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Catlisis Enzimtica
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Enzimas
Las enzimas se caracterizan por actuar
con gran velocidad y precisin y dejan
muy poco margen para el error
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Primeros estudios sobre enzimas
Buchner: (1897) las levaduras fermentan el azcar a
alcohol. Estas molculas funcionan separadas de las
clulas
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Enzimas
Las enzimas son protenas globulares muy numerosas:
hay ms de 2.000 enzimas diferentes.
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ENZIMAS
Difieren de los catalizadores qumicos en:
4. Capacidad de regulacin
Control alostrico
Modificacin covalente de las enzimas
Variacin de las cantidades de enzimas sintetizadas
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Cofactores
Algunas enzimas solo necesitan las cadenas laterales de
sus aas para ser funcionales
Otras necesitan cofactores para ser funcionales
Estabilizan la conformacin de la protena activa
Se unen en el centro activo
Unen enzima y sustrato
Dos tipos:
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Iones que actan como cofactores
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HOLOENZIMA
enzima + cofactor
complejo activo catalticamente
APOENZIMA
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Coenzimas
Hay dos tipos:
Molculas Orgnicas
Complejas
Slo se unen a la enzima en el
momento de la catlisis
Grupos Prostticos
Coenzima unidos ntimamente a
la enzima.
Una vitamina forma parte de la
estructura En rojo, coenzima
Transportadores intermediarios de FAD
grupos funcionales, tomos o
electrones
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Algunas coenzimas que actan como portadores transitorios de
tomos o grupos funcionales
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Las coenzimas ms
importantes son:
-NAD (Nicotinamida
Adenina Dinucletido)
Participan en
reacciones redox
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(B5)
Coenzima A
Riboflavina (B2)
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NADH, NADPH (nicotinamida adenina dinucletido, -vit B3-)
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Las enzimas se clasifican segn las
reacciones que catalizan
Sufijo -asa tras el nombre de sustrato o actividad que realiza
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Cmo funcionan las enzimas?
Las molculas biolgicas son muy
estables a pH neutro, temperatura
suave y el ambiente acuoso que hay
dentro de las clulas
E+S ES EP E+P
(Complejos transitorios)
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Las enzimas son catalizadores
SP
Estado de transicin:
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Energa de activacin:
diferencia entre la E del
estado basal y la E del
estado de transicin
S P
En ausencia de
catalizador slo una
pequea parte de las
molculas contar con E
suficiente para alcanzar el
estado de transicin: la
reaccin ser muy lenta
E+S ES EP E+P
ES y EP son intermediarios de reaccin.
Cuando en una reaccin existen varios pasos, la velocidad
global viene determinada por el paso cuya energa es ms
elevada: paso limitante de velocidad. 26
Ejemplo
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Velocidad de reaccin / equilibrio
El equilibrio de una reaccin est asociado a variaciones de
E libre estndar de la reaccin
S P
Constante de equilibrio (K eq)
K eq = [P] / [S]
Aplicando
termodinmica
G 0 = - RT ln K eq
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Poder cataltico y especificidad de los enzimas
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Especificidad
La E de fijacin tambin provoca la especificidad del enzima
Especificidad: discriminar entre sustrato y molcula
competitiva
Especificidad debida a la formacin de muchos enlaces
Centro activo: aas con cadenas laterales que favorecern
tanto la unin del sustrato como su catlisis (interacciones
hidrofbicas, inicas, covalentes, etc.)
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La complementariedad
geomtrica y electrnica
entre enzima y sustrato
depende de fuerzas no
covalentes
Grupos
hidrfobos
Puentes de H
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Especificidad
Absoluta
Slo hay 1 sustrato que se
pueda unir a un enzima
De grupo
Varios sustratos con un
grupo funcional determinado
se unen a la misma enzima.
De reaccin
Ej: Hidrlisis de un grupo
fosfato: rompe un enlace
fosfato de cualquier sustrato
De estereoespecificidad:
La ms especfica, distingue
estereoismeros
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Modelo llave-cerradura
Fisher (1894) enunci: "el sustrato se adapta al centro activo o
cataltico de una enzima como una llave a una cerradura
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Modelo del Ajuste Inducido
Modelo de Koshland (1958): las enzimas son flexibles y sus sitios
activos pueden cambiar (expandirse) para acomodarse a sus sustratos
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Enzima imaginario. Rotura de una vara metlica
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Grupos catalticos que contribuyen a la catlisis
Catlisis covalente
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Grupos catalticos que contribuyen a la
catlisis
Catlisis cido base general
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Ejemplo de catlisis cido base general
Se forma un
intermediario
cargado muy
inestable
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Catlisis cido base general
Hidrlisis de un enlace
amida: quimiotripsina
(proteasa)
El intermediario
inestable se estabiliza por
transferencia de H+ desde
o hacia las cadenas
laterales del centro activo
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Catlisis covalente
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Cintica enzimtica
Explica el mecanismo de accin enzimtica
Determinacin de la velocidad de la reaccin y el modo
en que sta cambia en respuesta a cambios en los
parmetros experimentales
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Cintica enzimtica
Constante Vara
[E]
[S] Meseta
Vmax
[S] Vo
aumenta ms
despacio
E+S ES E+P
Ms lenta
Limita la V de la
reaccin total
En cualquier momento de la reaccin, el enzima existe
en dos formas:
- la forma libre E
- la forma combinada ES
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Cintica enzimtica
E+S ES E+P
V mx se alcanza cuando
apenas quede E libre, todo en
ES.
El enzima est saturado
V mx [S]
Vo = ---------------
Km + [S]
[S]
=
Si divido por V mx
Km + [S]
Km = [S], cuando Vo = V mx
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En todas la enzimas que siguen una cintica de Michaelis-
Menten:
Hay una dependencia hiperblica de Vo frente a [S].
Se mide en mol/l
Si KM se necesita
poco S para alcanzar
Vmx: la afinidad entre S y
E es alta.
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Los valores de KM varan de una enzima a otra e
incluso varan de un sustrato a otro, dentro del
mismo enzima.
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Grfica de dobles recprocos de
Lineweaver-Burk
1 Km 1
= +
Pendiente =
Vo Vmx[S] Vmx
Se representan los
recprocos de la grfica de
Michaelis-Menten 1/Vo
frente a 1/[S].
k1 k2 k3
por ejemplo: E+S ES EP E+P
k-1 k-2
(paso limitante)
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Constante Kcat o nmero de recambio
En la ecuacin de Michaelis-Menten
Vmx
kcat = V max =K cat [Et]
[Et]
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REACCIONES MULTISUSTRATO
En muchas reacciones enzimticas se fijan al E
dos o ms molculas de S diferentes
ejemplo: hexoquinasa
Unin estadstica
o al azar
Unin ordenada
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E modificada covalentemente
INHIBICIN ENZIMTICA
Inhibicin reversible
Se unen mediante interacciones reversibles
Inhibicin irreversible
Se unen tan fuertemente a la enzima que bloquean su
actividad de forma permanente
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INHIBICIN REVERSIBLE
Inhibicin Competitiva: compite con el sustrato por el
centro activo del enzima
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INHIBICIN COMPETITIVA
El I compite con el S por el centro activo
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INHIBICIN COMPETITIVA
En presencia de un I competitivo la ec. de Michaelis-Menten:
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INHIBICIN COMPETITIVA
V mxima no vara.
Km aumenta
Es decir, independien-
temente de la [I]
competitivo, hay
siempre una [S]
suficientemente
elevada para desplazar
al I del sitio activo de
E
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Inhibicin competitiva como terapia mdica
Presumiblemente distorsiona el
sitio activo y hace que la E sea
catalticamente inactiva 65
INHIBICIN ACOMPETITIVA
En presencia de I acompetitivo la ec. de Michaelis-Menten:
Vmx [S]
V0 = [I] [ES] [I]
= 1 + KI =
Km + [S]
K [ESI]
I
Disminuye la Vmx
Disminuye la Km [S] necesaria para alcanzar Vmx
Aumentar la [S] no revierte el efecto de un I acompetitivo
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INHIBICIN ACOMPETITIVA
La pendiente no vara,
Km /Vmx
Al aumentar [I], Km y
V mx disminuyen
El I afecta la funcin
cataltica de la E pero
no su unin al S
La I acompetitiva es
significativa solo para
las enzimas
multisustrato.
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INHIBICIN MIXTA
El I se une a un sitio distinto que el S
Se une tanto a E como a ES
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INHIBICIN MIXTA
Ecuacin de velocidad
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INHIBICIN MIXTA
Pendiente Km / Vmx
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INHIBICIN REVERSIBLE
La ecuacin siguiente se utiliza como una
expresin general de los efectos de los
inhibidores reversibles
Vmx [S] Competitiva
=1
Vo =
Km + [S] =1 Acompetitiva
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INHIBICIN IRREVERSIBLE
El I se combina con o destruye un grupo esencial para
la actividad de la E
Asociacin no covalente muy estable
Enlace covalente
La reaccin de la
quimotripsina con el
diisopropilfluorofosfato
(DIFP) inhibe el enzima
irreversiblemente
(modifica una serina)
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INHIBICIN IRREVERSIBLE
Inactivadores suicidas o Inactivadores basados en el
mecanismo
Poco reactivos hasta que se unen al sitio activo de un E
especfico
El inactivador suicida comienza y pasa por los primeros pasos de
una reaccin enzimtica normal. Despus se convierte en un
compuesto muy reactivo, se combina irreversiblemente con E,
no se transforma en P
Diseo racional de frmacos
Muy efectivos
Pocos efectos secundario
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Factores que afectan a la actividad
enzimtica
pH
Existen un pH ptimo
Actividad mxima
Reflejo del ambiente celular en el
que normalmente se encuentra
Cambios en el pH afectan a la
estructura terciaria
Distribucin de cargas
Unin E S
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Factores que afectan a la
actividad enzimtica
TEMPERATURA
temp V reaccin
Velocidad de la reaccin se
duplica cada 10C
T ptima
Velocidad mxima
Si aumenta mucho la
temperatura:
desnaturalizacin, se pierde la
estructura terciaria, el centro
activo pierde su estructura
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