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Documento QUMICA CLNICA 2002; 21 (2) 67-73

Metodologa recomendada para la medicin del contenido de selenio en


especmenes biolgicos
Sociedad Espaola de Bioqumica Clnica y Patologa Molecular
Comit Cientfico
Comisin de Elementos Traza1

Documento B, Fase 3, Versin 1


Documento preparado por A. Montel Ruiz de Alda, J. L. Lpez Coln y J. M. de Prdena y Lobn.

ndice a) Condiciones analticas.


0 Introduccin b) Modificador de matriz.
1 Objeto y campo de aplicacin. c) Preparacin de la muestra.
2 Revisin metodolgica d) Preparacin de patrones.
2.1 Espectrometra de fluorescencia molecular. e) Caractersticas metrolgicas.
2.2 Espectrometra de absorcin atmica con generador de 3.5 Control de la calidad.
hidruros. a) Materiales de control.
2.3 Espectrometra de absorcin atmica electrotrmica. b) Programas de evaluacin externa de la calidad.
2.4 Espectrometra de plasma por acoplamiento inductivo 4 Intervalos de referencia.
con deteccin por espectrometra de masas (ICP-MS). 5 Conclusiones.
2.5 Otros procedimientos. 6 Bibliografa.
2.5.1 Activacin neutrnica.
2.5.2 Fluorescencia de rayos X.
2.5.3 Cromatografa lquida de alta resolucin (HPLC). 0 INTRODUCCIN
2.5.4 Cromatografa en fase gaseosa.
3 Procedimientos analticos recomendados. El selenio es un elemento qumico de numero atmico 34 y de
3.1 Obtencin de especmenes. peso atmico 78,96 daltons, perteneciente al grupo VI de la ta-
a) Plasma y suero. bla peridica. Su bioqumica, toxicologa e importancia nutri-
b) Sangre. cional ha sido revisada minuciosamente durante la ltima d-
c) Orina. cada (1, 2). Es un elemento esencial para los mamferos,
d) Otros. incluido el hombre, por formar parte de numerosas enzimas:
3.2 Procedimiento de medida de la concentracin de sele- glutation-peroxidasa, 1,5iodotironina-desionidasa, seleno
nio en plasma, suero, y sangre por espectrometra de proteina-P, tioredoxin-reductasa, etc.
absorcin atmica electrotrmica con correccin de Su papel protector en la prevencin del cncer es objeto de
fondo Zeeman. intensos debates y estudios epidemiolgicos (3), existiendo in-
a) Condiciones analticas. dicios de que esa accin puede ser ms farmacolgica que
b) Modificador de matriz. esencial (4, 5). En estudios en animales se ha demostrado que
c) Preparacin de la muestra. algunos virus benignos pueden llegar a ser virulentos en un
d) Preparacin de patrones. medio deficiente de selenio (6).
e) Caractersticas metrolgicas. El selenio, y su cuantificacin en muestras biolgicas, puede
3.3 Procedimiento de medida de la concentracin de sele- ser clnicamente importante en situaciones de ingesta excesiva
nio en orina por espectrometra de absorcin atmica o deficiente. Excepto en zonas aisladas de China y otros pases
electrotrmica con correccin de fondo Zeeman. donde la selenosis humana ha sido endmica (7), la intoxica-
a) Condiciones analticas. cin con selenio en el ser humano es poco habitual, pero puede
b) Modificador de matriz. llegar a ser grave. Han sido publicados casos en los que ha
c) Preparacin de la muestra. existido toxicidad debida a la ingestin de soluciones concen-
d) Preparacin de patrones. tradas (8) y suplementos (9) incorrectamente formulados. Los
e) Caractersticas metrolgicas. sntomas que destacan en la intoxicacin aguda son: vmitos,
3.4 Procedimiento de medida de la concentracin de sele- diarrea, aliento a ajo, daos en las mucosas, acidosis metabli-
nio en tejidos por espectrometra de absorcin atmica ca y espasmos musculares. Sin embargo la selenosis se mani-
electrotrmica con correccin de fondo Zeeman. fiesta como un trastorno gastrointestinal, aliento a ajo, prdida
de pelo y uas, lesiones dermatolgicas y, en casos extremos,
dao neurolgico.
1Composicin de la Comisin: J. A. Cocho de Juan, J.F. Escanero Marcen, M.D. De mayor relevancia, como se comprueba en la prctica cl-
Fernndez Gonzlez, L. Garca Beltrn, A. Garca de Jaln Comet, M. Gonzlez nica actual, es el seguimiento de las concentraciones de selenio
Estecha (presidenta), J. Gonzlez Revaldera, E. Herrero Huerta, I. Monreal
Marquiegui, A. Montel Ruiz de Alda, C. Pintos Virgs, V. Seijas Martnez- en el suero en pacientes a los que se les considera proclives a
Echevarra.

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padecer una deficiencia de este elemento como consecuencia mtico no es necesario y cuando se consigue no se traduce en
de una enfermedad, una terapia, o una ingesta deficiente y cr- una ventaja analtica.
nica (10). El origen de este inters procede de las dos manifes- Un gran avance ha sido la introduccin de un nuevo agente
taciones clnicas producidas por la deficiencia endmica de se- acomplejante (30): el 2,3-diamino-1,4-dibromonaftaleno. La
lenio: el sndrome de Keshan, una cardiomiopata frecuente en formacin del piazoselenol se produce con efectividad en el
nios y mujeres, y la enfermedad de Kashin-Beck (11), una os- medio cido de las muestras digeridas evitando la necesidad de
teoartropata que afecta a los nios. un ajuste de pH. Adems, el HBr en combinacin con el 2,3-
Las mencionadas cardiomiopatas, as como mialgias, alte- diamino-1,4-dibromonaftaleno permite un nico paso de re-
raciones hematolgicas, y decoloracin de pelo y uas han duccin y formacin del complejo de Se4+. El lmite de detec-
sido estudiadas en pacientes que haban sido sometidos, duran- cin es de 0,45 mol/L, la recuperacin de 98% y el
te un largo periodo de tiempo, a nutricin parenteral carente de coeficiente de variacin de 1%.
selenio, producindose vctimas mortales despus de 2, a 8 La relacin de volumen entre la solucin cida de digestin
aos. Estudios posteriores muestran que, aunque la deficiencia y de muestra debe ser optimizada para cada sistema de calenta-
de selenio sintomtica es rara, la disminucin bioqumica su- miento (generalmente un bloque de aluminio). Tambin afec-
cede, inevitablemente, en ausencia de suplementacin (12-14). tan a la velocidad de calentamiento las dimensiones de los tu-
La disminucin de selenio tambin ha sido estudiada en la mu- bos de digestin. No tener en cuenta estos aspectos puede
covoscidosis (fibrosis qustica) (15, 16), en la enfermedad cel- conducir a una digestin desigual dentro de un mismo anlisis,
aca (17, 18), en la enfermedad de Crohn (19, 20), y en los neo- provocando pobres resultados analticos.
natos y nios hospitalizados (21). La prdida de selenio voltil es poco probable a no ser que
se exceda durante un tiempo prolongado los 200 C de tempe-
ratura o los tubos se calienten en seco.
1 OBJETO Y CAMPO DE APLICACIN
2.2 Espectrometra de absorcin atmica con
En este documento se revisan los procedimientos para la medi- generador de hidruros
da directa de la concentracin o del contenido de selenio en es- Los procedimientos basados en este procedimiento ofrecen las
pecmenes biolgicos, detallndose los procedimientos que ventajas de su alta detectabilidad y versatilidad, ya que espec-
presentan una mayor fiabilidad dentro de los procedimientos menes como sangre, plasma, orina y tejidos, pueden ser anali-
ms accesibles al laboratorio clnico. zados adecuadamente. El Se6+ se reduce a Se4+ con cido clor-
hdrico, y posteriormente, el Se4+ se convierte en hidruro por
medio del borohidruro de sodio. El hidruro se transporta por
2 REVISIN METODOLGICA un flujo de gas (normalmente argn) a una celda de cuarzo si-
tuada en la trayectoria de un haz de luz de un espectrmetro de
2.1 Espectrometra de fluorescencia molecular absorcin atmica. La celda es calentada elctricamente o por
Este mtodo se basa en la reaccin en medio cido del Se4+ con medio de una llama para romper el hidruro en tomos de sele-
el 2,3-diamino-naftaleno (22), dando como resultado un piazo- nio. La detectabilidad es alta, obtenindose un lmite de detec-
selenol fluorescente, que posteriormente es extrado de la solu- cin de 0,17 mol/L (31).
cin acuosa cida con ciclohexano, donde puede ser medida su El procedimiento de digestin recomendado por la IUPAC
fluorescencia (excitacin: 366 nm; emisin 525 nm). (32) se basa en la utilizacin de cido ntrico, sulfrico y per-
La espectrometra de fluorescencia molecular es un procedi- clrico a una temperatura de hasta 310 C. Este procedimiento,
miento robusto y capaz de obtener un buen rendimiento anal- evaluado en un anlisis intercomparativo, mostr una buena
tico. Los procedimientos publicados ofrecen exactitud en el concordancia de resultados entre los distintos laboratorios par-
anlisis de controles de calidad comerciales, recuperaciones de ticipantes (32). El uso de cido perclrico, sin embargo, con-
ms del 90% y una imprecisin del 5 al 7% (CV) (23, 24) en lleva el riesgo de explosin, por lo que otros autores (33) utili-
sangre, del 3 al 4% (2, 26) en el suero, del 6% (27) orina y del zan una mezcla de cidos sulfrico y ntrico, y otros realizan la
10% en hgado. Mediante este procedimiento de fluorescencia digestin con una mezcla de cido sulfrico, agua oxigenada y
se llega a unos lmites de deteccin de 0,45 mol/L (28). vanadio a una temperatura constante de 100 C. Ambos obtie-
En la prctica, el procedimiento es el siguiente: los espec- nen resultados que muestran una buena concordancia con el
menes de sangre, suero, orina (0,1 a 4 mL) y tejidos (25 a 500 procedimiento recomendado por la IUPAC. Ms recientemente
mg), son digeridos completamente mediante cidos oxidantes (34, 35) se ha propuesto un procedimiento basado en cido
con el fin de eliminar la materia orgnica. Los especmenes y bromhdrico y bromuro que permite una completa descompo-
los patrones son digeridos, generalmente con una mezcla cida sicin de los compuestos orgnicos del selenio en menos de 90
de ntrico y perclrico a 210 C durante 13 h. (El uso de cido minutos a 120 C.
perclrico requiere la utilizacin de procedimientos especiales
de manipulacin, pero se ha citado como el que presenta la re- 2.3 Espectrometra de absorcin atmica
cuperacin de selenio ms elevada para todos los especmenes electrotrmica
(24)). A continuacin de la digestin, el residuo se calienta con Este procedimiento ofrece un anlisis directo sin previa diges-
cido clorhdrico a 100-150 C durante 15-30 min, con el fin tin y ha sido ampliamente adoptada por los laboratorios clni-
de reducir el Se6+ a Se4+. Para que esta reduccin se produzca, cos para la determinacin de selenio en el suero, plasma y san-
y como requisito previo a la formacin del piazoselenol, se gre.
debe ajustar el pH a 1,75 (29). Otros autores sin embargo en- La correccin de fondo con deuterio no es suficiente para
cuentran valores similares de piazoselenol a pH de 0,4 (24, evitar el efecto matriz, por lo que los equipos dotados con esta
26), por lo que el objetivo de conseguir un pH preciso y siste- correccin no son prcticamente aptos para el anlisis de sele-

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nio en muestras biolgicas, ya que no son capaces de corregir 2.5.2 Fluorescencia de rayos X
las interferencias que producen las altas concentraciones de Este procedimiento consiste en el bombardeo de la muestra
hierro y fosfatos en sangre y en orina respectivamente. Sin em- con fotones de alta energa, que logran activar los electrones
bargo la correccin de fondo por efecto Zeeman, ofrece una internos del selenio (43). Una proporcin de tomos se desin-
mejor solucin a este problema, aunque no se encuentra com- tegra con emisin de rayos X cuya longitud de onda es caracte-
pletamente libre del efecto matriz (36-39). rstica de este elemento, siendo su intensidad proporcional a la
En este procedimiento es muy importante la utilizacin de concentracin de selenio presente en la muestra. La precisin
un modificador de matriz que produzca seleniuros refractarios de este procedimiento en sangre es del 8%.
con el fin de posibilitar que la temperatura de la fase de pirli-
sis sea lo ms alta posible (1000-1300 C), con objeto de elimi- 2.5.3 Cromatografa lquida de alta resolucin. (HPLC)
nar la mayora de la matriz sin prdida de selenio. Se puede Una de las mayores ventajas de este procedimiento es la posi-
utilizar nquel como modificador, pero este ha sido casi total- bilidad de la utilizacin de distintos detectores: fluorometra,
mente sustituido por paladio, siendo en la actualidad conside- espectrometra de absorcin atmica, amperometra, etc., al-
rado como el modificador universal ya que ofrece una alta de- canzndose en todos ellos buenos limites de deteccin (44) de
tectabilidad, pocas interferencias y puede mezclarse con el 0,019 mol/L siendo sus inconvenientes principales: el largo
plasma sin precipitacin de protenas. Mediante este procedi- proceso de la digestin cida del espcimen (suero, plasma,
miento se consiguen lmites de deteccin (37) de 0,02 mol/L, sangre, eritrocitos, o tejidos), y la imposibilidad de su automa-
sensiblemente inferiores a los conseguidos por los procedi- tizacin.
mientos anteriormente citados.
2.5.4 Cromatografa en fase gaseosa
2.4 Espectrometra de plasma por acoplamiento Es el menos utilizado de los procedimientos que aqu se expo-
inductivo con deteccin por espectrometra de masas nen, y requiere un detector de captura de electrones con el fin
(ICP-MS) de aumentar su detectabilidad. Presenta, al igual que en el pro-
La espectrometra de masas con induccin de plasma se basa cedimiento anterior, el inconveniente de la digestin previa de
en el uso de un plasma de argn como fuente de ionizacin de la muestra (suero, plasma, sangre, eritrocitos, y tejidos) y la
los elementos de la muestra, siendo separados y detectados los imposibilidad de su automatizacin. El lmite de deteccin ba-
distintos iones mediante un espectrmetro de masas de alta de- sado en este procedimiento es de 0,39 mol/L (45).
tectabilidad.
El procedimiento ICP-MS combina la eficiencia en la des-
composicin de las muestras para formar iones con la potencia 3 PROCEDIMIENTOS ANALTICOS
de la espectrometra de masas para distinguir iones de masas RECOMENDADOS
diferentes, ofreciendo una gran detectabilidad en la determina-
cin de selenio y otros elementos, pudiendo incluso realizar Segn numerosos estudios, la metodologa recomendada en el
estudios de especiacin. anlisis de selenio es la espectrometra de absorcin atmica
Para la determinacin de selenio en sangre existe un mtodo electrotrmica con correccin de fondo Zeeman (36, 37, 45,
sencillo que se describe a continuacin (40): las muestras de 46).
sangre se diluyen 1:10 (v/v) con un diluyente que contiene
Tritn X-100 y cido ntrico. Los patrones se acondicionan 3.1 Obtencin de especmenes
para tener una concentracin de selenio similar a la de la a) Plasma y suero
sangre. La correccin de interferencias no se considera nece- A diferencia de la mayora de los anlisis de elementos traza,
saria. la contaminacin no es normalmente un problema, por lo que
Otro avance importante es la posibilidad de cuantificar indi- se pueden utilizar envases convencionales.
vidualmente cada uno de los istopos del selenio, por lo que se Se recomienda el empleo de plasma y suero en aquellos pa-
considera un mtodo ideal para el estudio del metabolismo uti- cientes en que se tenga que realizar un seguimiento de este ele-
lizando istopos estables de este metaloide en el plasma, eri- mento en espacios cortos de tiempo: hemodializados, pacien-
trocitos, y orina (41). El lmite de deteccin que se consigue en tes con nutricin parenteral, enfermedad de Crohn,
este procedimiento es de 0,02 mol/L (42). fenilcetonuria, intoxicacin aguda, etc.
Es importante evitar la hemlisis puesto que incrementara
2.5 Otros procedimientos de forma importante el contenido de selenio y de hierro, ha-
2.5.1 Activacin neutrnica ciendo las muestras no apropiadas para el anlisis.
Este procedimiento consiste en el bombardeo de la muestra La muestra con el tapn puesto en el tubo se centrifuga du-
(sangre, plasma, suero, y orina) con neutrones para formar los rante 10 minutos a 500 g, con el fin de evitar posibles contami-
istopos inestables de selenio 75Se y 77Se, que se desintegran naciones y se trasvasa a un tubo de polipropileno, refrigeran-
radiactivamente (43). La energa del fotn y la intensidad de la dose a +4 C. La muestra es estable por congelacin a 20 C
radiacin gamma inducida se miden mediante un contador de durante meses, aunque repetidas congelaciones y descongela-
radiacin gamma que emplea un cristal de Ge-Li. La precisin ciones pueden desnaturalizar las protenas lo que podra afec-
obtenida con este procedimiento es del 5%. El anlisis por ac- tar a los resultados analticos.
tivacin neutrnica presenta algunas desventajas: en solucio-
nes acuosas hay que realizar preconcentracin de la muestra, b) Sangre
como solo investiga el ncleo, no pueden realizarse estudios Tanto la heparina como el EDTA (46) son apropiados como
de especiacin, y por ltimo, el largo tiempo requerido para el anticoagulantes si se requiere analizar sangre. Se recomienda
anlisis. el empleo de sangre cuando se necesite estudiar la concentra-

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cin de este elemento en personas que no requieran ser someti- de al menos media hora antes de comenzar el anlisis.
das a monitorizacin, ya que su valor en sangre puede perma- Se utilizan tubos de grafito con plataforma integrada, reali-
necer constante durante meses. El hierro produce un elevado zando la lectura en rea de pico, utilizando un tiempo de inte-
efecto matriz que no puede ser eliminado por la lmpara de gracin de 4 s y un volumen de muestra de 20 L.
deuterio, por lo que debe de emplearse siempre la espectrome- El programa de temperatura del horno de grafito es el de la
tra de absorcin atmica electrotrmica con corrector de fon- tabla 1 (48).
do Zeeman.

Tabla I. Programa de temperatura del horno de grafito.


Temp. C Rampa s Tiempo s Flujo mL/min Gas Lectura

1 110 1 20 250 Argn No


2 130 1 30 250 Argn No
3 1250 5 30 250 Argn No
4 2000 0 4 0 Argn Si
5 2450 1 3 250 Argn No

c) Orina b) Modificador de matriz


Se recomienda la obtencin de orina de 24 horas recogida so- Los componentes primarios del modificador de matriz son: pa-
bre 10 ml de cido ntrico suprapuro. La orina as tratada per- ladio (10g/L de Pd(NO3)2 en HNO3 al 15%), Tritn X-100 y
manece estable durante una semana. El crecimiento bacteriano agua suprapura de 18 M/cm de resistividad.
disminuye el nivel de selenio en orina, ya que algunas bacte- Como modificador de la matriz de trabajo se emplean los
rias son capaces de reducir este elemento a H2Se que es voltil componentes anteriores en la siguiente concentracin: modifi-
y se desprende con facilidad. La determinacin de las concen- cador de paladio 1 mL, Tritn X-100 0,1 mL y agua suprapura
traciones de selenio en orina no ayuda a la determinacin del c.s.p. 100 mL.
estado nutricional, (46) pero es til para detectar toxicidad, por
lo que la orina se considera el espcimen de eleccin para la c) Preparacin del espcimen
monitorizacin del selenio ocupacional, realizndose el anli- El espcimen en el caso de suero o plasma, debe de ser centri-
sis en suero o sangre si la excrecin es elevada. Tambin se fugada 10 minutos a 500 g, mientras que la muestra de sangre
emplea en selenosis endmica, sndrome de Keshan, etc. La debe de homogeneizarse 20 minutos como mnimo.
orina es de anlisis complicado debido al efecto matriz que El espcimen (suero, plasma y sangre) se diluye en modifi-
producen los fosfatos, por lo que requiere al igual que la san- cador de matriz 1/9 (v/v), procedindose a su homogeneiza-
gre la espectrometra de absorcin atmica electrotrmica con cin.
corrector de fondo Zeeman.
d) Preparacin de patrones
d) Otros Se parte de un patrn certificado de 1 g/L, que es diluido en un
El anlisis de la concentracin de selenio en pelo se ha utiliza- matraz aforado hasta concentracin de 10 mg/L, estable en ne-
do en estudios epidemiolgicos como indicador a largo plazo vera al menos durante tres meses. Con este ultimo se realizan
en el cncer, en el sndrome de Keshan, selenosis endmica, los patrones de trabajo diluidos en modificador de matriz (pa-
intoxicacin aguda, etc (47). La manipulacin del cabello re- ladio y tritn X-100), 1/9 (v/v), de concentracin final: 0,63,
quiere un cuidado especial, particularmente en pases en los 1,26 y 2,53 mol/L.
que el selenio puede ser un ingrediente de champs. El blanco es agua suprapura diluida 1/9 (v/v) con modifica-
Tambin se emplea el hgado (45) de biopias y necropsias dor de matriz.
para la medicin de la exposicin ocupacional y en medicina
forense. e) Caractersticas metrolgicas
El procedimiento es lineal hasta los 5,06 mol/L. El lmite de
3.2 Procedimiento de medida de la concentracin de deteccin obtenido es de 0,01 mol/L, la masa caracterstica
selenio en el plasma, suero y sangre por de 39,1 pg/0,0044 unidades de absorbancia, la recuperacin
espectrometra de absorcin atmica electrotrmica media de 102,3% y la precisin media de 4,5%.
con correccin de fondo Zeeman Se considera el mtodo de eleccin debido a la facilidad de
La gran ventaja de este procedimiento es la utilizacin de las tratamiento del espcimen (no es necesaria la digestin), la
mismas rampas de temperatura para las tres matrices indistin- economa de tiempo y reactivos y la relativa ausencia de inter-
tamente. ferencias.

a) Condiciones analticas 3.3 Procedimiento de medida de la concentracin de


Se utiliza un espectrmetro de absorcin atmica electrotrmi- selenio en orina por espectrometra de absorcin
ca con corrector de fondo Zeeman (37, 48). La lmpara emple- atmica electrotrmica con correccin de fondo
ada es de descarga sin electrodos con el fin de evitar la fluctua- Zeeman
cin que se produce en las lmparas de ctodo hueco, adems El gran inconveniente de la medida de la concentracin de se-
de su escasa duracin. La longitud de onda empleada es de lenio en orina es el efecto matriz que producen los fosfatos.
196,2 nm, la intensidad de corriente de 290 mA y la rendija de Este anlisis debe realizarse sobre una alicuota de orina de 24
0,7 nm. Se hace necesario un precalentamiento de la lmpara horas, en la que no exista hematuria.

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a) Condiciones analticas 3.4 Procedimiento de medida de la concentracin de
Se utiliza un espectrmetro de absorcin atmica electrotrmi- selenio en tejidos por espectrometra de absorcin
ca con corrector de fondo Zeeman (37, 48-50). La lmpara em- atmica electrotrmica con correccin de fondo
pleada es de descarga sin electrodos. La longitud de onda em- Zeeman
pleada es de 196,2 nm, la intensidad de corriente de 290 mA y a) Condiciones analticas
la rendija de 0,7 nm. Se hace necesario un precalentamiento de Se utiliza un espectrmetro de absorcin atmica electrotrmi-
la lmpara de al menos media hora antes de comenzar el anli- ca con corrector de fondo Zeeman (51). La lmpara empleada
sis. Se utilizan tubos de grafito con plataforma integrada, reali- es de descarga sin electrodos. La longitud de onda empleada es
zando la lectura en rea de pico, utilizando un tiempo de inte- de 196,2 nm, la intensidad de corriente de 290 mA y la rendija
gracin de 4 s y un volumen de muestra de 20 L. de 0,7 nm. Se hace necesario un precalentamiento de la lmpa-
El programa de temperatura para el horno es el de la tabla 2. ra de al menos media hora antes de comenzar el anlisis. Se

Tabla II. Programa de temperatura del horno de grafito para anlisis de orina.
Temp. C Rampa s Tiempo s Flujo mL/min Gas Lectura

1 110 1 20 250 Argn No


2 130 1 30 250 Argn No
3 1200 5 30 250 Argn No
4 2200 0 4 0 Argn S
5 2600 1 3 250 Argn No

b) Modificador de matriz utiliza un introductor de muestras slidas. La lectura se realiza


Los componentes primarios del modificador de matriz son: pa- en rea de pico, utilizando un tiempo de integracin de 8 se-
ladio (10g/L de Pd(NO3)2 en HNO3 al 15%), cido ntrico su- gundos.
prapuro al 65% (p/p), Tritn X-100 y agua suprapura de 18 El programa de temperatura para el horno es el de la tabla 3.

Tabla III. Programa de temperatura del horno de grafito para anlisis de tejidos.
Temp. C Rampa s Tiempo s Flujo mL/min Gas Lectura

1 180 10 20 250 Argn No


2 300 30 20 250 Argn No
3 600 20 5 250 Argn No
4 1200 10 10 250 Argn No
5 300 5 10 250 Argn No
6 2400 0 8 0 No S
7 2500 1 3 250 Argn No

M/cm de resistividad. b) Modificador de matriz


Como modificador de la matriz de trabajo se emplean los Se utiliza como modificador de matriz primario: paladio
componentes anteriores en la siguiente concentracin: modifi- (10g/L de Pd(NO3)2 en HNO3 al 15%, HNO3 al 65% (p/p)).
cador de paladio1 mL, HNO3 suprapuro 2 mL, Tritn X-100 Como modificador de matriz de trabajo se emplea 5 L de
0,1 mL y agua suprapura c.s.p. 100 mL. paladio al 0,4%, 10 L de HNO3 suprapuro al 5% (v/v).

c) Preparacin de la muestra c) Preparacin de la muestra


El anlisis se realiza en orina de 24 horas recogida en frasco de Se utiliza un tubo de atomizacin cerrado dentro del cual se
polipropileno y conservada a +4 C. Se toma una alcuota de colocan pequeas cantidades de polvo seco y debidamente pe-
sta y se centrifuga a 500 g, durante 10 minutos. sado de tejido, posteriormente se adiciona el modificador enci-
La orina se diluye 1/4 (v/v) con modificador de matriz, ho- ma de la muestra.
mogeneizndose correctamente.
d) Preparacin de patrones
La calibracin se realiza por adiciones de selenio (0,63, 1,26 y
d) Preparacin de patrones 2,53 mol/L), a la muestra de referencia de hgado bovino del
Se parte del mismo patrn acuoso de 1g/L que en el mtodo NIST (National Institute of Science and Technology).
anterior. Se utilizan los patrones de trabajo diluidos en modifi-
cador de matriz (paladio, HNO3 y tritn X-100), 1/4 (v/v) de e) Caractersticas metrolgicas
concentracin 0,63, 1,26 y 2,53 mol/L. La precisin obtenida en este mtodo es del 10% y el lmite de
El blanco es agua suprapura diluida 1/4 (v/v) con modifica- deteccin de 0,1 mol/L y un coeficiente de correlacin lineal
dor de matriz. de 0,998.

e) Caractersticas metrolgicas 3.5 Control de la calidad


Con este mtodo se obtiene una recuperacin media del a) Materiales de control
102,9%, un lmite de deteccin de 0,04 mol/L y un coeficien- Se encuentran en el mercado un gran nmero de muestras de
te de correlacin lineal de 0,999. origen humano, que pueden ser utilizadas para la validacin y

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para el control interno analtico, entre las que podemos desta- terminados pacientes, siendo la va ms adecuada para conse-
car: guirlo la medida de la concentracin total de selenio en el plas-
Para suero: Nycomed (Seronorm Trace Elements) y ma o suero. Se considera como mtodo de referencia la espec-
Breitlnder GMBH. trometra de absorcin atmica electrotrmica con corrector de
Para sangre: Nycomed (Seronorm Trace Elements Whole fondo Zeeman tal y como se describe en este documento.
Blood).
Para orina: Nycomed (Seronorm TE Urine) y Breitlnder
GMBH y Bio-Rad (Lyphocheck Quantitative Urine Control). 6 BIBLIOGRAFA
Para tejidos: NIST (National Institute of Science and
1. Levander OA. Selenium. In: Mertz W, ed. Trace Elements in Human
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La concentracin de selenio en el plasma (o suero) esta rela- 11. Yi-Fang Jiang, Guang-Iu Xu. The relativity between some epidemiolo-
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(33, 52-62), por lo que no puede trasladarse de unos grupos a 12. Lane HW, Barroso AO, Englert D, Dudrick SJ, Macfadden BS.
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plasmtico es de un 40 a un 70% del valor maternal decrecien- Essential trace element provision to patients receiving home intrave-
do su concentracin durante los 4 primeros meses de vida (63), nous nutrition in the United Kingdom. Clin Nutr 1986; 5: 91-7.
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AREA SEXO *MEDIA INTERVALO NUMERO EDAD REF.


GEOGRFICA mol/L mol/L

Barcelona H 1,03 0,62-1,84 31 28-53 (64)


Barcelona M 1,06 0,68-1,64 27 26-49 (64)
Galicia Neonat. 0,52 0,29-0,91 108 0-28 d (65)
Galicia M 0,72 0,41-1,07 107 Adultos (65)
Galicia Nios 0,72 0,32-1,12 89 6-10 (66)
Madrid H 1,43 (Sangre) 0,62-2,01 50 65-86 (67)
Madrid M 1,60 (Sangre) 0,64-2,15 42 67-91 (67)
Madrid H/M 0,76 0,48-1,40 118 19-70 (68)
Zaragoza Neonat. 0,39 0,19-0,56 - 0-28 d (69)
Zaragoza Nios 0,64 0,26-1,04 - 0,3-1,9 (69)
Zaragoza Nios 0,90 0,62-1,19 44 2-10 (69)
Zaragoza H/M 0,96 0,53-1,32 277 21-80 (69)
Zaragoza H/M 0,79 0,43-1,15 20 >80 (69)

*Plasma-selenio; concentracin media de sustancia (mol/L).


H: Hombre. M: mujer

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