Guía Fitoquímica UIGV

UNIVERSIDAD INCA GARCILASO DE LA VEGA
FACULTAD DE CIENCIAS FARMACUTICAS Y BIOQUMICA
GUA DE PRCTICAS
ASIGNATURA:
FITOQUMICA
AUTOR: NORA HERRERA HERNNDEZ
CICLO ACADMICO: VI
SEMESTRE ACADMICO: 2016 - II
LIMA PER
2016
1
INTRODUCCIN
Las plantas poseen una gran cantidad de metabolitos primarios y secundarios que le permiten
crecer, multiplicarse, defenderse y sobrevivir. El metabolismo secundario de las plantas puede
definirse como el nivel funcional del metabolismo que, aunque no es indispensable para el
crecimiento y desarrollo del vegetal, lo es para la supervivencia de la especie. Dada la riqueza
qumica de las plantas, stas fueron consideradas la fuente natural de numerosos
medicamentos y por ello fueron usadas en la medicina tradicional, popular o folklrica y sus
cualidades fueron transmitidas a travs de las culturas de los pueblos. El estudio fitoqumico de
los vegetales permite conocer los principios activos y evaluar la complejidad de sus caminos de
biosntesis y degradacin as como los mecanismos de regulacin.
Es necesario que los futuros Qumico Farmacuticos conozcan los principales mtodos y
tcnicas de obtencin de los metabolitos secundarios presentes en los productos naturales.
Las experiencias aqu reunidas se han adaptado de diversas fuentes bibliogrficas, todas ellas
de muy alto nivel acadmico y pedaggico; se pretende mostrar que la qumica est
ampliamente distribuida en la naturaleza, se busca que el encuentro de los estudiantes con la
qumica de los productos naturales sea motivador, didctico, en lo posible correctivo y muy
formativo, buscando estimular la intuicin qumica en los estudiantes a partir del entrenamiento
experimental.
En la Gua de Prcticas se describen los procedimientos para el desarrollo de la investigacin

fitoqumica que incluye tcnicas de extraccin, aislamiento, purificacin y caracterizacin de
los metabolitos secundarios. Dentro de los aspectos novedosos de la Gua de Prcticas, resalta
la vinculacin de la parte prctica con el contenido terico del slabo de Fitoqumica, as como
la pertinencia del equipo y reactivos acorde con los actuales recursos de los laboratorios de la
Facultad.
Por el contenido y el formato en la que se presentan cada una de las prcticas, este Gua de
Prcticas est dirigida en especial a estudiantes de licenciatura, no obstante, esta obra puede
ser considerada como material de referencia para profesionales y docentes en el campo.
2
PRCTICA N 1: ESQUEMA DEL PROYECTO DE INVESTIGACIN EN FITOQUMICA
MARCO TERICO
La investigacin cientfica es un proceso libre y creativo. Sin embargo, esto no significa que
carezca de sistematicidad y organizacin. Mucho menos si se trata de la etapa de planificacin,
la cual se concreta en el proyecto de investigacin.
La investigacin cientfica es un proceso dirigido a la solucin de problemas del saber,
mediante la obtencin de nuevos conocimientos. Dicho proceso comprende las siguientes
etapas:
a) Planificacin.
b) Ejecucin o desarrollo.
c) Divulgacin
Planificacin, en este caso, significa trazar el plan o proyecto de la investigacin por realizar.
El desarrollo de la investigacin cientfica entonces, empieza con la formulacin de un proyecto
de investigacin.
Esta etapa se divide en los siguientes pasos:
1) Seleccin del tema: consiste en "... la definicin y posterior delimitacin del campo de
conocimientos sobre el que piensa trabajar." (Sabino, 1994, p. 74).
2) Identificacin de un problema: significa detectar algn aspecto no conocido dentro de un
rea temtica y que amerite de una indagacin para su solucin.
3) Formulacin del Anteproyecto: se refiere a la realizacin de un primer borrador de trabajo
con las ideas bsicas sobre la investigacin que se llevar a cabo.
Los investigadores en el rea de los productos naturales deben aspirar a ser parte de un grupo
de investigacin de reconocida excelencia, en el contexto regional, nacional e internacional, en
trminos de la formacin de profesionales Qumicos Farmacuticos y profesionales en el
campo de qumica con pensamiento universal, y congruentes con las tendencias mundiales en
la bsqueda del conocimiento y de la solucin de los problemas sociales relacionados con la
Salud.
El financiamiento de las investigaciones se consigue elaborando y presentando proyectos en
las convocatorias internas y externas.
COMPETENCIAS
1. Elabora proyectos de investigacin fitoqumica.

3
2. Realiza estudios fitoqumicos de plantas con el fin de impulsar la investigacin en productos

naturales como una fuente alternativa para solucionar problemas de tipo medicinal a la
comunidad acadmica y general.
3. Asla metabolitos secundarios de extractos con accin biolgica comprobada.
4. Purifica y determina estructuras de los metabolitos secundarios aislados por mtodos
espectroscpicos.
5. Realiza ensayos biolgicos con los compuestos puros.
6. Estandariza extractos vegetales y garantza la calidad de productos fitoteraputicos.
MTODO
Se presenta el esquema de un proyecto de investigacin:
1. Titulo
2. Planteamiento del estudio

2.1 Descripcin del problema
2.2 Formulacin del problema
2.3 Delimitacin de objetivos
2.4 Justificacin e importancia del estudio
3. Marco Terico Conceptual

3.1 Investigaciones relacionadas con el estudio / Estado del arte
3.2 Bases Terico-cientficas
3.3 Definiciones de trminos bsicos
4. Hiptesis y Variables
4.1 Hiptesis general
4.2 Hiptesis especifica
4.3 Identificacin y relacin entre variables
5. Metodologa
5.1 Tipo de investigacin
5.2 Poblacin y muestra de estudio
5.3 Tcnicas de recoleccin de datos
5.4 Tcnicas de procesamiento y anlisis de datos que llevan a resultados.
6. Resultados, Discusin
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7. Conclusiones
8. Aspectos Administrativos
8.1 Recursos humanos y materiales
8.2 Presupuesto del proyecto
8.3 Cronograma de acciones
8.4 Evaluacin del proyecto
9. Fuentes de informacin
9.1 Referencias bibliogrficas

9.2 Referencias hemerogrficas
9.3 Referencias electrnicas
10. Anexos
FUENTES DE INFORMACIN
Referencias bibliogrficas
Referencias hemerogrficas
Referencias electrnicas
1. Amiel, J. (1993) Metodologa de la Investigacin Cientfica. Lima a. b. 154 pp.

2. Avila R. (1997) Introduccin a la Metodologa de la Investigacin. La Tesis Profesional,
Aplicaciones y Ejemplos. Lima, W. H. Editores. 206 pp.
3. Bunge, M. (1995) La Ciencia, su mtodo y su filosofa. Lima, Editorial Lima, 160 pp.
4. Day, R. (1990) Cmo escribir y publicar trabajos Cientficos; OPS/OMS. Publicacin
Cientfica N 256. The Orys Press; Washington
5. Eco, H. (1997) Cmo se hace una tesis. Tcnicas y procedimientos de investigacin,
estudio y escritura. Barcelona, Gedisa. 268 pp.
5
PRCTICA N 2: Y RECOLECCIN DE LA ESPECIE VEGETAL A INVESTIGAR
MARCO TERICO
Los Andes es uno de los centros de diversidad, donde existen 38 especies de plantas
domesticadas, pero solamente en Per existen 25000 especies, que corresponde a un 10% de
las especies de todo el mundo. Entre las domesticadas tenemos tuberosas, races, granos,
frutas y vegetales, mientras que un gran nmero de plantas medicinales y ornamentales no
estn domesticadas todava. La biodiversidad del altiplano peruano incluye los seres vivos y
comprende los biomas terrestres (pisos bioclimticos) y acutico (lago Titicaca). En estos
ambientes, la flora y la fauna han evolucionado genticamente y se han adaptado a las
variaciones climticas de mayor riesgo a la sobrevivencia. Los pisos bioclimticos y el lago
Titicaca poseen caractersticas abiticas y biticas peculiares, por cuya razn, la diversidad de
especies, variabilidad gentica, los ecosistemas y la diversidad tnica son componentes
bsicos en la expresin actual de la diversidad biolgica.
La biodiversidad del bioma terrestre posee ventajas comparativas y competitivas excepcionales
en relacin a otras regiones o pases, as, los granos quinua (Chenopodium quinoa Willd.),
caihua (Chenopodium pallidicaule Aellen), kiwicha (Amaranthus caudatus L.) y tarwi (Lupinus
mutabilis Sweet), tienen caractersticas nutritivas prodigiosas para resolver problemas de
desnutricin humana. Las races maca (Lepidium meyenii) y kuchuchu (Xanthoxylaceae),
poseen propiedades medicinales que influyen en la longevidad y fecundidad del hombre,
adems, la pirka y wachanqha son plantas medicinales poco conocidas por la ciencia, sin
embargo en la formacopia andina se usa como laxante y para malestares hepticos (Mujica &
Jacobsen, 2001).
Diversos factores extrnsecos relacionados con el clima, pueden afectar el cultivo de las plantas
medicinales. El crecimiento y desarrollo de las plantas y generalmente, la naturaleza y cantidad
de sus metabolitos secundarios se ven afectados por la temperatura, lluvia, orientacin,
duracin del da (incluyendo la calidad de la luz) y altitud. Estos factores han sido estudiados
mediante el cultivo de determinadas plantas en diversas reas climticas y la observacin de
sus variaciones.
Las drogas pueden ser recolectadas a partir de plantas espontneas o cultivadas y la labor
puede realizarse por personal nativo e inexperto (caso de la ipecacuana, por ejemplo) o por
trabajadores expertos y de un modo altamente cientfico cuando se trata de la digital, belladona
y quina. No obstante, la recoleccin de especies vegetales depende de las caractersticas de
cada especie. Se puede hacer de forma manual o mecanizada. La recoleccin manual es
mucho mas selectiva y artesanal, pero ms lenta y poco rentable.
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COMPETENCIAS
Reconoce el ejemplar adquirido en los lugares de expendio.
Da su nombre comn.
Investiga acerca de la zona geogrfica de origen.
Investiga acerca de los factores edficos y climticos que afectan su cultivo.
MTODO
Para el desarrollo de esta prctica el estudiante buscar la informacin relacionada con las
caractersticas de las plantas medicinales. Una vez encontrada la informacin, el estudiante
proceder a la realizacin y presentacin del respectivo informe que debe contener un listado
de las plantas observadas con el nombre comn, la zona geogrfica de origen, los factores
edficos y climticos que afectan su cultivo.
CUESTIONARIO
1. Consultar sobre las 10 especies de plantas medicinales de mayor comercializacin en Per,

sus condiciones de cultivo y el uso teraputico aprobado por el DIGEMID.
2. Consultar la monografa de una planta medicinal asignada por el profesor, teniendo en
cuenta los siguientes aspectos: nombre cientfico, descripcin botnica, descripcin
microscpica, uso teraputico aprobado, droga aprobada, reacciones adversas,
advertencias y contraindicaciones. Esta informacin se encuentra en las farmacopeas
oficiales y textos de referencia en farmacognosia.
1. BRUNETON, J. (2001) Farmacognosia: Fitoqumica, Plantas Medicinales, 2 ed.

2. Acribia, Zaragoza.
3. KUKLINSKI, C. (2000), Farmacognosia. Estudio de las drogas y sustancias
medicamentosas de origen natural. Ediciones Omega, Barcelona.
4. SORZA, L; VALENCIA, G. (2009) Manual de Prcticas de Laboratorio de
Farmacognosia. Universidad de Antioqua, Bogot.
5. EVANS, W. C. (1991) "Farmacognosia. Trease-Evans". 13a Ed. Interamericana
McGraw Hill,Madrid-Auckland-Bogot.
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PRCTICA N 3: CLASIFICACIN TAXONMICA DE LA ESPECIE A INVESTIGAR
MARCO TERICO
La asociacin de un mismo nombre vulgar a varias especies vegetales y viceversa, puede

acarrear problemas sanitarios y tambin, posiblemente, creencias errneas sobre la eficacia de
un remedio. Se recomienda que ante una consulta sanitaria el paciente indique a su mdico si
toma infusiones u otros preparados vegetales, especialmente en el caso de tratarse de
especies autctonas utilizadas como remedio en Medicina Popular, ya que como ejemplo, es
muy diferente tomar tila procedente de Crataegus monogyna, planta utilizada desde la
antigedad por su accin sedante o tranquilizante y perteneciente a la familia Rosaceae, o "tila"
procedente de especies de rboles conocidos como Tilos pertenecientes al gnero botnico
Tilia (como Tilia platyphyllos o Tilia cordata). Las diferencias entre Crataegus monogyna y las
especies del gnero Tilia son claramente detectables por cualquier persona simplemente a
travs de la observacin de su porte, hojas, flores o frutos.
A estas diferencias morfolgicas podemos aadir otras de tipo ecolgico, biogeogrfico,
evolutivo, farmacolgico, etc.
Por otra parte se debe considerar que ante un remedio popular hay que tener mucha
prudencia, pues el nombre de un remedio puede referirse a varias preparaciones debido a la
sinonimia de los nombres vernculos de las especies vegetales segn el lugar donde nos
encontremos o la procedencia del remedio. Slo la nomenclatura cientfica aceptada
actualmente nos permite establecer un nico nombre para una especie vegetal sin riesgo de
confusin.
COMPETENCIAS
Da el nombre cientfico de la especie botnica a investigar.

Investiga la clasificacin taxonmica de la especie botnica a investigar.
Da una pequea descripcin botnica.
Da su uso teraputico.
Identifica cul es la droga vegetal.
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MTODO EXPERIMENTAL
El estudiante debe realizar en un laboratorio de control la clasificacin taxonmica de la

especie botnica a investigar y su nombre cientfico.
Tambin debe describir la morfologa de la planta e investigar acerca de los usos medicinales
y la parte de la planta que se usa.
CUESTIONARIO
1. Qu es un Herbario y que pasos deben seguirse en la formacin de un herbario?
2. Qu datos debe tener la etiqueta de identificacin de una especie vegetal en un

herbario?
1. BRUNETON, J. (2001) Farmacognosia: Fitoqumica, Plantas Medicinales, 2 ed.

Acribia, Zaragoza.
2. KUKLINSKI, C. (2000), Farmacognosia. Estudio de las drogas y sustancias
medicamentosas de origen natural. Ediciones Omega, Barcelona.
3. SORZA, L; VALENCIA, G. (2009) Manual de Prcticas de Laboratorio de
Farmacognosia. Universidad de Antioqua, Bogot.
4. EVANS, W. C. (1991) "Farmacognosia. Trease-Evans". 13a Ed. Interamericana
McGraw Hill,Madrid-Auckland-Bogot.
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PRCTICA N 4: PREPARACIN DE LAS MUESTRAS PARA EL TAMIZAJE FITOQUMICO
MARCO TERICO
La cosecha de las plantas medicinales est relacionada con el rgano de la planta que
contiene los principios activos relevantes para la medicina natural; es importante tambin
considerar la etapa fenolgica de la planta, la poca del ao y la hora de la cosecha. Por
ejemplo los alcaloides y los aceites esenciales se concentran ms durante la maana.
Lavado
Consiste en aplicar agua potable a la parte de la planta que se va a deshidratar con el
propsito de eliminar la tierra y otros materiales extraos.
El lavado es otro aspecto de inters en el manejo post cosecha de cualquier planta medicinal.
Es muy importante cuando la parte a usar de la planta ha estado expuesta al suelo tal como la
raz y partes del tallo. El agua debe ser potable para garantizar la eliminacin de agentes
contaminantes,
Desinfeccin
Consiste en la eliminacin de los microorganismos patgenos para el hombre por diferentes
vas, hasta los niveles establecidos por las normas. Puede ser:
a) Qumica: Consiste en inmersiones del material a deshidratar, en soluciones de sales
cloradas de otro tipo (Hipoclorito de sodio, Calcio) a fin de reducir la poblacin microbiana
hasta los parmetros aceptados por las normas.
b) Fsica: Consiste en exponer el material a deshidratar a radiaciones gamma, este mtodo se
emplea cuando la desinfeccin qumica no resulta eficiente y cuando la entrega de material
vegetal proviene de reas tecnificadas donde el flujo de entrega es constante y la aparicin de
materias inorgnicas es poca
Blanqueo
Esta operacin se realiza para evitar la oxidacin y el pardeamiento enzimtico. Consiste en
un choque trmico por inmersin en agua caliente o con vapor, con el propsito de inhibir la
accin de las enzimas responsables de la oxidacin.
Secado
De nada sirve producir material de excelente calidad si en el periodo de secado se pierden sus
propiedades curativas. Como regla general, Ocampo y Valverde (2000) recomiendan una
temperatura de 30 a 60 C para el secado de rizomas, cortezas y races; estas deben tener una
humedad final de 12%; para hojas, sumidades y flores recomiendan una temperatura entre 20 y
40 C y una humedad final de 5 a 10%.
Secado y deshidratacin son trminos que estn asociados. En el secado ocurre prdida de
agua por mtodos naturales (sol, aire), mientras que en la deshidratacin esta prdida ocurre
por mtodos artificiales diseados por el hombre. El secado es una tcnica, un arte antiguo
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muy utilizado para preservar plantas y alimentos. De la calidad del secado depender la calidad
del producto final.
Los tejidos de las plantas seca deben ser seleccionados para eliminar los decolorados,
mohosos o partes daadas, mezclas extraas y contaminantes.
COMPETENCIAS
Selecciona y recolecta las muestras para el reconocimiento de metabolitos

secundarios.
Conoce el proceso de lavado y desinfectar las muestras
Estabiliza las muestras por el secado
Prepara los reactivos de identificacin de metabolitos secundarios
MTODO EXPERIMENTAL
Materiales y equipos
Estufa con recirculacin de aire Fiolas x 10, 25, 50, 100 y 500 mL
Beaker x 1 L Balanza analtica
Pipetas x 10 mL Papel filtro
Bagueta Bao mara
Probeta x 100 mL
Reactivos
HCl cido sulfrico
H2O2 NaOH con amonaco
Acetato de plomo con cido actico Frascos color mbar de 50, 100, 250 y 1 000 mL
rea cido ctrico
FeCl3
Procedimiento:
TRATAMIENTO DE LA MUESTRA
Tratamiento 1.
Lave las partes de la planta (hojas, flores) seleccionadas

Desinfctelas con solucin desinfectante
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o
Squelas en estufa con recirculacin de aire a temperatura entre 37 y 40 C durante
24 horas.
El material secado debe ser troceado de forma mecnica hasta obtener un producto de
partculas pequeas, envselo en frascos de color mbar de boca ancha.
Tratamiento 2.
Lave y desinfecte los rizomas o cortezas, primero con agua y un cepillo con cerdas
flexibles para remover tierra y elementos extraos de la superficie de la raz.
Sumrjalos en una solucin de agua y cloro de uso domstico, a una proporcin de 2

gotas por cada litro de agua, por 15 minutos, para lograr un efecto germicida y
bactericida en la superficie de la raz, para proceder a realizar el troceado y as facilitar el
proceso de escaldado, que evita el deterioro del material por pardeamiento, inhibiendo
de esta manera la accin enzimtica y adems reduciendo la contaminacin por
actividad microbiolgica.
El escaldado se realiza en 500 mL de solucin de cido ctrico al 1% a 50C por 30
segundos en un bao mara, luego se enfran en agua destilada por 30 segundos y se
dejan drenar durante 5 minutos.
Realice el secado en un secador de bandejas, donde el insumo principal es el aire seco
caliente, para facilitar la deshidratacin del material a una temperatura promedio de 60 a
70C de aire caliente.
Preparacin de reactivos.
Prepare los siguientes reactivos, en las concentraciones indicadas: HCl, H2O2, acetato de
plomo con cido actico, rea, FeCl3, cido sulfrico e NaOH con amonaco en las
concentraciones indicadas. Envasar las soluciones en frascos limpios y secos de color mbar.
CUESTIONARIO
1. En qu consiste el escaldado de una muestra y cul es su importancia?

2. Realice los clculos correspondientes necesario en la preparacin de los reactivos a
emplear en la prctica
3. Qu tipos de secado existen? Explquelos.
4. Mencione los pasos a seguir en la preparacin de soluciones valoradas.
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1. CYTED. (1995) Manual de Tcnicas de Investigacin. Programa Iberoamericano de

Ciencia y Tecnologa para el Desarrollo. Bogot, Colombia.
2. DOMINGUEZ, X. (1973). Mtodos de Investigacin Fitoqumica . Limusa, Mxico.
FARNSWORTH, N. (1966). Biological and Phytochemical Screening of Plants. J.
Pharm Sci 55 , 225 - 275 .
3. HOSTETTMANN, K. , GUPTA, M., MARSTON, A., FERREIRA, E. (2008) Plantas
Medicinales Iberoamericanas. 1 edicin. CYTED. Programa Iberoamericano de Ciencia y
Tecnologa.
4. SHARAPIN, N. (2000) Fundamentos de Tecnologa de productos fitoteraputicos. Primera
edicin. Area de Ciencia y Tecnologa del convenio Andrs Bello & Red Iberoamericana
de Productos Fitofarmacuticos (RIPROFITO) del Subprograma X del CYTED.
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PRCTICA N 5: MTODOS DE EXTRACCIN DE COMPONENTES FITOQUMICOS
MARCO TERICO
La extraccin, el fraccionamiento y la purificacin de mezclas para obtener compuestos puros,

son aspectos decisivos para cualquier investigacin experimental.
El extracto obtenido es filtrado para separarlo del residuo slido (marco) y el disolvente es
evaporado a presin reducida en un evaporador rotatorio. Al residuo slido o aceitoso se le
conoce como extracto crudo. La obtencin de una sustancia pura a partir de l, requiere de
fraccionamientos y purificaciones ulteriores.
La tendencia es aplicar una tcnica estndar para obtener un extracto crudo, sin embargo la
gran diversidad de metabolitos secundarios obliga a utilizar tcnicas individuales, segn el tipo
de compuesto. Los disolventes deben ser re-destilados antes de ser usados
FUNDAMENTO
El proceso de extraccin es una operacin de separacin basada en la caracterstica de ser
selectiva e implica el tratamiento de la mezcla con un disolvente apropiado, que en el caso
ideal disuelva slo el constituyente deseado, permaneciendo sin disolver las dems sustancias.
En la prctica se obtiene una mezcla de compuestos solubles en el disolvente empleado y
otras arrastradas por co-solubilidad.
COMPETENCIAS
1. Desarrolla una extraccin por la tcnica de maceracin

2. Realiza una extraccin por la tcnica de reflujo
3. Implementa una extraccin por la tcnica de Soxhlet
4. Realiza una extraccin por la tcnica de percolacin
5. Desarrolla una extraccin por la tcnica de reparto o particin
6. Implementa una extraccin por la tcnica de destilacin por arrastre con vapor de agua.
MTODO EXPERIMENTAL
Materiales y equipos:
Estufa con recirculacin de aire Desecador
Beaker x 50, 100 mL Papel filtro
Pipetas x 5, 10 mL Embudo simple
Bagueta Frascos color mbar de 50, 100, 250 y 1 000 mL
Probeta x 100 mL Equipo de reflujo con baln de 100 mL
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Balanza analtica Evaporador rotativo

Papel filtro Pera decantacin x 100, 250 mL
Bao mara Equipo soxhlet
Matraz erlenmeyer x 200 mL Equipo destilacin por arrastre con vapor
Agitador magntico Papel indicador (0-14 unidades de pH)
Reactivos:
Cloroformo Acetato de etilo
Etanol Carbonato de sodio
Metanol Sulfato de sodio anhidro.
ter de petrleo
Procedimiento:
I. Extraccin Lquido Slida: Operacin de separacin por contacto en la que ciertos
componentes de una matriz slida se extraen selectivamente mediante el uso de un
disolvente.
1. MACERACIN
Pesar la muestra seca y pulverizada.
Colocar la muestra pesada en un matraz erlenmeyer y adicionar un volumen de solvente,
con agitacin constante.
Filtrar, lavar el filtrado dos veces con el disolvente y evaporar en un evaporador rotatorio
hasta sequedad, llevar a un desecador hasta peso constante y determinar el peso del
extracto obtenido.
2. REFLUJO
Colocar en un baln el peso indicado de droga pulverizada y adicionar un volumen de
solvente, reflujar y filtrar en caliente.
3. SOXHLET:
Pesar la muestra seca y pulverizada.
Colocar la muestra en un cartucho de papel filtro.
Extraer con el disolvente indicado durante 2 horas.
Evaporar el disolvente a presin reducida hasta sequedad y llevar a un desecador.
Pesar, hacer el clculo del % de grasa
Evaporar el disolvente del marco (en la campana extractora) y guardarlo.
Extraer el marco con el segundo disolvente.
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Evaporar el disolvente a presin reducida hasta sequedad y llevar a un desecador.
4. PERCOLACIN:
Pesar la muestra seca y molida.
En un percolador, colocar una pequea torunda de algodn embebido en el sistema
extractor de disolventes.
Colocar la muestra pesada en el percolador.
Adicionar gota a gota el disolvente extractor hasta cubrir la muestra y macerar.
Colectar el percolado gota a gota.
Renovar el disolvente extractor, macerar y colectar el segundo extracto.
Repetir el proceso anterior por tercera vez y colectar el tercer percolado.
Reunir todos los percolados y concentrar hasta 40 mL.
II. Extraccin Lquido Liquido: Operacin de separacin por contacto en la que ciertos
componentes de una matriz lquida se extraen selectivamente mediante el uso de un
disolvente.
PARTICIN O REPARTO:
Extraer inmediatamente la fase acuosa con tres porciones sucesivas del disolvente
indicado.
Colectar los extractos, aadir el desecante y dejar reposar toda una noche.
Filtrar y guardar refrigerado en un frasco de vidrio mbar hermticamente cerrado.
Concentrar a presin reducida hasta sequedad y pesar.
III. Extraccin Gas - Slida: Operacin de separacin por contacto en la que ciertos
componentes de una matriz lquida se extraen selectivamente mediante el uso de un
disolvente.
EXTRACCIN POR ARRASTRE CON VAPOR DE AGUA:
Montar un aparato para destilacin por arrastre de vapor.
Colocar la muestra fragmentada en trozos pequeos, en el matraz y adicionar agua.
Adicionar algunos trozos de porcelana porosa y destilar la mezcla manteniendo el
volumen interno prximo al volumen inicial.
Destilar la mezcla por arrastre de vapor, hasta que no aparezcan gotas de aceite en el
refrigerante.
Recibir el destilado en un embudo de separacin con una solucin saturada de cloruro
de sodio y un poco del disolvente indicado.
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Separar la fase orgnica y colocar el agente desecante por unos minutos, decantar y
concentrar a temperatura ambiente.
Pesar y anotar el volumen del aceite obtenido. Calcular el rendimiento con base en el
material vegetal de partida.
CUESTIONARIO
1. Cul es el fundamento fsico qumico de la extraccin por reparto?

2. Qu caractersticas fsico qumicas presenta el aceite esencial de clavo de olor?
3. Puede realizarse una extraccin en Soxhlet con mezclas de disolventes? Porqu?
4. Puede realizarse una destilacin por arrastre con vapor de etanol?

2. DOMINGUEZ, X. (1973). Mtodos de Investigacin Fitoqumica. Limusa, Mxico.
3. FARNSWORTH, N. (1966). Biological and Phytochemical Screening of Plants. J.
Pharm Sci 55, 225 - 275.
edicin. Area de Ciencia y Tecnologa del convenio Andrs Bello & Red Iberoamericana
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PRCTICA N 6: MARCHA DE SOLUBILIDAD Y TAMIZAJE FITOQUMICO
MARCO TERICO
En el anlisis de los metabolitos secundarios presentes en las plantas, existen una serie de
mtodos utilizados para su deteccin.
Los mtodos empleados pueden ser:
1. Histolgicos,
2. Biolgicos
3. Fisicoqumicos
4. Qumicos
La evaluacin fitoqumica en el laboratorio se realiza en un extracto crudo preparado por
extraccin del material vegetal seco y molido. Las plantas herbceas son utilizadas en su
totalidad, pero las plantas leosas es preferible seccionarlas en sus diferentes partes
botnicas: corteza, madera, frutos, semillas, races, hojas, etc.
Metabolitos primarios
Son los productos qumicos resultantes del metabolismo vital de todo ser vivo, son: los
carbohidratos, lpidos, protenas y cidos nucleicos.
Metabolitos secundarios
Son subproductos de rutas metablicas normales que ocurren en ciertas especies, siendo
particulares dentro de un grupo taxonmico, estado de vida o tejido, presentando una
distribucin restringida dentro del Reino vegetal, dando origen a la quimiotaxonoma.
Su ocurrencia depende de ataque de patgenos, predadores, cambios trmicos o lumnicos,
deficiencias nutricionales o presencia de otros organismos intra o interespecficos. El
metabolismo secundario determina la especializacin, puede no ser importante para la clula,
pero si para el organismo como un todo.
Reconocimiento de los metabolitos
Se realiza mediante pruebas fitoqumicas preliminares, consisten en reacciones qumicas que
producen una alteracin rpida en la estructura molecular del compuesto, por ejemplo
modificacin de un grupo funcional, apertura de un anillo, formacin de un aducto o un
complejo, lo cual da por resultado un cambio de color, la formacin de un precipitado o el
desprendimiento de un gas, lo cual nos indica la presencia o ausencia de un metabolito
secundario en particular.
Reconocimiento de alcaloides.
La base de un alcaloide es soluble en solventes orgnicos y pueden formar sales solubles en
solventes polares, cuando se encuentran en cidos minerales diluidos.
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Su presencia se observa con los reactivos yodados de Dragendorff, Mayer, Wagner,

Bouchardat, etc., con los cuales precipita.
Reconocimiento de Flavonoides
Son compuestos fenlicos con 15 tomos de carbono, su esqueleto se representa por el
sistema C6-C3-C6.
La aparicin de colores naranja, rosado, rojo o violeta con el reactivo de Shinoda es prueba
positiva para la existencia de flavonoides en la muestra.
Reconocimiento de cardiotnicos
Una aglicona cardiotnica es un ncleo esteroidal con los grupos metilo C18 y C19, un grupo
hidroxilo en el C3 y un anillo lactnico , -insaturado de 4 miembros, unido al C17, estimulan
el msculo cardaco cuando estn en la forma de glicsidos.
Reconocimiento de Saponinas
Son glicsidos solubles en agua que pueden hemolizar la sangre y disminuir la tensin
superficial del agua, formando abundante espuma. Por hidrlisis se desdoblan en
carbohidratos y una aglicona llamada sapogenina.
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La sapogenina puede tener el sistema anular esferoidal o de un triterpeno pentacclico. Los

anillos E y F de la saponina esferoidal conforman el llamado sistema espirostanal. El enlace
glicosdico se forma siempre con el carbono 3.
Reconocimiento de Cumarinas
Son compuestos fenlicos con la estructura de1-benzopiran-2-ona. Presentan fluorescencia
bajo la luz ultravioleta a 365 nm.
Reconocimiento de taninos
Son productos de excrecin de muchas plantas, como mecanismos de defensa contra
organismos parsitos. Comnmente estn en hojas, ramas y debajo de la corteza.
Son polmeros de polifenoles y se clasifican en:
Taninos hidrosolubles o piroglicos, son steres fcilmente hidrolizables, se reconocen con el
reactivo gelatina sal y con solucin de FeCl3 con el que dan color azul. Son comunes en
plantas dicotiledneas.
Taninos condensados, por hidrlisis dan azcar y cido elgico, algunos son llamados
proantocianidinas. Tambin se reconocen con solucin de FeCl3, con el que dan coloracin
verde.
Reconocimiento de esteroides y/o triterpenoides
Presentan la estructura del ciclopentano perhidrofenantreno, metilos en los carbonos 10 y 13 y

un radical lineal en el carbono 17. La formacin de colores rojo, azul o violeta o verde con el
reactivo de Liebermann Bourchard, es positivo de la reaccin.
Reconocimiento de quinonas
Son dicetonas cclicas insaturadas, pueden ser benzoquinonas, naftoquinonas, antraquinonas,
fenantroquinonas.
Se reconocen con el reactivo de Borntrager, si la capa acuosa se colorea de rosado a rojo
intenso es una prueba positiva
20
Reconocimiento de antocianinas
Son pigmentos flavonoides que se comportan como indicadores cido base. Se encuentran en
la savia de las plantas y en forma de slidos amorfos o cristalinos en las hojas de tejido leoso
y en frutos.
COMPETENCIAS
Detecta los metabolitos secundarios derivados de la ruta del shikimato como taninos,
compuestos fenlicos, cumarinas, leucoantocianidinas,etc.
Reconoce los metabolitos secundarios derivados de la ruta del mevalonato (terpenos,
las saponinas, esteroides, cardiotnicos, etc.
Identifica los metabolitos secundarios derivados de la ruta de los aminocidos,
presentes en las plantas como son los alcaloides.
Reconoce los metabolitos secundarios derivados de la ruta del acetato, presentes en
las plantas como son las quinonas.
Identifica los metabolitos secundarios derivados de rutas biogenticas mixtas,
presentes en las plantas, como son los flavonoides y los antocianos.
MTODO EXPERIMENTAL
Sustancias Reactivas Materiales y equipos instrumentales

Nitrato de Bismuto pentahidratado matraz erlenmeyer
Acido ntrico concentrado probetas
Yoduro de potasio pipetas graduadas
Cloruro de mercurio ( I ) tubos de ensayos
Yodo, NaOH, cloruro frrico Baguetas
Magnesio , limaduras gradilla para tubos de ensayos
Acido clorhdrico concentrado lunas de reloj
Metanol, cloroformo, etanol, tolueno pinzas para tubos de ensayos
Eter isoproplico hot plate
Gelatina Pizeta
Cloruro de sodio
21
I. MARCHA DE SOLUBILIDAD
La muestra seca se extrae en alcohol de 70 por 8 das (maceracin), con movimiento del
macerado peridico y en oscuridad, en un envase de vidrio de color mbar con tapa hermtica.
Cada uno de los extractos filtrados se deshidrat o concentr durante 48h hasta obtener un
extracto seco a una temperatura no mayor de 40C.
Del extracto etanlico del material vegetal seco se toman alcuotas en tubos de ensayos con
solventes de polaridad creciente (n-Hexano, Benceno, Diclorometano, Acetato de Etilo,
Metanol, Etanol y Agua)
II. TAMIZAJE FITOQUMICO
Fundamento
La deteccin de metabolitos secundarios se basa en su extraccin y su identificacin por
reacciones de coloracin y/o precipitacin.
Procedimiento:
Colocar el extracto seco en un matraz erlenmeyer y adicionar el disolvente indicado.

El extracto obtenido (15 mL), dividirlo en 4 alcuotas y disolverlo en cloroformo, metanol,
agua y cido clorhdrico al 1%:
1 En la solucin metanlica, verificar la presencia de Flavonoides, con la prueba de
Shinoda, esteroides, con la prueba de Lieberman Burchard, alcaloides, quinonas con la
prueba de Bornatrager y taninos con las siguientes reacciones:
A la 1 porcin del extracto inicial agregarle solucin de cloruro frrico.
A la 2 porcin agregar solucin de cloruro de sodio.
A la 3 adicionar solucin de gelatina y
A la 4 el reactivo gelatina-sal.
La precipitacin con este ltimo reactivo o con el 2 y el 3, es indicativo de la presencia
de Taninos. Si slo ocurre con el 1 el test, es falso.
2 En la solucin cida, comprobar la presencia de Alcaloides, con las pruebas de
Dragendorff , Mayer, Soneschein y Wagner .
3 En la solucin acuosa verificar la presencia de: flavonoides, leucoantocianidinas con la
prueba de Rosenheim, saponinas con la prueba de la espuma, carbohidratos con la
reaccin de Molish, azcares reductores con los reactivos de Fehling y de Benedict,
sesquiterpenlactonas con las pruebas de Legal y Baljet, aminocidos con el reactivo de
Ninhidrina.
22
CUESTIONARIO
1. En qu se fundamenta la prueba a la gota?

2. Escriba las ecuaciones qumicas de las reacciones que ocurren en el tamizaje
fitoqumico.
3. Qu criterios deben considerarse al analizar los resultados del tamizaje fitoqumico?
4. Porqu se recomienda realizar cinco ensayos para identificar alcaloides?
1. CYTED. (1995) Manual de Tcnicas de Investigacin. Programa Iberoamericano

de Ciencia y Tecnologa para el Desarrollo. Bogot, Colombia.
Pharm Sci 55, 225 - 275.
4. SHARAPIN, N. (2000) Fundamentos de Tecnologa de productos fitoteraputicos.
Primera edicin. Area de Ciencia y Tecnologa del convenio Andrs Bello & Red
Iberoamericana de Productos Fitofarmacuticos (RIPROFITO) del Subprograma X
del CYTED.
23
PRCTICA N 7: TCNICAS CROMATOGRFICAS DE FRACCIONAMIENTO Y

PURIFICACIN
MARCO TERICO
Los extractos crudos obtenidos a partir de productos naturales son mezclas muy complejas,
que necesitan fraccionamientos y purificaciones.
El fraccionamiento de un extracto o la purificacin de una sustancia de inters, se realiza
siguiendo los criterios de separacin basados en alguna propiedad fsica o qumica que
diferencia al compuesto en cuestin de otros que en principio estaran unidos a l.
La cromatografa (chromo= color y graphie=escritura, escribir en colores) fue inventada el 1903
por el botnico ruso Mikhail Tswett. Es un mtodo de separacin para la caracterizacin de
mezclas complejas de origen natural. Se basa en el principio de retencin selectiva, cuyo
objetivo es separar los distintos componentes de una mezcla, permitiendo identificar y
determinar las cantidades de dichos componentes. Las tcnicas cromatogrficas son muy
variadas, pero en todas ellas hay una fase mvil que consiste en un fluido (gas, lquido o fluido
supercrtico) que arrastra a la muestra a travs de una fase estacionaria que se trata de un
slido o un lquido fijado en un slido.
Entre los diversos mecanismos de separacin cromatogrfica tenemos:
Aqullos que fraccionan las molculas en base a sus tamaos, como la Cromatografa
de Filtracin en gel.
Aqullos que separan a las molculas atendiendo a las diferencias en la carga elctrica
neta del compuesto, como la Cromatografa de intercambio inico.
Los que se basan en la retencin especfica de slo uno o varios tipos de molculas,
como la Cromatografa de Afinidad.
Los que se basan en la adsorcin diferencial a determinadas matrices o Cromatografa
de Adsorcin.
Los procedimientos de separacin basados en las diferencias de solubilidad, como la
Cromatografa de Reparto o Particin.
CROMATOGRAFA EN COLUMNA (CC) Es una tcnica de separacin en la que el lecho

estacionario est contenido dentro de un tubo de vidrio vertical.
CROMATOGRAFA EN CAPA FINA (CCF)
Es la tcnica de separacin en la que la fase estacionaria est sobre un plano formando una
capa de partculas slidas extendida sobre un soporte, tal como una placa de vidrio o aluminio
((Thin Layer Chromatography, TLC).
El revelado de las placas se puede realizar mediante dos mtodos:
Mtodo qumico
24
Mtodo fsico (pticos).

CROMATOGRAFA EN CAPA DELGADA PREPARATIVA (CCDP)
La cromatografa preparativa se diferencia en que la papilla debe hacerse con menos agua que
de ordinario. El espesor ptimo oscila desde un mnimo de 1 mm. hasta un mximo de 2 mm.
La siembra debe realizarse a lo ancho de la placa.
Una vez localizados los compuestos, stos se extraen de la fase estacionaria, uno a uno, con
la ayuda de una esptula, sobre un papel de filtro u otro soporte. Una vez disuelto el
compuesto se filtra varias veces para separar el compuesto y la fase estacionaria.
Las placas utilizadas en cromatografa preparativa son placas grandes, de aproximadamente
20x20 cm.
En la prctica desarrollaremos algunas tcnicas cromatogrficas como: Cromatografa en
Columna, CC, Cromatografa en Capa Delgada, CCD y Cromatografa en Capa Delgada
Preparativa, CCDP.
COMPETENCIAS
Preparar y desarrollar una Cromatografa en Capa Delgada, CCD.

Preparar y desarrollar una Cromatografa en Capa Delgada Preparativa, CCDP.
Preparar y desarrollar una Cromatografa en Columna, CC.
MTODO EXPERIMENTAL
Materiales y equipos
Materiales
Estufa con recirculacin de Bao mara Equipo para medir
aire punto de fusin
Beaker x 50, 100 mL Desecador Espectrofotmetro
Pipetas x 5, 10 mL Cromatoplacas de slica gel 20 x 20
cm y cmara cromatogrfica
Bagueta Cromatofolios de slica gel GF -254,
5 x 10 cm ycubeta cromatogrfica
Probeta x 100 mL Columna cromatogrfica
Balanza analtica Tubos de ensayos y gradilla
Papel filtro Lmpara UV, longitud de onda corta
y onda larga
25
Reactivos
Slicagel para CC Acetona Tolueno Cloruro frrico
Cloroformo Acetato de etilo cido sulfrico Agua destilada

concentrado
Metanol Diclorometano Hidrxido de sodio
1. CROMATOGRAFA EN CAPA DELGADA PREPARATIVA, CCDP
Procedimiento:
A) Tratamiento de la Muestra: pesar el extracto seco de la muestra.
B) Cromatografa En Capa Delgada Preparativa

Sembrar en banda el extracto pesado, en un cromatofolio de 20 x 20 cm y utilizar como
fase mvil la mezcla indicada
Desarrollar la Cromatografa
Desorber la banda de inters con el disolvente adecuado.
Recristalizar.
Reconocer la sustancia con los reactivos de coloracin indicado.
Determinar su punto de fusin
Leer su espectro en EtOH
2. PURIFICACIN POR CROMATOGRAFA EN COLUMNA
Procedimiento:
A) Tratamiento de la muestra: pesar el extracto de la muestra.
B) Cromatografa en columna
Lavar y secar la columna cromatogrfica, colocar algodn o lana de vidrio en la
columna para evitar que la slica pase a travs de la salida inferior.
Preparar la fase estacionaria en un beaker, mezclando silicagel con el disolvente
elegido hasta formar una suspensin.
Empacar la columna por llenado hmedo, el llenado debe ser uniforme.
Eliminar el aire contenido en la columna.
Dejar en reposo para que sedimente la fase estacionaria.
Preparar la muestra en forma de papilla.
Aplicar la muestra slida por la parte superior de la columna.
Eluir la columna con los disolventes indicados, en gradiente.
Recibir los eluatos en tubos de ensayos y analizarlos por CCD.
26
3. IDENTIFICACIN POR CROMATOGRAFIA EN CAPA FINA
Procedimiento:
El extracto obtenido y pesado, re disolverlo en el disolvente elegido y sembrar en una

cromatoplaca de slica gel GF -254, desarrollar en la mezcla de disolventes.
Retirar la placa luego de desarrollar, dejarla secar en un extractor de vapores y
analizarla con una lmpara UV.
CUESTIONARIO
1. Al realizar una TLC Qu criterios utiliza en la eleccin de la fase mvil y la

fase estacionaria?
2. Qu se entiende por Rf?
3. Qu etapas comprende el empaque de una columna cromatogrfica?
4. Cules son las diferencias entre HPTLC y TLC?
5. Explique el mecanismo de adsorcin en la separacin cromatogrfica.
6. Cmo se identifican los componentes no coloreados eluidos de una
columna cromatogrfica?

3. FARNSWORTH , N. (1966). Biological and Phytochemical Screening of Plants. J.
Pharm Sci 55, 225 - 275.
4. HOSTETTMANN, K., GUPTA, M., MARSTON, A., FERREIRA, E. (2008) Plantas
Medicinales Iberoamericanas. 1 edicin. CYTED. Programa Iberoamericano de
Ciencia y Tecnologa.
Primera edicin. rea de Ciencia y Tecnologa del convenio Andrs Bello & Red
Iberoamericana de Productos Fitofarmacuticos (RIPROFITO) del Subprograma X del
CYTED.
27
PRCTICA N 8: COMPUESTOS FENLICOS: FENILPROPANOIDES Y

CUMARINAS
MARCO TERICO
La produccin de aceites esenciales es uno de los principales procesos donde se aplica la

destilacin por arrastre de vapor de agua
Los aceites esenciales son los constituyentes odorferos o esencias de una planta. La palabra
esencial fue derivada del latn quinta essentia que significaba el quinto elemento asignado a
estos aceites ya que la tierra, aire, fuego y agua fueron considerados los cuatro primeros
elementos. Los aceites esenciales estn constituidos qumicamente por terpenoides
(monoterpenos, sesquiterpenos, diterpenos, etc.) y fenilpropanoides, compuestos que son
voltiles y por lo tanto arrastrables por vapor de agua.
El clavo de especia es el botn floral del rbol de las Indias Occidentales, Eugenia aromtica,
familia Mirtaceae. Su olor se describe como punzante y especiado, tiene aplicaciones como
analgsico dental de uso tpico y se usa tambin en la produccin comercial de vainillina.
Tiene un agradable olor a clavo.
Eugenol (C10H12O2) es guaiacol con una cadena alil sustituda. i.e. 2 metoxi-4-(2-propenil)fenol.
El eugenol es un miembro de los compuestos de la clase alilbencenos. Es un lquido oleoso de
color amarillo plido extrado de ciertos aceites esenciales, especialmente del clavo de olor, la
nuez moscada, y la canela. Es difcilmente soluble en agua y soluble en solventes orgnicos.
Las cumarinas son metabolitos secundarios que derivan de la ruta del shikimato y actan como
anticoagulantes orales (4-hidroxicumarinas), como vitamina K falsa, interfieren en la
regeneracin de epxidos, provoca carencia de la vitamina K activa.
En humanos estn presentes como metabolitos (7-hidroxicumarinas).
COMPETENCIAS
Aisla el eugenol a partir del aceite esencial de clavo por particiones sucesivas con
disolventes y lcalis.
Identifica el eugenol por sus propiedades fsicas.
Identifica el eugenol por su Espectro de absorcin.
Sintetiza una cumarina.
28
MTODO EXPERIMENTAL
Sustancias reactivas Materiales y equipos instrumentales

Aceite esencial de Embudo de separacin, Soportes universales
clavo de olor Beakers, Probetas
Diclorometano Pipetas x 10 mL
Solucin de KOH al 5%..................................... Balanza analtica
Solucin de HCl al 5% Potencimetro, Rotavapor
Sulfato de sodio anhidro Bao mara
Cloruro de sodio Trozos de porcelana porosa
Procedimiento:
Mezclar el aceite esencial con diclorometano, extraer la fase orgnica por reparto en un
embudo de decantacin con solucin de KOH al 5%.
Reunir las fases acuosas alcalinas y lavarlas una vez con diclorometano.
Pasar la disolucin acuosa alcalina a un beaker y acidificar lentamente (reaccin
exotrmica) hasta un pH de 1 con HCl
Extraer la solucin cida con diclorometano, separar la fase acuosa y desecharla.
Reunir las capas orgnicas y lavarlas sucesivamente con agua destilada y de solucin
semisaturada de cloruro de sodio.
Secar la disolucin orgnica sobre Sulfato de sodio anhidro.
Decantar el agente desecante y eliminar el diclorometano a presin reducida en el
rotavapor, el eugenol se obtiene como un aceite amarillo plido con un intenso olor a clavo.
Pesar el aceite y calcular el rendimiento de eugenol, a partir del aceite de clavo empleado.
Obtener su ndice de refraccin.
Obtener su espectro de absorcin en el UV en el rango de 200 a 300 nm.
CUMARINAS
Sntesis 1:
En un matraz bola o pera de 25 ml agregar: resorcinol (5 mmol), acetato de etilo (6 mmol),
etanol (5mL) y HCl (5mL) Calentar a reflujo la mezcla de reaccin por 30 minutos en bao de
arena. Enfriar la mezcla a temperatura ambiente y adicionar hielo. Agitar hasta la formacin de
un precipitado. Filtrar y lavar el slido con agua fra. Recristalizar en etanol mediante reflujo.
Sntesis 2:
Mediante microondas:
29
En un matraz erlenmeyer de 150 mL agregar: resorcinol (5mmol), acetoacetato de etilo (6

mmol) y HCl (5 mL).
Introducir al horno de microondas a una potencia de P-3 durante 30 minutos, cada 10 minutos
en intervalos (agitar en cada uno de ellos). Adiciona a la mezcla de reaccin hielo y agitar.
Filtrar y lavar con agua fra. Recristalizar con etanol.
CUESTIONARIO
1. Escriba las ecuaciones qumicas que representen la obtencin del Eugenol a partir del
aceite esencial de clavo de olor.
2. Qu es un aceite esencial y cmo se clasifican por su composicin qumica?
3. Porqu las capas orgnicas se lavan con solucin semisaturada de cloruro de sodio?
4. Cul es el uso del eugenol?
5. Qu estudios existen acerca de la toxicidad del eugenol al ser usado en la salud?

Pharm Sci 55 , 225 - 275 .
CYTED.
30
PRCTICA N 9: FLAVONOIDES: DETERMINACIN DE RUTINA EN RUTA

GRAVEOLENS O RUTA spp , RUDA, UTILIZANDO TCNICAS
CROMATOGRFICAS
MARCO TERICO
El gnero Ruta (Familia Rutaceae) comprende alrededor de 60 especies; etimolgicamente

Ruta deriva del griego ruomai, que significa refrenar, en alusin a la supuesta accin
afrodisiaca.
Las especies de este gnero se conocen comnmente como ruda, y la Ruta graveolens L. es
una antiga planta medicinal nativa del Sur de Europa; entre sus diversas aplicaciones
encontramos que se utiliza la infusin de las hojas como digestivo, calmante nervioso, para
gases intestinales y clicos hepticos y menstruales, as como en lavados para la inflamacin
de ojos y odos. Otros usos son: contra el aire (frotar las sienes con las hojas), contra la fiebre
(aplicar el cocimiento en aguardiente de la planta machacada sobre el vientre y cabeza), en
prcticas de chamamismo para alejar los malos espritus (poner un manojo en la puerta o en la
casa), etc.
Las rudas se caracterizan por contener flavonoides, entre ellos la rutina, que se presenta
como cristales color amarillo plido, el que puede oscurecer gradualmente por exposicin de la
23
luz. Descompone con efervescencia a 214-215 C, su rotacin especfica [] D es +13,82
(etanol) y da un color verde en solucin diluda de cloruro frrico.
La rutina tiene importante uso en el tratamiento de la fragilidad capilar, encontrndose en
formulaciones farmacuticas con ese fin.
COMPETENCIAS
Detecta la rutina de la ruda a travs de cromatografas de capa delgada.

Separa la rutina de la ruda a travs de cromatografa de columna.
Purifica la rutina por Cromatografa en Capa Delgada Preparativa, CCDP.
Elucida estructuralmente la rutina por Espectroscopia de Absorcin UV e IR.
31
MTODO EXPERIMENTAL
Hojas secas de ruda Matraz erlenmeyer
Metanol beakers, bagueta

Cromatofolios de slicagel 4 x 10 cm pipetas, probeta
Solucin de FeCl3 al 1%.................................. ..embudo simple, capilares
Diclorometano Lmpara de luz UV
Slica gel 0,063 0,2 mm Tubos de ensayos, gradilla y pinzas
Cromatoplacas de slicagel gruesa de Espectrofotmetro UV
20 x 20 cm Espectrofotmetro IR
Procedimiento:
2.1 Tratamiento de muestra
Macerar en un recipiente tapado 10 gramos de hojas secas y molidas con suficiente metanol
por 48 horas con agitacin constante.
Filtrar y evaporar a sequedad en un evaporador rotatorio. Pesar el extracto seco y calcular el
rendimiento.
2.2 Anlisis cualitativo por cromatografa de capa delgada, CCD
Correr una CCD utilizando las siguientes condiciones:
- Adsorbente: cromatofolios de slica gel o cromatoplacas
- Dimensin: 4 x 10 cm
- Volumen aplicado: 5 uL (10 mg del extracto 1 en mL de metanol)
- Sistema de elucin: CH2Cl2:MeOH , 100:15
- Revelador: luz UV 366 nm, y solucin etanlica al 1% de FeCl3
Corra paralelamente una muestra de rutina estndar.
2.3 Separacin de rutina por cromatografa de columna (CC)
Hacer una CC utilizando 200 mg del extracto metanlico obtenido en 2.1, utilizando las
siguientes condiciones:
- Adsorbente: slica gel 0,063 0,2 mm
- Relacin extracto: adsorbente 1: 30
- Sistema de elucin:
CH2Cl2: MeOH Volumen total
(en proporciones) (mL)
100 15 30
100 20 30
100 30 30
32
Proceder de la siguiente manera:

- Aplicar los sistemas de elucin, recogiendo fracciones de 10 mL cada una.
- Observar las fracciones colectadas bajo luz UV 366 nm.
- Realizar el anlisis comparativo por CCD de las fracciones obtenidas, utilizando una muestra
estndar de rutina, y el sistema eluyente CH2Cl2: MeOH, 100: 15.
- Reunir las fracciones que contengan rutina, evaporar a sequedad.

- Si es necesario purificar por CCD preparativa usando el sistema eluyente CH 2Cl2: MeOH
(100 : 15). Recristalizar y pesar el producto.
- Obtener los espectros IR y UV
CUESTIONARIO
1. Cul es la ruta biogentica a partir de la cual se forman los flavonoides?

2. Cmo se clasifican los flavonoides, en base a su diferencia estructural qumica?
3. Qu seales de absorcin en el espectro UV se observan en la rutina? Adjunte el
espectro obtenido.
4. Qu seales de absorcin en el espectro IR se observan en la rutina? Adjunte el
espectro obtenido.
5. Cul es la aplicacin de la rutina?

CYTED.
5. LOCK DE UGAZ, O. (1994) Investigacin fitoqumica. Mtodos en el estudio de los
productos naturales. 2 ed. Lima: Fondo editorial Pontificia Universidad Catlica del
Per.
33
PRCTICA N10: ELUCIDACIN DE FLAVONOIDES POR ESPECTROSCOPA UV

VISIBLE
MARCO TERICO
Los FLAVONOIDES, unas sustancias llamadas as porque las primeras que se lograron aislar
eran de color amarillo, pero tambin hay incoloras con otros colores diferentes del amarillo
como son el rojo, el violeta y el azul.
Qumicamente son molculas que tienen dos anillos bencnicos ( aromticos, para los
qumicos orgnicos) unidos a travs de una cadena de tres tomos de carbono, puesto que
cada anillo bencnico tiene 6 tomos de carbono, los autores los denominan simplemente
como compuestos C6C3C6.
Figura 1. Estructura bsica de un flavonoide
Espectroscopa ultravioleta-visible
Los espectros UV de los flavonoides en metanol presentan bandas caractersticas debidas a
los sistemas conjugados de los anillos aromticos.
Las flavonas y flavonoles muestran dos bandas definidas: La banda I, de mayor longitud de
onda en el rango 300-390 nm asociada con la funcionalidad cinamolo, y la banda II, entre 250-
280 nm debida al anillo aromtico A (funcionalidad benzolo), aunque a veces se observan
otras bandas de absorcin. La posicin de la banda I depende del tipo de flavonoide: las
flavonas la muestran en 310-350 nm, los flavonoles 3-O-sustituidos en 330-360 nm, y los
flavonoles en 350-385 nm.
La presencia de hidroxilos fenlicos en diferentes posiciones de la molcula puede
establecerse estudiando el comportamiento del espectro UV metanlico al aadirle los
denominados reactivos de desplazamiento: metxido de sodio (NaOMe), acetato de sodio
(NaOAc), cloruro de aluminio (AlCl3) con y sin HCl, y cido brico (H3BO3).
El NaOMe es una base fuerte que ioniza los hidroxilos fenlicos presentes en la molcula y
34
particularmente permite reconocer la existencia de grupos hidroxilo en 3 y 4'.
El NaOAc es una base ms dbil que el NaOMe, y ioniza solo los hidroxilos fenlicos ms
cidos: 3, 4' y 7. La ionizacin del hidroxilo en 7 afecta la banda II y por lo tanto el NaOAc
es un reactivo til para determinar la presencia de dicho hidroxilo.
El H3BO3 en medio alcalino forma quelatos con hidroxilos fenlicos en posicin relativa orto:
La formacin del quelato produce desplazamiento batocrmico en la banda I. Si el
desplazamiento es de 12-36 nm se trata de un flavonoide (flavona, flavonol, aurona o
chalcona) orto-dihidroxilado en el anillo B, pero si el desplazamiento batocrmico es menor
es un flavonoide orto-dihidroxilado en el anillo A.
El AlCl3 anhidro tambin forma quelatos con flavonoides orto-dihidroxilados, 3-hidroxilados y 5-

hidroxilados. En el caso de los orto-dihidroxilados el quelato es inestable a pH cido, mientras
que los quelatos formados con 3- y/o 5-hidroxilados son estables:
Por lo anterior, si al determinar el espectro con AlCl3 y HCl se mantiene un desplazamiento
batocrmico de 35-55 nm en la banda I (comparando con el espectro metanlico) se trata de
una flavona o un flavonol 5-hidroxilado.
COMPETENCIAS
1. Reconoce las seales de los espectros UV y Visible en los espectros de flavonoides.

2. Interpreta espectros de absorcin en metanol, de los flavonoides
35
3. Interpreta espectros de absorcin con reactivos de desplazamiento, de los diferentes

tipos de flavonoides.
MTODO EXPERIMENTAL
El estudiante aprender a diferenciar los espectros de absorcin en el UV y visible de los

diferentes tipos de flavonoides, en metanol y con reactivos de desplazamiento.
CUESTIONARIO
1. -Investigar que derivados vegetales o animales poseen flavonoides.

2. -Explique ejemplos particulares en la salud y en la ecologa en el que los flavonoides tienen
importancia.
3. La morina es un flavonoide de frmula molecular C 15H10O7 y que presenta los espectros UV
mostrados a continuacin. Determine la estructura ms probable para esta sustancia.
36
1. Lock, O. (1994) Investigacin Fitoqumica, Mtodo en el Estudio de Productos Naturales.

Fondo Editorial PUCP. Lima. pp. 114-130
2. Mabry, T.J., Markham, K.R. and Thomas, M.B., (1970) The Systematic Identification of
Flavonoids. Springer-Verlag, Berln.
3. Oliveira, C.M., et. al. (1999) Farmacognosia, da Planta ao Medicamento. Editora DAUFSC,
Florianapolis. pp. 489-493
4. Wagner, H., Bladt, S., Zgainski, E.M. (1996) Plant Drug Analysis A Thin Layer
Chromatography. Springer-Verlag, Berln.
5. Park, Y., Koo, M., Ikegaki, M., Contado, J., (1997) Comparison of the flavonoid aglycone
contents of Apis mellifera propolis from various regions of Brazil. Arq. Biol. Tecnol. 40 (1), 97-
106.
6. Martnez, A. (2005) Flavonoides. Universidad de Antioqua. Medelln.
https:/ /www.repositorio.utp.edu.co/dspace/bitstream/11059/4609/.../547869M385.pdf
37
PRCTICA N 11: PIGMENTOS, COLORANTES, TERPENOIDES
MARCO TERICO
Los suplementos son adicionados a los alimentos con el fin de mejorar su apariencia, sabor,
color, y ayudar a su preservacin. Actualmente hay un considerable inters mundial en el
desarrollo de los colorantes naturales debido a su seguridad y beneficio para el organismo.
La crcuma (Crcuma longa Linn) conocida tambin como turmeric o haldi (Asia), de origen
asitico pertenece a la familia Zingiberaceae. Se cultiva principalmente en China, India,
Indonesia, Jamaica y Per. Las propiedades del turmeric son muy importantes para la industria
debido a que cuando se adiciona a preparaciones alimentarias preserva su frescura e imparte
un sabor caracterstico adems, de su uso en la medicina tradicional principalmente contra
afecciones estomacales.
La crcuma cuenta en su composicin qumica con compuestos voltiles y no voltiles.
La curcumina es el principal polifenol curcuminoide encontrado en el turmeric, junto
con la demetoxicurcumina, bisdemetoxicurcumina y la recientemente descubierta
ciclocurcumina forman el complejo conocido como azafrn indio, raz amarilla, jengibre
amarillo o amarillo natural 3. La curcumina (C21 H20 O6 ) es tambin conocida como
diferuloilmetano o 1,7-bis-(4-hidroxi-3-metoxifenil)-1,6-heptadieno-3,5-diona, es un
compuesto enlico de bajo peso molecular (369.37g/mol) con punto de fusin 183C,
de color amarillo en medio cido (pH 2,5-7) y rojo en medio bsico (pH> 7), es soluble
en solventes orgnicos como dimetilsulfoxido, etanol, metanol o acetona y muy poco
soluble en solventes acuosos.
COMPETENCIAS
Extrae la curcumina de los rizomas de crcuma, (Crcuma longa L.).

Caracteriza cromatogrficamente la curcum ina de los rizomas de crcuma.
Caracteriza espectroscpicamente la curcum ina de los rizomas de crcuma,
MTODO EXPERIMENTAL
Preparacin de Harina:
38
Los rizomas se cortan en rodajas y se secan por circulacin con aire caliente a 40C
por dos das, se muelen y tamizan hasta obtener un tamao de partcula adecuado
para las extracciones, la harina obtenida fue almacenada para los anlisis posteriores.
Extraccin del Colorante:
La harina fue desengrasada con hexano durante 9 horas. El material desengrasado se
someti a extraccin soxhlet con etanol absoluto por 9 horas con el fin de obtener el
extracto de colorantes.
Separacin y Purificacin de Curcumina:
El extracto se concentr y analiz por cromatografa de capa delgada utilizando placas
de slica gel y una mezcla de cloroformo y acetato de etilo (7:1), como fase mvil. La
separacin del extracto se hizo por columna cromatogrfica. Una posterior purificacin
para la caracterizacin de esta fue realizada por cromatografa preparativa.
Caracterizacin Espectroscpica:
Las fracciones recolectadas se recristalizan, con estos cristales se realizan los anlisis
espectroscpicos. Anlisis por Ultravioleta visible (UV-Vis): se realiza en un
espectrofotmetro de ultravioleta visible, usando etanol y cloroformo como blancos y
una celda de cuarzo de 1cm de longitud.
CUESTIONARIO
1. Qu seales en el Infrarrojo presenta la curcumina?

2. Qu usos tiene la curcumina?
3. Qu seales de RMN 1H y de 13C presenta la curcumina?
4. Qu seales en Espectrometra de Masas presenta la curcumina?
1. Tafoya, A. y Garca F. Colorantes. En: Biotecnologa Alimentaria. Mxico:

Limusa. 1993. pp. 479-617.
2. Ros, E; Duque, A; Len, D. (2009) Caracterizacin espectroscpica y
cromatogrfica de curcumina extrada de los rizomas de Crcuma (Crcuma longa
l.) Cultivada en el departamento del Quindo
39
PRCTICA N 12: ANLISIS DE ACEITES ESENCIALES DE SEMILLAS DE

umbelferas
MARCO TERICO
Los aceites esenciales pertenecen al grupo de los terpenoides. Bajo este trmino se agrupa a
una enorme cantidad de sustancias vegetales que tienen como caracterstica fundamental
originarse a partir de una ruta biosinttica comn. Todos los terpenoides tienen como punto de
partida la molcula del isopreno: CH2 = C (CH3 ) - CH = CH2 y su esqueleto carbnico se
constituye a partir de dos o ms de esas unidades de 5 carbonos. En su calidad de
terpenoides, los aceites esenciales pueden ser qumicamente divididos en 2 grupos: mono y
sesquterpenoides (C10, C15), los cuales difieren en el intervalo de su punto de ebullicin:
monoterpenoides entre 140 a 180C y sesquiterpenoides > 200C.
Los aceites esenciales son los responsables de los aromas y sabores caractersticos
encontrados en muchas plantas. Por ello son comercialmente importantes en la perfumera, la
industria de la alimentacin y la medicina.
Entre las familias de plantas que son especialmente ricas en aceites esenciales se incluye a las
compuestas, pinceas, rosceas, rutceas y umbelferas, estas ltimas sern motivo de
estudio en esta prctica.
COMPETENCIAS
Obtiene aceites esenciales de semillas de umbelferas y su deteccin por

cromatografa en capa fina.
Identifica los compuestos voltiles de semillas de umbelferas por reacciones
cromgenas.
Reactivos y disolventes
Semillas de ans (Pimpinella anisum L.), cilantro (Coriandrum sativum L.), comino (Cominum
cyminum L.), eneldo (Anethum graveolens L.), perejil (Pertroselinum crispum L.), Cardamomo
(Elleteria cardomomum L. Maton), Eter etlico, tolueno, revelador de anisaldehdo en medio
cido, Revelador vainillina-cido sulfrico, Revelador 2, 4-dinitrofenilhdrazina.
Materiales y equipo
40
2 Pipetas de 1 mL
1 Mortero con pistilo
1 Matraz volumtrico de 25 mL
2 Vasos de precipitados de 10 mL
1 Vaso de precipitado de 250 mL
1 Probeta de 25 mL
1 Matraz bola de 250 o 500 mL
5 Micropipetas
1 Agitador de vidrio
2 Placas cromatogrficas de silicagel FG254, de 20 X 20 cm.
1 Cmara cromatogrfica con tapa
Plancha elctrica.
Estufa de aire forzado
Lmpara de luz UV
Procedimiento:
Moler las semillas en el mortero, cubrirlas con ter y dejar reposar el extracto durante 30 min.
Decantar y concentrar el extracto a bao Mara o tomar una placa cromatogrfica y trazar una
lnea horizontal, a una distancia de 2 cm. del borde inferior de la placa. Sobre la lnea trazada,
aplicar con las micropipetas los extractos por analizar, es decir, apoyando el capilar sobre la
lnea. Repetir varias veces la aplicacin de las muestras. Preparar otra placa de la misma
manera. Introducir las placas cromatogrficas en la cmara de elusin la cual deber contener
la mezcla de tolueno:acetato de etilo 93:7, tapar la cmara y esperar a que el eluyente suba
hasta 0.5 cm. del borde superior, (40-60 min. aproximadamente). Sacar las placas de la
cmara, marcar inmediatamente con el lpiz la distancia recorrida por la mezcla eluyente y
dejarlas secar. Observar las placas bajo luz UV y marcar las manchas.
Aspersar la primera placa con el revelador vainillina-cido sulfrico, calentar a 100C durante
10 minutos para desarrollar color. Asperjar la segunda placa con el revelador 2,4-
dinitrofenilhdrazina (DNP) y observar las manchas de color naranja, alternativamente la placa
se puede asperjar con el revelador de anisaldehdo-cido sulfrico, calentando a 100C por 10
minutos para desarrollar color (Ver apndice para la preparacin de los reveladores).
RESIDUOS Y SU MANEJO:
Tejido vegetal macerado
Se coloca en una bolsa de papel de estraza y se deposita al cesto de la basura.
Mezcla de elusin tolueno:acetato de etlo
Se vierte en el recipiente de los residuos orgnicos.
41
Gel de Slice
Una vez que se tomaron todos los datos se retira la silicagel de la placa raspando con una
navaja de un filo y se coloca en el recipiente de desechos de silica gel, para su posterior
limpieza y reutilizacin.
Tener la precaucin de realizar esta actividad con mascarilla y lentes.
CUESTIONARIO
1.- Describe las principales funciones de los aceites esenciales en las plantas
2.-. Describe por lo menos 3 mtodos de anlisis que se reportan para el estudio de
aceites esenciales
3.- Escribe cual es la ruta metablica de biosntesis de los aceites esenciales.
1. Ikan, R. 1991. Natural Prroducts. A Laboratory Guide. Academic Press, New

York.360p.
2. Harborne, J. B. 1991. Phytochemical Methods. 3rd ed. Chapman & Hall. Londres. 288p.
3. Wagner, H., S. Bladtt. 1996. Plant Drug Analysis A Thin Layer Chromatography Atlas.
2d. Ed. Springer Verlag. New York. 384 p.
4. Soto, H. M. R. 2007. Fitoqumica, Manual de prcticas. Colegio de Postgraduados
Campus Montecillos. 102 p
42
PRCTICA N13: ESTEROIDES. EXTRACCIN E IDENTIFICACIN DEL -

SITOSTEROL
MARCO TERICO
Con el nombre de terpenos se conoce a un grupo importante de componentes vegetales que

tienen un origen biosinttico comn. Todos, aunque con estructuras qumicas muy distintas,
proceden de la condensacin, en nmero variable, de unidades isoprnicas.
Desde el punto de vista farmacutico, los grupos de principios activos de naturaleza terpnica
ms interesantes son: monoterpenos y sesquiterpenos constituyentes de los aceites
esenciales, derivados de monoterpenos correspondientes a los iridoides, lactonas
sesquiterpnicas que forman parte de los principios amargos, algunos diterpenos que poseen
actividades farmacolgicas de aplicacin a la teraputica y por ltimo, triterpenos y esteroides
entre los que se encuentran las saponinas y los hetersidos cardiotnicos.
Este grupo de principios activos est constituido por numerosos compuestos, estructuralmente
muy similares, derivados mayoritariamente del epoxiescualeno o en menor nmero del propio
escualeno. Todos ellos poseen un hidroxilo en el C 3 que les permite la unin con una o varias
molculas glucdicas, dando lugar a estructuras heterosdicas. Pueden establecerse dos
grandes grupos dependiendo de su estructura qumica: triterpenos (tetra y pentacclicos) y
esteroides. Se encuentran en estos grupos compuestos de gran inters farmacutico como son
los saponsidos y los hetersidos cardiotnicos. Los Esteroides son molculas policclicas de
21 a 29 tomos de carbono. Desde el punto de vista qumico son derivados del
ciclopentanperhidrofenantreno y del punto de vista biosinttico derivan del lanosterol o del
cicloartenol. El -sitosterol es un fitosterol con una estructura parecida al colesterol producido
por los animales, est en muchos productos alimenticios y es tambin un suplemento diettico.
43
COMPETENCIAS
Extrae y fracciona esteroides a partir de la maca

Purifica el -sitosterol
Identifica el -sitosterol por TLC
MTODO EXPERIMENTAL

Estndar de -sitosterol Fiola x 10 mL
Diclorometano Beakers, bagueta
Cromatofolios de slicagel 4 x 10 cm Pipetas, probeta
Maca en polvo ................................... .Embudo simple, capilares
Acetato de etilo Lmpara de luz UV
cido sulfrico concentrado Equipo de soxhlet con baln x 100 mL
Cromatoplacas de slicagel 20 x 20 cm Estufa
Vainillina Hot plate
Tolueno Agitador magntico
Hexano Centrfuga,
Etanol Rotavapor
Procedimiento:
Preparacin del estndar:
Pesar 10 mg del estndar en una fiola de 10 mL, adicionar 5 mL de diclorometano. Sonicar
hasta disolucin completa. Enrasar con diclorometano y homogenizar.
44
Preparacin de la muestra:
Pesar 15 g de maca y hacer una extraccin en Soxhlet con 30 mL de Diclorometano MeOH
(7:1) en el baln y aproximadamente 80 mL de Diclorometano MeOH (7:1) en el cuerpo del
soxhlet. Extraer a 50C por un tiempo mnimo de 4 horas.
Concentrar a sequedad y disolver con 10 mL de Tolueno, sonicar por 5 minutos, centrifugar por
15 minutos y separar el sobrenadante, concentrar a sequedad, redisolver con 1 mL de
diclorometano en un tubo de ensayos y hacer TLC, considerando:
Fase estacionaria: silicagel
Fase mvil: n-hexano-Acetato de etilo (4:1)
Reveladores:
Solucin A: solucin de cido sulfrico al 5% (volumen / volumen) en etanol p.a.
Solucin B: solucin de vainillina al 1% (peso / volumen) en etanol p.a.
Frente de solvente: 16 cm
Volumen de siembra: Estndar: 10 L Muestra: 20 L
Marcar la placa cromatogrfica a 2 cm del borde inferior y a 16 cm de esta lnea de referencia
Sembrar 10 L del estndar y 20 L de la muestra.
Colocar la placa en el sistema de solventes hasta llegar a un frente de solvente de 16 cm.
Retirar la placa cromatogrfica, dejar secar a temperatura ambiente en la campana extractora
por 15 minutos. Aspersar la placa con la solucin A y seguidamente con la solucin B, secar la
placa durante 15 minutos a temperatura ambiente y luego calentar a 105C en la estufa por 5
minutos. Hallar el Rf = 0,43
CUESTIONARIO
1. Cul es la ruta biogentica a partir de la cual se forma el -sitosterol?

2. Cmo se clasifican los esteroides, en base a su diferencia estructural qumica?
3. Qu seales de absorcin en el espectro UV se observan en el -sitosterol? Adjunte el
espectro obtenido.
4. Qu seales de absorcin en el espectro IR se observan en el -sitosterol? Adjunte el
espectro obtenido.
5. Cul es la aplicacin del -sitosterol?
1. CYTED. (1995) Manual de Tcnicas de Investigacin. Programa Iberoamericano de Ciencia

y Tecnologa para el Desarrollo. Bogot, Colombia.
45

Medicinales Iberoamericanas. 1 edicin. CYTED. Programa Iberoamericano de Ciencia y
Tecnologa.
edicin. rea de Ciencia y Tecnologa del convenio Andrs Bello & Red Iberoamericana
5. LOCK DE UGAZ, O. (1994) Investigacin fitoqumica. Mtodos en el estudio de los
productos naturales. 2 ed. Lima: Fondo editorial Pontificia Universidad Catlica del Per.
46
PRCTICA N 14: ALCALOIDES: EXTRACCIN DE LA CAFINA EN HOJAS DE T NEGRO
MARCO TERICO
La cafena es uno de los ms importantes metil derivados naturales de la xantina (1, 3, 7-

trimetilxantina). La concentracin de este alcaloide, que se encuentra en el caf, t, nuez de
cola, mate, etc., vara dependiendo de las condiciones climticas y topogrficas en las que se
desarrollan los cultivos de donde se extrae. Se ha encontrado un intervalo de variacin entre
2.0 a 4.6% de cafena en dichos vegetales.
La cafena presenta varias acciones farmacolgicas de inters teraputico. Es fisiolgicamente
activa produciendo un efecto estimulante sobre el sistema nervioso central (SNC). La
popularidad de las bebidas que contienen cafena es parcialmente debida a este efecto; sin
embargo, su consumo en exceso puede causar efectos irritantes tales como nerviosismo e
insomnio. Adems de su efecto sobre SNC la cafena acta sobre el rin para producir
diuresis; estimula el msculo cardiaco y relaja el msculo liso, especialmente el bronquial.
COMPETENCIAS
Aisla cafena de hojas de t negro.

Caracteriza el producto obtenido por su punto de fusin, pruebas de color y formacin
de un derivado.
MTODO EXPERIMENTAL
Reactivos y disolventes:
Hojas de T Negro Camellia sinensis L. o en su defecto bolsitas de te negro (alumno),
Diclorometano, Acetato de plomo al 10%, Agua destilada, Hidrxido de amonio Acetona,
Yoduro de potasio, Yodo, Metanol, Acetato de etilo, Agua oxigenada, carbonato de calcio,
Papel filtro, cido clorhdrico, Tela de algodn.
Materiales y equipo
1 Matraz Erlenmeyer de 125 mL
1 Anillo metlico
2 Vasos de precipitados de 400 mL
1 Embudo de vidrio tallo corto
1 Probeta graduada de 100 mL
1 Vaso de precipitado de 50 mL
47
1 Embudo de separacin de 500 mL

1Matraz Erlenmeyer de 50 mL
1 Matraz Kitazato de 500 mL
1 Vidrio de reloj
1 Embudo Bchner de 8 cm diam.
1 Agitador de vidrio
1 Recipiente p/bao Mara
1 Pipeta Pasteur
1 Soporte metlico
1 Parrilla de calentamiento
1 Esptula
1 Cpsula de porcelana
Balanza analtica
Rotaevaporador
Procedimiento:
Poner a hervir 100 mL de agua destilada en vaso de precipitados de 400 mL. Sumergir en el
vaso 10-11 g de hojas de t (cinco bolsitas de t negro) y hervir por 15 min. Enfriar, remover las
bolsas de t, exprimindolas con unas pinzas. Aadir 5.0 g de carbonato de calcio y calentar
por 5 min. Filtrar la mezcla a un vaso limpio a travs de la tela de algodn y exprimir la tela.
Filtrar ahora con vaco en un embudo Bchner para eliminar por completo el residuo de t.
Enfriar el filtrado a temperatura ambiente y pasarlo al embudo de separacin; aadir 30 mL de
diclorometano y agitar el embudo suavemente, dejar separar las fases, quitar el tapn del
embudo y drenar la fase orgnica inferior de la fase acuosa superior. Repetir la extraccin de la
fase acuosa con dos porciones ms de diclorometano (30 mL c/u). Evaporar el disolvente en el
rotaevaporador. Purificar la cafena cruda con acetona. Dejar secar los cristales. Pesar el
producto, determinar su p.f. y efectuar las siguientes pruebas:
a).- Poner unos cuantos cristales de cafena en una cpsula de porcelana y aadir 3 gotas de
H202 + 3 gotas de HC1. Evaporar a sequedad con calor y aadir 2 gotas de hidrxido de
amonio; observar la formacin de un color prpura. (Prueba de la Murexida).
b).- Como prueba adicional obtener el espectro UV de la cafena, observndose max a 278
nm.
c).- Alternativamente realizar la cromatografa en capa fina utilizando como mezcla eluyente
acetato de etilo: metanol: agua (100:13.5:10). Revelar con el revelador de yodo/yoduro de
potasio en medio cido.
48
RESIDUOS Y SU MANEJO:
Bolsitas con te negro
Se colocan en bolsa de papel de estraza y se depositan en el cesto de la basura.
Diclorometano
Se deposita en el recipiente de residuos halogenados.
Mezcla de etanol: ter etlico y ter de petrleo
Se vierten en el recipiente de residuos orgnicos.
Residuos de la prueba de Murexida (cido clorhdrico, hidrxido de amonio).
Dado que se trata de pequeas cantidades del orden de unos cuantos mililitros, se diluye con
agua y se vierte en el recipiente de los residuos acuosos.
CUESTIONARIO
1.- Describe las principales funciones de los alcaloides en las plantas

2.- Mencione los principales usos que se le dan a los alcaloides de las plantas.
3.- Escribe cual es la ruta metablica de biosntesis de la cafena.
1. Harborne, J. B. 1991. Phytochemical Methods. 3a ed. Chapman & Hall. Londres. 288 p.
2. Ikan, R. 1991. Natural Products. A Laboratory guide. Academic Press New York. 293 P.
3. Pavia, D.D., Lampman, G.M. y Kriz, G.S. Jr. 1976. Introduction to Organic Laboratory
Techniques. W.B. Saunders Co. Filadelfia. 699 p.
4. Soto, H. M. R. 2007. Fitoqumica, Manual de prcticas. Colegio de Postgraduados
Campus Montecillos. 102 p.

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