Halaman 1

Jurnal Elektronik Pemuliaan Tanaman, 1 (4): 360-369 (Juli 2010) 360

Artikel Penelitian
Transgenik kapas dengan gen Antisense AC1 untuk ketahanan terhadap kapas
daun curl virus
J.Amudha, G.Balasubramani, VGMalathi, D.Monga, KCBansal dan KRKranthi

Abstrak:
Virus curl daun kapas adalah hama yang sangat menghancurkan di India Utara dan di kantong-
kantong kecil di negara bagian Selatan. Kapas daun keriting Penyakit (CLCUD) disebabkan oleh
Geminivirus yang ditularkan oleh vektor whitefly Bemisia tabaci. Ini adalah masalah serius di
wilayah utara dan menyebabkan kehilangan hasil hingga 58% dan 69% (perekam ICAC,
1999). Rekayasa genetika untuk kapas Transgenik yang resisten terhadap penyakit curl daun
(CLCUD) melalui pendekatan antisense RNA berpotensi untuk mengatasi penyakit ini.
Transgenik kapas yang resisten terhadap penyakit curl daun (CLCUD) menggunakan gen
Antisense (repetase protein) adalah dikembangkan melalui transformasi Agrobacterium
mediated. Sebuah vektor biner yang membawa gen rep Antisense bersamaan dengan gen npt II
(neomycin phospho transferase) yang didorong oleh promotor CaMV-35S dan terminator NOS
(nopaline synthase) adalah digunakan untuk transformasi. Konfirmasi gen rep dan npt II di
tanaman transgenik diverifikasi oleh PCR dan Integrasi T-DNA ke genom tanaman dikonfirmasi
oleh analisis Selatan. Transgenik individual dapat ditingkatkan di rumah kaca dan disaring untuk
melawan virus. Analisis progeni T2 menunjukkan pola pewarisan Mendel.

Kata kunci:
Resistensi berbasis RNA Antisense, virus curl daun kapas, rep, npt II, transformasi
Agrobacterium mediated, G.hirsutum.
pengantar
Rekayasa genetika berpotensi untuk diperbaiki
pengelolaan serangga dan hama di kapas. SEBUAH
jumlah gen dengan potensi untuk memberi serangga
resistensi telah diperkenalkan melalui
Agrobacterium atau dengan pemboman partikel atau oleh
kombinasi kedua metode tersebut (Firoozabady
et al., 1987; Perlack et al., 1990; McCabe dan
Martinall, 1993; Rajasekharan et al., 1996;
Zapata et al., 1999). Konsep patogen
resistansi turunan (PDR) (Sanford dan Johnston
1985) adalah cara yang efektif untuk menghasilkan virus-
tanaman tahan dan bisa digunakan untuk sejumlah
berbagai kelompok virus tanaman dengan berbagai virus
gen (Powell-Abel dkk, 1986; Lomonossoff,
1995; Fuchs dan Gonsalves, 1997; Varma et al.,
2002; Verma et al., 2003).
Resistensi terhadap virus tanaman dapat diberikan
baik dengan mengekspresikan bagian dari genom virus
memproduksi protein (protein-mediated)
Central Institute for Cotton Research, Kotak Pos No: 2,
Shankar Nagar (PO), Nagpur, 440 010
Maharashtra, India,
Email: jamudhacicr@gmail.com
yang memberikan perlawanan terhadap berbagai virus
strain dan virus Penggunaan gen virus sebagai PDR
telah mengungkapkan kurangnya korelasi antara
tingkat ekspresi protein transgenik dan tingkat
resistensi (Stark dan Beachy, 1989;
Golemboski et al., 1990) mengemukakan protein
tidak penting untuk perlawanan. Padahal tinggi
tingkat resistensi virus tertentu melalui
akumulasi sekuens asam nukleat virus
(RNA-mediated) memberikan tingkat yang sangat tinggi
resistensi virus spesifik (Beachy, 1997;
Baulcombe, 1996; Boogart et al., 1998). RNA-
dimediasi resistensi ditafsirkan sebagai contoh
penghilangan gen homologi-dependent (Flavell,
1994; Dougherty dan Parks, 1995).
Resistansi mediasi RNA pertama yang menghalangi
ekspresi gen replikasi (rep) oleh
Konstruksi gen antisense dilaporkan oleh Linbo
dan Dougherty, (1992) dan Smith et al., (1994).
AC1 (gen rep) di Begomoviruses (monopartit
atau bipartit) mengkodekan protein multifungsi,
yang terlokalisasi di dalam inti yang terinfeksi
tanaman, di mana ia memainkan peran kunci dalam peraturan tersebut

Halaman 2
Jurnal Elektronik Pemuliaan Tanaman, 1 (4): 360-369 (Juli 2010)
361
replikasi dan transkripsi DNA virus
(Luafs et al 1995). Rep adalah urutan dan untai
endonuklease / helicase spesifik / ATPase / ligase
yang menghasilkan viral load ssDNA
monomer dengan memutar lingkaran replikasi dari a
bentuk ulangan ganda terdampar ganda pada
pemetaan asal cis-essential di sebelah rep
gen (Hanley-Bowdoin et al 1999; Orozeo et al.
2000). Ini adalah protein virus yang sangat diperlukan
Sintesis DNA, yang memulai proses ini oleh
memperkenalkan nick pada asal replikasi.
Interaksi protein Rep dengan virus
Urutan DNA ditandai dengan baik. Reputasi
protein berinteraksi secara khusus dengan urutan di
wilayah umum (CR) yang dilestarikan
antara dua komponen genom, dekat
urutan yang terlibat dalam transkripsi
gen rasa komplementer yang mengkode BC1
protein dan protein AC1 sendiri dengan virus
protein peniru replikasi (REn), dan tanaman
homolog retinoblastoma, siklus sel
protein pengatur (Kong et al., 2000). Itu
Produk gen Rep auto menekannya sendiri
ekspresi dengan mengikat urutan antara
Kotak TATA promotor Rep dan Rep
situs inisiasi transkripsi N-terminal
daerah gen Rep memediasi ikatan ini
(Hanley-Bowdoin et al 1999). Berbasis antisense
transgenik resistensi memiliki potensi yang lebih baik
Virus DNA yang menuliskan genom mereka ke dalamnya
mRNA di nukleus (Narayanaswamy dan
Savithri; 2003). Transformasi genetik kapas
telah dilaporkan sebagai jaringan independen genotip
Metode kultur diikuti oleh beberapa
penulis (Sunilkumar dan Rathore, 2001) .Kami punya
Diadopsi Agrobacterium metode mediated
transformasi untuk pengembangan transgenik
kapas dalam investigasi sekarang
Bahan dan metode:
Biji kapas varietas F 846 diperoleh
dari Central Institute for Cotton Research
(Stasiun Regional), Sirsa, Haryana, India.
Sistem transformasi:
Agrobacterium tumefaciens strain EHA 105
menyimpan plasmid biner pBin AR dengan
gen rep antisense dan gen npt II sebagai seleksi
penanda di T-DNA yang digerakkan oleh kembang kol
promotor virus mosaik (35S CaMV) dan NOS-
terminator digunakan sebagai sistem vektor untuk
transformasi (Gambar 1). Bakteri dipertahankan
pada media YEMA (1,0% b / v ekstrak ragi,
Mannitol 1,0% b / v, 0,1% b / v Natrium klorida,
0,2% b / v magnesium sulfat, pH-7,0)
mengandung kanamycin 50mg / l dan 25mg / l
rifampisin Untuk inokulasi, satu koloni tunggal
ditanam semalam pada cairan YEMA pada suhu 28C
dengan antibiotik yang tepat.
Transformasi tanaman kapas:
Varietas kapas varietas F 846 dibesarkan
aseptically pada setengah - Murashige dan Skoog [1962]
(MS) sedang. Sumbu embrio dipotong
dan dipangkas dari kedua sisi dan digunakan untuk co-
budidaya dengan A.tumefaciens. Eksplan
dikultivasi bersama dalam media cair setengah MS
dengan budaya tumbuh aktif A.tumefaciens di
1.0 OD dan 100mM acetosyringone. Setelah
Semalam co-budidaya, tunas itu
didekontaminasi di medium MS setengah
mengandung sefotaksim 250 mg / l. Eksplan
kemudian dipindahkan ke media seleksi
mengandung kinetin 0.1mg / l, BAP 0,1 mg / 1 dan
kanamisin 50 mg / l. Tahan kanamisin
Pemotretan dikultur dalam media yang mengandung
0,1 mg / l BAP 0,1 mg / l untuk induksi akar.
Tanaman berakar dibilas dengan baik dan dipindahkan ke
pot berisi gambut, tanah dan pasir dalam rasio 1: 1: 1.
Tanaman ditutupi dengan kantong plastik dan kemudian ke
sebuah pot dengan tanah untuk pengerasan selama 15 hari sebelumnya
mentransfer ke rumah kaca di bawah alam
kondisi. Benih dipanen dan T1
Tanaman dibesarkan di rumah hijau.
Skrining untuk tanaman yang ditransmisikan menggunakan PCR:
DNA genom diisolasi seperti yang dijelaskan oleh
Paterson dkk., (1993) dari daun muda
T0
tanaman tumbuh di polyhouse. PCR
amplifikasi gen rep dan npt II menggunakan
primer spesifik dilakukan untuk memeriksa
Kehadiran transgen, rep spesifik
primer
urutan
(5'-3 ')
ATGCCACGTGATTTAAAAACA
dan
GTGGGGAGAGTTTCAGATCG dan npt II
spesifik
primer
GAGGCTAATTCGGCTATGACTG
dan
ATCGGGAGAGGCGAT ACCGTA. PCR itu
dilakukan dalam reaksi 20l (volume total)
Campuran yang mengandung 100ng DNA, reaksi 10X
buffer, 10mM dNTPs, 100ng masing-masing primer,
25mm MgCl2 dan 1U polimerase Taq DNA.
Berikut kondisi 94C selama 5 menit, lalu 35
siklus 94C untuk 30 detik, 56C selama 1min, 72C untuk
1 menit dan 5 menit untuk perpanjangan akhir pada suhu 72C.
Amfibi diberi elektroforesis pada 1% b / v

Halaman 3
Jurnal Elektronik Pemuliaan Tanaman, 1 (4): 360-369 (Juli 2010)
362
agarosa dan dideteksi dengan etidium bromida
pewarnaan.
Hibridisasi Selatan tanaman yang ditransformasikan:
Konfirmasi integrasi gen di
tanaman transgenik dilakukan di T 0 tanaman dengan
Metode blotting selatan (Sambrook et
al., 1989). DNA genom terisolasi dari
daun dari T 0
tanaman. Untuk selatan
hibridisasi 10g DNA genom total dari
transgenik putatif dicerna dengan Eco
RI dan Hind III diatasi dengan gel agarose 0,8%
elektroforesis. Gen rep probe diberi label
dengan kit pelabel DIG non radioaktif dari
Roche, Jerman.
Hasil:
Transformasi dan regenerasi tanaman:
Sumbu embrio berukuran sekitar 5-10 mm dari
Kotiledon berumur 2-3 hari dipangkas dan digunakan
untuk co-budidaya. Sebanyak 685 sumbu embrio
eksplan dari kotiledon berusia 2 hari itu
dibudidayakan dan dipilih dengan menggunakan kanamisin 50
mg / l sebagai agen seleksi yang hanya mengizinkan
transforman tumbuh (Gambar 2a). Tembak
induksi diamati setelah 10 - 15 hari di
media induksi tunas (Gambar 2b). Putatif itu
tunas yang berubah menjadi sub-kultur dua kali
media pemotretan dan kemudian dipindahkan ke
Media perakaran setelah tunas mencapai ketinggian
5-6 cm (Gambar 2c). Tanaman berakar dibilas dengan baik
dan dipindahkan ke pot berisi gambut, tanah dan
pasir dalam rasio 1: 1: 1 (Gambar 2d). Tanaman T1 tumbuh
di rumah hijau (Gambar 2e).
Analisis molekuler transforman:
DNA genomik dari T 0 tanaman diuji
untuk ada tidaknya gen npt II dengan
primer spesifik yang dikatakan di atas oleh PCR (Gambar 3)
menghasilkan amperon 700bp. Kehadiran gen rep
juga dikonfirmasi dengan memperkuat gen dengan
primer spesifik dan 540bp yang diharapkan
segmen diamati (Gambar 4). PCR positif T 0
Tanaman dianalisis lebih lanjut untuk integrasi
gen ke genom tanaman oleh Southern
hibridisasi hibrid Hibridisasi Selatan terjadi
dilakukan untuk mengkonfirmasi integrasi
transgen di T 2 generasi dengan gen rep
menyelidiki. Gen rep dengan label yang tidak radioaktif
hibridisasi dengan Eco RI dan Hind III
DNA genom yang dicerna. Noda setelah dicuci
menunjukkan integrasi gen di
transgenik T 1 tanaman (Gambar 5) dan tidak ada band itu
terlihat dalam kontrol Analisis PCR dari 56 T 2 tanaman
mengungkapkan 18 tanaman untuk keberadaan gen tersebut
Integrasi yang sesuai dengan rasio Mendel 3: 1
segregasi dan nilai 2 di 1DF pada tingkat 5% dari
signifikansi adalah 0,5.
Skrining bulu kelopak nifas:
Kejadian transgenik individu disaring
lalat putih vulgar (24 jam setelah akuisisi
periode). Tanaman transgenik berada di bawah
skrining selama satu bulan dan mereka diamati
untuk gejala penyakit. Tahan
transgenik tidak menunjukkan adanya gejala dan adanya
dipertahankan di rumah kaca.
Titik integrasi gen rep di kapas
genom
Untuk mengetahui integrasi gen rep di
genom kapas dibawa oleh Chromous
Biotech Pvt Ltd, Bangalore sebagai berikut. Itu
DNA genomik diisolasi dari kapas
Daun disediakan dengan menggunakan genom genom
minispin Kit. DNA genomik dicerna
dengan Hind III dan Pst I membatasi endonuklease.
DNA yang dicerna diliguskan untuk vektor pUC
dicerna dengan endonuklease restriksi yang sama
enzim. Menggunakan teknik PCR berpemilik
fragmen genom yang terdiri dari gen rep adalah
diperkuat Amplifikasi yang digunakan primer
mengapit Hind III dan situs restriksi Pst I. Itu
Gen yang diperkuat diklon ke dalam pUC18 yang dicerna
dengan situs pembatasan Hind III dan Pst I. Itu
Klon diurut dan dari urutan
titik data integrasi ditentukan.
Menyejajarkan data urutan menggunakan BLAST NCBI
ditemukan bahwa gen rep telah terintegrasi ke dalam
Gossypium hirsutum retrotransposon bersifat putatif
copia (gb | EF457753.1) Gossypium hirsutum
retrotransposon copia putatif, transposon
Gypsy3, seperti retrotransposon putative gypsy,
dan transposon putatif MuDR, lengkap
urutan; alkohol dehidrogenase gen A,
CD lengkap; transposon copia-like dan myosin
pseudogene, urutan lengkap; putative FAD-
tergantung oksidoreduktase dan protein putatif
disulfida isomerase gen, lengkap cds;
retrotransposon, urutan lengkap; diduga
gen protein membran integral, CD lengkap;
retrotransposon putative gypsy, lengkap
urutan; methyltransferase asam sitokat
gen,
lengkap
cds;
transposon,
retrotransposon gipsi putatif, dan transposon,
urutan lengkap; putatif asam caffeic
methyltransferase
gen,
lengkap
cds;

Halaman 4
Jurnal Elektronik Pemuliaan Tanaman, 1 (4): 360-369 (Juli 2010)
363
transposon, urutan lengkap; dan fotosistem
Gen protein II, sebagian CD.
Diskusi:
Regenerasi kapas dan pengenalan
Gen asing adalah genotipe spesifik alam
Metodologi adalah genotip independen. Coker
genotipe, yang sesuai untuk regenerasi
invitro oleh embriogenesis somatik, secara luas
digunakan dalam percobaan transformasi genetik
(Umbeck et al., 1987; Finer dan McMullen,
1990; Chaudhary et al., 2004; Gould dan
Magallanes-Cedeno 1998). Keberhasilan yang terbatas
Telah diperoleh dengan meristem tunas sampai saat ini
oleh yang lain dengan protokol transformasi rendah
(McCabe dan Martinell, 1993; Zapata et al.,
1999; Satyavathi et al., 2002) .Genotype
produsen independen untuk mengubah non-coker
genotipe telah dilaporkan oleh Gizant dan
Weintraub (1984) .Cotton transgenik dengan
Antisense AV2 gen untuk ketahanan terhadap kapas
virus curl daun yang dilaporkan oleh Sanjaya et al., (2005)
menunjukkan pola Mendelian klasik
warisan. Dalam penelitian ini kami telah berkembang
keberhasilan pengenalan gen rep melalui
Metode mediated Agrobacterium.
Virus Gemini dapat menyebabkan kehilangan hasil yang signifikan
dan mereka menumpuk di inti sel tanaman
dimana mereka mereplikasi dan mengembangkan penyakit. Itu
Teknologi RNA antisense pertama kali dilaporkan oleh
Gizant dan Weintraub [1984] sebagai antisense
RNA pasang dengan mRNA target gratis
dan akan menghambat ekspresi homolog
gen dengan merendahkan target mRNA dan
mencegah terjemahan Yang rasional dari Antisense
Teknologi RNA yang mengarah pada gen membungkam, adalah
pembentukan RNA beruntai ganda dari
rasa / antisense
rekan-rekan
dari
segmen endogen / transgen, yang memulai
sistem surveilans di dalam pabrik, untuk
degradasi mRNA transgen dan target RNA
(Waterhouse et al, 1995; Yang et al., 2004).
RNA Antisense sebenarnya adalah bagian dari kompleks
jalur alami untuk regulasi gen oleh
homologi tergantung gen membungkam mekanisme
dimana transkrip akal bisa membungkam gen
ekspresi (Asad et al., 2003).
Daun daun kerucut daun koopartit tokomovirus
virus memiliki DNA A dan DNA . DNA Sebuah kode untuk
AV 1 (CP), AV2 (MP), AC 1 dan AC 4 (Rep),
AC 2 (Trap), AC 3 (REn). Tanaman transgenik
dengan gen rep akan menangkap replikasi dari
menyerang genom virus dengan menargetkan
mRNA komplementer yang diproduksi oleh pabrik.
Transgenik kapas diperoleh pada penelitian ini
membuka jalan untuk mengembangkan resistensi virus di a
sistem bandel seperti kapas
Kesimpulan: Gen post-transcriptionional membungkam
(PTGS) mengakibatkan degradasi RNA dari
gen tuan rumah dan transgen setelah homolog
transkripsi di nukleus. Beberapa model punya
telah didalilkan untuk menjelaskan, gen yang diamati
fenomena membungkam, yang meliputi
keterlibatan RNA antisense (Waterhouse et
al., 1998), cosuppression (Palauqui dan
Vaucheret., 1998) dan interferensi RNA (Susi et
al., 2004). Percobaan kami sesuai dengan sebagian besar
strategi rekayasa genetika
resistensi terhadap begomovirus telah terlibat
protein yang terkait replikasi. Studi memiliki
difokuskan pada penggunaan sebagian, seluruh, rasa antisense
atau gen rep begomovirus bermutasi (Noris et al
., 1996; Bendahmane dan Gronenborn, 1997;
Yang et al., 2004). Dasar pemikiran asli dari
teknologi RNA antisense (Gizant dan
Weintraub, 1984), yang menyebabkan pembungkaman gen,
menyajikan mekanisme efektif melawan virus
(ditinjau oleh Wassengger 2002). Ada
Ada sejumlah model yang diusulkan untuk induksi
dan operasi pembungkaman gen yang terlibat dengan
strategi antisense Pada kebanyakan model itu
menunjukkan bahwa dengan berpasangan dengan a
RNA target pelengkap, antisense
RNA akan menghambat ekspresi homolog
gen dengan mencegah translasi atau promosi
degradasi penargetan RNA (Fuchs dan
Gonsalves, 1997; Waterhouse et al., 1998)
Gen rep antisense dari CLCuV pada prinsipnya
blok ekspresi gen virus rep oleh
mencegah terjemahan atau melalui homologi
tergantung degradasi target viral RNA
(Praveen et al., 2005). Resistensi terhadap curl daun
penyakit yang didemonstrasikan dalam penelitian ini, dengan
antisense rep gen construct memiliki antisense RNA-
dimediasi yang menghambat ekspresi akal
gen dengan berpasangan dan mengarah pada degradasi
menargetkan RNA, yang sesuai dengan
studi Yang et al (2004).
Untuk menjelaskan hasil kami, batu penjuru kami
Model pembungkaman gen, diinduksi oleh pembentukan
RNA duplex dengan akal (asal virus) dan
antisense (transgen), mengakibatkan pemulihan virus-

Halaman 5
Jurnal Elektronik Pemuliaan Tanaman, 1 (4): 360-369 (Juli 2010)
364
tanaman yang terinfeksi Untuk daun kapas curl virus diaease
(CLCuD) pendekatan antisense tampaknya memiliki
potensi yang lebih baik untuk mendapatkan perlawanan spesifik. Itu
CLCuD hanya memiliki satu molekul tunggal
DNA terdampar, DNA-A yang kode untuk dua
protein, AV1 atau protein mantel, AV2 atau gerakan
protein dalam arti orientasi dan empat protein
AC1, AC2, AC3 dan AC4 dalam antisense
orientasi dan kekurangan komponen DNA-B
(Zhou et al., 1998). Dengan demikian fungsi DNA-B
protein berkode yaitu BV1 (terlibat dalam
pengangkutan DNA virus ke luar nukleus) dan
BC1 (terlibat dalam sel ke gerakan sel) adalah
dilakukan oleh protein mantel (CP) AV1 dan
Gerakan protein AV2 masing-masing, di antaranya
monopartit Begomoviruses. Jadi antisense
RNA ke AC1 akan membentuk RNA duplex dengan akal
(asal virus) dan antisense (transgen)
mengganggu fungsi gen. Oleh karena itu virus
replikasi, gerakan dan enkapsulasi akan terjadi
terpengaruh Tanaman transgenik mengekspresikan antisense
gen protein reptil (AC1) yang dikembangkan di
Investigasi ini bisa mengakibatkan penangkapan
infeksi karena gangguan replikasi virus,
gerakan dan enkapsulasi.
Ucapan Terima Kasih: Kami mengakui
Proyek Jaringan Transgenik yang didanai oleh
Dewan Penelitian Pertanian India untuk Indonesia
dukungan finansial
Singkatan: CP: Coat protein, MP: Gerakan
protein,
Rep: Replicase
protein,
REn: Replicase enhancer protein, TrAP:
Transkripsi Protein Aktif
Referensi :
Asad S, Haris WAA, Bashir A, Xafar Y, KA Malik,
Malik NN & Lichtenstein CP, 2003.
Tembakau transgenik mengekspresikan virus Gemini
RNA resisten terhadap virus yang serius
patogen yang menyebabkan penyakit daun kapas curl,
Lengkungan. Virol. 148. 2341-2352.
Baulcombe DC, 1996. Mekanisme patogen-
resistansi yang diturunkan terhadap virus dalam transgenik
tanaman, sel tanaman 8. 1833-1844.
Beachy RN, 1997. Mekanisme dan penerapan
resistensi yang diturunkan patogen dalam transgenik
tanaman, Curt. Opini Biotek 8. 215-220.
Bendahmane M & Gronenborn B, 1997. Teknik
resistensi terhadap virus daun kuning tomat
(TYLCV) menggunakan RNA antisense. Tanaman Mol.
Biol.33: 351-357.
TV Boogart, Lomonosoff GP & Davis JW, 1998. Bisa
kami menjelaskan resistansi virus RNA yang dimediasi oleh
gen homologi yang bergantung pada silencing ?. Mol.
Mikroba Tanaman Berinteraksi. 11. 717-723.
Chaudhary B, Kumar S, Prasad KVSK, Oinam GS,
Burma BK & Pental D, 2004. Pengeringan lambat
menyebabkan pengambilan suara frekuensi tinggi dari
mengubah embrio somatik dari kapas
(Gossypium hirsutum L. cv Coker 310 FR),
Plant Cell Rep.21, 955-960.
Dougherty WD & Parks TD, 1995. Transgenes dan
Penindasan gen: memberi tahu kita sesuatu yang baru?
Curr. Opini Cell Biol. 7 .399-405
Finer JJ & McMullen MD, 1995. Transformasi dari
kapas (Gossypium hirsutum L) melalui partikel
pengeboman. Plant Cell Rep 8. 586-589.
Firoozabady E, Deboer DL, Merlo DJ, Halk EL,
Amerson LN, Rashka KE & Murray EE,
1987.Transformasi kapas (Gossypium
hirsutum L.) oleh Agrobacterium tumefaciens
dan regenerasi tanaman transgenik, Tanaman
Mol. Biol., 10. 105-116.
Flavell RB, 1994. Inaktivasi ekspresi gen di
tanaman sebagai konsekuensi urutan tertentu
duplikasi, Proc. Natl. Acad. Sc. USA 91.
3490-3496.
Fuchs M & Gonsalves D, 1997. Aman lingkungan
pendekatan untuk pengendalian penyakit tanaman, Genetik
Engieering Dalam: Rechcigl NA dan Rechcigl
JE (eds) Pendekatan yang Aman bagi Lingkungan
Crop Disease Control, Lewis penerbit CRC
tekan, Boca Raton, Florida. 333-368.
Gizant & Weintraub H, 1984. Penghambatan timidin
Ekspresi gen kinase oleh RNA Antisense:
pendekatan molekuler untuk analisis genetika, Cell
36. 1007- 1015.
Golemboski DB, Lomonosoff GB & Zaitlin M, 1990.
Tanaman ditransformasikan dengan virus mosaik tembakau
urutan gen non-struktural tahan terhadap
virus, Proc. Natl. Acad. Sci. AMERIKA SERIKAT. 87
.6311-6315.
Gould JH & Magallanes-Cedeno M, 1998. Adaptasi
Kultur apeks pucuk kapas sampai Agrobacterium
- ransformasi yang dimediasi, Plant Mol. Biol.
Rep 16. 1-10.

Halaman 6
Jurnal Elektronik Pemuliaan Tanaman, 1 (4): 360-369 (Juli 2010)
365
Hanley-Bowdoin saya, Settlage SB, Orozeo, BM, Nagar
S, & Robertson D, 1999. Geminivirus -
Model untuk replikasi DNA tumbuhan,
transkripsi dan regulasi siklus sel. Cri Rev
Tanaman sci 18, 71-106
JKong, I. J, Orozeo, BM, Roe, JI, Nagar, S., Ou,
S., Feiler, HS, Durfee, T., Miller, AB,
Guissem, W., Robertson, D., dan Hanley-
Bowdoin, L., 2000. Replikasi Geminivirus
protein berinteraksi dengan retinoblastoma
protein melalui domain baru untuk menentukan
gejala dan spesifisitas jaringan infeksi
implan EMBO J. 19, 3485-3495
Lindbo JA, Dougherty WG, 1992. Patogen berasal
resistensi terhadap potyvirus: kebal dan tahan
fenotip pada tanaman tembakau transgenik
mengekspresikan bentuk berubah dari mantel virus poty
urutan nukleotida protein, Mol. Menanam-
Microbe Berinteraksi 5144-153.
Lomonossoff GP, 1995. Pathogen yang diturunkan resistace ke
virus tanaman, Annu.Rev. Phylopathol. 33 323-
343.
Luafs, J., Schumacher, S., Gcisler, N., Jupin, I. dan
Gronenborn, B, 1995. Identifikasi dari
tiruan tirosin protein Geminivirus Rep.
FEBS surat 18, 2258-2262.
McCabe DE & Martinell BJ, 1993. Transformasi dari
Kultivar kapas elit melalui pemboman partikel
dari meristems. Bio / Teknologi. 11. 596-598.
Murashige T & Skoog F, 1962. Media yang direvisi untuk
pertumbuhan cepat dan bioassay dengan jaringan tembakau
budaya. Tanaman fisiol 15: 473-497.
Narayanaswamy K & Savithri HS, 2003. Secara genetis
direkayasa ketahanan terhadap virus tanaman. Di: singh
RP dan Jaiswal PK (eds) Tanaman Genetik
Teknik: Aplikasi dan Keterbatasan.
Vol. 1. Rekayasa Genetika Tanaman; vol. 1.
Aplikasi dan Keterbatasan (hlm. 61-85).
Scitech Pub. LLC, USA.
Nateshan HM, Muniyappa V, Swanson MM &
Harrison BD, 1996. Rentang host, vektor
hubungan dan hubungan serologis kapas
virus curl daun di India Selatan, Ann. Appl. Biol.
126 233-244.
Noris E, Accotto G, Tavazza R, Brunetti A, Crespi S &
Tavazza M, 1996. Ketahanan terhadap kuning tomat
daun curl geminivirus di
Nicotiana
Tanaman benthamiana berubah dengan a
gen virus C1 terpotong.24: 132-138.
Orozeo, BM, Kong, LJ, Batts, LA, Elledge, S.,
dan Hanley-Bowdoin, L, 2000. The
karakter multifungsi dari sebuah geminivirus
Protein replikasi ini tercermin dari kompleksnya
sifat oligomerisasi. J Biol Chem. 275,
6114-6122
Palauqui JC & Vaucheret H, 1998. Transgen adalah
dibuang untuk langkah degradasi RNA
cosuppression Tanaman biol 95 (16): 9675-9680.
Paterson H, Brubaker CL & Wendel JF, 1993. Cepat
metode ekstraksi kapas (Gossypium
spp.) DNA genom yang cocok untuk RFLP atau PCR
analisis, Plant Mol. Biol. Rep 11.122-127.
Perlak J, Deaton RW, Armstrong TA, Fuchs RL, Sims
SR, Greenplate IT & Fischhoff DA, 1990.
Tanaman kapas tahan serangga, Bio / Teknologi
8. 939-943.
Praveen S, Mishra AK & Dasgupta A, 2005. Antisense
penekanan ekspresi gen replikasi
sembuh tanaman tomat dari infeksi daun curl.
Tanaman Sci.168: 1011-1014.
Powell-Abel P, Nelson RS, Hoffman N De B, Rogers
SG, Fralley RT & Beachy RN, 1986. Keterlambatan
Perkembangan penyakit pada tanaman transgenik itu
Ungkapkan gen protein coat mosaik tembakau,
Ilmu. 232. 138-143.
Rajasekharan K, Grula JW, Hudspeth RL, Pofelis S &
Anderson DM (1996) tahan herbisida
Kacang Acala dan Coker ditransformasikan dengan a
Gen asli mengkodekan bentuk mutan
sintase asetat hidroksiasida. Mol. Berkembang biak. 2: 307-
319.
Rishi N & Chauhan MS, 1994. Penampilan daun
penyakit keriting kapas di India Utara. J. Kapas
Res. Dev. 8179-180.
Sambrook, Fritsch EF & Maniatis T, 1989. Molekuler
Kloning - Manual Laboratorium, Musim Semi Dingin
Laboratorium Pelabuhan, New York, AS.
Sanford JC & Johnston SA, 1985. Konsep
resistensi turunan parasit yang berasal dari resistansi
gen dari parasit genome sendiri, J.
Theor. Biol. 113. 395-405.
Sanjaya, Satyavathi VV, Prasad V, Kirthi N, Maiya
SP, Savithri HS & Sita Lakshmi G, 2005.
Pengembangan transgenik kapas dengan
gen AV2 antisense untuk melawan resistensi
daun kapas curl virus (CLCUD) via
Agrobacterium tumefaciens. Sel tumbuhan tiss
Kultus organ 81: 55-63.

Halaman 7
Jurnal Elektronik Pemuliaan Tanaman, 1 (4): 360-369 (Juli 2010)
366
Satyavathi VV, Prasad V, Gita Lakshmi & Sita
Lakshmi, 2002. Transformasi efisiensi tinggi
protokol untuk tiga varietas kapas India via
Agrobacterium tumefaciens, tanaman sci. 62. 215-
223.
Smith HA, Swaney SL, Taman TD, Wernsman EA &
Dougherty WG, 1994. Virus tanaman transgenik
resistensi dimediasi oleh akal yang tidak dapat diterjemahkan
RNA: ekspresi, regulasi, dan takdir
RNA tidak penting, sel tumbuhan. 6.1441- 1453.
Stark DM & Beachy RN, 1989. Perlindungan terhadap
potyvirus pada tanaman transgenik; Bukti untuk
Resistansi spektrum luas, Bio / Teknologi. 7.
1257-1262.
Sunilkumar G & Rathore KS, 2001. Transgenik
kapas; faktor yang mempengaruhi Agrobacterium-
dimediasi transformasi dan regenerasi,
Mol. Berkembang biak. 8. 37-52.
Susi P, Hohcuri M, Wahlroos T & Kilby NJ, 2004.
Karakteristik pembungkaman RNA pada tanaman:
kesamaan dan perbedaan antar kerajaan.
Tanaman Mol. Rebus.54: 157-174.
Bagian Informasi Teknis.1999.Cotton Leaf curl
Penyakit: Kerugian dan pengobatan, ICAC
RECORDER, International Cotton Advisory
Komite, Volume XVII, No.4, Des.
Umbeck P, Johnson G, Barton K & Swain W, 1987.
Kapas bertransformasi secara genetik (Gossypium
hirsutum L.) tanaman, Bio / Teknologi. 5. 263-
265.
Varma A & Malathi VG, 2003. Muncul
Masalah geminivirus: ancaman serius
produksi tanaman pangan, Ann. Appl. Biol. 142. 145-
164.
Varma A, Jain RK & Bhat AI, 2002. Tahan virus
tanaman transgenik untuk lingkungan aman
pengelolaan penyakit virus, Indian J.
Biotechnol. 1,73-86.
Waterhouse M & Graham MW, 1995. Perlawanan virus
dan pembungkaman gen pada tanaman dapat diinduksi oleh
ekspresi simultan rasa dan keasaman
RNA. Proc. Natl. Acad. Sci. AMERIKA SERIKAT. : 13959-
13964.
Wassengger
M
(2002)
Gen
membungkam.Int.Rev.Cytol.219: 61-113.
Yang Y, Sherwood TA, Patte CP, Hiebert E &
Polston JE, 2004. Penggunaan daun kuning tomat
virus curl (TYLCV) .Rep gen ke
resistensi TYLCV insinyur pada tomat.
Phytopathology.94: 490-496.
Zapata Z, Taman SH, EL-Zikand KM & Smith RH,
1999.Transformasi katun Texas
Kultivar dengan menggunakan Agrobacterium dan tunas
apex, Theor. Appl. Genet. 98. 252-256.
Zhou X, Liu Y, Robinson JD & Harrison BD, 1998.
Empat DNA-varian di antara isolat Pakistan
virus curl daun kapas dan afinitas mereka
DNA-A dan isolat virus Gemini dari
Okra.J.Gen.Virol.79: 915-923.

Halaman 8
Jurnal Elektronik Pemuliaan Tanaman, 1 (4): 360-369 (Juli 2010)
367
Gambar 2a: Tunas yang berubah pada media seleksi, 2b: induksi pucuk, 2c: rooting
dari
tunas, 2d: pengerasan tanaman yang berakar, 2e: Tanaman transgenik di rumah hijau
2a
2b
2c
2d
RB
ECoRI Bam HI ECoRI Bam HI LB
Tidak ada promoter Npt II pAnos CaMV 35S Rep gen pANos pAocs
Gambar 1: Peta biner pBin AR yang membawa gen Rep Antisense

Halaman 9
Jurnal Elektronik Pemuliaan Tanaman, 1 (4): 360-369 (Juli 2010)
368
Gambar 3: Analisis elektroforesis produk PCR tanaman kapas transgenik
menunjukkan
adanya fragmen gen npt II yang diperkirakan 700bp.
Jalur 1: Kontrol positif, 2 sampai 6: DNA tanaman yang berubah bentuk, marker M:
100 bp
Gambar 4: Analisis elektroforesis produk PCR tanaman kapas transgenik
menunjukkan
adanya fragmen reseptor 540 bp dari gen rep yang diharapkan.
Jalur 1-3: DNA tanaman yang berubah, 4: Lamda marker (Eco RI + Hind III digest)
M: 100 bp marker,
1
2
3
4
5
6
M
700bp
1
2
3
4
M
540bp

Halaman 10
Jurnal Elektronik Pemuliaan Tanaman, 1 (4): 360-369 (Juli 2010)
369
Gambar 5: Analisis blot selatan terhadap tanaman transgenik. DNA genom (10 g)
dicerna
dengan Eco RI dan Hind III dihibridisasi dengan probe gen rep yang diberi label non-
radioaktif
metode penggalian label.
Tangga Lane 1 & 2: 100 bp, Lane 3 & 4: DNA genom gen transgenik individual, Lane
5:
+ ve Control, Lane 6: -ve Control
123456
kb
1.0
0,6
0,1