesis de las protenas que forman parte
del virus.

5. Ensamblaje de las partculas virales.

6. Liberacin de los virus maduros.

Absorcin de la partcula viral a la clula husped

Existe una alta especificidad en la interaccin del virus con su clula husped.
Este proceso de absorcin est mediado por receptores presentes tanto a nivel
de la partcula viral como a nivel de la clula husped. Entre los receptores de
esta ltima tenemos: polisacridos, lipoprotenas, glicoprotenas etc. En
relacin a los virus, la localizacin de los receptores depende del tipo de virus;
si se trata de un virus sin cubierta los receptores estn localizados en la
cpsida. En aquellos virus que poseen cubierta lipdica, los receptores estn
localizados en dicha cubierta.

El proceso de adsorcin puede bloquearse aadiendo al medio anticuerpos

dirigidos contra los receptores virales y en el caso de los virus que poseen
cubierta, el proceso tambin puede impedirse tratndolos con solventes
orgnicos.

Penetracin del virus

Una vez que el virus ha hecho contacto con la clula husped, la penetracin
depende del tipo de virus. Si se trata de virus sin cubierta, stos son tomados
por un proceso anlogo a la fagocitosis, que en el caso de los virus se
denomina "viropexia", donde la membrana celular sufre una invaginacin y el
virus penetra al interior como una vacuola fagoctica. En cambio que aquellos
virus que poseen cubierta se fusionan con la membrana celular y lo que
penetra es la ncleo cpsida desnuda.
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Liberacin del cido nucleico

Enzimas que normalmente estn presentes en la clula husped o que son

inducidas por la presencia del virus, digieren la cpsida para liberar al cido
nucleico para que pueda ser transcrito y replicado.

Replicacin del cido nucleico y sntesis de las protenas que forman

parte del virus

Existen diferentes mecanismos de replicacin viral que dependen de la

naturaleza del cido nucleico. De una manera general podemos sealar los
siguientes:

Virus cuyo genoma est constituido por ADN

La mayora de los ADN virus se replican en el ncleo, utilizando las enzimas de
la clula husped, la ADN polimerasa sintetiza el ADN viral y las protenas
virales tanto estructurales como funcionales sern transcritas a partir del
genoma viral por la ARN-polimerasa ADN dependiente.

Virus cuyo genoma est constitudo por ARN

La mayora de los ARN virus se replican en el citoplasma, pero debido a que
las clulas no replican ARN, es decir no sintetizan ARN usando como molde
ARN, ellas no tienen las enzimas para realizar este proceso, de ah que los
ARN virus se valgan de diferentes estrategias
para lograr hacer la replicacin de su ARN, algunos ARN virus llevan la ARN
transcriptasa en la partcula viral, otros tienen un genoma con polaridad
mensajero que puede ser traducido directamente en los ribosomas y as
sintetizar la ARN-transcriptasa requerida, y las otras protenas funcionales y
estructurales requeridas.

Ciclo de multiplicacin de un ADN virus

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Ciclo de multiplicacin de un ARN virus

Ensamblaje de las partculas virales

Una vez que se haya replicado el genoma y producido las protenas que van a
formar la cpsida, el prximo paso es el ensamblaje de los componentes para
formar la ncleo cpsida.

Liberacin de la partcula viral

Esta ltima fase del ciclo de multiplicacin viral, tambin depende del tipo de
virus. Generalmente los virus sin cubierta producen la lisis de la clula husped
con la subsiguiente liberacin de los virus.

Por el contrario los virus que poseen cubierta, una vez formada la
nucleocpsida, sta se acerca a la membrana celular, la cual ha sido
modificada por la incorporacin de glicoprotenas codificadas por el virus.
Finalmente la nucleocpsida adquiere la cubierta por un proceso semejante al
de la gemacin, que se ilustra a continuacin.

Liberacin de virus con cubierta

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MTODOS PARA DETERMINAR LA INFECTIVIDAD DE UNA

PREPARACIN VIRAL

Estos mtodos se fundamentan en la capacidad que tienen los virus para

multiplicarse dentro de la clula husped con la subsiguiente liberacin de
partculas virales infecciosas que a su vez infectan nuevas clulas
producindose as ciclos repetidos de multiplicacin viral.

Mtodos cuantitativos

Nos proporcionan el nmero de partculas infecciosas que existe en la

preparacin viral.

Recuento en placas

Un ejemplo de este tipo de mtodo lo constituye la determinacin del nmero

de unidades formadoras de placas/mL de la preparacin viral.
Entindase por placa "una zona localizada de destruccin celular ocasionada
por la multiplicacin viral".

El mtodo se basa en la infeccin de un gran nmero de monocapas de clulas

susceptibles con alcuotas de diluciones de la preparacin viral.

Algunos virus no matan a las clulas que infectan, por lo tanto hay que recurrir
a otros mtodos para poner en evidencia la multiplicacin viral localizada, por
ejemplo anticuerpos fluorescentes.

Mtodos para determinar el nmero de partculas virales

totales

Estas tcnicas no discriminan entre partculas infecciosas y no infecciosas. El

ms utilizado es el mtodo de recuento al microscopio electrnico.

Recuento al microscopio electrnico

Los virus pueden contarse al microscopio electrnico. Como no es posible

determinar exactamente el volumen de la preparacin viral para ser observada
al microscopio electrnico se usa como referencia una suspensin de
partculas de ltex de concentracin conocida. Se procesa para su observacin
al microscopio electrnico y se cuenta el nmero de partculas virales y el
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nmero de partculas de ltex. Como se conoce la concentracin de partculas

de ltex, fcilmente puede calcularse el nmero de partculas virales totales.

Recuento de partculas totales al microscopio electrnico

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CONCLUSIONES

La velocidad de crecimiento exponencial de las bacterias, expresada

como el tiempo de generacin G, no siempre es la misma, ya que cambia
dependiendo del tipo de microorganismo, variando de 30 minutos hasta
incluso varios das

Toda curva de crecimiento bacteriano posee 4 fases: fase de latencia,

fase exponencial o logartmica, fase estacionaria y la fase de muerte.

Las 3 principales formas para hallar el crecimiento microbiano son:

determinacin del nmero de clulas totales, determinacin de clulas
viables y determinacin de la masa microbiana.

El ciclo de multiplicacin de un virus posee 6 fases diferenciadas:

absorcin de la partcula viral a la clula husped, penetracin del virus,
liberacin del acido nucleico, replicacin del acido nucleico, ensamblaje
de partculas virales y liberacin de los virus maduros.
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Bibliografa

Davis, Dulbecco, Eisen and Ginsberg. 1990. Microbiology. Fourth

Edition. J. B. Lippincott Company.

Madigan M.T, Martingo J. M. y Jack Parker. 2004. Dcima Edicin.

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Prescott, L.; Harley, J.; Klein D. 1999. Microbiologa. Cuarta edicin.

McGraw-Hill Interamericana.

Tortora G. J.,B. R. Funke and Ch. L. Case 2007. Introduccin a la

Microbiologa 9na Edicin. Editorial Mdica Panamericana.