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GUA PRCTICA

DE MICROBIOLOGA
2017
Universidad Nacional San Luis Gonzaga De Ica
Facultad De Medicina Humana Daniel Alcides Carrin
ACCIN DE LOS AGENTES FSICOS Y QUMICOS SOBRE
LOS MICROORGANISMOS. CONTROL MICROBIANO
La inhibicin del crecimiento y la destruccin de microorganismos patgenos se
realizan ya sea por medios fsicos o qumicos. Algunos mtodos de control microbiano
solo se aplica a objetos inanimados, en tanto que otros muestran una toxicidad
selectiva y pueden utilizarse in vivo.

Agentes fsicos:
El control de microorganismos potencialmente patgenos se lleva a cabo p or mtodos
fsicos mediante la desinfeccin o la esterilizacin. Entre estos tenemos:

a. Calor.
El calor es el mtodo de eleccin ms usada para la esterilizacin de todos los
materiales, excepto los que puedan ser alterados por l.

Para esterilizacin
Llama directa del asa
bacteriolgica

Se hace uso del


Esterilizacin
horno, para
con calor
esterilizar materiales
seco
como placas Petri.

Esterilizacin
con calor Se usa el autoclave.
hmedo

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Consiste en el
calentamiento a 62C
Pasteurizaci
durante 30 minutos
n
tres veces. Se utiliza
en alimentos.

b. Congelacin.
Los cristales de hielo pueden lesionar a las bacterias.
c. Radiacin ultra violeta. Cuando se usan radiaciones de onda cada vez ms cortas
a partir de 330 nm se produce esterilizacin bacteriana, lesiona el DNA bacteriano
que impide su replicacin.
d. Radiaciones ionizantes. Pueden utilizarse fuentes de radiactividades intensas
para esterilizar materiales hospitalarios, alimentos, etc.
Agentes mecnicos:

a. Ondas snicas y supersnicas.- Los ultrasonidos (con frecuencias que oscilan


entre 15,000 y varios centenarios de miles de vibraciones por segundo)
desnaturalizan protenas y destruyen bacterias.
b. Filtracin.- Si se utilizan filtros con poros menores de 1nm, se pueden obtener
filtrados libres de bacterias. Esto se utiliza con soluciones que no se pueden
esterilizar con calor.
Agentes Qumicos:
La accin de las sustancias qumicas vara dependiendo de la composicin
fisicoqumica del medio ambiente, la concentracin, T y el tiempo que dura este
contacto. En relacin al efecto biolgico se tiene una accin bactericida, es decir,
destruccin de la bacteria; y una accin bacteriosttica, sea que inhibe el
crecimiento bacteriano. Tenemos a los desinfectantes, y antispticos.

Metales pesados
Halgenos
Agentes alquilantes
Agentes con propiedades tensioactivas o tensoactivas
Fenoles
Alcoholes

Material.

Cultivos bacterianos de Bacillus, E.coli, Salmonella, Pseudomonas.


Tubos con caldo BHI o nutritivo
Placas con agar BHI o nutritivo
Discos estriles de papel de filtro
Pinza estril
Hisopos o torundas estriles
Frascos con alcohol, fenol, mertiolate, mercurio cromo, violeta de genciana.

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Asa bacteriolgica
Procedimiento.

1. Sembrar en tres tubos con caldo nutritivo pH7 por agitacin, incubar por 18 -24
horas, uno a 60C, otro a 37C, y finalmente otro a 4C.

2. Introduzca un hisopo estril es la cepa bacteriana, y siembre en toda la superficie


de la placa con agar BHI o nutritivo, deje reposar 5 minutos y proceda a colocar los
discos de papel de filtro embebidos en los diferentes desinfectantes y antispticos
(un disco para cada desinfectante o antisptico) coloque una a distancia prudente
del otro. Luego incube las placas a 35-37C por 18-24 hrs.

VIOLETA DE GENCIANA LEJIA AGUA OXIGENADA

Resultados.

1. En los tubos incubados a diferente temperatura observe si hubo crecimiento por la


presencia o ausencia de turbidez. Explique a que se debe ese resultado.
2. En los tubos sembrados a diferentes pH, tambin observe si hubo crecimiento por
la presencia y ausencia de turbidez, anote los resultados y explique el por qu.

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3. Observe alrededor de los discos impregnados con cada uno de los deferentes
antispticos o desinfectantes, si hay o no un halo alrededor, que demuestra si el
agente qumico es eficaz o ineficaz para actuar contra el microorganismo. Anote
todos los resultados y explique por qu algunos qumicos son eficaces y otros no.

AGENTE FSICO: TEMPERATURA

4 C

37 C

CRECIMIENTO NORMAL

60 C

AGENTES QUMICOS:

INMUNOLOGA. REACIONES DE AGLUTINACIN.


Tradicionalmente el diagnstico definitivo pasa por la identificacin, el aislamient o en
cultivo puro del patgeno; de este modo la morfologa, actividad bioqumica y patrn
de sensibilidad a los antimicrobianos podrn ser examinados y evaluados.

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Sin embargo algunos microorganismos no se pueden cultivar in vitro como Treponema
pallidum, Mycobacterium Leprae y en algunos otras enfermedades infecciosas un
diagnstico serolgico es mucho ms econmico y rpido, pero no definitivo.

El mtodo serolgico tradicional demuestra una respuesta de anticuerpos


especficos humorales contra los microorganismos en cuestin. Ejemplos de reacciones
serolgicas de aglutinacin son las pruebas para anticuerpos contra Brucella y
Salmonella que son parte de un panel de pruebas para aglutinaciones febriles.

Aglutinacin bacteriana

Una de las aplicaciones de aglutinac in bacteriana es la llamada prueba de


Reacciones febriles que est basada en la investigacin de la presencia de
aglutininas contra la fiebre tifoidea, La brucelosis y el tifo, que indican que el individuo
padece enfermedad o que ha estado en contacto con el germen (antgeno) sin llegar a
contraerla. Estas reacciones febriles comprenden la Reaccin de Widal para la fiebre
tifoidea y paratifoidea, La Reaccin de Huddlesson para la brucelosis y La Reaccin
de Weil- Flix para el tifo.

REACCIN DE WIDAL REACCIN DE REACCIN DE W EIL-FLIX


HUDDLESSON
La reaccin de Widal Se lleva a cabo con La reaccin de Weil-Flix
utiliza como antgeno antgeno de Brucella utiliza Proteus OX-19 como
una sepa de Salmonella abortus para detectar antgeno para detectar
Typhi en fase O (o sea sin anticuerpos contra anticuerpos contra
flagelos) y otra en fase H fiebre de malta. Rickettsia prowaseki,
(flagelo). Adems se debido a que posee los
tienen otros antigenos mismos antgenos y por la
Salmonella paratyphi A-B. facilidad de su manejo en el
laboratorio.

Material.

Suero de paciente
Antigeno (tifico O y H, paratfico A y B, brucela, proteus OX -19.
Lminas de vidrio para aglutinaciones
Pipetas serolgicas de 0,2 ml
Palitos mondadientes

Procedimiento:

Tcnica cualitativa:

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1. Colocar una gota de suero problema en cada uno de los espacios marcados en
la lmina
2. Agregar una gota de cada uno de los antgenos sobre la gota de suero problema

ANTIGENO H ANTIGENO O ANTIGENO PA ANTIGENO PB ATG. BRUCELLA

3. Mezclar uniformemente con un mondadientes cada gota, rotar la lmina por 3


minutos y observa los resultados.

Lectura.

Positivo: Aparicin de grumos de tamao variables que tienden a agruparse en la


superficie de la gota.
Negativo: La mezcla permanece homognea.

Tcnica cuantitativa.

1. Con una pipeta de 0,2 ml. Depositar 0,08, 0,04, 0,02, 0,01, 0,005 del suero
problema en la lmina.
2. Aadir una gota de antgeno que dio aglutinacin en la prueba cualitativa a cada
cuota del suero.
3. Con el mondadientes mezclar y rotar la lmina durante 3 minutos.

Lectura:
Realizar la lectura teniendo en cuenta la presencia de grumos de acuerdo a la siguiente
equivalencia:

Suero problema: Ttulo:

0.08 ml 1/20
0,04 ml 1/40
0,02 ml 1/80
0,01 ml 1/160
0,005 ml 1/320

Ttulos mayores de 1/80 tienen significacin diagnstico para Salmonella.


Ttulos mayores de 1/100 tienen significacin diagnstico para Brucella.

Resultados:

Ttulos de Suero
Antgeno
1/20 1/40 1/80 1/160 1/320

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Tfico O

Tfico H

Paratfico A

Paratfico B

Brucella 1/25 1/50 1/100 1/200 1/400

ANTIBIOGRAMA. RESISTENCIA BACTERIANA A LOS


ANTIBITICOS.
Muchas bacterias presentan resistencia a los agentes antimicrobianos. Los patrones
de resistencia cambian en forma constante. No importa cun rpidamente se introducen
los nuevos agentes teraputicos, los microorganismos parecen estar dispuesto a
sobrepasarles.
Cuando no se conoce o no se puede predecir la susceptibilidad de las bacterias, a los
agentes antimicrobianos, es necesario estudiar la sensibilidad individual a estas drogas,
pudiendo elegir entonces el agent e adecuado, que proporciona mayores posibilidades
de una evolucin favorable.

Para realizar las pruebas de sensibilidad in vitro, es necesario emplear un inculo


estndar que contenga 10 6 a 10 8 microorganismo por ml; un medio de cultivo que no
interfiere con la eficacia de los antibiticos ni con el crecimiento del microorganismo,
en cantidad conocida y un pH regulado como el Miuller Hinton en caldo o Agar medio
suplementado con los cationes magnesio y calcio.

ANTIBIOGRAMA POR DILUCIN-CUANTITATIVO

Mtodo que sirve para evaluar cuantitativamente la actividad de un antibitico. Se


colocan concentraciones de creciente del agente antimicrobiano, en tubos con caldo
de cultivo Miuller Hinton que sostendr el desarrollo del microorganismo, luego se
inocula el microorganismo. Un tubo de caldo se mantiene sin el antibitico y es
conocido como el control, luego se llevan a incubar todos los tubos y al da siguiente
se observa la turbidez que indicara desarrollo bacteriano. El microorganismo crecer
en el tubo control y en todos los otros que no contengan suficiente agente
antimicrobiano como para inhibir el desarrollo. La concentracin ms baja que impide
el crecimiento bacteriano se considera concentracin inhibitoria mnima (CIM) del
frmaco y esta es detectada por falta de turbidez.

Material.

Cultivo bacteriano que contenga 10 6 - 10 8 microorganismo por ml.


Solucin de antibitico que c ontenga 1000 unidades
Tubos 13x 100 ml. Estriles
Pipetas estriles

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Caldo Miuller Hinton

Procedimiento.

Colocar 10 tubos 13x100 ml estriles enumerados del 1al 10.


Diluir el antibitico que contenga 1000 U. en proporcin 1:5 en caldo, obteniendo
una concentracin 200 u. por ml.
Con una pipeta estril colocar 0.5 ml del caldo en los tubos marcados del 2 al
10.
Agregar 0.5 ml del antibitico a los tubos 1 y 2, mezcle el contenido del segundo
tubo y trasvase 0.5 ml al tubo 3, continuando de igual forma hasta el 9no tubo.
Retirar 0.5 ml del 9no tubo y descartar; el 10mo no recibe antibitico y sirve
como control.
Agregue 0.5 ml de la cepa bacteriana a todos los tubos
Incubar a 35-37C por 24 horas
Resultado.

Realice la lectura e interprete los resultados o btenidos.


Determine la CIM del frmaco estudiado.
Determine si el microorganismo probado es sensible o resistente al frmaco
probado haciendo uso de la tabla.
Interprete correctamente el resultado obtenido

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LMITE CIM: RESISTENCIA


CRTICO CIM: MODERADA
DE SENSIBILIDAD
FRMACO CIM: SENSIBLE

ANTIBIOGRAMA POR DIFUSIN-DISOLUCIN-CUALITATIVO.

Por este mtodo se prueba simultneamente un germen aislado de un paciente frente


a ms de un agente antimicrobiana, y esto se consigue inoculando la superficie de la
placa de agar Miuller Hinton con el microorganismo en estudio, transcurrido 5 minutos
se procede a colocar los discos de antibiticos (con una concentracin conocida)
equidistante uno de otro, los antibiticos difunden en el medio en forma radial alrededor
del disco e inhibe el desarrollo microbiano en la zona donde su concentracin es
suficientemente alta (halo de inhibicin), trascurrido la incubacin a 35 -37C por 24 hrs.
Este mtodo tambin es conocido como disco-difusin. En 1966 despus del estudio
Kirby-Bauer y otros se uniformizaron criterios y se estandariz la prueba tomando en
cuenta los conceptos de concentracin mnima inhibitoria (CIM ) y la concentracin
promedio en sangre de las drogas frecuentemente usadas.

Material.

Placas con agar Miuller Hinton


Disco de antibiticos
Torundas estriles
Pinzas estriles
Cepa bacteriana en caldo con una concentracin de 10 6 10 8
microorganismo por ml
Procedimiento.

Introduzca la torunda en la cepa bacteriana, escurrir oprimiendo contra


las paredes del tubo y extender uniformemente en la superficie de la
placa de Agar Miuller Hinton.

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Dejar reposar 5 minutos y colocar con la ayuda de la pinza los discos de
diferente antibiticos en la superficie del Agar y presionarlos
suavemente.
Los discos deben estar equidistantes unos de otros
Incube a 35C 24 hrs.
Resultados

Para realizar la lectura, mida el halo de cada disco de antibitico en mm,


conocidos los dimetros utilice la tabla pa ra categorizar si el
microorganismo es sensible, moderadamente sensible o resistente a los
diferentes antibiticos.
Explique cul es o son los mejores antibiticos segn el antibiograma in
vitro.

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AISLAMIENTO E IDENTIFICACIN: STAPHYLOCOCCUS Y
STREPTOCOCCUS.
AISLAMIENTO E IDENTIFICACION STAPHYLOCOCCUS

El gnero Staphylococcus forman parte de la flora microbiana normal de la piel y


mucosas del hombre y en ciertas circunstancias pueden comportarse como patgeno.
El Staphylococcus aureus ha sido reconocido como un patgeno humano virulento e
importante causante de abscesos, diversas infecciones piognas, neumona,
endocarditis e incluso septicemia mortal. Tambin durante los ltimos aos los
estafilococos coagulasa negativos han surgido c omo patgenos importantes,
principalmente de huspedes deficientes incluyendo pacientes con algn tipo de
prtesis, estos son los S. epiderminis, los S. saprophyticus son responsables de ITU
en mujeres jvenes. ltimamente los estafilococos coagulasa negativos son
responsables de bacteriemia en pacientes neutropnicos, de infecciones relacionadas
con catteres permanentes.

Material

Placas con Agar sangre


Placas con Agar Manitol hipertnico o baird Parker
Lminas portaobjeto
Set de colorantes Gram.
Tubos con caldo tioglicolato
Plasma citratado
Disco de novobiocina
Perxido de hidrgeno
Asa de kolle
Muestra clnica: Absceso, S. nasal, ntrax.etc.
Procedimiento

1. DIAGNSTICO PRESUNTIVO
Examen directo: Realizar una Tincin Gram de la muestra y buscar cocos Gram
+.

2. DIAGNSTICO DEFINITIVO:

Cultivo.

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a. Enriquecer en caldo tioglicolato, inoculando la muestra previamente incube
a 35-37C x 18-24 hrs.
Caldo tiglicolato:

Rezarsurina
Agar agar 0.016 gr%
Tioglicolato

b. Aislar en Agar sangre y/o Agar Manitol hipertnico u otro medio selectivo,
sembrado por estiras y agotamiento en 4 cuadrantes: Incube a 35 -37C x
18- 24 hrs.
c. Identificacin:
1. Estudio macromorfolgico de la colonia agar sangre y/o manitol
hipertnico.

2. Estudio micromorfolgico de la colonia GRAM de la colonia.

3. Estudio bioqumico y metablico de las colonias.


Catalasa
Coagulasa
Hemolisina
Resistencia a la novobiocina

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Resultado

Anotar lo obtenido en el examen directo


Anotar la forma de crecimiento en el tioglicolato
Describir las colonias tpicas de los Staphylococcus en agar manitol
hipertnico y agar sangre.
Anotar el microorganismo aislado y si existe correlacin con el examen
directo.
AISLAMIENTO E IDENTIFICACION STREPTOCOCCUS

Material

Placas con Agar sangre y otros con medio selectivo CNA


Tubos con caldo tioglicolato
Lminas portaobjetos
Set de Gram.
Discos de bacitracina
Muestra clnica: hisopado farngeo
Procedimiento

DIAGNSTICO PRESUNTIVO:

Examen directo de la muestra clnica: Realizar un Gram.


Reaccin de Quellung

Carbohidrato C de la pared celular

DIAGNSTICO DEFINITIVO:

Cultivo:
a. Enriquecer la muestra en caldo tioglicolato, inoculando el espcimen clnico
en el medio de cultivo y dejar incubar a 35-37C por 18-24 hrs.
Caldo tiglicolato:

Rezarsurina
Agar agar 0.016 gr%
Tioglicolato

b. Aislar en Agar sangre, Agar columbia y CNA, sembrando por estra y


agotamiento e incubando a 35-37C por 18-24 hrs.

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c. Identificacin:
1. Estudio macromorfolgico la colonia en agar sangre y/o CNA
2. Realice un Gram. de la colonia y observe la morfologa bacteriana
microscpica.
3. Estudio bioqumico y metablico de las colonias .
Prueba de catalasa
Prueba de bacitracina, optoquinona
Prueba de hemolisina
Carbohidrato de pared celular

Resultados:

Anotar lo obtenido en el examen directo


Anotar la forma de crecimiento en el tioglicolato
Describir las colonias tpicas de los Streptococcus en agar sangre.
Anotar el microorganismo aislado y si existe correlacin con el examen directo.

AISLAMIENTO E IDENTIFICACIN DE NEISSERIA


GONORRHOEAE.N. MENINGITIDIS
La Neisseria son cocos gramnegativos. Algunas Neisserias son comensales y otras
como N. gonorrhoeae y N. meningitidis son patgenos. En un frotis de muestra
clnica coloriado con Gram., estos microorganismos se presentan como diplococos de
forma arrionada (o granos de caf) y se pueden observar dentro de los neutrfilos

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polimorfonucleares, esta presentacin se conoce c omo diplococos intracelulares
gramnegativos y contribuyen a la identificacin de una verdadera infeccin .
Aunque estos cocos son aerobios estrictos desarrollan mejor en un medio enriquecido
con atmsfera de 2-10% de co2. Las Neisseria patgenas son muy sensibles a las
variaciones de temperatura, por la que las muestras clnicas deben ser inoculadas lo
ms pronto posible. Luego de 24-48 hrs. de incubacin la N. gonorrhoeae forma
colonias pequeas (0.5.- 2 mm), traslucidas, grisceas, convexas, brillantes, con
bordes lisos, con frecuencia se despegaran completamente de la superficie del Agar y
pueden ser mucoides o gomosas. Son autoltico

Material

Placas con agar chocolate y Thayer Martn modificado


Lminas
Set. De Gram.
Reactivo para Oxidasa
Muestra: Uretral, cervix y canal anal y de otros localizaciones LCR.

Procedimiento

DIAGNSTICO PRESUNTIVO:

Examen directo de la muestra clnica.- Hacer un frotis de la muestra y teir


con Gram.
Diplococos G-, intracelulares, encapsulados

Aislamiento e identificacin:

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DIAGNSTICO DEFINITIVO:

Cultivo
a) Sembrar la muestra en agar chocolate y/o Thayer Martn modificado por
estra y agotamiento para obtener colonias aisladas, incubar 24 -48 hrs. a
37C y con CO2 2-10%.

b) Aislamiento:
Agar Chocolate
Agar Thayer Martin Modificado

c) Identificacin:
1. Estudio macromorfolgico la colonia en agar chocolate, thayer martin
modificado: Colonias pequeas, traslcidas, autolticas, gotas del
roci

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2. Estudio micromorfolgico: Realizar un Gram. de estas colonias.

3. Estudio bioqumico y metablico de las colonias.


Prueba de oxidasa
Prueba de azcares
Virulencia en el ratn
No crece a 22C

Resultados

- Anotar los resultados obtenidos en el examen directo.


- Describir las colonias tpicas aisladas, morfologa microscpica y reacciones
bioqumicas.

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AISLAMIENTO E IDENTIFICACIN DE ENTEROBACTERIAS.
UROCULTIVO Y COPROCULTIVO
Son las que se aslan con mayor frecuencia-
Desarrollan bien en: Agar sangre, chocolate, medios selectivos (Mac Conkey).
Algunas son patgenas clsicas, otros si colonizan sitios sensibles provocan
enfermedades.
Consideraciones generales, anatoma de las ITU y FMN de la uretra anterior:

Estafilococos coagulasa negativos


Estreptococos viridans y no hemolticos
Lactobacilos
Difteroides
Neisseria sp.
Bacilos Gram negativos
Anaerobios
Mycobacterium sp.
Ocasionalmente levaduras.

VIAS DE INFECCION:
VIA ASCENDENTE:
Escherichia coli
Klebsiella
Proteus mirabilis
Otras enterobacterias: Citrobacter, Serratia
marcensces,
Pseudomonas aeruginosa
Staphylococcus saprophyticus
Enterococcus.

VIA DESCENDENTE:
Staphylococcus aureus
Candida albicans
Listeria

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Mycobacterium tuberculosis
Salmonella

UROCULTIVO
RECOLECCION Y TRANSPORTE DE MUESTRAS:

La calidad del diagnstico laboratorio al depender directamente de la muestra enviada.

METODOS DE OBTENCION DE LA ORINA:

Aspiracin suprapbica
Segundo chorro o chorro medio
Cateterizacin vesical
Bolsa recolectora
I. DIANOSTICO PRESUNTIVO: PRUEBAS DE SELECCIN RAPIDA PARA ITU:

Gram de gota fresca Washington:

Colocar 1 gota de orina fresca en lmina porta objetos, no extender y dejar


secar
Seguir los pasos de Gram.

Resultado: La presencia por lo menos de 01 bacteria/campo (20 campos), se


correlaciona con bacteriuria significativa (>100,000 UFC/ml orina)

Sedimento:

Colocar 6 ml. Aprox. De orina en un tubo y centrifugar a 2500 rpm x 3`


Decantar y hacer un preparado hmedo del sedimento.
Resultado:
Leucocitos: > 5 10/c (piuria significativa)
Bacterias: Escasas, moderadas y abundantes
Clulas epiteliales, hemates, cilindros, cristales, etc.

Prueba de Griess:

Colocar tira reactiva en la orina


Resultados: Determina enzimas reductoras de Nitratos y leucocitaria,
pH, proteinas, etc.

II. DIAGNOSTICO DEFINITIVO:

CULTIVO DE ORINA UROCULTIVO.

A. Aislamiento usar asa calibrada de 1, 10, y 100 ul., cargar con la muestra e
inocular al medio de cultivo Incubar a 35 37 C x 18 24 hrs.

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Medios de cultivo:

Gram negativos: Agar Mac Conkey, Chromocult, EMB.


Gram positivos, Gram negativos: Agar tripticasa (TSA), Agar sangre
Otros medios de cultivo: A. sabouraud, ogawa

B. Lectura - Resultados:

Recuento de colonias = UFC/ml de orina = n de colonias totales x (10, 100, 1000)

Ejemplo:

Recuento=103 col. X 1000

=103,000 UFC/ml orina.

CRITERIOS DE INTERPRETACION DE UN RECUENTO EN UROCULTIVOS:


CHORRO MEDIO:
Urocultivo negativo:<10,000 UFC/ml orina
Urocultivo dudoso: Entre 10,000 100,000 UFC/ml orina
Urocultivo positivo:>100,000 UFC/ml orina
PUNCION SUPRAPUBICA:
Cualquier nmero es importante.
CATETERIZACION VESICAL:
Recuentos mayores de 100 UFC/ml de orina se consideran positivos
2. Identificacin del microorganismo aislado agente etiolgico.

Macromorfologa

Micromorfologa

Identificacin bioqumica

3. Pruebas de sensibilidad a los antibiticos:

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Determinar si agente etiolgico de la ITU es sensible, moderadamente sensible
o resistente a las diferentes drogas.

INTEGRACION DE LOS RESULTADOS:


I. Dx. Presuntivo: Ex. Directo.
II. Dx. Definitivo: Urocultivo:
Recuento de colonias
Agente etiolgico de la ITU
Sensibilidad o antibiograma

COPROCULTIVO

Viene a ser el cultivo de las heces con la finalidad de aislar a patgenos intestinales
como Salmonella, Shigella, Yersinia, Campylobacter, Vibrio cholerae, E. coli patgenos.
Se utiliza medios en algunas ocasiones para enriquecer las muestras y otros se aslan
directamente en medio selectivos o altamente selectivos, estos medios tienen
capacidad de inhibir el desarrollo de la flora acompaante. Los patgenos intestinales
son generalmente lactosa negativos excepto las E.coli patgenos.

B. Aislamiento: Sembrar por estria y agotamiento.


Mac Conkey
EMB
SS
TCBS, etc.
Incubar 35 -37C x 18 24 hrs.
C. Identificacion:
1. Macromorfologa
2. Micromorfologa
3. Est. Bioqumico metablico
4. Serologa
D. Antibiograma.

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CULTIVO Y AISLAMIENTO DE MYCOBACTERIUM


TUBERCULOSIS. OBSERVACIN LMINAS DE M.
TUBERCULOSIS Y M.LEPRAE.
I. DIAGNOSTICO PRESUNTIVO:

Examen directo Baciloscopia


Col. Ziehl Neelsen: BAAR Especificidad del 98 % y sensibilidad del 60
80 %
Kinyoun: BAAR
Rodamina auramina

RESULTADO DE LA BACILOSCOPIA:

Negativo (-): No se encuentra BAAR en 100 campos observados


Positivo (+): Se observa menos de 1 BAAR promedio por campo en 100 campos
observados
Positivo (++): Se observa de 1 a 10 BAAR promedio por campo en 50 campos
observados
Positivo (+++): Se observa ms de 10 BAAR promedio por campo en 20 campos
observados.
M. Paucibacilar: Se observa de 1 a 9 BAAR en 100 campos microscpicos
observados.

II. DIAGNOSTICO DEFINITIVO: CULTIVO.

Especificidad del 100% y sensibilidad del 80 90%

1. Descontaminacin, homogenizacn y/o concentracin de la muestra: Agregar NaOH y


centrifugar la muestra.

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2. Aislamiento: Siembra por baado en rl medio de cultivo: Ogawa, Lowestein jensen,
Middlebrook Incubar a 37C entre 8-12 a 60 das.

3. Identificacin:

a) Estudio macromorfolgico de la colonia: Colonias secas, rugosas, polimorfas,


cremas o amarillas (coliflor).

CUANTIFICACION DE COLONIAS:

(-) : No se observa ninguna colonia N de colonias totales cuando son menos de 20

(+) : De 20 a 100 colonias

(++) : Mayor de 100 colonias

(+++) : Toda la superficie

b) Estudio microscpico de la colonia: Ziehl Neelsen. BAAR


c) Estudio bioqumico.
Test de niacina
Reduccin de nitratos
Catalasa
Hidrlisis del Tween 80
Reduccin de telurito

PRUEBAS SEROLGICAS PARA EL DX DE SFILIS: VDRL Y


RPR.
El gnero Treponema incluye especies no patgenas y patgenas como el Treponema
causante de sfilis, pinta, pian y bejel. Las cepas virulento de estas espiroquetas son
de dificil cultivo, solo se pueden cultivar en testculo de conejo o almohadilla plantar
del ratn, en 1981 Fieldsteel y Col. obtuvieron el cultivo de T. pallidum, biotipo
pallidum, agente causal de la sfilis, empleando un cultivo celular muy complejo
constituido por monocapas de fibroblasto. Son microorganismos microaerfilos,
Gramnegativos. Como el microorganismo no es cultivable por mtodos convencionales,
el diagnstico de laboratorio se realiza bsicamente por serologa, visualizacin en
microscopio de campo oscuro y la sintomatologa clnica.
En la muestra de una lesin primaria de sfilis en la fase pre coz denominada chancro
sifiltico se puede observar la presencia de espiroquetas mviles con un microscopio
de campo oscuro.

I. DIAGNOSTICO PRESUNTIVO:

Examen directo:

Microscopia de campo oscuro

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Microscopia fluorescente:

II. DIAGNOSTICO DEFINITIVO:

CULTIVO.

El Treponemma pallidum no es cultivable in vitro, slo in (testculos del conejo)

III. DIAGNOSTICO SEROLOGICO:

1. Pruebas serolgicas no treponmicas:

Son presuntivas
De gran sensibilidad pero poca
especificidad
Reaccin antgeno anticuerpo no treponmicos
Son los ms usados
Cualitativos o cuantitativos
Pueden dar falsos positivos
Tenemos a VDRL y RPR

VDRL y RPR, Tcnica cualitativa:

Procedimiento:

Colocar 50 ul de muestra en el hoyo o crculo de las tarjetas.

Aadir 1 gota de reactivo VDRL o RPR

Mezclar y rotar VDRL x 4y RPR x 8 a 180 RPM

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La tcnica VDRL se lleva al microscopio (Microscpica) y el RPR se observa a
simple vista (Macroscpica)

RPR

RESULTADOS DE RPR Y VDRL

CUALITATIVO:

- Reactivo : Presencia de floculacin

- No reactivo: Ausencia de floculacin

TECNICA CUANTITATIVA:

Para determinar el ttulo se debe de usar la tcnica en forma cuantitativa, haciendo uso de

Diluciones en tubos:

Tubo 1 : 0.5 ssf + 0.5 suero 1 : 2, 2 dils


Tubo 2 : 0.5 ssf + 0.5 del T. 11 : 4, 4 dils
Tubo 3 : 0.5 ssf + 0.5 del T. 21 : 8, 8 dils
Tubo 4 : 0.5 ssf + 0.5 del T. 31 : 16, 16 dils
Tubo 5 : 0.5 ssf + 0.5 del T. 41 : 32, 32 dils

2. Pruebas serolgicas treponmicas:

Son de alta especificidad


Se usan para confirmar resultados positivos de pruebas no treponmicas
Reaccin antgeno anticuerpo treponemicos
FTA abs, TPI y Hemoaglutinacin

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